耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药性及金属β-内酰胺酶的检测

目的 了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的状况及耐药性,为临床合理选用抗生素提供依据。方法 细菌鉴定、药敏实验采用WalkAway-40全自动微生物分析仪,金属β-内酰胺酶检测采用双纸片增效法。结果 铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率从1999年的13．0％升高到2005年的39．1％。亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌对阿米卡星、头孢他啶、哌拉西林／他巴坦和头孢吡肟的耐药率在60％～63％之间,对妥布霉素、氨曲南、庆大霉素、环丙沙星和哌拉西林的耐药率分别为66．5％、68．0％、70．7％、71．0％和72．2％,金属β-内酰胺酶的检出率为15,7％。结论 亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌呈逐年增加的趋势,且多重耐药现象严重;产金屑β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制,实验室应加强对金属β-内酰胺酶的检测。     

淮北地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制

目的探讨淮北地区铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）对亚胺培南的耐药机制。方法采用K-B法和MIC法检测25株临床分离亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对12种临床常用抗生素的敏感性;采用PCR法检测外膜蛋白OprD2和金属β-内酰胺酶（MBLs）耐药相关基因（IMP、VIM、SPM、GIM）。结果 25株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中15株外膜通道蛋白OprD2基因缺失,缺失率60%;5株产金属酶,检出率20%（4株产VIM-2,1株产IMP-1）;未检出SPM-2、GIM基因。结论淮北地区铜绿假单胞菌亚胺培南耐药,外膜通道蛋白OprD2缺失与产金属酶均起重要作用。     

铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的临床调查研究

目的调查临床分离铜绿假单胞菌产金属β内酰胺酶株分布情况及耐药现状，为临床合理应用抗生素提供依据。方法收集临床分离的铜绿假单胞菌，采用κ—B法筛选对亚胺培南和头孢他啶同时耐药菌株，E—test法检测产金属伊内酰胺酶菌株，最后用最低抑菌浓度（MIC）法测定产金属β-内酰胺酶菌株对8种常用抗菌药物的敏感度。结果300株铜绿假单胞菌中同时耐亚胺培南和头孢他啶者34株，占11．3％（34／300）；其中检出产金属伊内酰胺酶15株，占5．0％（15／300），产酶株分布较为集中，产酶株对亚胺培南和头孢他啶等抗生素高水平耐药，对阿米卡星和环丙沙星部分耐药。结论铜绿假单胞菌产金属伊内酰胺酶检出率升高，产酶株的多重耐药较严重，应高度重视产金属β内酰胺酶铜绿假单胞菌的监测与控制。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性分析及金属β-内酰胺酶的检测

目的调查盐城市第一人民医院住院患者送检标本分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药水平及其产金属β-内酰胺酶(MBLs)的情况。方法临床标本分离的铜绿假单胞菌采用法国生物梅里埃细菌鉴定及药敏检测系统进行细菌鉴定与药物敏感性试验;采用纸片协同实验来检测铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的情况。结果 236株铜绿假单胞菌中有63株对亚胺培南耐药,耐药率为26.69%,耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星、氨曲南部分耐药,耐药率分别为45.12%、50.33%、59.74%、61.43%、62.12%和63.16%;对头孢他啶、头孢吡肟、哌拉西林、美罗培南耐药率较高;63株耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶的检出率为38.10%(24/63)。结论金属β-内酰胺酶的产生是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制之一,实验室应加强对产酶菌株的监测,为临床合理选用抗生素提供有效依据。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性

目的：研究铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率及对其他抗菌药物的耐药率。方法：收集2000年1月—2002年12月我院细菌室分离的铜绿假单胞菌，采用琼脂扩散法作敏感试验。结果：2000年分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率为20．6％(32／155)，2001年为39．0％(48／123)，2002年为41．3％(95／230)。痰标本分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌最多见，占69．1％(121／175)，其次为尿液、伤口分泌物等。耐亚胺培南铜绿假单胞菌主要分布在外科监护病房，占35．6％(51／143)，其次为呼吸监护病房(33．5％)、外科(12．5％)和呼吸科(6．25％)等。耐亚胺培南铜绿假单胞菌对多种抗菌药物耐药，对氨曲南、头孢他啶、头孢吡肟、庆大霉素和环丙沙星的耐药率逐年升高。外科监护病房和呼吸监护病房分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌对其他抗菌药物的耐药率均较高。结论：铜绿假单胞菌对碳青霉烯类的耐药率逐年增加，并对多种抗菌药耐药，应引起高度重视。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的研究

