Annexin V联合PI染色法定量检测凋亡细胞

为评价ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ双参数法在凋亡检测中的价值,用ＰＩ染色法、ＴＵＮＥＬ法及双参数ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法定量检测地塞米松处理小鼠胸腺细胞凋亡发生率。结果发现其凋亡检出率分别为ＰＩ法２７１９％,ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法３２２８％,ＴＵＮＥＬ法５０１７％。三者之间均有显著差异（Ｐ＜００１）。但ＴＵＮＥＬ法不能将死亡细胞、凋亡细胞区分开来。ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法可将正常细胞（ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＰＩ ）、凋亡细胞（ＡｎｎｅｘｉｎＶ＋ＰＩ ）、死亡细胞（ＡｎｎｅｘｉｎＶ＋ＰＩ＋）分开来。ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法能检出早期凋亡细胞且更为简单、灵敏、特异,是较为理想的凋亡定量检测方法。     

流式细胞术定量检测细胞凋亡3种方法的比较研究

目的：探讨流式细胞术定量检测细胞凋亡３种方法的价值。方法：同时使用ＰＩ染色，ＴＵＮＥＬ及Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ３壹量检测地塞米松处理小鼠的胸腺细胞凋亡发生率。结果：ＰＩ染色，Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ，ＴＵＮＥＬ３种方法凋亡检出率分别为２７．１９％，３２．２８％，５０．１７％，两者之间均有显著差异。     

Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较

目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。     

AnnexinⅤ/PI法定量检测胎盘细胞凋亡

目的:探讨AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡较PI法的优越性。方法:三十份正常足月胎盘的滋养细胞标本同时进行AnnexinⅤ/PI法和PI法染色,经流式细胞仪检测分析细胞凋亡的百分数。结果:AnnexinⅤ/PI法和PI法检测的结果分别为3.71±1.86%、0.69±0.48%,二者有显著性差异(P<0.01)。结论:AnnexinⅤ/PI法可检测出细胞早期的凋亡,其灵敏、准确,是目前检测细胞凋亡较好的方法。     

PTTG抑制PI3K/AKT信号通路诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的机制

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumoRtransforming genes,PTTG)对皮肤鳞状细胞癌细胞活力、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将设计合成的PTTG特异性siRNA(si-PTTG)转染人皮肤鳞癌细胞系A431(si-PTTG组),无干扰作用siRNA(NC组)及未转染的空白细胞(空白组)作为对照组,LY294002作为PI3K/AKT信号通路的抑制剂。通过MTT法、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及ROS检测试剂盒分别检测细胞活力、凋亡率和ROS含量。Western blot法检测PTTG、AKT、p-AKT、Cyclin D1和Bax蛋白表达。结果si-PTTG转染A431细胞后,PTTG表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,si-PTTG组和LY294002组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,si-PTTG组ROS含量明显升高,p-AKT和Cyclin D1蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P<0.05)。A431细胞转染si-PTTG,并用LY294002处理,细胞活力明显低于LY294002组,凋亡率高于LY294002组(P<0.05)。结论沉默PTTG表达可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制与细胞ROS水平增高及PI3K/AKT通路抑制有关。     

TUNEL法检测体外培养细胞凋亡的体会

ＴＵＮＥＬ(ＴｄＴ ｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇ ,ＴｄＴ介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记 )是用于原位检测细胞凋亡情况的一种基本方法。作者在绿茶儿茶素 (ＧＴＣ)诱导ＢＥＬ 740 2人肝癌细胞凋亡的研究中 ,对培养于盖玻片的ＢＥＬ 740 2细胞 (盖片培养细胞 )和ＢＥＬ 740 2细胞涂片 (培养细胞涂片 )进行了ＴＵＮＥＬ染色效果的比较。1　材料和方法1.1　材料　原位细胞死亡检测试剂盒 ,ＰＯＤ为ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品。ＧＴＣ :日本产品 ,由中国医学科学院肿瘤研究所程书钧院士惠赠 ,实…     

Annexin V/PI法定量检测胎盘细胞凋亡

目的探讨Annexin V/PI法检测细胞凋亡较PI法的优越性.方法三十份正常足月胎盘的滋养细胞标本同时进行Annexin V/PI法和Pl法染色,经流式细胞仪检测分析细胞凋亡的百分数.结果Annexin V/PI法和PI法检测的结果分别为3.71±1.86%、0.69±0.48%,二者有显著性差异(P＜0.01).结论Annexin V/PI法可检测出细胞早期的凋亡,其灵敏、准确,是目前检测细胞凋亡较好的方法.     

