肝素酶基因表达与食管癌转移的关系

目的　探讨肝素酶基因表达与食管癌转移的关系。方法　采用逆转录聚合酶链反应技术 ( RT-PCR)检测 5 4例食管癌组织、癌旁组织及正常粘膜中肝素酶基因的表达。结果　有淋巴结转移的食管癌癌组织中肝素酶基因阳性表达率为 90 .5 % ( 19/ 2 1) ,癌旁组织为 6 1.9% ( 13/ 2 1) ,正常粘膜为 0 ( 0 / 2 1)。无淋巴结转移的食管癌癌组织中肝素酶基因阳性表达率为 15 .2 % ( 5 / 33) ,癌旁组织为 6 % ( 2 / 33) ,正常粘膜为 0 ( 0 / 33)。有淋巴结转移的食管癌组织及癌旁组织中肝素酶基因阳性表达率均高于无淋巴结转移者 ,二者相比差异均有显著性 (癌组织 P<0 .0 0 1,癌旁组织 P<0 .0 5 )。结论　肝素酶基因表达可能与食管癌发生转移有关 ,其可能成为预测食管癌转移的指标     

肺癌患者外周血癌胚抗原、细胞角蛋白19mRNA水平与肿瘤分期、近期疗效及预后的关系

目的探讨肺癌患者治疗前后外周血癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋向19（CKl9）mRNA的表达水平．及其与肿瘤分期、近期疗效、监测预后的关系。方法应用Taq Man定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测78例肺癌患者（鳞癌28例、腺癌40例、小细胞肺癌9例、大细胞肺癌1例）治疗前后、30例肺部良性疾病患者及30例健康对照者外周血癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19（CK19）mRNA的水平；同时采用酶联免疫吸附测定法检测肺癌患者治疗前血清CEA和细胞角蛋白19片段（CYFRA21—1）水平。患者随访2年。结果肺癌患者外周血CEA、CK19mRNA阳性率分别为69．2％（54／78）、62．8％（49／78）．显著高于肺部良性疾病患者及健康对照者，3者差异有统计学意义（χ^2值分别为37．65、41．54；27．41、30．84，p〈0．01）。鳞癌组CK19mRNA阳性率最高，腺癌组CEAmRNA阳性率晟高。不同分期患者问CEA、CK19mRNA阳性率差异无统计学意义（χ^2值分别为3．63、3．81）。肺癌患者外周血CEA、CK19mRNA的阳性率显著高于血清CEA、CYFRA21—1水平；手术后CEA、CK19mRNA阳性率显著下降；化疗后阳性率下降不明显。化疗前CEAmRNA阳性患者的中位生存期明湿低于阴性患者（分别为8．5月、11．7月）、化疗前CK19mRNA阳性患者的中位生存期明显低于阴性患者（分别为8,9月、12．3月）：术前CEAmR—NA阳性患者肿瘤复发或转移率（29．4％）高于术前阴性患者（7．7％），术前CK19mRNA阳性患者肿瘤复发或转移率（18．8％）高于术前阴性患者（7．1％）。结论CEA、CK19mRNA对于检测肺癌患者肿瘤细胞微转移有一定的临床意义．有助于评估手术疗效及预测预后；CEA、CK19mRNA表达水平与肿瘤分期无关；CEA、CK19基因的检测敏感性优于蛋白水平的检测．可有助于肺癌的辅助诊断。     