目的检测该院2005年4~7月住院患者耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)产金属β-内酰胺酶(MBL)的情况,为难治性感染治疗提供参考。方法VITEK-60鉴定细菌及测定PA对抗菌药物的耐药性;纸片法检测PA产MBL。结果共检出PA103株,耐亚胺培南PA47株,同时耐头孢他啶16株,其中产MBL的PA8株,占所分离PA的7.8%,占耐亚胺培南PA的17.0%。8株产酶菌株中除1株对左旋氧氟沙星敏感外,对羧苄青霉素、阿米卡星、替卡西林/克拉维酸、头孢哌酮、头孢他啶、头孢吡肟、奈替米星、复方增效磺胺、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星等抗生素均耐药;非产酶菌株仅有2株对羧苄青霉素敏感,1株对阿米卡星敏感,对其他抗生素均耐药。结论临床感染分离的PA、产酶菌株与非产酶菌株均呈多重耐药性。产MBL是PA对头孢类及碳青酶烯类抗生素耐药的机制之一,实验室对其正确检测可帮助临床合理选用抗菌药物,并减少耐药性的扩散。     

106株铜绿假单胞菌耐药性分析及金属β-内酰胺酶检测

目的分析医院铜绿假单胞菌的分布、耐药性及产金属β-内酰胺酶的现状,为临床治疗铜绿假单胞菌感染提供合理用药的实验依据。方法将VITEK-2全自动鉴定仪鉴定出的106株铜绿假单胞菌,采用琼脂纸片扩散(K-B)法进行体外耐药性监测及统计耐药率,同时用双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶的百分率。结果 106株铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的22株,占20.8%。金属β-内酰胺酶阳性与阴性的铜绿假单胞菌耐药率相比较,对头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、头孢哌酮的耐药率差异有统计学意义(P<0.05);而对氨曲南、阿米卡星、左氧氟沙星、庆大霉素呈现的耐药率二者差异无统计学意义(P>0.05)。结论产金属β-内酰胺是铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制之一,临床应根据药敏结果及产酶情况综合考虑合理用药,以减少耐药菌株的产生。     

铜绿假单胞菌的耐药性与金属β-内酰胺酶检测

目的检测铜绿假单胞菌的耐药性以及β-内酰胺金属酶阳性率。方法采用K-B法检测356株铜绿假单胞菌对20种常用抗生素的耐药率,采用IPM EDTA与CAZ EDTA抑菌环直径之差判断金属酶阳必性率。结果356株铜绿假单胞菌有86株对IPM耐药。有155株对CAZ耐药,82株同时对CAZ与IPM耐药,从中共检测出16株铜绿假单胞菌产金属酶,对大多数抗生素形成耐药。结论金属酶对氨曲南和多粘菌素B稳定,可作为产金属酶铜绿假单胞菌临床感染治疗的首选药物。通过密切监视产金属酶菌株的发展趋势,合理使用抗生素,减少耐药菌株的传播。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌产OXA型β内酰胺酶分型

目的探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)产生的OXA型β内酰胺酶的基因型及其与整合子的关系。方法收集临床分离耐亚胺培南PA;提取总DNA,用PCR技术作OXA基因(blaOXA)分型及整合子可变区PCR定位。结果105株受试菌中,共检出blaOXA阳性株20株,其中14株blaOXA-Ⅰ阳性(包括3株同时blaOXA-Ⅱ阳性,3株同时blaOXA-Ⅲ阳性),另6株仅blaOXA-Ⅱ阳性。20株阳性株中10株含酶基因相关整合子。结论国内耐亚胺培南PA中部分菌株产blaOXA-Ⅰ,同时存在产OXAⅡ、Ⅲ型酶菌株,且酶基因与整合子相关。     

铜绿假单胞菌外膜蛋白D2与亚胺培南耐药的关系

目的制备铜绿假单胞菌(PA)的外膜蛋白(Opr)D_2多克隆抗体,探讨OprD_2缺失与亚胺培南耐药的关系。方法常规酚-氯仿法提取PA的基因组DNA,PCR扩增OprD_2基因,构建原核表达质粒pRSET-OprD_2,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达目的蛋白,胶回收后制备兔多克隆抗体,应用该抗体检测临床分离的32株PA OprD_2的表达情况。结果成功构建了OprD_2原核表达载体,制备了特异性好的OprD_2多克隆抗体。蛋白印迹法检测27株临床分离的耐亚胺培南PA,20株(74.1%)OprD_2表达缺失,5株(18.5%)OprD_2表达明显减少,2株(7.4%)OprD_2表达正常。结论临床分离的PA OprD_2表达的缺失或减少是PA对亚胺培南耐药的主要机制之一。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的药敏情况与耐药机制