肌醇磷酯-3激酶介导血管紧张素Ⅱ激活血管平滑肌 细胞系裂素活化的蛋白激酶

作者以前的研究显示血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )通过Ｒａｓ -ＰＫＣｚｅｔａ -ＭＥＫ途径激活血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)系裂素活化的蛋白激酶或细胞外信号调节激酶 (ＥＲＫ1 /2 )。然而 ,这不能解释ＡｎｇⅡ促进ＶＳＭＣ增生的作用可被ＰＩ3Ｋ的抑制剂Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ所阻断。我们推测ＰＩ3Ｋ也可能参与了ＡｎｇⅡ激活的ＥＲＫ1 /2的调节。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和免疫沉淀加Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析显示正常培养的ＶＳＭＣ表达ＰＩ3Ｋ ,ＡｎｇⅡ和血小板源性生长因子 (ＰＤＧＦ)刺激并不影响ＰＩ3Ｋ的表达 ,但可提高ＰＩ3Ｋ对抗其抗…     

TUNEL法与EnVision法多重染色技术的应用

我们在酒精性肝病及慢性病毒性肝炎的病理研究中 ,采用ＴＵＮＥＬ法原位检测凋亡细胞 ,选用简便而敏感的ＥｎＶｉ ｓｉｏｎ法免疫组化染色 ,分别显示肝星状细胞、枯否细胞及肝相关淋巴细胞 (Ｐｉｔ细胞 )以改良Ｍａｓｓｏｎ三色染色法做对比染色以显示肝纤维化程度。其结果背景清晰、反差鲜明 ,取得了较好的效果。1　材料和方法1.1　标本　尸检肝组织 2例 ,病毒性肝硬化尸检肝组织 3例 ,组织取材于日本医科大学多摩永山医院。1.2 　试剂　ＴＵＮＥＬ检测试剂盒 (ＡＰ)ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品 (现为罗曼公司 ) ;免疫组…     

丁型肝炎病毒感染树肝组织中Fas和ICE表达的初步研究

我们采用免疫组化技术检测感染丁型肝炎病毒 (ＨＤＶ )树肝组织中ＨＤＡｇ、Ｆａｓ和ＩＣＥ表达 ,并应用免疫组化双重染色分析病毒抗原、Ｆａｓ和ＩＣＥ表达之间的关系。1　材料和方法1 1　标本来源　 30份感染ＨＤＶ树肝组织 ,取自本科建立的感染ＨＤＶ树经免疫组化和原位杂交证实ＨＤＶ在肝细胞中稳定复制、表达 ,且伴ＡＬＴ升高。1 2　ＨＤＡｇ检测　采用ＳＰ法 ,ＳＰ检测试剂盒购自情士德生物工程有限公司 ,ＨＤＶ多克隆抗体由本室用ＨＤＶＡｇ合成肽免疫家兔制备而成 ,工作浓度 1∶12 0 ,ＨＤＶＲＮＡ原位杂交检测试剂盒购自华西…     

T细胞无能与凋亡关系初探

目的：探讨无能Ｔ细胞与凋亡的关系。方法：利用Ｂ７－１单抗和环孢素Ａ（ＣｓＡ）联用处理ＡＰＣ即Ｔ细胞系统,在体外诱致抗原特异性Ｔ细胞无能,用ＰＩ染色法经ＦＡＣＳ分析了无能Ｔ细胞的凋亡,用ＲＴ－ＰＣＲ法检测了凋亡细胞Ｆａｓ ｍＲＮＡ的表达水平。结果：无能Ｔ细胞在１、３、５、１０ｄ细胞凋亡的百分率依次为２．１６％１１．２８％、１９．２７％、４１．２２％。当加入１００Ｕ／ｍｌ ＩＬ－２维培养,无能Ｔ细胞为     

