三苯氧胺,放线菌素D和肿瘤坏死因子—a对人乳腺癌MCF—7细胞株的体外…

用荧光流式细胞计和细胞族集试验证实雌激素可促使ＭＣ－７细胞进入分裂周期，三苯氧胺作用与雌激素相反。放线菌素Ｄ在达到一定剂量时可直接杀死细胞而非抑制细胞进入分裂周期。     

IL-12、IL-7、IL-2协同诱导PBMC所产生的内源性细胞因子对其细胞毒活性的影响

应用细胞因子生物学检测法对ＩＬ－１２、ＩＬ－７、ＩＬ－２协同诱导的ＰＢＭＣ培养上清中的ＴＮＦ和ＩＬ－２进行了检测，同时观察了抗ＴＮＦ－α、抗ＴＮＦ－β和抗ＩＬ－２抗体对刺激细胞的细胞毒作用的影响。结果表明，ＩＬ－１２、ＩＬ－７、ＩＬ－２三种因子协同刺激ＰＢＭＣ可产生较高水平的ＴＮＦ，而抗ＴＮＦ－α单抗能显著抑制刺激细胞的杀瘤活性，提示内源性ＴＮＦ－α在介导该类细胞的细胞毒效应中起重要作用。     

IL—12,IL—7,IL—2协同诱导PBMC的产生的内源性细胞因子对？…

应用细胞因子生物学检测法对ＩＬ－１２、ＩＬ－７、ＩＬ－２协同诱导的ＰＢＭＣ培养上清中的ＴＮＦ和ＩＬ－２进行了检测，同时检察了抗ＴＮＦ－α、抗ＴＮＦ－β和抗ＩＬ－２抗体对刺激细胞的细胞毒作用的影响。结果表明，ＩＬ－１２、ＩＬ－７、ＩＬ－２三种因子协同刺激ＰＢＭＣ可产生较高水平的ＴＮＦ，而抗ＴＮＦ－α单抗能显著抑制刺激细胞的杀瘤活性，提示内生ＴＮＦ－α在介导该类细胞的细胞毒效应中起重要作用。     

人重组IL—2G与TNFα抗肿瘤的实验研究

观察ｒｈＩＬ－８和ＴＮＦα对肿瘤的作用。用ＭＴＴ法检测ｒｈＩＬ－８和ＴＮＦα体外对ＥＬ－４，Ｂ１６瘤细胞的细胞毒作用；小鼠体内抑瘤试验。结果：ｒｈＩＬ－８对ＥＬ－２，Ｂ１６瘤细胞体外无直接杀伤作用，ｔｈＩＬ－８和ＴＮＦα联合运用可有效抑制同种异体ＥＩＬ－４，Ｂ１６瘤细胞在Ｃ５７小鼠成瘤及生长。     

矢车菊素－３－葡萄糖苷通过降低ＳＴＡＴ３活化抑制ＴＮＦ－α诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖

【目的】 探讨矢车菊素－３－葡萄糖苷（Ｃ３Ｇ）对ＴＮＦ－α诱导的血管平滑肌增殖的影响及可能的机制。【方法】 Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠主动脉平滑肌细胞（ＶＳＭＣ） 购于ＡＴＣＣ,体外培养后以Ｃ３Ｇ对细胞进行预处理后观察ＴＮＦ－α的促细胞增殖作用;Ｄｉｈｙｄｒｏｅｔｈｉｄｉｕｍ （ＤＨＥ）荧光染色检测ＶＳＭＣ在ＴＮＦ－α作用下的活性氧（ＲＯＳ）生成情况;实时定量ＰＣＲ检测细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活化蛋白１（ＮｏｘＡ１）的ｍＲＮＡ水平;蛋白质印迹法检测细胞内ＮｏｘＡ１、信号转导与转录激活因子３ （ＳＴＡＴ３）、磷酸化ＳＴＡＴ３及β－ａｃｔｉｎ的表达水平。统计学方法采用单因素方差分析。【结果】 Ｃ３Ｇ预处理能够抑制ＴＮＦ－α诱导的ＶＳＭＣ增殖,该作用呈现剂量、时间依赖性。联合应用５０ μｍｏｌ／Ｌ Ｃ３Ｇ及１００ μｍｏｌ／Ｌ ａｐｏｃｙｎｉｎ显著减少ＴＮＦ－α诱导ＲＯＳ的生成。Ｃ３Ｇ联合ａｐｏｃｙｎｉｎ较Ｃ３Ｇ或ａｐｏｃｙｎｉｎ单独孵育更能显著抑制ＴＮＦ－α处理下ＶＳＭＣ内ＮｏｘＡ１基因的表达及ＳＴＡＴ３蛋白的磷酸化。应用ＲＯＳ清除剂触媒（ｃａｔａｌａｓｅ ２ ０００ Ｕ／ｍＬ）能显著抑制ＴＮＦ－α诱导的ＶＳＭＣ增殖及ＳＴＡＴ３蛋白活化。【结论】 Ｃ３Ｇ对抗ＴＮＦ－α诱导ＶＳＭＣ增殖的机制很可能是通过削弱ＮｏｘＡ１导致的ＲＯＳ生成,从而抑制ＳＴＡＴ３蛋白的激活。     

