降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）和神经生长因子（NGF）对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响。方法原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法。结果假手术组大鼠纹皮质c-jun mRNA表达弱；缺血组较假手术组c-jun mRNA表达显著强（P〈0．01）；CGRP组和NGF组c-jun mRNA表达弱于缺血组（P〈0．05）；CGRP和NGF合用组c-jun mRNA表达明显弱于缺血组（P〈0．01），分别弱于CGRP组和NGF组（P〈0．05）。假手术组大鼠纹皮质未见c-Jun蛋白表达；缺血组较假手术组c-Jun蛋白表达明显强（P〈0．01），缺血后再灌注3h强，1d、3d时弱；CGRP组和NGF组c-Jun蛋白表达较缺血组弱（P〈0．05）；CGRP和NGF合用组较缺血组c-Jun蛋白表达明显弱（P〈0．01），分别弱于CGRP组和NGF组（P〈0．05）；CGRP和NGF合用组缺血后再灌注3h时强，1d、3d时弱。结论CGRP和NGF分别抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达，联合应用显著抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达，两者对保护缺血神经元可能有协同作用。     

短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质血管c-Fos蛋白表达及CGRP和NGF的影响

目的研究外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质血管c-Fos蛋白表达的影响,探讨CGRP和NGF对缺血神经元的作用机制。方法在全脑缺血后再灌注模型上,应用免疫组织化学结合显微图象分析检测了c-Fos蛋白表达。结果假手术组、缺血再灌注组、CGRP组、NGF组和CGRP+NGF组缺血后再灌注3h、1d时在纹皮质的血管及其附近未见c-Fos蛋白阳性反应。缺血后再灌注3 d时在纹皮质的血管及其附近,缺血再灌注组未见c-Fos蛋白阳性反应,但NGF组和CGRP组c-Fos蛋白阳性反应明显,合用CGRP和NGF组分别较NGF组和CGRP组c-Fos蛋白阳性反应明显增强。结论CGRP和NGF分别增强脑缺血后再灌注大鼠纹皮质血管c-Fos蛋白表达,二者联合应用强于单独应用,二者对保护缺血神经元可能有协同作用。     

CGRP和NGF对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质Caspase-3蛋白表达的影响

为了探讨外源性降钙素基因相关肽 ( CGRP)和神经生长因子 ( NGF)对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达的影响 ,在全脑缺血后再灌注模型上 ,应用免疫组织化学结合显微图象分析方法检测了 Caspase-3蛋白表达。结果发现 ,假手术组大鼠纹皮质未见 Caspase-3表达 ;缺血组较假手术组 Caspase-3表达显著增加 ( P<0 .0 1) ;CGRP组和 NGF组 Cas-pase-3表达均弱于缺血组 ( P<0 .0 5 ) ;CGRP和 NGF合用组 Caspase-3表达明显弱于缺血组 ( P<0 .0 1) ,分别弱于 CGRP组 ( P<0 .0 5 )和 NGF组 ( P<0 .0 5 )。缺血组缺血后再灌注 3 h Caspase-3开始表达 ,1d达高峰 ,3 d时减弱 ,CGRP和 NGF合用组 Cas-pase-3表达随着缺血后再灌注时间的延长而逐渐减弱。以上结果提示 :CGRP和 NGF分别抑制全脑缺血后大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达 ,联合应用则能显著抑制全脑缺血后大鼠纹皮质 Caspase-3蛋白表达 ,二者对保护缺血神经元可能有协同作用     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas mRNA表达的调节作用

目的研究外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas mRNA表达的影响,探讨降钙素基因相关肽对缺血再灌注脑神经组织的作用。方法用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,应用原位杂交和显微图象分析方法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas mRNA的表达。结果假手术组大鼠海马未见Fas mRNA阳性表达;缺血再灌注组(缺血再灌注不同时间段6 h,12 h,24 h,48h,72 h)海马Fas mRNA明显过表达;注射CGRP后海马区Fas mRNA阳性表达细胞平均光密度值明显低于缺血再灌注组(P<0.01)。结论经颈动脉注入外源性CGRP下调缺血神经元Fas mRNA的表达,可能是外源性CGRP对缺血神经元保护作用的机制之一。     

降钙素基因相关肽和神经生长因子对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶、海马FasmRNA表达的影响