preS2反义寡核苷酸降低端粒酶活性及诱导肝癌细胞凋亡的作用

反义核酸技术从分子水平破坏靶基因 ,已用于多种抗病毒的试验。我们以人工合成的硫代反义寡核苷酸研究针对ＨＢＶ不同区段反义寡核苷酸ＨＢＶ的抑制作用 ,从中筛选了效果最好的针对ＨＢＶｐｒｅＳ2的反义序列 (ａｓ ｐｒｅＳ2 )。为进一步探讨ａｓ ｐｒｅＳ2在肝癌治疗中的应用价值 ,以ＨＢＶＤＮＡ整合的肝母细胞瘤细胞ＨｅｐＧ2 .2 .15为研究对象 ,采用ＦＡＣ ＳＣＡＮ流式仪检测细胞凋亡率 ,ＴＲＡＰ银染测定细胞端粒酶活性 ,同时以ＲＩＡ法检测培养上清中的血清铁蛋白浓度。设计合成针对ｐｒｅ Ｓ2基因 (ｐｅｒ Ｓ2 )翻译起始区 (32 0 3…     

抗单链DNA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

凋亡细胞内由于组蛋白 ＤＮＡ的稳定性受到破坏或染色质受到修饰 ,使得凋亡细胞的ＤＮＡ对热变性敏感。在适宜条件下 ,凋亡细胞的ＤＮＡ能被热变性为具有足够长度、形成一定构像的单链ＤＮＡ(ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ ,ｓｓＤＮＡ) ,从而被ｓｓＤＮＡ特异的单克隆抗体 (ｍＡｂ)染色 ;而非凋亡细胞的ＤＮＡ则不被热变性 ,或变性的ＤＮＡ部分不足以形成与抗ｓｓＤＮＡｍＡｂ结合的单链构象决定簇。因此 ,用抗ｓｓＤ ＮＡｍＡｂ能敏感、特异地检测到凋亡细胞[1 ,2 ] 。目前 ,国外此项研究已取得较大成果 ,并有产品的试剂盒销售 ,…     

中性红摄入法检测幽门螺杆菌空泡毒素活性

空泡变性细胞毒素 (ＶａｃＡ)是幽门螺杆菌 (Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ)分泌的一种重要毒素 ,其相对分子质量 (Ｍｒ)约为 (87～ 95 )×10 3 ,最初发现该毒素与哺乳动物细胞共同孵育后可导致细胞内产生大量的空泡。既往多采用光学显微镜下直接计数空泡形成细胞的比例来评价ＶａｃＡ活性 ,我们采用中性红摄入法 (Ｎｅｕｔｒａｌｒｅｄｕｐ ｔａｋｅａｓｓａｙ ,ＮＲＵ)对Ｈｐ菌株ＶａｃＡ进行定量检测 ,评价该方法检测ＶａｃＡ活性的应用价值。标准Ｈｐ菌株ＣＣＵＧ17874经固体平皿培养后 ,混悬于布氏肉汤液体培养基中 ,置 37℃微需氧环境振荡培养 72…     

转染反义Fas阻断T细胞凋亡及对肿瘤的治疗意义

目的 通过阻断Ｔ细胞的Ｆａｓ信号传递途径,探讨消除肿瘤对Ｔ细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义。方法 流式细胞术、ＲＴ－ＰＣＲ方法检测卵巢癌细胞表达Ｆａｓ和ＦａｓＬ。构建ｐｃＤＮＡ３－反义Ｆａｓ真核表达载体,经脂质体转染Ｊｕｒｋａｔ细胞,流式细胞仪检测Ｆａｓ表达变化。以Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ和ＭＴＴ法检测转染反义Ｆａｓ基因对Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡的影响。采用ＭＴＴ体外杀伤实验观察３ＡＯ对Ｊｕｒｋａｔ细胞杀伤变化。结果 ６种卵巢癌细胞均表达Ｆａｓ和ＦａｓＬ。ｐｃＤＮＡ３－反义Ｆａｓ基因可以使Ｊｕｒｋａｔ细胞表达Ｆａｓ量下降并部分阻断Ｆａｓ单抗诱导的Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡,３ＡＯ对其杀伤减弱。结论 卵巢癌细胞表达ＦａｓＬ可能是其逃逸免疫监视并产生对淋巴细胞攻击的原因之一;应用反义技术阻断Ｆａｓ表达,可部分阻断Ｆａｓ单抗诱导Ｊｕｒ     

