风湿性心脏病患者外周血细胞因子和Treg的检测意义

目的:探讨风湿性心脏病(RHD)患者相对于正常对照者,外周血中细胞因子及调节性T细胞(Treg细胞)的变化及其意义.方法:分析2012年9月～2014年2月在我院接受治疗RHD患者的临床资料,选取本院体检中心的健康体检者作为正常对照组.比较两组受试者的一般资料、Treg细胞(CD4+ CD25+T、CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg)比例以及细胞因子,包括转化生长因子-β1(TGF-β1)及白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平.结果:本研究共纳入受试者74例,其中观察组患者38例,正常对照组36例.观察组患者的CD4+ CD25+T占淋巴细胞比例(￡=18.87,P＜0.01)、CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg占CD4+T比例(t=9.182,P＜0.01)均显著低于对照组;观察组患者的TGF-β1(t=9.716,P＜0.01)、IL-10(t=13.18,P＜0.01)均显著低于对照组,而TNF-α(t=2.416,P=0.018)、IL-6(t=3.049,P＜0.01)水平则高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:RHD患者外周血中调节性T细胞水平均低于正常对照组,TGF-β1和IL-10浓度能作为体现RHD患者中调节性T细胞改变的两项辅助指标.     

Th17/Treg及其相关细胞因子失衡与溃疡性结肠炎

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的病因和发病机制尚未完全明确,Th17/Treg及相关细胞因子失衡与溃疡性结肠炎发病密切相关,深化对Th17/Treg及相关细胞因子平衡关系的认识可能是今后研究的重要方向。     

CD4+CD25+Treg细胞调节T细胞的作用机制分析

目的通过检测Treg细胞表达介导抑制性共刺激分子CTLA4和分泌抑制性细胞因子,并设置Treg细胞与效应性T细胞共培养和分隔培养实验模型,分析Treg细胞对效应性T细胞形成抑制作用的可能机制及各机制的主次要关系.方法对比分析Treg细胞与效应性T细胞膜分子CTLA4、CD28表达和细胞因子IL-10、TGF-β1分泌水平;以TransWell Millicell-PCF分隔培养槽分隔培养Treg细胞与不同淋巴细胞组成的反应体系,采用向共培养及分隔培养体系加入与不加入IL-10、TGF-β1抗体的阻断方法,检测Treg细胞对不同组混合淋巴细胞反应的抑制效率.结果 Treg细胞分泌IL-10和TGF-β1的浓度水平明显高于效应性T细胞,Treg细胞培养上清中IL-10和TGF-β1水平分别达到(380±36.3) pg/ml和(790±56.8) pg/ml,Treg细胞分泌IL-10和TGF-β1的浓度水平与效应性T细胞比较,均有显著性差异(P<0.01).共刺激分子CTLA4、CD28在Treg细胞和效应性T细胞膜表面的表达水平存在明显差异,Treg细胞以表达CTLA4为主.Treg细胞对共培养体系混合淋巴细胞反应的抑制效率明显高于分隔培养,通过分泌IL-10对效应性T细胞的抑制作用亦明显强于通过TGF-β1.结论细胞接触机制是Treg细胞抑制效应性T细胞的主要作用机制,而细胞因子机制中,以通过分泌IL-10的方式对效应性T细胞的抑制作用更明显.     

毛细支气管炎患儿外周血Treg细胞及Th1/Th2细胞因子检测及临床意义

目的探讨毛细支气管炎患儿外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、8、10水平变化及临床意义。方法选取2016年6月～2017年6月于本院儿科治疗的毛细支气管炎患儿80例,初次发作喘息患儿为轻症组(A组),合并呼吸衰竭或心力衰竭患儿为重症组(B组),另选取同时期健康体检者40例为正常对照组(C组),应用流式细胞术测定外周血CD4~+CD25~+Treg细胞比例,ELISA法检测血清TNF-α、IL-8、IL-4和IL-10表达水平,比较各组不同指标间的差异。结果治疗前,毛细支气管炎患儿CD4~+CD25~+Treg细胞比例明显低于正常对照组(P0.05);血清TNF-α、IL-8水平明显高于对照组(P0.05),血清IL-4、IL-10水平明显低于对照组(P0.05);治疗1周后,Treg细胞呈现增高趋势,A组Treg细胞比例明显高于B组(P0.05);血清TNF-α、IL-8水平较前明显下降,IL-4、IL-10水平较前明显上升(P0.05)。结论毛细支气管炎患儿病情严重程度与Th1/Th2平衡的紊乱程度具有相关性。     

