釉基质蛋白对人牙周膜细胞粘附、伸展的影响

目的：了解釉基质蛋白对人牙周膜细胞黏附，伸展的影响。方法：改良组织块法培养人牙周膜细胞，固相结合分析方法观察釉基质蛋白对人牙周膜细胞黏附，伸展的影响。结果：实验组PDLC黏附率与对照组无差别，实验组PDLC伸展率高于对照组。结论：EMPs对PDLC黏附无影响，但可促进其伸展。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞总蛋白含量和超微结构的影响

目的：观察釉基质蛋白对人牙周膜细胞总蛋白含量及超微结构的影响。方法：组织块法培养人牙周膜细胞。考马斯亮蓝法测定人牙周膜细胞的总蛋白含量。透射电镜技术观察细胞超微结构。结果：釉基质蛋白质量浓度在50mg／L时即可明显增加人牙周膜细胞的总蛋白含量，l00mg／L时细胞的总蛋白含量增加到最大，此时，细胞的超微结构显示：核仁明显，粗面内质网及高尔基复合体发达。结论：釉基质蛋白能促进人牙周膜细胞核酸及蛋白质的合成活性。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞群在牙骨质上附着与增殖的影响

目的研究釉基质蛋白(emdogain,EMD)对体外培养的人牙周膜细胞群(human periodontal ligament cellpopulations,hPDLPs)在牙骨质片上附着、增殖的影响,为EMD联合hPDLPs应用于牙周组织缺损修复提供实验依据。方法采用组织块法分离培养hPDLPs,制备人牙骨质片,实验组用含100 mg/mL EMD的培养液包被处理牙骨质片,对照组用不含EMD的培养液处理。分别于细胞接种牙骨质片上16 h(观察附着情况)和72 h(观察增殖情况),用噻唑蓝比色法检测牙骨质片上的细胞数;同时,用扫描电镜观察牙骨质片上的细胞数。结果噻唑蓝比色法检测,实验组细胞附着数(t=-3.318,P=0.008)、增殖数(t=-6.499,P<0.001)明显多于对照组,两组之间差异有统计学意义。扫描电镜观察计数,实验组hPDLPs附着数(t=8.001,P<0.001)、增殖数(t=13.046,P<0.001)较对照组多,差异有统计学意义。结论 EMD可促进hPDLPs在牙骨质表面的附着和增殖,提示EMD和hPDLPs可联合应用修复牙周组织缺损。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白的影响

目的:观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白能力的影响.方法:乙酸法提取猪釉基质蛋白,改良组织块法原代培养人牙周膜细胞,免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白的能力.结果:人牙周膜细胞胞浆骨桥蛋白、骨涎蛋白染色阳性,200、100、50mg/L釉基质蛋白作用下可以使细胞胞浆骨桥蛋白、骨涎蛋白染色不同程度地加深.人牙周膜细胞在釉基质蛋白作用下,最早从第3d开始骨桥蛋白表达增加、从第7d开始骨涎蛋白表达增加.结论:一定浓度的釉基质蛋白在特定的时间可以促进牙周膜细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白.     

釉基质蛋白对人牙囊和牙周膜细胞黏附增殖的影响

目的 比较釉基质蛋白（EMP）对人牙囊细胞（hDFC）和人牙周膜细胞（hPDLC）在钛片表面黏附和增殖能力的影响。方法 分离培养hDFC和hPDLC,双喷砂加酸蚀处理钛片表面。实验分为4组：hDFC＋EMP诱导组、hDFC组、hPDLC＋EMP诱导组、hPDLC组。采用噻唑蓝（MTT）法和细胞免疫荧光染色法,定量分析细胞在钛片表面的黏附和增殖情况,扫描电子显微镜观察细胞在钛片表面1～7 d的生长情况。结果 1～7 d各组间MTT值的差异无统计学意义（P〉0.05）;加有EMP诱导的2组细胞较2组单纯细胞培养组的形状系数（Sf）值更高（P〈0.05）,hDFC组和hPDLC两组间Sf值差异无统计学意义（P〉0.05）,hDFC＋EMP诱导组较hPDLC＋EMP诱导组Sf值高（P〈0.05）。结论 EMP能促进hPDLC和hDFC在钛片表面的黏附,且对hDFC的促进作用更强;但对接种在钛片表面的hPDLC和hDFC短期增殖没有影响。     