重组人白介素10对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察重组人白介素１０（ｒｈＩＬ－１０）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。方法 离体培养大鼠胸主动脉 ＶＳＭＣ并分别接受不同浓度ｒｈＩＬ－１０、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）的刺激,采用ＭＴＳ／ＰＥＳ 法确定ＶＳＭＣ的增殖状态并与对照组比较。结果　与对照组相比,ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ均对ＶＳＭＣ增殖具有明显的刺 激作用（Ｐ＜０．０５）。单独应用ｒｈＩＬ－１０对血管平滑肌细胞生长没有影响。在ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ分别刺激下,ｒｈＩＬ－１０均可 抑制ＶＳＭＣ的生长（Ｐ<０．０５）。结论　ｒｈＩＬ－１０可抑制细胞因子和生长因子诱导的ＶＳＭＣ增殖。     

胞壁酰二肽对睡眠的作用及其与TNF的关系

目的：研究胞壁酰二肽（ＭＤＰ）对家兔睡眠的影响及其与肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的关系。方法：睡眠时相分析方法分析家兔睡眠，ＥＬＩＳＡ法测定血清及脑匀浆中ＴＮＦ水平。结果：ＭＤＰ和ＴＮＦ均可延长家兔的睡眠时间，ＭＤＰ可升高小鼠血清和脑中ＴＮＦ水平，ＴＮＦ单抗可部分拮抗ＭＤＰ的催眠作用。结论：ＭＤＰ的催眠作用与其影响ＴＮＦ有关。     

重组人肿瘤坏死因子对人结肠癌SW－480细胞在体外的杀伤作用研究

文中报道了重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）对人结肠癌细胞株ＳＷ－４８０的克隆抑制和细胞毒作用。改良噻唑兰（ＭＴＴ）法表明ＴＮＦ在６００００ｕ／ｍｌ时才有明显的细胞毒作用说明ＳＷ－４８０对ＴＮＦ低度敏感，而且无剂量依赖关系．但克隆抑制试验表明１０ｕ／ｍｌ就可明显抑制ＳＷ－４８０集落的生长，并有剂量依赖性，且在剂量１５０ｕ／ｍｌ以上时抑制作用随时间而增强．３Ｈ－ＴｄＲ掺入测定的ＴＮＦ抑制ＳＷ－４８０细胞ＤＮＡ合成和ＭＴＴ法测定的细胞毒曲线一致说明ＴＮＦ对ＳＷ－４８０的主要作用是抑制ＤＮＡ合成．ＴＮＦ对ＳＷ－４８０抑制后超微结构变化：最初是胞膜出现微孔，然后细胞内线粒体变性，溶解，核固缩，溶解，最后细胞溶解．这些结果与ＭＴＴ法细胞毒试验及３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验相结合说明ＴＮＦ对ＳＷ－４８０杀伤作用主要针对细胞核内外染色体的ＤＮＡ合成上．     

