海嘧啶抗肿瘤作用的实验研究

目的 研究海嘧啶的抗肿瘤作用。方法 采用MTT实验和集落形成实验观察海嘧啶的体外抗肿瘤作用;通过海嘧啶对FC小鼠和S180、H22荷瘤小鼠瘤重和生存时间的研究,观察了海嘧啶的体内抗肿瘤作用。结果 海嘧啶对8种人癌细胞具有一定的杀伤作用,以对BGC-823、Eca-109、HCT-8细胞的抑制作用最强;对BGC-823、Eca-109、HCT-8细胞的集落形成有明显的抑制作用,以对Eca-109细胞集落形成抑制作用最强;可明显抑制FC小鼠和S180小鼠瘤体的生长,明显延长H22荷瘤小鼠的生存时间。结论 海嘧啶由中药复方和5-Fu两部分复合而成,其抗肿瘤作用与二者相比具有明显的协同作用．倬抑瘤率大幅度提高．     

乳源免疫调节肽诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的研究

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响。方法采用MTT法测定PGPIPN对人食管癌Eca-109细胞的作用,用流式细胞仪(FCM)、琼脂糖凝胶电泳检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡,用免疫组化SP法检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡过程中survivin、caspase-3蛋白的表达变化情况。结果 PG-PIPN对人食管癌Eca-109细胞有明显的生长抑制作用并有剂量依赖性,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关,Eca-109细胞经PGPIPN作用后,其survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强。结论 PGPIPN能诱导人食道癌Eca-109细胞凋亡,这可能与survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强有关。     

丹皮酚对食管鳞癌细胞株Eca-109的体外放射增敏作用和机制

目的探讨丹皮酚在体外对人食管癌Eca-109细胞放射增敏作用的机制。方法采用 MTT 法检测丹皮酚对Eca-109细胞的增殖抑制作用。松胞素B ( CB )微核法研究丹皮酚对Eca-109放射敏感性的影响。克隆形成试验观察丹皮酚对Eca-109细胞的放射增敏作用。免疫组织化学法分析射线联合丹皮酚对Eca-109细胞的COX-2和Survivin表达的影响。结果①丹皮酚对人食管癌细胞Eca-109有生长抑制作用,半数抑制浓度( IC50)为(59.40±2.23) mg/L。②7.81 mg/L 丹皮酚加重照射后Eca-109细胞的染色质损伤,提高其放射敏感性。③克隆形成实验显示,丹皮酚对Eca-109细胞有增敏作用,放射增敏比为1.092。④6 Gy X射线照射后48 h,Eca-109细胞中的COX-2和Survivin的表达增加(P<0.01),3.91、7.81、15.63 mg/L丹皮酚可不同程度降低照射后COX-2和Survivin的表达,其中3.91 mg/L丹皮酚对COX-2表达的下调差异无统计学意义,其余差异均有统计学意义( P<0.01)。两种蛋白表达的变化呈正相关性(r=0.955,P<0.05)。结论丹皮酚在体外对人食管癌细胞 Eca-109有放射增敏作用,其作用机制可能与下调COX-2和Survivin两种蛋白的表达相关。     

藤梨根正丁醇提取物对人食管癌细胞生长作用的实验研究

目的:探讨藤梨根正丁醇提取物对培养的人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用。方法:MTT比色法检测藤梨根正丁醇提取物在不同浓度(1μg/m l、10μg/m l、100μg/m l)及不同时间(24 h、48 h、72 h)对Eca-109细胞生长抑制作用,TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应。结果:①藤梨根正丁醇提取物对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强。②提取物对瘤细胞有明显的凋亡效应。结论:藤梨根正丁醇提取物能有效抑制人食管癌Eca-109细胞生长。     

大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109生长的抑制作用

目的研究大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109增殖抑制作用。方法传代培养人食管癌细胞,MTT法及流式细胞仪检测测定Eca-109细胞增殖抑制率。结果大蒜素对细胞的生长均有明显的抑制作用,且呈浓度、时间依赖性。结论一定浓度的大蒜素能抑制食管癌细胞的生长。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对人食管癌细胞生长的抑制作用