肺癌患者外周血癌胚抗原、细胞角蛋白19mRNA表达水平与肿瘤分期、近期疗效及预后的关系

目的探讨肺癌患者治疗前后外周血癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19（CK19）mRNA的表达水平及其与肿瘤分期、近期疗效、预后的关系。方法应用TaqMan定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测78例肺癌患者（鳞癌28例、腺癌40例、小细胞肺癌9例、大细胞肺癌1例）治疗前后、30例肺部良性疾病患者及30名健康对照者外周血癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19（CK19）mRNA的水平；同时采用酶联免疫吸附法测定肺癌患者治疗前血清CEA和细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）水平。患者随访2年。结果肺癌患者外周血CEA、CK19mRNA阳性率分别为69．2％（54／78）、62．8％（49／78），显著高于肺部良性疾病患者及健康对照者，三者差异有统计学意义（χ^2值分别为37．65、41．54；27．41、30．84，P均〈0．01）。鳞癌组CK19mRNA阳性率最高，腺癌组CEAmRNA阳性率最高。不同分期肿瘤患者间CEA、CK19mRNA阳性率差异无统计学意义（χ^2值分别为3．63、3．81，P〉0．05）。肺癌患者外周血CEA、CK19mRNA的阳性率显著高于CEA、CYFRA21-1蛋白水平；手术后CEA、CK19mRNA阳性率显著下降；化疗后阳性率下降不明显。化疗前CEAmRNA阳性患者的中位生存期明显低于阴性患者（分别为8．5、11．7个月），化疗前CK19mRNA阳性患者的中位生存期明显低于阴性患者（分别为8．9、12．3个月）；术前CEAmRNA阳性患者肿瘤复发或转移率（29．4％）高于术前阴性患者（7．7％），术前CK19mRNA阳性患者肿瘤复发或转移率（18．8％）高于术前阴性患者（7．1％）。结论检测肿瘤患者外周血CEA、CK19mRNA水平对于预测肿瘤细胞微转移有一定的临床意义，有助于评估手术疗效及预测预后。CEA、CK19mRNA表达水平与肿瘤分期无关。CEA、CK19基因检测的敏感性优于蛋白水平的检测，有助于肺癌的辅助诊断。     

cystatin B基因在人食管癌中的表达

目的：研究cystatinB基因在人食管癌中的表达状况。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测41对食管癌组织及配对食管癌旁黏膜和食管癌细胞系EC9706和肺癌细胞系GLC82中cystatinB基因的表达。结果：cystatinB基因在82．95（34／41例）食管癌组织中的表达水平,低于配对的食管癌旁黏膜,且与食管癌淋巴结转移显著相关（P＜0．05）。在食中细胞系EC9706有微弱表达,在肺癌细胞系GLC82未检测到表达。结论：cystatinB基因在人食管癌中表达显著下调且与淋巴结转移相关。     

基因检测胃癌区域淋巴结微转移的实验研究

目的　探讨 RT- PCR检测胃癌区域淋巴结微转移及其意义。方法　以病理组织学和 RT- PCR扩增角蛋白 1 9(K1 9)对 1 8例胃癌患者的癌组织标本及 78个淋巴结进行检测。结果　 1 8例胃癌癌组织均有 K1 9m RNA表达 ,78个淋巴结中 ,组织学阳性 1 6个 ,而 RT- PCR阳性达 2 6个。结论　 RT- PCR扩增 K1 9m RNA检测胃癌区域淋巴结微转移是一种敏感、特异的检测方法 ,结合淋巴结微转移的情况 ,对胃癌患者手术淋巴结清扫范围有一定的参考价值 ,有助于更精确的分期及对预后的判断。     

采用人基因表达谱芯片筛选肺癌转移相关基因的初步研究

目的应用基因芯片技术分析人高、低转移肺巨细胞癌细胞株的基因差异表达谱，筛选与肺癌转移相关基因。方法提取人高转移肺巨细胞株95D和人低转移肺巨细胞株95C的mRNA，通过逆转录，制备分别用cy5-dUTP和cy3-dUTP进行标记的cDNA探针，并与芯片杂交。经过ScanArray3000扫描仪扫描，获取图象及对杂交信号进行数据分析，筛选出95D和95C细胞表达差异的基因谱，并对其中部分基因进行RT—PCR分析、验证。结果在所检测95C和95D细胞中，466条基因有表达差异，其中具有同-Genebank量的有108对，上调基因47对，下调基因61对。对其中KIAA1108、PGR1、JWA、S182、Jab1部分差异表达基因，经RT-PCR技术验证，结果与基因芯片基本符合。结论肺癌转移过程与多种基因作用有关，基因芯片技术可为肺癌转移相关基因的筛选，提供有效方法。     

