乳癌组织TSLC1基因mRNA表达及启动子甲基化状态

目的探讨乳癌组织中非小细胞肺癌抑制因子（TSLC1）基因mRNA表达及其启动子甲基化状态。方法应用实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR,分别检测39例人乳癌组织及对应癌旁组织中TSLC1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,并探讨二者之间的关系。结果乳癌组织中TSLC1mRNA的表达量是癌旁组织的0.44倍。乳癌组织及癌旁组织中TSLC1基因甲基化率分别为56.4%、10.3%,乳癌组织中TSLC1基因甲基化率明显高于相应癌旁组织（χ2=16.673,P〈0.01）。甲基化的癌组织中TSLC1mRNA的表达量是非甲基化者的0.60倍,表达TSLC1mRNA的癌组织的甲基化率为50%,不表达者为100%,两者之间差异有显著性（P=0.046）。结论 TSLC1基因异常甲基化是其在乳癌组织中表达缺失或下调的原因之一,在乳癌的发生发展中起一定作用,可能成为乳癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。     

甲基化在肺癌中的意义

目的探讨基因T-钙黏蛋白(CDH13)在40例癌组织,40例的癌旁组织标本和非肺癌良性肺切除组织标本15例作为对照的表达的临床意义,进一步研究其基因异常甲基化与肺癌的相关性。方法采用特异性甲基化PCR(MSP)检测该基因在肺癌组织中异常甲基化的水平。结果 1.在肺癌组织中CDH13基因甲基化率明显高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,甲基化率分别为32.5%、7.5%、6.7%,有统计学意义(P<0.05)。2.CDH13基因异常甲基化和CDH13的表达水平呈负相关性(r=-0.520).3.CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化阳性率在肺癌组织中显著高于癌旁组织和非肺癌良性肺切除组织,CDH13基因启动子区5’CpG岛甲基化导致了CDH13的表达下调。结论在肺癌组织中CDH13基因异常甲基化率明显升高且有临床诊断意义,CDH13基因在癌组织中的异常甲基化水平将有望成为肺癌新的治疗靶点。     

人肺癌癌旁支气管上皮的病理学改变及临床意义

对28例手术切除的肺癌癌旁支气管上皮进行病理组织学及CEA免疫组化染色观察,并与慢性炎症性肺疾病的相应支气管上皮病变比较,结果表明:(1)肺鳞癌癌旁支气管上皮病变广泛且较严重,支气管上皮鳞状化生、非典型增生与肺鳞癌发生有密切关系;(2)支气管上皮角化鳞状化生是肺鳞癌独有的病变;(3)随着癌旁支气管上皮病变加重,CEA阳性率逐渐升高;(4)肺璩癌癌旁支气管上皮病变较少。提示:支纤镜活检支气管上皮有鳞状化生,尤其有角化鳞化、不典型增生者,应作为肺癌高危对象进行随访,必要时作CEA免疫蛆化染色,如为阳性,更应高度警惕癌变。     

Ⅰ型钙黏蛋白基因异常甲基化及其功能蛋白表达与肺癌的相关性

目的 探讨Ⅰ型钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)基因甲基化及其功能蛋白表达与肺癌的相关性.方法 分别提取基因组DNA、总RNA和总蛋白,用半定量荧光甲基化特异PCR(MSP)、巢式逆转录PCR(nRT-PCR)和免疫印迹法(WB)检测30例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性疾病对照肺组织中CDH1甲基化、mRNA相对表达和上皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达情况,并对部分表达阴性标本用免疫组化法进行验证.结果 半定量荧光MSP检测CDH1启动子甲基化相对比值,癌组织为0.13%～450.67%、中位数33.61%,癌旁组织为0.00%～177.02%、中位数18.04%,远癌组织为0.00%～51.68%、中位数13.69%.经配对秩和检验分析癌与癌旁组织和远癌组织中CDH1甲基化程度差异有统计学意义(Z分别为-2.355和-3.527,P分别为＜0.05和＜0.01).nRT-PCR检测CDH1 mRNA表达的相对比值,癌组织为1.33±0.48,癌旁组织为1.61±0.55,远癌组织为1.93±0.45、肺良性疾病对照肺组织为2.09±0.09,经方差分析,癌与癌旁和远癌组织的差异有统计学意义(F=9.081,P＜0.01).WB结果显示,癌组织E-cad阳性率为36.7%(11/30)、癌旁组织为70.0%(21/30)、远癌组织为96.7%(29/30),经确切概率法分析癌与癌旁和远癌组织的差异有统计学意义(X2分别为6.70、24.30和7.68,P均＜0.01).而肺良性疾病对照肺组织阳性率为100%(5/5).结论 肺癌患者癌组织CDH1启动子发生甲基化后,可抑制该基因的转录,进而影响E-cad蛋白的表达,CDH1异常甲基化与肺癌的发生有相关性.     

