氢醌对人胚肺成纤维细胞中DNA及细胞核的影响

目的　研究氢醌 (HQ)对人胚肺成纤维细胞 (HLF)DNA及细胞核的损伤作用 ,探讨其遗传毒性。方法　分别用 0、10、2 0、4 0和 80 μmol/L的HQ染毒HLF细胞 3h ,用彗星试验检测DNA损伤。再用相同剂量组HQ染毒HLF细胞 1h ,继续培养 2 4h后进行微核试验。结果　彗星试验结果表明 ,各剂量组细胞DNA拖尾率分别为 12 %、19%、4 2 %、79%和 95 % ,彗星尾长分别为 7 87、9 35、11 0 3、19 2 8和 2 3 32 μm ,有明显的剂量效应关系 ,其中 2 0、4 0和 80 μmol/L剂量组的拖尾率和彗星尾长明显增加 ;且随着HQ剂量的升高 ,高度、重度DNA损伤的比例也逐渐增加。HQ也可致微核、核异常形成 ,各剂量组的微核率分别为 2 %、3%、10 %、9%和 15 % ,核异常率分别为 6 %、7%、16 %、2 7%和 2 8% ,剂量效应关系显著 ,其中 2 0、4 0和 80 μmol/L剂量组的微核率和核异常率显著增加。结论　HQ可致HLF细胞DNA和细胞核损伤 ,产生遗传毒性作用。     

镍化合物对人胚肺成纤维细胞DNA的损伤

目的 研究不溶性镍盐(Ni3S2和Ni2O3)和水溶性镍盐(NiSO4)对细胞DNA的损伤状况,为镍致癌机制的研究提供科学依据.方法 使用不同浓度Ni3S2、Ni2O3和NiSO4处理人胚肺成纤维细胞(human lung fibroblast,HLF),通过单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测细胞DNA损伤程度.结果 镍处理各组的HLF细胞较阴性对照组细胞DNA损伤程度增高(P＜0.01),彗星尾矩增大(P＜0.01),有一定的剂量-反应趋势.结论 3种镍化合物均可引起细胞DNA损伤,不溶性镍盐的损伤强度大于水溶性的镍盐.DNA损伤是镍化合物致癌的可能机制.     

低剂量氢醌诱导人胚肺成纤维细胞适应性反应研究

目的通过研究低剂量氢醌(HQ)诱导人胚肺成纤维细胞(HLF)适应性反应的量效关系,建立氧化适应模式,探讨真核细胞过氧化适应性反应及其可能机理。方法应用HLF,以HQ为诱导剂,用不同剂量HQ对HLF细胞预处理12h后,再用80μmol LHQ攻击HLF1h,结合微核试验、彗星实验及细胞周期变化,观察低剂量HQ诱导的适应性反应。结果在细胞整体活力水平,0.001μmol L、0.01μmol LHQ预处理可以提高HLF对攻击剂量80.0μmol L的耐受性。与对照组比较,从0.5μmol LHQ剂量开始预处理的HLF的微核率和核异常率明显增加(P<0.05),细胞出现不同程度拖尾现象,拖尾率及彗星尾长显著增加(P<0.01),从0.1μmol L预处理剂量开始,随着预处理剂量的增加,属3级、4级DNA损伤细胞比例逐渐增加。细胞周期出现G2期阻滞,G1期比例减少。与细胞仅大剂量攻击比较,0～0.1μmol L预处理的HLF微核率和核异常率、尾长及拖尾率均明显减少、DNA重度损伤比例明显下降(P<0.05)。相关分析表明,预处理剂量从0.1μmol L开始,HLF的微核率、核异常率、拖尾率及彗星尾长与HQ预处理剂量间均存在剂量反应关系。结论低剂量HQ预处理HLF后再用高剂量去攻击,出现不同程度的适应性反应。     