目的 观察藤梨根乙酸乙酯提取物对培养的人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用,探讨藤梨根对人食管癌细胞的作用机制.方法 MTT比色法检测藤梨根乙酸乙酯提取物在不同浓度（1 μg/ml,10 μg/ml,100 μg/ml）及不同时间（2 h,48h,72 h）对Eca-109细胞生长抑制作用,TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应,免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达.结果 ①藤梨根乙酸乙酯提取物对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强,其生长抑制率可达到77.5%.②提取物对瘤细胞有明显的凋亡效应,而在对照组,未见有明显凋亡现象.③提取物对瘤细胞作用24 h,48 h,72 h后分别与对照组比较,用药组Bax蛋白表达明显增强（P＜0.01）;同时伴有Bcl-2表达的减弱,在72 h后最明显,差异有显著意义（P＜0.01）.结论 藤梨根乙酸乙酯提取物能有效抑制人食管癌Eca-109细胞生长.     

丹皮酚增强顺铂对人食管癌细胞Eca-109的抗肿瘤作用

目的探讨丹皮酚联合顺铂在体内外应用对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用。方法采用MTT体外试验法和裸鼠移植瘤动物模型体内试验法研究两药的抗肿瘤作用,两药相互作用指数(CDI)评价联合用药性质。结果丹皮酚在体外可明显抑制Eca-109细胞增殖,其IC50为124·77mg/L;不同浓度的丹皮酚与顺铂联用时抑制率较单一用药时显著提高,差异具有显著性,采用两药相互作用指数分析,丹皮酚7·81、15·63、31·25mg/L与系列浓度(0·078～2·5mg/L)的顺铂联合用药时具有协同作用(CDI<1)。体内灌胃给予丹皮酚25、50、100、200mg/kg对裸鼠移植人食管癌Eca-109的抑制率分别为10·67%、23·54%、27·91%、34·46%;丹皮酚在100mg/kg剂量下与顺铂5mg/kg联合用药抑制率为77·91%,与单一用药时比较差异有显著性(P<0·05),CDI=0·74。结论丹皮酚对人食管癌细胞Eca-109有抗肿瘤作用,与顺铂联合应用具有明显的协同作用。     

至生胶囊对人食管癌细胞Eca-109侵袭作用的影响

目的:探讨人食管癌细胞Eca-109对重组基底膜的侵袭作用及至生胶囊时其侵袭能力的影响.方法:取12只健康日本大耳白兔,随机分为至生胶囊高剂量组、低剂量组、复方斑螫胶囊对照组、生理盐水空白组4组,每组3只,连续给药3 d,末次给药后2 h内分别从耳中央动脉无菌采血,制备含药血清,采用TransweU细胞培养小室建立人肿瘤细胞体外侵袭模型,光学显微镜观察侵袭细胞的相对数目来表示肿瘤细胞的侵袭能力.结果:至生胶囊高剂量组、低剂量组对人食管癌细胞Eca-109有明显的抑制作用,与对照组、空白组比较,组间有显著性差异(P<0.05).结论:至生胶囊能明显抑制人食管癌细胞Eca-109对重组基底膜侵袭能力.     

尼美舒利对人食管癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的观察选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂尼美舒利对食管癌Eca-109细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其毒副作用,以探讨其抗肿瘤效应及可能的机制。方法培养人食管癌Eca-109细胞,建立食管癌裸鼠移植瘤模型,灌胃给予尼美舒利,观察移植瘤的生长情况,逆转录-聚合酶链反应法检测COX-2 mRNA表达,免疫组织化学技术检测COX-2及Ki-67的表达变化。结果尼美舒利对裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用。尼美舒利组,尼美舒利作用4周后,移植瘤体积及瘤质量分别为(807.68±217.76)mm3及(0.81±0.21)g,较对照组的(2 116.77±362.47)mm3及(1.45±0.39)g明显减小,两组间差异有显著性(P<0.05)。两组裸鼠的体质量增加无显著性差异(P>0.05)。尼美舒利组COX-2 mRNA、蛋白及Ki-67的表达均较对照组明显减弱。结论尼美舒利对食管癌Eca-109细胞移植瘤的生长有明显抑制作用,其机制可能与抑制COX-2及Ki-67表达、抑制肿瘤细胞的生长及增殖有关。     