胸腺上皮细胞上清液促进85细胞增殖的研究

目的 比较不同培养条件下原代人胸腺上皮细胞生长情况,观察上清液对Ｔ细胞株８５细胞增殖及存活的效应。方法 原代胸腺上皮细胞培养、８５细胞增殖测定、台盼兰试验及ＦＡＣＳ分析。结果 含血清的培养基与含生长因子的培养基均能培养出原代胸腺上皮细胞,ＴＥＳ上清单独能促使８５细胞增殖且能提高８５细胞的存活率。结论 研究发现含血清的培养基与含生长因子的培养基培养效果无明显差异,仅剪切也能培养纯净的胸腺上皮细胞。Ｔ     

首发精神分裂症患者调节性T细胞及相关细胞因子变化

目的 探讨首发精神分裂症患者调节性T细胞及细胞因子变化及与精神症状的关系。方法 采用流式细胞仪技术检测27例首发精神分裂症患者和27例健康体检者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg）占CD4+T细胞的百分率,酶联免疫吸附试验检测血清IL-10及TGF-β1水平,采用阳性与阴性症状量表（PANSS）评定精神分裂症患者精神症状。Treg细胞、TGF-β1与年龄、病程、教育年限和精神症状以及细胞因子的相关性采用Spearman相关分析。结果首发精神分裂症患者Treg细胞百分率为（0.03±0.01）%,明显低于对照组（0.04±0.02）%（t=-3.681,P=0.001）;首发精神分裂症患者血清TGF-β1[（1.40±1.16）pg/ml]水平明显高于对照组[（0.75±0.81）pg/ml]（t=2.376,P=0.021）,但IL-10水平在精神分裂症组[（0.12±0.25）pg/ml]和对照组[（0.12±0.26）pg/ml]间比较差异无统计学意义（t=0.432,P=0.668）。首发精神分裂症患者的Treg百分率与教育年限呈正相关（r=0.452,P=0.018）,与年龄、病程和精神症状无相关性;TGF-β1与年龄、病程、教育年限和精神症状之间均无相关性。首发精神分裂症患者的Treg细胞百分率与IL-10、TGF-β1间均无相关性。结论首发精神分裂症存在免疫抑制机制受损,Treg及TGF-β1可能在首发精神分裂症患者免疫失衡的病理生理机制发挥着重要的作用。     

CD4+CD25+Treg细胞调节T细胞作用机制的实验研究

目的 :通过检测Treg细胞表达介导抑制性共刺激分子CTLA4和分泌抑制性细胞因子 ,并设置Treg细胞与效应性T细胞共培养和分隔培养实验模型 ,分析Treg细胞对效应性T细胞形成抑制作用的可能机制及各机制的主次要关系。方法 :对比分析Treg细胞与效应性T细胞膜分子CTLA4、CD2 8表达和细胞因子IL 10、TGF β1 分泌水平 ;以TransWellMillicell PCF分隔培养槽分隔培养Treg细胞与不同淋巴细胞组成的反应体系 ,采用向共培养及分隔培养体系加入与不加入IL 10、TGF β1 抗体的阻断方法 ,检测Treg细胞对不同组混合淋巴细胞反应的抑制效率。结果 :Treg细胞分泌IL 10和TGF β1 的浓度水平明显高于效应性T细胞 ,Treg细胞培养上清中IL 10和TGF β1 水平分别达到(380 0± 36 3)pg ml和 (790 0± 5 6 8)pg ml,Treg细胞分泌IL 10和TGF β1 的浓度水平与效应性T细胞比较 ,均有显著性差异 (P <0 0 1)。共刺激分子CTLA4、CD2 8在Treg细胞和效应性T细胞膜表面的表达水平存在明显差异 ,Treg细胞以表达CTLA4为主。Treg细胞对共培养体系混合淋巴细胞反应的抑制效率明显高于分隔培养 ,通过分泌IL 10对效应性T细胞的抑制作用亦明显强于通过TGF β1 。结论 :细胞接触机制是Treg细胞抑制效应性T细胞的主要作用机制 ,而细胞因子机制中     