BMP4对人牙周膜细胞骨钙素分泌的影响

目的观察体外培养的人牙周膜细胞转染骨形成蛋白4基因(bone morphogenetic protein,Bmp4)后,骨钙素(osteocalcin,OCN)的分泌变化,为深入探讨BMP4在牙周再生中的调控作用奠定基础。方法Bmp4基因转染体外培养的第四代人牙周膜细胞,经原位杂交检测确定Bmp4成功转染细胞后,计数并统计转染组和未转染组人牙周膜细胞中骨钙素的表达变化。结果Bmp4基因转染后的人牙周膜细胞上清液中骨钙素的含量明显高于未转染组细胞。结论Bmp4基因能够促进人牙周膜细胞分泌非胶原蛋白,因此,对牙周组织的再生具有一定的调控作用。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：探讨釉基质蛋白对于牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：采用细胞培养技术,噻唑盐比色测定（MTT）法和酶动力学方法,观察釉基质蛋白对牙周膜细胞的作用。结果：釉基质蛋白组的牙周膜细胞,其增殖活性显著提高,以50mg/L浓度为最佳;其ALP活性也较对照组明显增加,以200mg/L浓度的效果最佳。具有一个合适的剂量范围。结论：釉基质蛋白可促进人牙周膜细胞的增殖和ALP活性。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响

目的：观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响。方法：改良组织块法培养人牙周膜细胞，免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的能力。结果：50、100、200mg/L的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞合成I、Ⅲ型胶原，其中，以100mg/L釉基质蛋白的促I型胶原合成作用最明显，50mg/L釉基质蛋白的促Ⅲ型胶原合成作用最明显。但是，这种促进作用有一定的时间性。结论：一定浓度的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原。     

Emdogain诱导人牙周膜细胞群向成牙骨质细胞分化的研究

目的探讨人牙周膜细胞群（human periodontal ligament cell populations,hPDLPs）在Emdogain（EMD,商品化的猪釉基质蛋白）诱导下生物学特性的改变。方法组织块法分离培养牙周膜细胞,用含100 mg/L EMD的培养液诱导6 d,光镜下观察细胞形态改变,扫描电镜观察细胞在牙骨质片上的形态变化。免疫细胞化学检测成牙骨质细胞相关矿化蛋白：骨涎蛋白（bone sialoprotein,BSP）、Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ,COLⅠ）的表达。结果EMD诱导后细胞由长梭形向多角形的类成牙骨质细胞分化。免疫组织化学检测结果显示诱导后BSP、COLⅠ的表达增强。结论EMD可以诱导人牙周膜细胞群向类成牙骨质细胞方向分化。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的影响

目的:观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的影响.方法:改良组织块法培养人牙周膜细胞,免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的能力.结果:50、100、200 mg/L的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原,其中,以100 mg/L釉基质蛋白的促Ⅰ型胶原合成作用最明显,50 mg/L釉基质蛋白的促Ⅲ型胶原合成作用最明显.但是,这种促进作用有一定的时间性.结论:一定浓度的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原.     

釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和牙骨质相关蛋白基因表达的影响

目的 通过研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMP)对人牙周膜细胞增殖及牙骨质相关蛋白基因表达的影响,探讨EMP促进牙骨质形成的机制.方法 分别用质量浓度为0(对照组)、50、100、200、300 mg/L的EMP作用于培养的人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC),在培养的第1、3、5、7天用甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖活性;在培养的第7天用荧光实时定量反转录聚合酶链反应法检测各组细胞牙骨质附着蛋白(cementum attachment protein,CAP)和牙骨质蛋白23(cementum protein-23,CP-23)mRNA表达量.结果 EMP质量浓度在50 ～ 200 mg/L范围内可以促进人PDLC增殖,在300 mg/L时抑制细胞增殖;EMP质量浓度为100、200 mg/L时可以显著促进CAP mRNA(分别为4.661 ±0.154、5.923±0.788)和CP-23mRNA的表达(分别为1.222±0.089、3.795±0.640)与对照组(CAP:1.006±0.062,CP-23:1.012±0.163)相比差异均有统计学意义(P＜0.05),且以200 mg/L EMP的促表达效果最佳.结论 EMP在一定浓度范围内能促进人PDLC增殖及CAP和CP-23基因表达,提示EMP可能通过促进细胞增殖和牙骨质相关蛋白的表达促进牙骨质的形成.     