目的研究外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶、海马FasmRNA表达的影响,探讨降钙素基因相关肽和神经生长因子对缺血再灌注脑神经组织的作用。方法用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,应用原位杂交和显微图象分析方法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶、海马FasmRNA的表达。结果假手术组大鼠顶叶、海马未见FasmRNA阳性表达细胞;缺血再灌注组(缺血再灌注不同时间段6h,12h,24h,48h,72h)顶叶、海马FasmRNA阳性细胞明显过表达;注射CGRP或NGF后顶叶、海马FasmRNA阳性表达细胞平均光密度值明显低于缺血再灌注组(P<0.01);两者合用组平均光密度值比单独应用低(P<0.05)。结论经颈动脉注入外源性CGRP和NGF下调顶叶和海马缺血神经元FasmRNA的表达,且有协同效应,可能是两者对缺血神经元保护作用的机制之一。     

降钙素基因相关肽和神经生长因子对脑缺血再灌注大鼠海马及顶叶皮质神经元凋亡及核因子-κB表达的调节

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对脑组织缺血再灌注的保护作用及机制。方法:采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型,采用TUNEL法、免疫组织化学SABC法及显微图像分析检测海马及皮质内神经元凋亡和核因子κB(NF-κB)的表达。结果:大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加而NF-κB免疫阳性反应产物较正常组减少,注射CGRP或NGF后神经元凋亡数减少,NF-κB免疫阳性反应产物明显高于缺血再灌注组,两者联合应用效果更加显著。结论:CGRP和NGF抑制缺血神经元凋亡,参与NF-κB的调节,两者对缺血神经元有协同修复作用。     

NGF和CGRP对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质CHOP蛋白表达的影响

目的探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质神经元CHOP蛋白表达的影响及其作用机制。方法用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,应用免疫组织化学方法,免疫印迹法(W estern B lotting)测定CHOP蛋白表达;M etamoph图像分析系统对结果进行分析。结果假手术组大鼠顶叶皮质未见CHOP蛋白表达;缺血组CHOP蛋白在缺血再灌注后12 h明显表达,24 h达高峰,72 h显著下降,缺血组较假手术组CHOP蛋白表达显著增加(P<0.01);NGF组和CGRP组CHOP蛋白表达分别弱于缺血组(P<0.01);NGF和CGRP合用组CHOP蛋白表达明显弱于缺血组(P<0.01),也分别弱于NGF组和CGRP组(P<0.01)。结论NGF和CGRP能分别下调局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CHOP蛋白表达,联合应用则作用更强,二者对保护脑缺血神经元可能有协同作用。     

神经生长因子及降钙素基因相关肽减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质tau蛋白磷酸化

目的:探讨外源性神经生长凶子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质神经元tau蛋白过度磷酸化的影响.方法:制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、免疫印迹法和图像分析方法检测大鼠顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达,以及NGF与CGRP对tau蛋白过度磷酸化的影响.结果:缺血再灌注组同侧顶叶皮质tau蛋白在Scr199'202位点磷酸化水平和总tau蛋白明显升高;NGF组及CGRP组大鼠顶叶皮质tau蛋白在scr199'202位点磷酸化水平明显低于缺血再灌注组,总tau蛋白也下降;NGF与CGRP合用组顶叶皮质tau蛋白磷酸化水平进一步降低,分别低于NGF组和CGRP组.结论:NGF及CGRP明显减轻脑缺血再灌注大鼠脑tau蛋白磷酸化程度.两者合用作用更强.     

短暂性脑缺血后再灌注大鼠丘脑C-jun mRNA表达及CGRP和NGF的影响

目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性脑缺血后再灌注大鼠丘脑c-jun mRNA表达的影响。方法在脑缺血后再灌注模型上,应用原位杂交结合显微图像分析方法检测c-jun mRNA表达。结果缺血组大鼠丘脑较假手术组c-jun mRNA表达显著增加(P<0.01),CGRP组和NGF组c-jun mRNA表达分别低于缺血组(P<0.05),CGRP+NGF合用组c-jun mRNA表达明显低于缺血组(P<0.01)和分别低于CGRP组和NGF组。结论CGRP和NGF分别抑制脑缺血后再灌注大鼠丘脑c-jun mRNA表达,二者联合应用对保护缺血神经元可能有协同作用。     

神经生长因子与降钙素基因相关肽减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化

为探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western Blotting和图像分析方法检测大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达,以及NGF与CGRP对tau蛋白过度磷酸化的影响。结果显示:缺血再灌注组同侧海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白明显升高(P<0.05);NGF组及CGRP组大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平明显低于缺血再灌注组,总tau也下降(P<0.05);NGF与CGRP合用组海马tau蛋白磷酸化水平进一步降低,分别低于NGF组和CGRP组(P<0.05)。以上结果表明NGF及CGRP明显减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化程度,二者合用作用更强,降低缺血神经元tau蛋白磷酸化水平可能对缺血神经元起保护作用。     