ITP患者治疗前后Breg Treg构成及其相关细胞因子浓度变化和意义分析

目的:探讨免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前后调节性B细胞(Breg)、调节性T细胞(Treg)及其相关细胞因子水平及意义。方法:选取2018年12月至2022年1月在我院治疗的ITP患者103例作为观察组,同时选取健康志愿者103例作为对照组,检测两组Breg细胞、Treg细胞、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)、可溶性程序性死亡1(sPD-1)和可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)差异,同时分析观察组治疗前后Breg细胞、Treg细胞等差异。结果:观察组Breg细胞、Treg细胞、TGF-β、IL-10和IL-4分别为(4.46±1.01)%、(5.11±1.03)%、(2203.19±225.51)pg/mL、(4.06±0.93)pg/mL和(298.32±55.62)pg/mL,明显低于对照组(P<0.05),IL-17和sPD-1分别为(12.01±2.28)pg/mL和(110.32±19.20)pg/mL,明显高于对照组(P<0.05)。观察组和对照组sPD-L1比...     

IL-2和IL-10对Treg细胞体外扩增影响的差异研究

目的 分析细胞因子IL-2和IL-10对Treg细胞体外扩增的促进作用,比较扩增的Treg细胞和自然分选Treg细胞对CTL功能活性的影响.方法 采用不同浓度细胞因子IL-2和IL-10作为诱导剂,分析2种细胞因子体外诱导Treg细胞增殖的有效性及最适浓度,同时以2种细胞因子诱导扩增的Treg细胞和自然分选的Treg细胞分别作用于CTL,分析采用体外扩增Treg细胞抑制CTL活性的可能性.结果 100 ng/ml IL-2能够诱导Treg细胞增殖明显增加,经48、96 h和144 h诱导后,其增殖比例分别达到10%、18%和20%,而IL-10的使用浓度需达到150 ng/ml才能获得同样的扩增比例;与自然分选的Treg细胞对比,采用细胞因子体外扩增的Treg细胞具有同等抑制CTL功能活性的效力,组间无显著性差异(P＞0.05).结论 采用添加IL-2培养体系是体外扩增Treg细胞的优选方法,其增殖效能强于IL-10;体外扩增Treg细胞与自然分选Treg细胞对CTL的功能抑制没有明显差异.     

IDO基因转染小鼠Lewis肺癌细胞体外诱导Treg细胞增殖的研究

目的 调节性T细胞(regulatory T cell,Treg cell)在肿瘤局部免疫耐受中发挥了重要作用,但其产生机制尚不清楚.本实验通过将吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)基因转染小鼠Lewis肺癌细胞,体外研究对Treg细胞的诱导增殖作用,为肺癌免疫耐受产生机制研究提供新的依据.方法 采用阳离子脂质体Lipofectmine2000,将含人全长IDO基因的pEGFP-IDO真核表达质粒转染到小鼠Lewis肺癌细胞,G418筛选获得Lewis-IDO细胞,同时设置空白对照组(Lewis细胞)及空质粒转染组(Lewis-EGFP细胞),将3种细胞分别与小鼠T淋巴细胞混合培养,利用流式细胞技术分析3种细胞对Treg细胞的诱导增殖作用.结果 IDO基因成功转染到小鼠Lewis细胞,与小鼠T淋巴细胞共培养后,Treg细胞增殖明显,和Lewis-EGFP细胞(6.2%:4.9%,P＜0.05)及Lewis细胞(6.2%:5.0%,P＜0.05)相比差异有统计学意义.结论 IDO基因转染小鼠Lewis肺癌细胞在体外能明显增强Treg细胞的增殖,为肺癌局部免疫耐受机制研究提供了新的实验依据.     