新型人TNFα对小鼠Lewis肺癌的抗肿瘤作用

本文研究了一种重组人ＴＮＦα衍生物（ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ）对小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的抗肿瘤作用。同时与原型重组人ＴＮＦα（ｒｈＴＮＦα）的抗肿瘤作用进行了比较，并对它们全身给药和局部给药的抗瘤效果作了对比。Ｃ５７ＢＬ／６小鼠接种肿瘤细胞后ｄ７，将ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ和ｒｈＴＮＦα以高、中、低三种剂量分别连续肌肉注射４ｄ，或瘤内注射３ｄ，停药后１ｄ处死动物，根据抑瘤率进行疗效评价。结果表明，ｒｈＴＮＦα     

抗CD_3McAb诱导外周血单个核细胞活化增殖的观察

目的：观察抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）活化增殖过程中的影响因素及抗ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）免疫学特性的变化。方法：采用ＭＴＴ法和苔盼蓝染色法、ＩＬ－２依赖细胞株（ＣＴＬＬ细胞）增殖实验、ＴＮＦ－α（双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法）试剂盒以及间接免疫荧光法分别检测ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性、内源性ＩＬ－２、ＴＮＦ－α的产生及ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＩＬ－２Ｒ等的表达。结果：抗ＣＤ３ＭｃＡｂ对ＨＰＢＭＣ有很强的丝裂原作用，该作用与其诱导浓度、时间及外源性ＩＬ－２的协同作用密切相关。ＣＤ３ＡＫ细胞可产生内源性ＩＬ－２、ＴＮＦ－α，ＩＬ－２Ｒ表达及ＣＤ８＋细胞百分率显著增多。结论：ＣＤ３ＡＫ细胞具有很强的增殖能力，但需要外源性ＩＬ－２的协同作用，增殖细胞以ＣＤ８＋细胞为主。     

The effect of anastrozole on mRNA expression of oestrogen related gene in MCF-7 breast cancer cells

Objective： To look for additional markers of molecular biology response to anastrozole, a new aromatase inhibitor, on the growth and mRNA expression level of MCF-7 cell. Methods： We investigated the effect of anastrzole on growth and gene expression in the human breast cancer cell line MCF-7 and compared with the most widely used antiestrogen tamoxifen. We chose 4 genes to examine regulation of gene expression of estrogen regulated genes ： PR A, PR B, ErbB-2 and cyclin D1. Results： Compared with the tamoxifen, a statistically significant growth inhibition was observed with anastrozole. The PR A, PR B and cyclin D1 mRNA level in anastrozole treated cells was sigificantly below the level in tamoxifen treated cells （P〈0. 05）. They had agonistic effect on ErbB gene （P〉0. 05）. Conclusion： The third generation of aromatase inhibitors anastrozole exert more inhibit function in some expression of estrogen regulated genes than tomoxifen in MCF-7 cell line.     

Evn-50对人乳腺癌MCF-7耐三苯氧胺细胞株生长和凋亡的影响

目的:通过研究黄荆子的乙酸乙酯提取物Evn-50在体外对人乳腺癌MCF-7和耐三苯氧胺细胞株(MCF-7/TAM-R)的生长和凋亡的影响,探索Evn-50在逆转乳腺癌耐药中的作用及其可能机制。方法:构建MCF-7/TAM-R细胞系,分别用DMSO、5μmol/L TAM、5μmol/L TAM+50μg/ml Evn-50和50μg/ml Evn-50处理细胞。然后,采用MTT法测定细胞存活率,PI单染流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布情况,免疫蛋白印记法观察Evn-50和TAM单独或联合作用时的机制。结果:Evn-50单药或与TAM联合均可以降低人乳腺癌MCF-7和三苯氧胺耐药细胞株MCF-7/TAM-R的存活率,两药联合作用更为明显,同单用TAM组相比差异有统计学意义(P<0.01)。Evn-50单药或与TAM联合应用对两株细胞的凋亡均有明显影响,且随着作用时间的延长细胞凋亡逐渐增多,其中以72 h时细胞凋亡率和G2期细胞比例最为明显(P<0.01)。TAM和Evn-50联合处理无论是对MCF-7细胞还是对三苯氧胺耐药细胞MCF-7/TAM-R,均能明显下调p-AKT(Ser473)和p-MAPK44/42(Thr202/Tyr204)蛋白水平。结论:Evn-50能够抑制MCF-7和MCF-7/TAM-R细胞株的生长并诱导细胞凋亡,尤其在Evn-50与TAM联合处理时更为明显。其作用机制可能与AKT和MAPK信号通路的下调相关,但需要进一步研究证实。     