1800 MHz射频电磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞DNA损伤的影响

目的研究全球移动通讯系统(GSM)1800 MHz射频电磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)DNA损伤的影响.方法采用DNA双链断裂的早期标志性事件H2AX的磷酸化作为检测指标,将细胞间断(5 min开,10 min关)暴露于比吸收率为0或3.0 W/kg的1800 MHz射频电磁场1或24 h后,用4%多聚甲醛固定后进行γH2AX免疫荧光分析,即用鼠源抗γH2AX单克隆抗体为一抗和异硫酸酯荧光素标记的山羊来源抗鼠抗体为二抗,显示细胞核内γH2AX的形成情况.以4,6-二咪基-4-联苯基吲哚标记细胞核,采用Image Pro-Plus图像软件分析数据,以20 mg/L的DNA损伤剂二乙酰氨基芴(AAF)作用2 h作为阳性对照.各处理条件至少检测50个细胞的γH2AX 焦点数,焦点超过5个的细胞定义为γH2AX焦点阳性细胞,将该焦点阳性细胞率作为评价细胞DNA损伤程度的指标.结果γH2AX焦点阳性细胞率在1800 MHz射频暴露24 h后为(37.9±8.6)%,在阳性对照组为(50.9±9.4)%,与假辐照组的(28.0±8.4)%比较,明显增高;而射频暴露1 h后的γH2AX焦点阳性细胞率为(31.8±8.7)%,增加不明显.结论 1800 MHz 比吸收率为3.0 W/kg的射频电磁场辐照24 h对CHL细胞DNA有损伤作用.     

人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞对其细胞周期的影响

目的研究人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染人胚肺成纤维细胞（human embryoniclung fibroblast,HELF）后对其细胞周期的影响,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的HELF作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。用倒置相差显微镜观察两组细胞形态学变化至感染后7d。于感染后12h、24h、48h、72h和96h收获细胞,用免疫细胞化学法检测两组细胞核内HCMVIE172蛋白,流式细胞术检测细胞周期。结果模拟感染组未见细胞形态学改变,亦未出现HCMVIE172蛋白阳性产物。感染组感染后72h时即可见局部细胞变圆,膨胀,胞体及胞核巨大化,7d时可见所有细胞均发生病变;免疫细胞化学检测显示,其各时间点的细胞均在核内出现呈棕黄色颗粒的HCMVIE172蛋白。模拟感染组在感染后12h时有65.7%的细胞处于G1期,24h时有43.8%的细胞处于G1期;感染组在感染后12h时有70.4%的细胞处于G1期,24h时有69.9%的细胞处于G1期;两两比较,差异均有显著性（均P〈0.01）。结论HCMV感染HELF后在细胞核内进行复制、增殖,其影响了HELF周期,使大部分细胞停滞在G期。     

极低剂量氢醌诱导人胚肺成纤维细胞应答反应的研究

我们采用蛋白质组学技术研究了极低浓度氢醌(HQ)刺激人胚肺成纤维细胞蛋白质表达差异，用肽指纹图谱初步鉴定了数个差异蛋白，有助于阐明低剂量化学物刺激诱导细胞应答反应的分子机制，为发展低剂量毒物测试系统，建立正确的环境污染物的危险度评价体系提供理论依据。     

二氧化硅对成纤维细胞和肺上皮细胞的DNA损伤作用

目的研究小剂量二氧化硅(SiO2)粉尘对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)和貂肺上皮细胞(CCL-64)的DNA损伤作用.方法采用彗星试验,按SiO2粉尘不同的作用浓度(终浓度0、7.5、15、30、60、120 mg/L)和时间分组(1 h、2 h)来观察DNA损伤.以彗星尾长(彗头末端到彗尾末端的长度)作为DNA损伤程度的评价指标.结果与对照组相比,SiO2明显增加了CHL及CCL-64细胞的DNA迁移距离(P＜0.01),在7.5～120 mg/L的剂量范围内,彗星尾长随作用剂量的增加而增加;一般2 h组比1 h组引起更严重的DNA损伤.结论小剂量SiO2粉尘确有遗传毒性,体外试验可致CHL细胞和CCL-64细胞DNA链断裂.由彗星试验的系列浓度SiO2引起两种细胞DNA链断裂的效应相似.     