混合胸腺裸小鼠移植模型的建立及重建T细胞功能的体外研究

目的　建立混合胸腺移植模型 ,并在体外观察重建T细胞的功能状况。方法　首先建立混合胸腺裸小鼠左肾包膜下移植模型 ,流式细胞仪检测受体动物外周血中T细胞的重建情况 ,并利用刀豆素A(concanavalinA ,ConA)增殖实验和混合淋巴细胞培养检测其体外功能状态。结果　混合胸腺移植 3个月后 ,移植的胸腺组织在裸小鼠肾包膜下能够正常发育 ,并有效重建了受体外周血中的CD4 T和CD8 T细胞。体外功能检测显示 ,受体的脾细胞对ConA的刺激有良好的反应性 ,并对供体胸腺来源的F3Q44大鼠抗原刺激表现为特异性的低反应。结论　混合胸腺移植不仅在数量上可重建受体裸小鼠外周血中CD4 T和CD8 T细胞 ,而且受体中重建的T细胞还可发挥正常的免疫功能     

IDO基因转染小鼠树突状细胞体外诱导Treg细胞增殖的研究

目的调节性T细胞(Treg)在肿瘤局部免疫耐受中发挥了重要作用,但其产生机制尚不清楚。本实验通过将吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)基因转染小鼠树突状细胞(DC),体外研究对Treg细胞的诱导增殖作用,为肺癌免疫耐受产生机制研究提供新的依据。方法采用慢病毒转染技术,将含人全长IDO基因转染到小鼠DC细胞,G418筛选获得IDO-DC细胞,同时设置空白对照组(DC细胞)及空质粒转染组(EGFP-DC细胞),将3种细胞分别与小鼠T淋巴细胞混合培养,利用流式细胞技术分析3种细胞对Treg细胞的诱导增殖作用。结果 IDO基因成功转染到小鼠DC细胞,与小鼠T淋巴细胞共培养后,Treg细胞增殖明显,和EGFP-DC细胞(7.5%vs 3.6%,P<0.05)及DC细胞(7.5%vs 3.1%,P<0.05)相比差异显著。结论 IDO基因转染小鼠DC细胞在体外能明显增强Treg细胞的增殖,为肺癌局部免疫耐受机制研究提供了新的实验依据。     

雷帕霉素体外促进小鼠调节性T细胞的分化和增殖

目的:观察雷帕霉素体外对小鼠调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)分化和增殖的影响,为进一步探讨其可能的免疫耐受诱导机制奠定基础.方法:无菌条件下取C57BL/6小鼠脾脏,分离单个核细胞,免疫磁珠阴性分选获得CD4+T细胞,分别与0.1 μmol/L雷帕霉素(RAPA组)、0.5 μmol/L环孢素(CsA组)进行共培养7 d,并以正常培养细胞作为空白对照.流式细胞仪检测各组CD4+CD25+Treg细胞比例;RT-PCR检测各组T细胞Foxp3 mRNA表达水平.结果:与空白对照[(7.42±0.82)%]相比,CsA组CD4+CD25+Treg细胞[(3.72±0.74)%]所占比例明显降低(P<0.01);RAPA组CD4+CD25+Treg细胞[(11.47±1.08)%]所占比例明显升高(P<0.01).RAPA组T细胞Foxp3 mRNA表达明显高于CsA组和空白对照(P<0.01);CsA组Foxp3 mRNA表达低于空白对照(P<0.05).结论:雷帕霉素体外可促进CD4+CD25+ Treg细胞的分化和增殖,有利于免疫耐受的形成,其免疫抑制机制不同于CsA.     