FKBP51表达降低促进雌激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药机制初探

目的:初步探讨FK506结合蛋白51（FKBP51）在雌激素受体阳性（ER+）乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用及分子机制。方法:采用ER+人乳腺癌MCF-7细胞建立对他莫昔芬耐药的MCF-7/TAMR细胞,MTT法检测他莫昔芬对MCF-7和MCF-7/TAMR细胞增殖的影响。Western blot检测FKBP51和蛋白激酶B（AKT）信号通路中相关蛋白在MCF-7和MCF-7/TAMR细胞中的表达情况。通过敲低或者过表达FKBP51,观察FKBP51对ER+乳腺癌细胞耐药性及AKT信号通路的影响。在ER+人乳腺癌组织标本中验证FKBP51表达情况。结果:成功建立MCF-7/TAMR细胞株。他莫昔芬对MCF-7和MCF-7/TAMR细胞增殖的抑制率均呈剂量依赖性,且对MCF-7细胞增殖的抑制率高于MCF-7/TAMR细胞（P<0.05）。Western blot结果显示,FKBP51在MCF-7/TAMR细胞中的表达低于MCF-7细胞,并且其表达水平的降低激活AKT信号通路的活性,促进乳腺癌细胞对他莫昔芬的耐药。同时,FKBP51在ER+他莫昔芬耐药人乳腺癌组织中表达水平低于他莫昔芬敏感人乳腺癌组织。结论:FKBP51表达水平降低促进ER+乳腺癌患者对他莫昔芬耐药,可能与激活细胞内AKT信号通路有关。     

苯并二氢吡喃衍生物对人类乳腺癌细胞增殖的影响

目的研究苯并二氢吡喃衍生物xy2004对乳腺癌细胞增殖的影响。方法采用MTT比色法测定化合物对MCF-7细胞的
增殖作用;用流式细胞术测定化合物对细胞凋亡的影响,用放射性配体结合法考察化合物与雌激素受体（ER）的亲和力,用蛋白
印记杂交法观察细胞内凋亡蛋白的变化。结果低浓度的xy2004促进MCF-7细胞增殖,其增殖作用可被tamoxifen阻断;高浓
度xy2004 抑制MCF-7 细胞增殖,诱导细胞凋亡,Bax 蛋白表达增强,Bcl-2 蛋白表达降低;xy2004 对ERα和ERβ的IC50分别为
7.38×10-5 mol/L 和4.12×10-7 mol/L。结论化合物xy2004低浓度促进MCF-7细胞增殖,其增殖作用机制与ERα激动有关,高浓
度抑制MCF-7细胞增殖,抗增殖作用与诱导细胞凋亡相关。
     

膜雌激素对乳腺癌MCF-7细胞生长的调控及其对其表皮生长因子受体表达水平的影响

目的：探讨膜雌激素持续作用对乳腺癌细胞生长调控的影响及其可能的分子机制。方法采用MTT法测不同浓度的膜雌激素对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响。分别采用MTT法和RT-PCR法分析不同的信号抑制剂调控后,膜雌激素对乳腺癌细胞MCF-7生长及其EGFR mRNA表达水平的影响。结果终浓度为10-7M和10-12M的膜雌激素持续作用能诱导乳腺癌MCF-7细胞的增殖。膜G蛋白藕联受体阻断剂苏拉明和EGFR阻断剂AG-1478能明显抑制膜雌激素对MCF-7细胞生长的诱导作用。苏拉明和AG-1478能抑制膜雌激素持续作用上调MCF-7细胞中EGFRmRNA表达的作用。结论雌激素膜持续效应能刺激乳腺癌细胞的增殖,这一作用是通过膜G蛋白藕联受体和EGFR通路来完成的。     

番茄红素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的 观察番茄红素对体外培养的雌激素受体阳性(ER )乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞MDA-MB-231的存活率、细胞周期及凋亡的影响.方法 采用MTT法和H3-TdR 掺入法观察番茄红素对两种细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和DNA合成,具有剂量效应关系,随着时间延长,抑制作用增强,最大抑制率分别为52.6%、61.9%.流式细胞仪结果显示,番茄红素作用24 h后,MCF-7、MDA-MB-231细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少,同时可诱发MDA-MB-231细胞凋亡.结论 番茄红素通过阻滞MCF-7细胞于G1期而抑制该细胞的增殖,而对MDA-MB-231细胞增殖的抑制除可通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.     