富血小板血浆对人牙周膜细胞增殖及分化的影响

目的:探索不同浓度富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对人牙周膜细胞体外增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响.方法:两步离心法制备PRP,用酶联免疫吸附法检测血浆、PRP、激活后PRP上清液中转化生长因子-β1(transforming growth factors-β1,TGF-β1)和血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factorAB,PDGF-AB)的水平.分别用2%、5%、105、20%激活后的PRP作用于人牙周膜细胞,以DMEM培养液为阴性对照.在作用24h和72h后,用细胞计数试剂盒检测细胞增殖状况,以对硝基磷酸二钠为底物,检测细胞ALP的活性.用SPSS10.0软件包中的方差分析和配对t检验进行统计学分析.结果:激活后的PRP上清中,TGF-β1和PDGF-AB的水平均高于未经激活的PRP和血浆.各浓度PRP促细胞增殖和ALP活性的作用均显著强于阴性对照组(P＜0.001);各浓度PRP 72h时促细胞增殖和ALP活性的作用均高于24h时(P＜0.01);不同浓度PRP组问存在显著差异(P＜0.001),PRP浓度从2%渐增至10%时,细胞增殖和ALP活性随之增加;当PRP浓度达到20%时,促细胞增殖作用开始下降,而促ALP活性作用继续增强.结论:在1～3d内,PRP对人牙周膜细胞的体外增殖和ALP活性均有促进作用,并在一定范围内呈剂量依赖关系.     

机械牵张力对人牙周膜细胞成骨样细胞功能的影响

目的 观察机械力作用下牙周膜细胞成骨样细胞特性的改变，以深入探讨正畸牙齿移动的机理。方法 利用自行研制的细胞加力装置对体外培养的人牙周膜细胞施加间歇性机械牵张力，检测其成骨样细胞表型蛋白碱性磷酸酶（alkaline phosphotase,ALP)、骨桥蛋白（osteopontin,OPN)和骨钙素（osteocalcin,OCN)表达的改变。结果 人牙周膜细胞在受到机械牵引力刺激后表现为ALP分泌活性的影响，而且24h的时段内波动，2、4h和24h出现2个显著增高期（P＜0．01）；OCN受机械牵张力影响出现较缓慢和晚期的表达增强，加力4h后缓慢增高，在12h最为明显（P＜0．05）；非分泌型ALP、OPN随观察时间延长蛋白表达水平，如ALP、OCN和OPN都增强，具有时序性。提示人牙周膜细胞在机械力诱导下向成骨样细胞分化成熟，从而可能在机械力介导的骨改建中起作用。     

人牙周韧带细胞膜片的体外实验研究

目的 观察体外培养人牙周韧带细胞(hPDLCs)的成骨、成脂能力;构建hPDLCs膜片并鉴定膜片细胞外基质的主要结构蛋白.方法 通过酶联组织块法分离并纯化培养hPDLCs;免疫细胞化学法鉴定hPDLCs来源及干细胞标志物STRO-1表达情况;取第2～4代细胞分别用成骨诱导培养基和成脂诱导培养基培养,茜素红及油红O染色检测hPDLCs的成骨、成脂能力;制备成熟的hPDLCs膜片,苏木素-伊红(HE)及免疫组织化学染色法鉴定膜片细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白的表达情况.结果 经原代培养的hPDLCs抗波形蛋白染色阳性,干细胞标志物STRO-1染色阳性,证实hPDLCs来源于间充质并具有干细胞潜在分化能力;hPDLCs在诱导成骨、成脂分化培养14～16 d后,茜素红及油红O染色结果阳性提示hPDLCs具有良好的成骨及成脂分化能力;HE染色及免疫化学染色发现hPDLCs膜片高表达细胞外基质主要结构蛋白Ⅰ型胶原、层黏蛋白及纤连蛋白.结论 本研究从细胞分离培养,来源鉴定、多向分化潜能诱导及细胞膜片技术等方面证实PDLCs中存在成体干细胞,提示hPDLCs膜片能为牙周组织再生种子细胞提供新来源,可进一步深入研究.     

纯钛表面牙周韧带细胞形成物骨钙素的表达

目的：以骨钙素为细胞分化指标，探讨商用纯钛表面牙周韧带细胞形成物的特征。方法：将牙周韧带细胞和纯钛进行复合培养，分别在第8天，第16天和第24天取材，免疫荧光染色原位观察骨钙素的表达，结果：第8天后，牙周韧带细胞在纯钛表面即可形成复层生长，并持续高表达骨钙素，结论：牙周韧带细胞在纯钛表面有向成骨样细胞分化的趋势，表现为形成高度表达骨钙素的类组织。