应用MSP方法检测非小细胞肺癌RASSFlA基因启动子甲基化

目的探讨应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测非小细胞肺癌(NSCLC)RASSFlA基因启动子甲基化情况。方法留取58例非小细胞肺癌患者手术标本及正常肺组织,甲基化特异性PCR分析RASSFlA基因启动子甲基化情况。结果58例非小细胞肺癌中RA SSFlA基因启动子甲基化阳性率为34.5%,甲基化与各临床参数之间无显著相关性。结论原发性非小细胞肺癌中存在着较高比例的RASSFlA启动子过度甲基化,提示RASSFlA在非小细胞肺癌的发生中起着重要作用。     

皮肤癌中原钙黏蛋白10基因启动子甲基化水平及意义

目的探讨皮肤癌组织中原钙黏蛋白10(protocadherin 10,PCDH10)基因的甲基化水平及临床意义。方法取67例皮肤鳞状细胞癌、85例皮肤基底细胞癌患者手术切除癌组织和癌旁正常组织标本,43例光化性角化病患者活检病变组织及正常组织标本,提取DNA进行甲基化修饰。高分辨率熔解曲线法检测各浓度标准品荧光信号强度,运用软件分析得到甲基化分型图谱,判断样本曲线在标准曲线上的位置,获得样本甲基化程度的数据。结果鳞状细胞癌、基底细胞癌组织中PCDH10基因启动子高甲基化比率(89.6%、87.1%)均高于癌旁组织(11.9%、8.2%)(P0.05);光化性角化病病变组织PCDH10基因启动子高甲基化比率(51.2%)高于癌旁正常组织(9.3%)(P0.05);鳞状细胞癌、基底细胞癌组织中PCDH10基因启动子高甲基化比率高于光化性角化病病变组织(P0.05);鳞状细胞癌组织中PCDH10基因启动子超甲基化比率为23.9%。结论高水平的PCDH10基因甲基化可能被用作皮肤癌的标志物,其中超甲基化可作为鳞状细胞癌的标志,而低水平的PCDH10甲基化可作为皮肤病早期发现的指标。     

结直肠癌患者SorCS1基因启动子甲基化检测的临床价值

目的 探讨结直肠癌患者SorCS1基因启动子甲基化检测的临床价值。方法 收集17例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织,采用MassARRAY平台检测结直肠癌患者癌组织与癌旁组织相关基因启动子甲基化水平,筛选出癌组织与癌旁组织基因启动子甲基化存在差异的基因,并与肿瘤基因图谱计划（TCGA）数据库进行比对。同时检测SEPT9基因甲基化水平。用癌组织基因启动子甲基化检测值与癌旁组织基因启动子甲基化检测值的差值（Δ）表示结直肠癌患者癌组织基因启动子甲基化水平相对于癌旁组织的差异。结果 共筛选出2个基因（SorCS1、CASR）。结直肠癌患者癌组织SorCS1、CASR、SEPT9基因启动子甲基化水平均显著高于癌旁组织（P<0.001）。与TCGA数据库的比对结果显示,膀胱尿路上皮癌、宫颈鳞状细胞癌、结肠腺癌、多形性胶质母细胞瘤、直肠腺癌、胃腺癌患者的SorCS1基因相对表达量均低于正常对照者（P<0.05）,结肠癌、直肠癌、肺腺癌患者SorCS1基因启动子甲基化水平明显高于正常对照者（P<0.05）;结直肠癌患者与正常对照者之间CASR基因相对表达量差异无统计学意义（P>0...     