三苯氧胺与阿霉素联合应用对乳腺癌MCF-7细胞生长与凋亡的影响

目的：探讨三苯氧胺（tamoxifen,TAM)和阿霉素(adriamycin，ADM)联合应用对乳腺癌细胞MCF—7(ER )生长和凋亡的影响。方法：分别或联合应用不同浓度的TAM、ADM作用于MCF—7细胞，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，应用流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率。结果：TAM与ADM均可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡。TAM可造成MCF—7细胞G0／G1期阻滞，且呈时间、剂量依赖性；ADM可造成G2／M期细胞增高；两者联用时MCF—7细胞的生长抑制率、凋亡率无明显增加，G0／G1期细胞增高。结论：TAM与ADM可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡，两者联合应用不能增强作用效果，无协同作用。     

The Influence of Phorbol Ester on the Effect of Tamoxifen in Breast Cancer Cells

The growth of breastcells is stimulated simulta-neously by peptide growth factors and steroids,andithas been recently found thatthere are crosstalks inseveral levels between the two pathways. To eluci-date if the activation of extracelluar signal transduc-tion pathway influences the response of estrogen re-ceptor(ER) positivebreastcancer cellsto tamoxifen,we examined the influence of TPA,an activator ofprotein kinase C and mitogen activated protein ki-nase,on the effectof tamoxifen.1　 MATE…     

尿路上皮癌相关1基因通过竞争性抑制miR-18a增强乳腺癌细胞的他莫昔芬治疗耐药

目的：探讨尿路上皮癌相关1（urothelial carcinoma-associated 1,UCA1）基因及miR-18a在雌激素受体（estrogen receptor, ER）阳性的乳腺癌细胞他莫昔芬耐药中的作用和调控机制。方法： 通过反转录实时定量PCR测定乳腺癌细胞中UCA1和miR-18a的表达,用双荧光素酶报告实验验证miR-18a和UCA1 3′UTR区域结合。在他莫昔芬敏感的MCF-7细胞中过表达UCA1或敲减miR-18a,在他莫昔芬耐药的LCC9和BT474细胞中敲减UCA1或过表达miR-18a,CCK-8方法测定细胞活力,软琼脂克隆形成实验测定细胞克隆形成能力,流式细胞术测定细胞周期。结果： 他莫昔芬耐药的LCC2、LCC9和BT474细胞中,UCA1表达量显著高于他莫昔芬敏感的MCF-7细胞。MCF-7细胞在0.1 μmol/L 他莫昔芬处理后,UCA1的表达水平显著升高。UCA1过表达提高了MCF-7细胞在他莫昔芬处理后的活力,而UCA1 siRNA则显著降低了LCC9和BT474细胞在他莫昔芬处理后的活力。在MCF-7细胞中,相对于质粒对照+他莫昔芬组,UCA1+他莫昔芬组的克隆数目多19.0%,克隆平均大小增加29.0%,G1期细胞比例减少7.3%,S期细胞增加6.7%。在BT474细胞中,相对于siRNA对照+他莫昔芬组,si-UCA1+他莫昔芬组的克隆数目少54.0%,克隆平均大小减少42.0%,G1期细胞比例增加9.0%,S期细胞减少6.2%。UCA1有一个miR-18a结合位点,敲减miR-18a提高了MCF-7细胞在他莫昔芬处理后的活力,过表达miR-18a则显著降低了BT474细胞在他莫昔芬处理后的活力。在MCF-7细胞中,相对于对照+他莫昔芬组,miR-18a抑制+他莫昔芬组的克隆数目多15.0%,克隆平均大小增加33.0%,G1期细胞比例减少8.8%,S期细胞增加5.3%。在BT474细胞中,相对于对照+他莫昔芬组,miR-18a过表达+他莫昔芬组的克隆数目少47.0%,克隆平均大小减少25.0%,G1期细胞比例增加13.3%,S期细胞减少7.9%。结论： UCA1可以通过竞争性抑制miR-18a增强乳腺癌细胞的他莫昔芬治疗耐药。