结直肠癌患者外周血中癌胚抗原-mRNA的表达及其临床意义

目的：肿瘤复发转移仍是威胁患者生存的重要原因，及早检出外周血中的循环肿瘤细胞并进行有效的综合治疗有着重要的临床意义。检测结“直肠癌患者外周血中癌胚抗原（CEA）－mRNA的表达及血清CEA蛋白的含量，并分析其临床价值。方法：35例有明确临床肿瘤病灶存在的结直肠癌患者、9例根治术后患者和37例健康志愿者，分别以逆转录PCR（RT－PCR）检测其外周血中CEA－mRNA的表达，时间分辨荧光方法测定其血清CEA蛋白的含量。结果：35例结直肠癌患者CEA－mRNA阳性率为45．7％，而健康对照组阳性率为2．7％，两者比较差异有显著性（P＜0．05）；9例术后患者CEA－mRNA仅2例阳性；CEA－mRNA阳性表达率与肿瘤分期相关，与肿瘤细胞分化程度并不相关。CEA－mRNA阳性组血清CEA蛋白阳性率（72．2％）显著高于CEA－mRNA阴性组（42．3％）。结论：外周血细胞中CEA－mRNA的表达与肿瘤分期相关，有可能作为结直肠癌微转换的一个监测指标。长期的随访有助于评价其临床价值。     

食管癌血液及淋巴结微转移检测及其对预后的影响

采用RT-PCR技术检测52例食管癌患者术前外周血液及术后病理诊断阴性的212枚区域淋巴结(pN0)中癌胚抗原(CEA)mRNA的表达.发现15例患者的术前血液中检测到CEA mRNA表达.17例患者的24枚淋巴结检测到CEA mRNA表达.CEA mRNA表达与肿瘤分化程度及浸润深度显著相关(P＜0.05).血液及淋巴结微转移者3 a生存率均明显低于无微转移者(P均＜0.05).多因素回归分析结果显示,肿瘤浸润深度、血液微转移及淋巴结微转移是独立的预后因素(P均＜0.05).认为微转移与食管癌术后早期复发转移及预后不良有关,检测食管癌术前血液及术后病理诊断阴性的pN0中CEA mRNA表达,可以诊断食管癌微转移.     

αB-crystallin基因在食管癌组织中的表达及其意义

目的 探讨αB-crystallin基因在食管癌组织中的表达及其与食管癌临床病理的关系.方法 采用RT-PCR方法检测食管癌组织及其正常组织黏膜中αB-crystallin基因的表达.结果 αB-crystallin基因在食管癌组织中表达阳性率明显高于正常组织黏膜,深层浸润者的表达阳性率明显高于浅层浸润者,较大肿瘤者中的表达阳性率明显高于较小肿瘤者,有淋巴结转移者中的表达阳性率明显高于无淋巴结转移者(P均＜0.05);αB-crystallin 基因表达与患者年龄及肿瘤的分化程度无关(P＞0.05).结论 αB-crystallln基因的高表达可能与食管癌的癌变及侵袭转移的发生有关.     