番石榴黄酮提取液对HeLa细胞及Ec109细胞生长的影响

目的研究番石榴黄酮提取液对HeLa细胞和Ec109细胞生长的抑制作用。方法以番石榴叶和果实的粗黄酮提取液为受试液,采用体外细胞培养法,MTT法检测其对HeLa及Ec109细胞的生长抑制率。结果番石榴叶或果实的粗水溶性黄酮液和粗醇溶性黄酮液,均能较强抑制两种癌细胞生长。5.000 mg/L的番石榴叶粗水溶性黄酮抑制HeLa细胞生长作用最大,抑制率达70.84%;0.100 mg/L的叶粗醇溶性黄酮抑制Ec109细胞生长作用最大,抑制率达69.95%。结论番石榴粗黄酮液在体外可显著抑制HeLa细胞和Ec109细胞的生长。     

半夏药材中总生物碱部位抗炎作用的研究

目的探讨半夏药材中总生物碱部位的抗炎作用。方法通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验、腹腔注射醋酸(HAc)所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的实验以及大鼠棉球肉芽肿实验,观察总生物碱部位的抗炎作用;制作小鼠气囊滑膜炎模型,测定炎症渗出物中前列腺素E2(PGE2)含量。结果半夏生物碱对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性的增加以及大鼠棉球肉芽肿的形成均有明显的抑制作用,生物碱组渗出液中PGE2含量明显低于模型组。结论半夏总生物碱部位对多种炎症模型均有明显的对抗作用,为半夏抗炎作用的主要有效部位之一。且此作用部分与炎症因子PGE2的产生和释放受抑制有关。      

半夏药材中脂肪酸成分的研究

目的 研究半夏药材中的脂肪酸成分。方法 对半夏药材的甲酯化样品进行GC-MS分析，质谱图用NBS谱库检索，鉴定各种脂肪酸，并用色谱峰面积归一化法测定其相对百分含量。结果 发现半夏药材中含有较多不饱和脂肪酸。结论 半夏药材中的不饱和脂肪酸相对含量为49.152%。其中亚油酸占37.096%。     

肿瘤特异性Caspase-8表达载体对食管癌细胞Eca109体外增殖和凋亡作用的研究

目的研究肿瘤特异性Caspase-8表达载体对食管癌细胞Eca109体外增殖和凋亡作用。方法用脂质体法将人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控的肿瘤特异性表达载体hTERT-Caspase-8,瞬时转染端粒酶阳性的食管癌细胞株Eca109及端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞株MRC-5。结果转染hTERT-Caspase-8对细胞Eca109的生长具有显著抑制作用,细胞凋亡水平显著升高;转染hTERT-Caspase-8对MRC-5的生长和凋亡均无明显影响。结论上述发现提示hTERT启动子可以调控Caspase-8基因在食管癌细胞中靶向性表达,选择性抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,可能是肿瘤靶向性基因治疗中比较理想的转录调控元件。     

眩晕证候分类与风、痰、虚、瘀相关性的临床研究

目的探讨眩晕证候分类与风、痰、虚、瘀的相关性。方法临床调研诊治300例眩晕患者,证候分类为风阳上扰、痰浊上蒙、气血亏虚、肝肾阴虚。对各证型的比例,与西医病种的关系,风、痰、虚、瘀相兼同化,其病位与脏腑的关系进行分析。结果证候分类比例风阳上扰证占33.6%,痰浊上蒙证占32.6%,气血亏虚证占16.3%,肝肾阴虚证占17.3%。引起眩晕主要西医病种为高血压病、内耳性眩晕症等16个。证候分类存在兼风(火)、兼痰湿、兼虚、兼瘀现象。涉及相关脏腑主要为肝、脾、肾三脏。半夏白术天麻汤等古方、经方辨证治疗眩晕总有效率为92.3%。结论无风不作眩、无痰不作眩、无虚不作眩、血瘀致眩理论源自临床并指导实践。      

半夏中总游离有机酸的作用研究

目的 对半夏药材中的总游离有机酸进行提取分离和药理作用的研究。方法 以95％醇提取分离总游离有机酸,以氨水致咳模型、酚红祛痰、家鸽呕吐实验、MTT法体外肿瘤细胞试验检测有机酸的作用。结果 以95％的醇提取并经一系列的分离,得到半夏的总游离有机酸部分,药理研究证实半夏中含有的总游离有机酸具有止咳、祛痰、体外抑制肿瘤细胞的作用。结论 半夏药材中的有机酸组分为半夏的有效成分之一。     