p16基因异常甲基化检测对周围型肺癌的诊断价值

目的:了解周围型肺癌患者外周血血浆中p16基因异常甲基化发生情况及其在周围型肺癌临床辅助诊断中的应用价值。方法:选取56例肺周围型结节手术患者的血浆和组织标本,其中31例为周围型肺癌,25例为肺部良性结节,采用甲基化特异性聚合酶链反应方法检测p16基因启动子的异常甲基化情况。结果:在周围型肺癌患者的血浆和肿瘤组织中,p16基因甲基化检出率分别为64.5%(20/31)和70.9%(22/31);周围型肺癌患者血清、肿瘤组织中p16基因的甲基化异常事件与肿瘤分期、分型无明显相关性。在25例良性肺部疾病患者中,3例血浆和手术切除标本检测出p16基因启动子的异常甲基化存在;良、恶性肺周围型结节的p16基因异常甲基化发生情况差异存在显著性。结论:检测周围型肺癌患者血浆中p16基因异常甲基化情况有可能成为有价值的临床辅助诊断手段。     

肝细胞癌中p14ARF基因启动子甲基化及蛋白表达的研究

目的 通过检测肝细胞癌中p14ARF基因启动子甲基化状态与蛋白表达的关系,探讨p14ARF基因启动子甲基化与肝细胞癌的关系.方法 通过甲基化特异性PCR(MSP)方法及免疫组化(IHC)法分别检测50例肝细胞癌组织和癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化状态和蛋白表达水平.结果 癌组织及癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化阳性率分别为28%(14150)和4%(2/50)(P<0.01).癌与癌旁组织p14ARF蛋白表达差异极显著(P<0.01).p14ARF基因启动子甲基化和蛋白表达与临床分期、门脉癌栓、术后复发、肝外转移、肿瘤大小、肿瘤个数及血清AFP值无关,而在肿瘤分化程度上p14ARF盯蛋白表达有显著差异,p14ARF基因启动子甲基化则无差异.p14ARF基因启动子甲基化与蛋白表达呈负相关.结论 启动子区甲基化是p14ARF基因失活的重要机制.p14ARF启动子区异常甲基化可能参与了肝癌的发生、发展,在肝癌的进展中起重要作用.     

乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:对乳腺癌组织中甲状腺激素受体β1(thyroid hormone receptorβ1,TRβ1)基因沉默机制进行初步探讨.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)和直接测序法检测40例乳腺癌、癌旁组织及10例正常乳腺组织中TRβ1基因启动子甲基化状态;分析其与临床病理特征间的关系.结果:乳腺癌及癌旁组织中TRβ1 基因启动子甲基化率分别为80.0%、72.5%,而正常乳腺组织仅10%;直接测序结果显示至少3个CG位点有甲基化改变.TRβ1基因启动子甲基化与患者的年龄、淋巴结转移、临床分期不相关.结论:甲基化可能是乳腺癌中TRβ1基因表达沉默的重要机制之一,在乳腺癌发生发展中起一定作用.     

FHIT和TSLC1基因在宫颈组织中的表达及其与HPV感染的关系

目的检测宫颈组织脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)基因表达,研究他们与宫颈癌发生及人类乳头瘤病毒(HPV)感染之间的关系。方法采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测正常宫颈组织20例、低度鳞状上皮内病变(LSIL)20例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)45例及宫颈癌患者标本33例FHIT基因及TSLC1基因表达,同时检测这些标本中高危型HPV感染情况。结果正常宫颈组织、LSIL、HSIL和宫颈癌组织中HPV的感染率、FHIT基因表达率及TSLC1基因表达率分别为0%、30%、71%和100%,100%、80%、36%和18%以及100%、75%、33%和24%。3项指标在不同宫颈组织之间差异有统计学意义(P<0.01)。所有FHIT基因与TSLC1基因表达缺失的患者均存在高危型HPV感染。受试者工作特征(ROC)曲线分析表明检测FHIT与TSLC1基因表达缺失对宫颈癌及HSIL具有诊断价值。结论 FHIT基因与TSLC1基因在HPV感染之后、宫颈癌发生过程的早期阶段就可能发生表达缺失。对高危型HPV感染者进行FHIT与TSLC1基因表达检测,有可能成为宫颈癌早期诊断的重要参考依据。     

非小细胞肺癌中p16基因甲基化的临床分析

目的：研究非小细胞肺癌中p16基因甲基化的表达,分析p16基因甲基化与临床、病理资料之间的相关性。方法对61例经手术切除且病理确诊的非小细胞肺癌在术中提取新鲜癌组织和癌旁组织样本冷冻保存,提取DNA后经重亚硫酸盐修饰,用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测癌和癌旁组织中p16基因甲基化状态。结合临床及病理资料对实验结果进行统计学分析。结果非小细胞肺癌和癌旁组织中出现p16基因甲基化的阳性率分别为11.48%（7/61）和1.64%（1/61）（P＞0.05）。不同的病理分型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移程度及吸烟指数间p16基因甲基化状态差异无统计学意义（P＞0.05）。结论非小细胞肺癌组织中存在p16基因甲基化。     