食管癌端粒酶活性的研究

目的　探讨食管癌端粒酶活性检测的临床意义。方法　建立并应用ＰＣＲ 技术为基础的端粒重复序列扩增,对３６ 例食管癌及其癌旁组织进行检测。结果　３６ 例食管癌组织中２９ 例端粒酶活性呈阳性,阳性检出率为８０ ．５０ ％ ,癌旁组织中２ 例呈阳性,阳性检出率为６．００％ ;二者比较差异有非常显著性（χ２ ＝ ４１．３０,Ｐ＜０ ．００１）;３６ 例食管癌均为鳞状细胞癌,其中１７ 例伴随淋巴结转移的标本中端粒酶活性均呈阳性,而在１９ 例未伴随淋巴结转移的病人中仅有１２ 例检出端粒酶活性,其活性检出率为６３．１５％ ,二者比较差异有非常显著性（ Ｐ＝ ０ ．００６）。结论　端粒酶活性的检测可作为食管癌诊断的指标之一,同时对判断食管癌的预后具有重要参考价值。     

癌-睾丸抗原GAGE基因mRNA在肝细胞癌的表达及临床意义

GAGE基因是Van den Eynde等应用细胞毒性T淋巴细胞（CTL）筛选法，从一黑色素瘤细胞株cDNA文库中筛选出的肿瘤抗原基因，它能在多种来源不同的肿瘤组织表达，而在正常组织的表达仅限于睾丸组织，因此属于癌-睾丸抗原（CT抗原）。本研究中采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测肝细胞癌（HCC）组织及相应癌旁组织中GAGE基因mRNA4的表达情况，     

外周血中白蛋白mRNA作为肝癌微小转移标志物的进一步研究

目的　检测不同肝脏疾病患者的外周血中白蛋mRNA(ALBmRNA) ,探讨外周血中ALBmRNA作为肝癌微小转移标志物的特异性。方法　分离原发性肝癌患者以及肝硬化、急慢性肝炎、肝转移癌、肝脏良性肿瘤患者和健康志愿者的外周血单个核细胞 ,提取单个核细胞的总RNA ,进行RT PCR ,将RT PCR产物再进行Southern杂交。结果　原发性肝癌患者组外周血中ALBmRNA的检出率为 44 .8% ,对照组检出率为 2 9.2 % ,两者之间的差异无统计学意义 (P≥ 0 .0 5 )。结论　作为肝癌微小转移的检测标志物ALBmRNA的特异性不高     

RT-PCR/Southern杂交方法检测肝癌患者外周血AFP mRNA

目的寻找一种敏感的方法以检外外周血中的肝癌细胞.方法分离原发性肝癌患者以及肝硬化、急慢性肝炎、肝转移癌、肝脏良性肿瘤患者和健康志愿者的外周血单个核细胞,提取单个核细胞的总RAN,进行RT-PCR/Southern杂交检测AFPmRNA.结果原发性肝癌患者外周血AFP mRAN的检出率为41.4%,其检出率与肿瘤大小以及TNM分期有关,对照组均为阴性.结论肝癌患者外周血中的AFPmRNA可以作为肝癌细胞的血液微小转移的标志物.     

狼疮肾炎患者外周血单核细胞载脂蛋白EmRNA表达及意义

目的研究外周血单核细胞载脂蛋白E（apoE）mRNA表达，初步探讨apoE在狼疮肾炎（LN）中的作用和意义。方法系统性红斑狼疮（SLE）患者19例，其中LN患者13例：LN-Ⅳ型（弥漫性LN）8例、LN-Ⅱ型（系膜增生性LN）5例，非LN的SLE患者组6例，健康对照组8名。通过密度梯度离心法分离外周血单核细胞，反转录-聚合酶链反应检测单核细胞apoEmRNA表达量。结果LN-Ⅳ型组apoEmRNA表达量明显高于LN-Ⅱ型组（脚．006）和其他两组（均为P=O．000）。与正常对照组和非LN的SLE组比较，LN-Ⅱ型组表达也上调，P值分别为0．018和0．031，正常对照组和非LN的SLE组之间差异无统计学意义，P=O．276。19例患者apoEmRNA表达量与外周血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平之间无直线相关关系，P值分别为0．697，0．647。LN-Ⅳ型组、LN-Ⅱ型组、非LN的SLE组血清总胆固醇水平无差异，P=0．764，3组TG差异也无统计学意义，P=0．525。LN-Ⅳ型组肾脏病变活动指数高于LN-Ⅱ型组，P=0．006。结论LN患者单核细胞apoE表达水平可能与体内免疫反应和活动性炎症病变有关。     