云芝多糖-B对人食管癌细胞Eca109转移的影响

【目的】 应用新型云芝多糖-B(CVPs-B)作用食管鳞癌Eca109细胞,探讨其对Eca109细胞转移特性的作用?【方法】 Western blot检测CVPS-B作用后,食管鳞癌Eca109细胞CXCL12蛋白表达的变化,Transwell侵袭实验评估食管癌细胞侵袭能力的变化,MTT法观察食管癌细胞与Matrigel胶黏附能力的变化,划痕法检测食管癌细胞迁移能力的变化?【结果】 实验组Eca109细胞CXCL12蛋白表达水平较对照组显著降低(P < 0.05)?CVPs-B孵育后,食管癌Eca109细胞黏附?侵袭及迁移能力下降?【结论】CVPs-B降低食管癌细胞CXCL12蛋白表达,有效抑制食管癌Eca109细胞的转移潜能,提示CVPs-B可能可以通过CXCL12/CXCR4通路抑制食管鳞癌细胞转移特性?     

Nucleostemin特异性RNA干扰联合化疗药物对肿瘤细胞增殖抑制作用的体外实验研究

目的：研究Nucleostemin特异性RNA干扰（RNAi）联合4种化疗药物对人食管癌细胞株Eca-109体外增殖的影响。方法：1.用NS特异性RNAi表达载体转染Eca-109细胞。2.实验分组：分为silencer组（S组）、normal组（N组）、单纯用药组和联合用药组。S组为转染NS特异性siRNA表达载体的Eca-109细胞;N组为正常Eca-109细胞;单纯用药组为单纯应用4种化疗药物作用于Eca-109细胞;联合用药组为转染NS特异性RNAi表达载体分别联合4种化疗药物作用于Eca-109细胞。3.利用细胞计数法、镜下细胞形态学观察和MTT法检测各组细胞的增殖情况。结果：联合用药各组增殖速率明显低于单纯用药各组,而增殖抑制率明显高于单纯用药各组,差异具有显著性（p〈0.05）。结论：4种化疗药物与NS特异性RNAi联合对Eca-109细胞都具有一定的协同抑制作用。     

双歧杆菌培养上清对人食管癌109细胞的抑制作用

目的：探讨双歧杆菌培养上清对人食管瘤109细胞（Eca－109）的影响。方法：采用体外细胞培养、镜检及细胞排染试验,观察双歧杆菌培养上清对Eca－109细胞的形态学及细胞活度变化。结果：高浓度双歧杆菌培养上清可抑制Eca－109细胞贴壁生长,并使其活度明显下降,与生理盐水组相比有显著差异（P＜0．05）。结论：双歧杆菌培养上清对人食管癌109细胞有抑制生长作用。     

S1P5对食管癌细胞Eca109黏附能力的影响

目的研究S1P5对食管鳞癌Eca109细胞黏附能力的影响。方法从人正常食管黏膜上皮克隆S1P5基因,构建表达载体S1P5-EGFP,转染Eca109细胞,经G418筛选,获得S1P5-EGFP/Eca109稳定细胞株。以对照载体Control-EGFP转染的Eca109细胞作为对照,荧光显微镜下观察细胞的形态,用黏附试验评价其黏附能力。结果成功构建S1P5-EGFP和Control-EGFP载体并转染Eca109细胞获得稳定细胞株。S1P5表达于细胞膜并使细胞略呈梭形改变。S1P5过表达致Eca109细胞黏附能力明显低于对照（P〈0.05）,并且不受其配体1-磷酸鞘氨醇（S1P）的影响。结论 S1P5组成性抑制Eca109细胞的黏附能力,食管癌细胞可能通过下调S1P5的表达增强其黏附。     

人食管癌细胞系Eca109在抗癌药物筛选试验中的应用

用人食管癌细胞株（Ｅｃａ１０９）进行了丝裂霉素（ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＣ，ＭＭＣ）抗癌药物敏感性研究。结果表明，与对照组相比，ＭＭＣ浓度为０．２５μｇ／ｍｌ时，其细胞生长抑制率为６１．９６％（Ｐ＜０．０１）；集落形成抑制率为６４．４６％（Ｐ＜０．０１）．ＭＴＴ显色法证实，ＭＭＣ引起的细胞毒性与药物作用时间成正相关（ｒ＝０．９９９６，Ｐ＜０．０１），ＭＭＣ可抑制细胞的增殖速度，还使癌细胞的有丝分裂指数降低，提示ＭＭＣ对Ｅｃａ１０９细胞呈毒性作用，该细胞株保持了人体食管癌的药物敏感性，故可用于体外筛选新抗癌药。