染尘巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞中HSP27表达的影响

采用大鼠巨噬细胞(AMs)和人胚肺成纤维细胞(HELF)组成体外模型,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术及免疫印迹(western blot)方法分别检测二氧化硅粉尘处理AMs 24 h的培养上清液刺激HELF细胞的HSP 27 mRNA及蛋白表达。同时用二氧化钛作为阴性对照,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照。结果HSP 27能被染尘AMs诱导表达,且mRNA表达水平和蛋白质表达水平变化趋势一致,均呈良好的剂量-效应关系。提示HSP 27可能参与了矽尘致肺纤维化过程。 更多还原     

青石棉处理的肺泡巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞？…

为了探讨青石棉对肺损伤的机理,用兔肺泡巨噬细胞（ＡＭ）和人胚肺成纤维细胞（ＨＥＰＦ）组成体外模型,采用ＭＴＴ颜色反映法测定青石棉处理兔ＡＭ２４ｈ后的培养上清液刺激ＨＥＰＦ细胞增殖情况,同时用标准石英作为阳性对照,二氧化钛作为阴性对照,以不同粉尘处理的ＡＭ培养上清液作为正常对照。结果发现青石棉能明显刺激ＨＥＰＦ增殖,呈剂量－效应关系（Ｐ〈０．０１）。青石棉浓度在１００μｇ／ｍｌ时,青石棉组ＨＥＰＦ的     

氯化镉对人胚肺成纤维细胞的恶性转化作用

为研究氯化镉致人胚肺成纤维细胞的恶性转化作用,用染色体分析,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验和流式细胞术检测了转化细胞染色畸变,各细胞周期时相细胞的比例和ＤＮＡ合成情况。结果显示,氯化镉在０．００４μｍｏｌ／Ｌ、０．０２μｍｏｌ／Ｌ、０．０４μｍｏｌ／Ｌ３个实验浓度都可使人胚肺成纤维细胞生长排列紊乱。     

长波紫外线对人皮肤成纤维细胞DNA的损伤

紫外线在电磁波谱中属于非电离辐射 ,波长 1 0 0～ 40 0ｎｍ ,通常把波长 32 0～ 40 0ｎｍ的紫外线称为长波紫外线(ＵＶＡ)。ＵＶＡ的能量很弱 ,ＤＮＡ对ＵＶＡ的吸收作用极低 ,因此ＵＶＡ对ＤＮＡ的损伤往往被忽视。我们用单细胞凝胶电泳检测ＵＶＡ对原代培养人皮肤成纤维细胞ＤＮＡ的损伤。一、材料与方法1 材料 :ＤＭＥＭ培养液 (Ｓｉｇｍａ)、小牛血清 (Ｓｉｇｍａ)、低熔点琼脂糖 (ＬＭＡ ,进口分装 )、正常熔点琼脂糖 (ＮＭＡ ,进口分装 )、溴乙锭 (ＥＢ ,Ｓｉｇｍａ)、荧光显微镜 (Ｎｉｋｏｎ)、ＵＶＡ光源 (上海特种荧光灯管厂 )、…     

百草枯致体外培养人胚肺成纤维细胞凋亡及氧化损伤

[目的]观察百草枯（PQ）对体外培养人胚肺成纤维细胞（MRC-5）的毒性作用,并探讨可能的损伤机制。[方法]不同浓度（0.00、0.15、0.30、0.60、1.20、2.40、4.80、9.60mmol／L）PQ处理MRC-5细胞24h后,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTF法）测定MRC-5细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况;同时用分光光度比色法测不同浓度（0.00、0.15、0.30、0.60、1.20mmol／L）PQ处理3、12、24h后,MRC-5细胞超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量和细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性。[结果]与对照组相比,PQ≥0.30mmol／L时开始明显抑制细胞生长,并随着染毒浓度的增加细胞存活率明显下降（P〈0.05）。与对照组相比,短时间、低剂量（3、12h,0.15mmol／L）作用下,SOD活性下降不明显,其他组别明显下降（P〈0.05）;与对照组相比,染毒后不同时点MDA含量均较自身对照上升,LDH含量较对照上升（除染毒3h,1.20mmol／L组）,且差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;0.60、1.20mmol／L组PQ染毒后MRC-5细胞凋亡率明显上升（P〈0.05）。[结论]PQ对MRC-5细胞活性的影响存在剂量依赖性,并可影响MRC-5细胞的抗氧化酶活性和细胞凋亡。     