骨肉瘤细胞凋亡和增殖与预后的关系

目的：探讨细胞凋亡指数与骨肉瘤病理、细胞增殖及预后的关系。方法：应用ＴＵＮＥＬ方法检测８０例骨肉瘤凋亡细胞,ＰＣＮＡ单克隆抗体ＰＣ１０免疫组化检测肿瘤组织增生,以１００个肿瘤细胞中凋亡细胞和增生细胞分别作为凋亡指数ＡＩ（％）和增生指数ＰＩ（％）。结果：８０例骨肉瘤中ＡＩ范围为０．６３％～１８．８％,其与骨肉瘤ＷＨＯ新分型及ＰＩ值密切相关（Ｐ〈０．０５）。而且ＡＩ〉７．２１的骨肉瘤比ＡＩ≥７．２１的     

烟台地区健康人群乙型肝炎病毒标志物的检测及感染状况分析

为了解烟台地区ＨＢＶ感染状况 ,现将我院近两年 42 80例健康查体中乙型肝炎表面抗原 (ＨＢｓＡｇ)阳性人群进行乙型肝炎病毒五项指标检测 ,现将结果报告如下。材料和方法一、标本来源 :随机检测健康查体人群 42 80例 (男 2 818例占 6 5 .8% ,女 146 2例占 34 .2 % ) ,年龄 18～ 5 8岁 ,空腹采取静脉血 3ｍｌ当日分离血清检测。二、方法 :酶联免疫吸附法 (ＥＬＩＳＡ)检测ＨＢｓＡｇ ;试剂盒由山东潍坊 3Ｖ公司提供 ,同时检测肝功能 (ＡＬＴ、总蛋白、白蛋白、总胆红素 )。ＨＢｓＡｇ阳性标本采用固相放射免疫分析技术 (ＲＩＡ)检测 ,ＨＢｓ…     

免疫学技术与方法流式细胞术定量检测细胞 凋亡3种方法的比较研究

目的探讨流式细胞术定量检测细胞凋亡3种方法的价值。方法同时使用PI染色、TUNEL及Annexin V/PI 3种方法定量检测地塞米松处理小鼠的胸腺细胞凋亡发生率。结果PI染色、Annexin V/PI、TUNEL 3种方法凋亡检出率分别为27.19%、32.28%、50.17%，两两之间均有显著差异(P＜0.01)。但仅Annexin V/PI法可将正常细胞、凋亡细胞、死亡细胞区分开来。结论Annexin V/PT法是目前最为理想的凋亡定量检测方法。     

氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞凋亡的泡沫化

目的 :动脉粥样硬化 (ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,Ａｓ)发生的细胞学基础是内皮细胞的受损以及血液单核 -巨噬细胞、血管平滑肌细胞 (ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ,ＶＳＭＣ)的迁移和增殖。增生的ＶＳＭＣ和巨噬细胞 ,表面受体的表达发生改变 ,清道夫受体吞噬化学修饰的低密度脂蛋白 (例如 ,氧化低密度脂蛋白 ) ,因其缺乏下行调节机制 ,致使胆固醇酯在细胞内大量积聚 ,从而转化为泡沫细胞 ,是Ａｓ斑块的主要成分。细胞凋亡的异常是许多疾病的原因之一 ,Ａｓ的发生直接与凋亡有关 ,Ｈａｎ等观查了 35例直接取自…     

大蒜素调控VEGF/PI3K/AKt促进SKOV3细胞的凋亡

目的探讨大蒜素调控VEGF/PI3K/AKt促进卵巢癌细胞凋亡的作用研究。方法浆液性卵巢癌(SKOV3)细胞株给予0、25、50和100μg/mL大蒜素培养12 h、24 h和48 h后,细胞计数CCK-8法检测SKOV3细胞的存活率;流式细胞仪检测检测SKOV3细胞凋亡和细胞周期改变;Western blot法检测SKOV3细胞磷酸化蛋白VEGF、PI3K、AKt和Caspase3蛋白表达水平。结果与对照组相比,随着大蒜素给药时间的延长和剂量的增加,细胞存活率显著降低,细胞凋亡明显发生,差异有统计学意义(P<0.05);VEGF、PI3K、AKt蛋白的表达含量均明显下降,Caspase3蛋白含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大蒜素调控VEGF/PI3K/AKt促进卵巢癌细胞凋亡,具有时间剂量反应关系。