地方性氟中毒患者外周血淋巴细胞COLIXA3基因的表达

目的 探讨氟暴露人群中,氟中毒与COLIXA3(the a3 chain of collagen X)mRNA表达水平的关系,观察在地方性氟中毒的发病机制中COLIXA3基因所起的作用.方法 2009年,选取新疆生产建设兵团农七师123团和128团确诊的轻度氟中毒患者12人为病例组,生活在氟中毒病区10年以上的6例健康人作为内对照组,生活在非氟中毒病区10年以上的6例健康人作为外对照组,采集静脉血,分离淋巴细胞,采用SYBR Green Ⅰ嵌合荧光法进行实时定量PCR,对氟骨症患者和对照组淋巴细胞中COLIXA3 mRNA进行相对表达量的检测.结果 病例组、内对照组、外对照组COLIXA3基因的相对表达量分别为2.16±0.62、1.06±0.09、1.05±0.12,病例组COLIXA3表达明显上调,高于内对照组和外对照组(P均＜0.05),内对照组与外对照组组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 过量氟可促进患者外周血淋巴细胞中COLIXA3 mRNA的表达,达到对照组的2倍以上,可能有生物标志物意义.     

CEA mRNA在乳腺癌患者外周血中的表达及临床意义

目的以套式RT—PCR方法检测癌胚抗原（CEA）mRNA在乳腺癌患者外周血中的表达,并探讨其在乳腺癌诊断与治疗中的意义。方法收集乳腺癌患者52例（乳腺癌组）、乳腺增生性病变患者40例（增生组）、健康查体者20例（对照组）,采集外周血样本。分别用套式RT—PCR法检测其外周血中CEAmRNA的表达。结果乳腺癌组外周血CEAmRNA阳性率为40．4％,增生组及对照组分别为5．0%和0,两两比较均有显著差异（P均〈0．01）;乳腺癌组TNMⅢ期、Ⅳ期患者CEAmRNA阳性表达率明显高于Ⅰ期、Ⅱ期患者,外周血CEAmRNA阳性表达与淋巴结转移密切相关。结论外周血CEAmRNA表达可作为乳腺癌转移的一个辅助监测指标。     

动脉化疗对进展期胃癌CEA mRNA及CK19 mRNA表达的影响

目的:探讨外周血细胞CEAmRNA,CK19mRNA水平与胃癌EAP方案介入化疗近期疗效相关意义.方法:选择30例中晚期胃癌患者(Ⅱ期3例,Ⅲ期15例,Ⅳ期12例),于EAP(VP-16 ADM CBP)介入化疗前2-3d及化疗后2-3wk取外周血,全自动发光免疫法检测血清CEA及TPA,逆转录聚合酶链反应检测CEA及CK19mRNA.用超声内镜(EUS)结合CT测量肿块对化疗的有效率(CR PR)情况.结果:介入化疗前后外周血CEA及CK19mRNA均有显著差异[CEA:60.0%(18/30)vs33.3%(10/30),χ2=4.29,P<0.05;CK19:73.3%(22/30)vs46.7%(14/30),χ2=4.34,P<0.05].CEA及CK19mRNA联合检测阳性率在介入化疗前后也有显著差异[90.0%(27/30)vs50.0%(15/30),χ2=8.52,P<0.05].影像学诊断显示,外周血CEAmRNA,CK19mRNA联合检测阳性患者治疗前后分别为16例及5例(χ2=8.86,P<0.05).结论:外周血细胞CEAmRNA、CK19mRNA水平在EAP方案介入化疗后阳性率显著下降,CEAmRNA、CK19mRNA联合检测的敏感性高于血清CEA、TPA联合检测,可反应EAP方案介入化疗后肿瘤体积的变化情况.