目的：探讨44株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的药敏情况和产金属β-内酰胺酶的类型。方法：采用K-B法测定抗菌药物对细菌的体外抗菌活性，双纸片协同试验进行金属β-内酰胺酶筛选，PCR法进行金属β-内酰胺酶耐药基因IMP和IMP的检测。结果：阿米卡星敏感性最高为27．3％，其次为环丙沙星（20．5％）和头孢吡肟（15．9%）；44株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中，扩增出IMP型阳性株4株，未检测到VIM型金属β-内酰胺酶基因。结论：对耐亚胺培南铜绿假单胞菌引起的感染，阿米卡星、环丙沙星和头孢吡肟可以考虑使用。北京天坛医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制中，产IMP型金属β-内酰胺酶起着重要作用。     

碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2的研究

目的 研究铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2与碳青霉烯类抗生素耐药的关系.方法 琼脂稀释法测定14种抗菌药物对铜绿假单胞菌的MIC.PCR扩增oprD2编码基因并进行序列分析.十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2的变化,比较敏感株和耐药株外膜蛋白的差异,统计分析采用均数t检验.结果 141株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南药敏试验结果显示具3种模式,以亚胺培南和美罗培南同时耐药(IMPRMEMR)为主,占66.7%;亚胺培南耐药和美罗培南敏感(IMPRMEMS)占32.6%;亚胺培南敏感和美罗培南耐药(IMPSMEMR)仅占0.7%.PCR扩增141株耐药株oprD2编码基因结果136株耐药株oprD2编码基因发生显著变异,变异位点呈现多样性.其中34株细菌的oprD2编码基因存在大片段缺失,6株的oprD2编码基因中有插入片段,96株有小片段缺失或不同位置的多个点突变.另4株产金属酶菌株及1株亚胺培南敏感(美罗培南耐药)株的oprD2编码基因未发现异常.对其中16株碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌进行SDS-PAGE分析,结果显示10株IPMRMEMR和5株IPMRMEMS铜绿假单胞菌外膜蛋白均存在分子量46 000 u处的OprD2蛋白减少,而1株IMPSMEMR株OprD2蛋白带未见异常.结论 oprD2编码基因的缺失或突变可能是导致外膜蛋白OprD2缺失或减少的分子基础,并是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素尤其是亚胺培南耐药的主要机制之一.     

广州地区泛耐药铜绿假单胞菌的分子流行病学调查

目的 调查广州地区4家医院2005年3月至2007年3月泛耐药铜绿假单胞菌株之间的同源性,了解是否有该耐药株暴发流行.方法 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对134株泛耐药铜绿假单胞菌株进行分型,明确其是否为同一菌株的克隆.结果 134株铜绿假单胞菌PFGE图谱分为56型,其中主要流行型A型有45株,主要在医院A的中心ICU传播流行.其余3家医院也存在各自的流行株,即B、C、D医院的流行株分别为B型、C型、D型,占各医院的总分离株数的22.6%(7/31)、33.3%(6/18)、31.6%(6/19).克隆株Q型同时存在于B医院与D医院,B医院和C医院分别有1株菌与A医院的A型同源性在80%以上,其余菌株在各医院问无同源性.对A医院ICU环境、纤维支气管镜、呼吸机管道采样,未发现A型克隆株存在;但有6例携带A型克隆株的患者在调查时间里多次入住ICU的情况.耐药机制分析,42株A克隆产IMP-9金属β内酰胺酶,B、C、D克隆不产金属酶.结论 在2年的调杏中,广州地区4家大型医院均存在不同规模的泛耐药铜绿假单胞菌株克隆株传播,虽然未发现优势克隆株在4家医院大规模传播,但部分医院间已有共同的克隆株存在.加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控可能是控制克隆株继续传播的关键.     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的整合子检测及其与多重耐药相关性的研究

目的调查亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌携带整合子情况,了解其与多重耐药的相关性。方法采用Mi—croWlkway-96全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药敏试验,PCR法对临床分离的120株亚胺培南耐药和80株亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌进行整合子检测。结果120株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中I类整合子的检出率为81．7％（98／120）、Ⅲ类整合子检出率为1．7％（2／120）,未检出Ⅱ类整合子;80株亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌中I类整合子的检出率为21．3％（17／80）,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子。整合子阳性的铜绿假单胞菌对临床常用抗菌药物的耐药率明显高于整合子阴性的铜绿假单胞菌,并且前者多重耐药现象较为严重。结论I类整合子广泛存在于亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中,并与其多重耐药性密切相关。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及β-内酰胺类耐药基因研究