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂对氢醌致人胚肺成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)特异性抑制剂N-(6-氧-5,6-二氢菲啶-2-羟基)-N,N-二甲基乙酰胺-盐酸(PJ34)对氢醌(HQ)所致人胚肺成纤维细胞(HLF细胞)凋亡的影响及其作用机制。方法将离体传代培养的HLF细胞分为阴性对照组、阳性对照组(HQ组)、3个PJ34组和3个PJ34 HQ组。按PJ34不同浓度(0.5、1.0、2.0μmol/L)分为PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用4 h后检测结果;按PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组浓度及作用4 h后再分别加入HQ(80μmol/L)分为PJ34 HQ的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用24 h检测结果;HQ组仅用HQ24 h处理。采用PARP-1单克隆抗体荧光标记,流式细胞术检测HLF细胞中PARP-1蛋白表达、细胞凋亡和细胞复制后期(G2)细胞数情况,噻唑蓝(MTT)比色法测定HLF细胞相对存活率。结果各组给予不同剂量的PJ34 4 h后,HLF细胞的存活(增殖)明显受抑制(P<0.05),随着PJ34浓度的增加,其抑制作用进一步增强;PARP-1蛋白表达阳性的HLF细胞百分数均明显低于阴性对照组(P<0.01);流式细胞术检测显示HQ作用24 h后均可引起HLF细胞的调亡,可出现明显的亚二倍体峰,且随着PJ34预处理浓度的增加,其峰值也逐渐增加;HQ可导致细胞周期出现G2期阻滞,PJ34 HQⅠ、Ⅱ、Ⅲ组G2期阻滞减少且差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论PARP-l抑制剂PJ34明显抑制HLF细胞PARP-1表达,增加HQ所致细胞凋亡,并通过诱导HLF细胞凋亡抑制其增殖。     

亚砷酸钠对人胚肺成纤维细胞增殖活性及细胞周期的影响

目的 探讨亚砷酸钠对人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖活性及细胞周期的影响.方法 将体外培养的HELF细胞分别暴露于浓度为0(对照)、20、40、60 μmol/L的亚砷酸钠培养基24、48和72 h.采用噻唑蓝(MTr)法检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞周期分布.结果 与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒24、48、72 h后细胞抑制率均升高,差异有统计学意义(P＜0.05);HELF细胞抑制率与亚砷酸钠浓度及作用时长均呈正相关(P＜0.05).HELF细胞G2+M期的比例仅在染毒24、48 h时均与亚砷酸钠染毒浓度呈正相关(P＜0.05).HELF细胞S期比例在染毒48 h时与亚砷酸钠染毒浓度呈负相关(P＜0.05).结论 亚砷酸钠染毒可降低HELF细胞的增殖活性,并能够选择性地将细胞阻滞在合成末期及分裂期(G2+M期).     

人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的早衰研究

目的研究关于人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的早衰。方法常规传代培养人胚肺二倍体成纤维细胞及应用过氧化氢染毒诱导细胞早衰发生,利用细胞衰老综合指标进行评价,包括细胞形态学改变、生长曲线、寿命周期、细胞周期分布及衰老相关β-半乳糖苷酶染色等,同时检测细胞衰老不同阶段增殖细胞核抗原PCNA的mRNA和蛋白水平表达变化。结果人胚肺二倍体成纤维细胞于52PDL(群体倍增水平)处于细胞复制性衰老状态,400μmol/L过氧化氢可短期内诱导细胞过早衰老,衰老的细胞变大扁平,饱和度降低,细胞不可逆的阻滞于G1期,衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性率增加,PCNA表达随着衰老程度的增加而逐渐下降。结论400μmol/L过氧化氢以一定方式作用于细胞可以诱导早衰发生,细胞复制性衰老与细胞早衰具有相同的生物学特征和增殖能力。     