PLK1和P53蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其意义

目的检测POLO样蛋白激酶1(PLK1)和P53蛋白在卵巢上皮性癌中的表达,探讨其与患者预后的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测20例正常卵巢组织、19例卵巢良性上皮性肿瘤组织和52例卵巢上皮性癌组织中PLK1和P53蛋白的表达情况,分析其与卵巢癌临床病理指标的关系及二者在卵巢癌组织中表达的相关性,单因素和多因素Logistic回归分析影响卵巢癌患者预后的危险因素,Kaplan-Meier法分析PLK1和P53表达与卵巢癌患者预后的关系。结果 PLK1和P53在卵巢上皮性癌组织中的表达分别为38.5%和67.3%,显著高于良性肿瘤和正常卵巢组织(P<0.05)。在卵巢上皮性癌中,PLK1和P53异常高表达与临床分期和组织分化相关,临床分期越晚、组织分化越差的癌组织中PLK1和P53蛋白表达越高(P<0.05);PLK1蛋白的表达与P53蛋白的表达呈负相关(r=-0.629,P=0.000)。单因素Logistic回归分析显示PLK1、P53、临床分期、组织分化和淋巴结转移是影响卵巢癌患者预后的因素,多因素Logistic回归分析显示仅PLK1是影响卵巢癌患者预后的独立因素(OR=2.288,P=0.025,95%CI:0.105⁵0.050)。与其他患者相比,PLK1表达阳性同时P53表达阳性的卵巢癌患者,生存期最短(?2=17.246,P=0.037)。结论 PLK1和P53共同参与了卵巢癌的发生发展,PLK1可作为判断卵巢癌患者预后的标志物。     

肺癌肿瘤抑制因子1在膀胱尿路上皮癌中的表达

目的探讨肺癌肿瘤抑制因子1（tumor supressor in lung cancer 1,TSLC1）与膀胱尿路上皮癌病理分级的相关性。方法免疫Balb/c雌性小鼠,通过脾细胞和骨髓瘤细胞融合技术制备TSLC1单克隆抗体,并测定效价;同时选取膀胱尿路上皮癌蜡块65例（低危组40例,高危组25例）,正常膀胱黏膜20例,应用免疫组化检测TSLC1蛋白表达情况,由两位病理医生根据染色情况确定阴性（-）、弱阳性（＋）、强阳性（＋＋）。利用SPSS 13.0软件对不同病理分级的TSLC1蛋白表达情况进行统计学分析。结果成功制备TSLC1单克隆抗体IgG1,测其效价为1∶100 000;免疫组化示细胞质、细胞膜显色。高危组TSLC1蛋白表达阴性为88%（22/25）,弱阳性为12%（3/25）;低危组TSLC1蛋白表达弱阳性为75%（30/40）,阴性25%（10/40）;正常膀胱黏膜移行上皮均为强阳性表达,三组间差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论TSLC1蛋白的表达与膀胱尿路上皮癌病理分级呈负相关,在评价肿瘤预后方面具有重要的临床参考价值,是膀胱肿瘤生物学行为中有价值的标志物之一。     

CDH1基因甲基化与食管鳞癌的关系

目的 探对食管鳞癌组织中CDH1基因启动子区甲基化的表达状况及其与烟酒史、肿瘤家族史的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测食管鳞癌中CDH1基因启动子区甲基化情况.结果 食管鳞癌、癌旁及正常组织CDH1基因的甲基化阳性率分别为51.6％(32/62)、22.6％(14/62)和0(0/18).癌与癌旁组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.01);癌和正常组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(x2=15.484,P＜0.01);癌旁与正常组织间差异无统计学意义(x2 =3.487,P＞0.05).食管鳞癌CDH1基因甲基化情况与其性别、年龄、烟酒史和上消化道肿瘤家族史比较差异均无统计学意义(均P ＞0.05).结论 CDH1基因启动子区甲基化与食管鳞癌发生关系密切,在食管鳞癌中是一常见的表观遗传学事件.CDH1基因甲基化可能是一个独立的危险因素.     