目的分析该院2005年1～12月临床分离的34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特征以及B～内酰胺类耐药相关基因存在状况。方法应用BDPhoenix100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,头孢哌酮／舒巴坦敏感性检测采用K—B法。应用PCR方法检测12种β-内酰胺类耐药相关基因,分别为TEM、SHV、CARB、OXA-10、PER、VEB、GES、DHA、IMP、VIM、GIM、SPM。结果亚胺培南耐药铜绿假单胞菌除对阿米卡星100．00％敏感外,对哌拉西林、哌拉西林／他唑巴坦敏感率为48．00％～55．00％,对第3、4代头孢菌素、氨曲南、喹诺酮类等抗生素抗菌活性差,敏感率为3．22％～29．03％。对美洛配能29．03％敏感,对氨苄西林／舒巴坦、氯霉素、四环素、复方新诺明全部耐药。β-内酰胺类耐药相关基因TEM、CARB、DHA、IMP阳性率分别为5．9％、32．4％、14．7％、17．6％,而SHV、0XA-10、PER、VEB、GES、VIM、GIM、SPM均为阴性。结论耐亚胺培南的铜绿假单胞菌除对阿米卡星敏感外,对其他常用抗生素耐药严重。携带TEM、CARB、DHA、IMP基因是本组试验菌株对β-内酰胺类抗生素和亚胺培南耐药的重要机制。     

绿脓假单胞菌β内酰胺类耐药基因研究

目的 调查湖北襄樊地区绿脓假单胞菌多重耐药菌株中β内酰胺酶编码基因及oprD2基因存在状况。方法 采用PCR方法检测分离自本地区的35株绿脓假单胞菌耐药菌株各种β内酰胺酶编码基因TEM、SHV、OXA、PER、GES、IMP、VIM、质粒型AmpC酶DHA、MIR及OprD2。结果 35株β内酰胺类耐药基因TEM、OXA、质粒型AmpC酶DHA的阳性率分别为51．4％、17．1％、2．9％，OprD2基因缺失率100％，而SHV、PER、GES、IMP、VIM、MIR基因检测均阴性。结论研究表明，携带TEM、OXA、质粒型AmpC酶DHA以及OprD2基因缺失是导致本组绿脓假单胞菌多重耐药菌株对β内酰胺酶类抗生素耐药的重要机制。     

广州地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌的感染现状及耐药性检测

目的调查广州地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌在医院内的感染现状及耐药谱特性,帮助临床合理选用抗生素。方法用VITEK-32型全自动细菌分析系统筛选广东省中医院、南方医院、广州中医药大学附属第一医院、中山大学附属第二医院2005-2007年期间耐亚胺培南铜绿假单胞菌,并用琼脂稀释法检测其对亚胺培南的最低抑菌浓度。结果440株铜绿假单胞菌中,耐亚胺培南81株（18．41％）。在所测试的抗生素中,耐亚胺培南菌株组与非耐亚胺培南菌株组之间的耐药率差异明显,尤以庆大霉素（分别为65．43％、10．86％）、头孢他啶（分别为53．09％、10．03％）和阿米卡星（分别为53．09％、12．26％）显著。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药,且耐药率有逐年增高的趋势,在治疗时应根据药敏试验结果合理谨慎选用抗生素,有效控制及减缓耐药株的产生。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析

目的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析研究。方法采用K-B法检测100株耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA),并用聚合酶链式反应(PCR)法检测分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关金属酶IMP、VIM基因以及外膜通道蛋白OprD2基因。结果 70株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为多重耐药菌,对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦的敏感性较高。金属酶IMP基因阳性率为24.29%(17/70),vIM型金属酶基因阳性率为7.14%(5/70),外膜蛋白通道OprD2基因阳性率为68.57%(48/70),其中外膜蛋白通道OprD2基因缺失率为58.33%。结论 IRPA耐药情况严重。外膜蛋白通道OprD2基因缺失突变是本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制之一。     

2000-2005年耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药性的变化

目的比较分析我院2003—2005年与2000-2002年耐亚胺培南铜绿假单胞菌的发生率及对其他抗菌药物的耐药性变迁。方法收集我院自2000年1月2005年12月细菌室分离的铜绿假单胞菌，采用琼脂扩散法进行药敏试验。结果2003-2005年间细菌对亚胺培南耐药率为26．5％（160／604），2000-2002年间耐药率为34．4％（175／508，与2003-2005年比较差异有显著性，P〈0．01）。痰标本中分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌在2003-2005年与2000-2002年均占较大比例，分别为75．0％（120／160）和69．1％（121／175），其次为尿液（分别为6．9％和11．4％）和伤口分泌物（5．0％和4．0％）。2003—2005年与2000-2002年耐亚胺培南铜绿假单胞菌对8内酰胺类、喹诺酮类和氨基苷类均耐药。但2003-2005年对庆大霉素和头孢哌酮-舒巴坦的耐药性较2000-2002年显著下降（P〈0．01）。结论碳青霉烯耐药性铜绿假单胞菌的发生率2003—2005年较2000-2002年下降，并且对多种抗菌药物的耐药性有所下降，进一步提醒临床医师合理应用抗菌药物的重要性。