神经生长因子与降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB的上调作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western印迹法和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组手术侧顶叶皮质CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组;NGF组和CGRP组顶叶皮质CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组;NGF组和CGRP联合应用时CREB与p-CREB的表达更高。结论:NGF与CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,NGF和CGRP有协同作用。     

神经生长因子及降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑环磷酸腺苷反应元件结合蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)及降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)mRNA表达的影响。方法:用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREB mRNA的表达。结果:缺血再灌注组右侧海马CA1区和顶叶皮质神经元CREB mRNA表达比假手术组减少,NGF组及CGRP组的CREB mRNA表达均高于缺血再灌注组,NGF与CGRP联合应用时CREB mRNA的表达分别高于NGF组和CGRP组。结论:NGF及CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质CREB mRNA的表达,NGF与CGRP联合应用则作用更强,NGF和CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过激活CREB基因转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现。     

慢性脑缺血大鼠大脑皮质中的神经生长因子表达

目的：研究慢性脑缺血时大鼠大脑皮质中神经生长因子（NGF）的表达变化,探讨缺血性脑损伤及修复机制。方法：永久性结扎Wistar大鼠双侧颈总动脉,取慢性脑缺血30、120d组。行为学测试,免疫组化ABC法染色,计数大鼠大脑皮质中的NGF阳性神经元数及测量平均灰度值。结果：大鼠慢性脑缺血时,大脑皮质中NGF的表达,第120d比第30d及对照组显著增强,而30d与对照组无显著性差异,同时伴有学习和记忆力下降。结论：慢性脑缺血时,NGF在大脑皮质中的表达将随时间逐渐增强,对坏死神经元起保护作用。     

CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织Erk表达的调节作用

目的 :检测大鼠脑缺血再灌注后细胞外调节蛋白激酶 (Erk)的表达 ,探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)和神经生长因子 (NGF)对脑组织的保护作用及机制。方法 :采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组织化学SABC法及显微图像分析检测海马及皮质内Erk的表达。结果 :大鼠缺血再灌注海马及皮质内Erk免疫反应阳性产物较正常组增多 (P <0 .0 5 ) ,而注射CGRP或NGF后阳性产物明显高于缺血再灌注组 (P <0 .0 1 ) ,二者联合应用效果更加显著 (P <0 .0 5 )。结论 :CGRP及NGF参与缺血神经元Erk的调节 ,二者对缺血神经元有协同修复作用     

外源性bFGF对坐骨神经钳夹损伤后脊髓DRG感觉神经元CGRP变化的影响

目的:观察外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对坐骨神经损伤后大鼠背根神经节(DRG)和脊髓后角内降钙素基因相关肽(CGRP)变化的影响。方法:成年雄性Wistar大鼠随机分成正常组、阳性对照组和bFGF组。阳性对照组动物右侧坐骨神经钳夹损伤,bFGF组动物右侧坐骨神经损伤后给予bFGF,在不同时间点运用免疫荧光技术结合图像分析检测相应背根节和脊髓后角CGRP的变化。结果:bFGF处理组术侧DRG内中小型神经元和脊髓后角内的CGRP表达明显高于阳性对照组,积分光密度值相比(P<0.05);但DRG内大型神经元内CGRP表达没有明显变化。结论:结果提示外源性bFGF能明显促进损伤后同侧DRG中小型神经元和脊髓后角CGRP的合成,对DRG内大型神经元中CGRP的表达没有明显影响。     

胶质细胞源性神经营养因子对比目鱼肌切除后相关运动神经元群降钙素基因相关肽表达的影响

目的：探讨鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对比目鱼肌(SOL)切除后相关运动神经元Mn群降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法：应用霍乱毒素B亚单位结合胶体金(CB-Au)逆行标认神经元复合免疫细胞化学反应的非荧光双标法,显示标记SOL-Mn群CGRP样免疫反应(CGRP-LI)。结果：(1)与对照组相比,SOL切除后SOL-Mn群CGRP-LI强阳性Mn比率由正常的23．48%分别上升到68．8%(3d)、65．32% (10d);此后逐步降低到11．3%(30d)。(2)SOL切除后,鞘内注射GDNF强阳性Mn比率可达70．91%(30d)。结论：鞘内注射GDNF可以显著提高靶肌肉切除后相关Mn群CGRP的表达,提示GDNF对运动神经元的部分神经营养作用可能是通过上调CGRP实现的。