组织芯片技术在研究肿瘤组织中抗原表达的应用

目的：研究多种肿瘤组织芯片、肿瘤进展组织芯片以及肿瘤预后相关组织芯片中多种抗原的表达,明确组织芯片技术在肿瘤研究中的应用。方法：运用组织芯片技术和免疫组织化学法检测多种肿瘤组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的表达、肺癌进展组织中P53的表达及肺鳞癌组织中P16的表达。结果：手工制作的组织芯片阵列排列整齐,仅有1个组织缺失（1／625—0．16％）,3个组织有折叠（3／625=0．48％）,其余组织形态均好;ER、PR在乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌等多种肿瘤中均有强弱不等的表达;P53在肺癌及不典型增生组织中阳性表达率（70％,40％）明显高于在正常支气管黏膜中的表达（0％）（P〈0．05）;P16蛋白在肺鳞癌中失表达率为57．9％,其中有转移组（8／13—61．5％）高于无转移组（7／17—41．2％）（P〈0．05）。结论：组织芯片技术能快速、高效地对大量肿瘤组织样本进行各种检测分析,低消耗、可比性强,手工制作简单又经济,可以广泛地应用于肿瘤病理研究的各个方面;应用组织芯片技术,检测到ER,PR在多种肿瘤中均有表达,提示两者与多种肿瘤的发生有关;证明了P53基因的突变是肺癌发生的早期事件,参与了肺癌的发生与发展;P16基因在肺鳞癌中有一定的失表达率,而且与肿瘤预后相关因素中是否转移有一定相关性。     

胃癌组织P16和P53蛋白表达的研究

目的研究胃癌组织中P16和P53蛋白的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法,对57例胃癌组织和癌旁组织、38例正常胃组织中p16和p53基因表达产物进行检测,并结合临床进行讨论和分析。结果胃癌组织中P16蛋白的阳性率为21.1%（12/57）,明显低于癌旁组织59.6%（34/57）和正常胃组织89.5%（34/38,P〈0.05）;P53蛋白的阳性率为80.7%（46/57）,明显高于癌旁黏膜组织42.1%（24/57）和正常胃组织0%（0/38,P〈0.05）。P16和P53蛋白表达与胃癌组织学类型、浸润深度、分化程度及淋巴结转移有关（P〈0.05）。结论胃癌组织P16和P53蛋白的异常表达与胃癌发生发展、淋巴结转移和预后可能有关。     

鼻咽癌中hMLH1基因甲基化及其蛋白表达的临床意义

目的观察鼻咽癌组织中hMLH1基因启动子区甲基化状态及其对蛋白表达的影响,并分析甲基化及蛋白表达与临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性定量PCR检测鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症组织中hMLH1的甲基化状态。应用免疫组化法检测hMLH1蛋白表达情况。结果鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎症组织中hMLH1基因甲基化阳性率分别为77.8%(57/63)、8.3%(1/12)(P<0.001)。hMLH1蛋白表达下调/缺失率分别为71.4%(45/63)、8.3%(1/12)(P<0.001)。hMLH1基因甲基化阳性率与鼻咽癌的临床分期、组织分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05),hMLH1蛋白表达与鼻咽癌的淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。结论 hMLH1甲基化及其蛋白表达与鼻咽癌关系密切,并且甲基化影响其蛋白表达。     

DNMT1和HDAC1在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的：研究DNA甲基转移酶（DNMT）1和组蛋白去乙酰化酶（HDAC）1在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织及上皮性卵巢癌组织中的表达,分析二者与卵巢癌组织多种临床病理参数关系及相关性。方法运用免疫组织化学方法检测15例正常卵巢组织、20例良性卵巢肿瘤组织及30例上皮性卵巢癌组织中DNMT1和HDAC1的表达情况。分析二者的表达与卵巢癌临床病理参数的关系,以及2种蛋白在卵巢癌组织中表达的相关性。结果上皮性卵巢癌组织中DNMT1和 HDAC1的表达高于正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织,差异有统计学意义（P＜0．05）;卵巢癌组织中DNMT1和 HDAC1的表达与是否绝经和病理类型无关,而与组织学分级、临床分期有关;DNMT1和 HDAC1二者在卵巢癌组织中的表达呈正相关。结论 DNMT1和HDAC1的高表达在卵巢癌发生、发展中有重要作用。二者具有协同作用是卵巢癌发生发展的主要原因,可以为卵巢癌的早期筛查提供理论依据。