人巨细胞病毒感染对人胚肺成纤维细胞复制允许因子Cdt1表达的影响

目的研究人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染对人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung fibroblast，HELF）复制允许因子Cdt1表达的影响，探讨HCMV感染的发病机制。方法以HCMV感染同步化的HELF作为感染组，同时设模拟感染组为对照组。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Cdt1 mRNA的表达水平。结果模拟感染组在感染后12h时Cdt1 mRNA表达水平最高，后逐渐下降，至72h时达最低水平，96h时又稍回升。感染组在感染后12h时Cdt1 mRNA表达水平较低，24h时稍升高，48h达最高峰，48h后至72h急剧下降，96h时大致维持72h时水平。两组相比，12h、24h和48h时Cdt1 mRNA表达水平差异有显著性（P为0．001～0．030），12h和24h时感染组较模拟感染组明显降低，48h时感染组较模拟感染组明显升高。模拟感染组Cdt1 mRNA表达水平的高峰出现在感染后12h，而感染组的高峰则出现在感染后48h，较之明显滞后。结论HCMV感染使HELF复制允许因子Cdt1 mRNA的表达水平迟滞。     

青石棉处理的肺泡巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞的作用

为了探讨青石棉对肺损伤的机理,用兔肺泡巨噬细胞(AM)和人胚肺成纤维细胞(HEPF)组成体外模型,采用MTT颜色反映法测定青石棉处理兔AM24h后的培养上清液刺激HEPF细胞增殖情况,同时用标准石英作为阳性对照,二氧化钛作为阴性对照,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照.结果发现青石棉能明显刺激HEPF增殖,呈剂量效应关系(P<0.01).青石棉浓度在100μg/ml时,青石棉组HEPF的净增殖率达60.91%,是正常对照组的348倍,高于阳性对照和阴性对照100μg/ml青石棉处理兔AM的培养上清液的不同稀释度对HEPF增殖的影响不同,随稀释度的加大,其促细胞增殖的能力越弱,以1:2稀释度作用最强,明显高于阳性对照和阴性对照(P<0.01).提示青石棉处理肺泡巨噬细胞的培养上清液中存在有促进肺成纤维细胞增殖的生物活性物质,若能阻止这些生物活性物质的合成和分泌将对石棉相关疾病的预防和治疗具有重要意义.     

氢醌处理人胚肺成纤维细胞致DNA损伤和微核形成

目的观察氢醌(HQ)对人胚肺成纤维(HLF)细胞DNA损伤和微核形成情况。方法分别用不同剂量的HQ处理HLF细胞1 h,继续培养24 h后进行微核试验;处理HLF细胞2 h后直接用彗星试验检测DNA损伤。结果各剂量组的微核率为2‰~9‰(P<0.05),核异常率为3‰~13‰(P<0.05)。相关分析表明,存在明显的剂量—效应关系,其中20、40和80μmol/L剂量组的微核率和核异常率显著增加(P<0.05)。各剂量组细胞DNA拖尾率和彗星尾长均有明显的剂量—效应关系,其中20~80μmol/L剂量组的拖尾率和彗星尾长明显增加(P<0.05);且随着HQ剂量的增加,高度、重度DNA损伤的比例也逐渐增加。结论似乎HQ可致HLF细胞DNA损伤和细胞微核形成。     

P物质对人胚肺成纤维细胞作用及机制

目的 探讨P物质(SP)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)增殖与活化的作用及其调控机制.方法 体外培养MRC-5细胞,以P物质或与NK-1R抑制剂(L732138)及TGFβR1抑制剂(SB431542)联合培养细胞后,利用CCK8法检测细胞增殖活性,天狼猩红染色检测胶原纤维含量,Western blot检测α-SMA、...