不同浓度葛根素对体外培养血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度葛根素对体外培养血管内皮细胞增殖的影响。方法：取3只5d龄SD大鼠·分离心脏，在体外消化收集血管内皮细胞并进行培养，第3代细胞用于实验。除空白对照组外·血管内皮细胞分别于含0．01、0．1、1、10和100umol／L葛根素的培养基中进行培养。24h后纠置显徽镜下观察细胞形态并进行细胞计数，采用甲基噻唑基四唑比色法、免疫组织化方法和流式细胞仪检测血管内皮细胞的增殖情况。结果：与空白对照组比较，1、10和100umol／L葛根素组血管内皮细胞细胞计数增加（P〈0．05，P〈0．01）·增殖细胞梭抗啄阳性细胞比率及细胞分裂增殖指数增加（P〈0．05，P〈0．01）．结论：葛根素对体外培养的血管内皮细胞有明显的促进增殖作用，其作用与葛根素的剂量有关。     

洛伐他汀对BRCA1高表达MCF-7乳腺癌细胞周期调控蛋白的影响

目的探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(lovastatin, LOV)对BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞株细胞周期调控蛋白表达的影响.方法将BRCA1基因进行扩增、鉴定后,运用脂质体转染MCF-7乳腺癌细胞,通过MTT比色法检测细胞增殖功能,RT-PCR方法检测细胞周期调控蛋白cyclinD1、cyclinD3、CDK2、CDK4的mRNA以及Western blot检测cyclinD1、CDK4蛋白表达水平.结果 LOV处理后,细胞的增殖能力减弱,cyclinD1、 cyclinD3、CDK2、CDK4 mRNA表达及cyclinD1、CDK4蛋白表达均降低,其中,以BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞株经LOV处理后变化更为显著.结论 BRCA1基因在LOV诱导的细胞周期蛋白抑制中可能起重要作用,其高表达增强了MCF-7乳腺癌细胞对LOV的敏感性和LOV对乳腺癌细胞的增殖抑制作用.     

肺癌化学免疫治疗程序不同时T细胞功能的影响

目的：利用荷瘤动物模型初步探讨化学免疫治疗肺癌时不同程序联合应用对肿瘤生长及T细胞功能的影响,以明确最佳治疗方案。方法：建立C57BL／61Leuwis肺癌荷瘤小鼠动物模型,全身应用卡铂及局部应用TNFα、IFNγ,不同程序联合处理荷瘤鼠,观察小鼠肿瘤生长情况。用同位素掺入法检测脾脏T细胞转化能力及脾细胞对IL-2的应答能力。结果：肿瘤生长速率最小者为先卡铂后细胞因子组（P＜0.001）;其次为卡铂与细胞因子同时组（P＜0．01）;T细胞转化能力最高组为卡铂、细胞因子同时组（P＜0．001）。其他两组升高明显（P＜0．05）,脾细胞对IL-2的应答能力以同时治疗组和先细胞因子组最高（P＜0．05）。结论：不同程序的联合方案对机体T细胞功能影响不同;卡铂与细胞因子同时应用为最佳治疗方案。     

调节性T细胞在炎症性肠病中的研究进展

调节性T细胞(Treg)是一类具有免疫调节功能的T细胞亚群,可通过直接接触和细胞因子依赖等方式下调机体免疫反应,维持自身免疫耐受。近年来,Treg细胞在炎症性肠病中的作用越来越受到关注,本文总结并讨论了CD4 CD25 Treg细胞在炎症性肠病免疫方面的研究进展。     

初发Graves病患者外周血调节性T细胞及滤泡调节性T细胞检测的临床研究

目的：　检测Graves病（Graves'' disease,GD）患者外周血调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）、滤泡调节性T细胞（follicular regulatory T cells,Tfrs）、滤泡辅助性T细胞（follicular helper T cells,Tfhs）数量及其表面分子肿瘤坏死因子受体超家族成员4（tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,OX40）、程序性死亡因子1（programmed-death 1,PD-1）的表达。方法：　纳入初发GD患者23例（GD组）和健康对照者22例（NC组）,通过流式细胞术检测2组外周血Tregs（CD3⁺CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺）、Tfrs（CD4⁺Foxp3⁺PD-1⁺CXCR5⁺）及Tfhs（CD4⁺Foxp3^-PD-1⁺CXCR5⁺）细胞比例及其表面分子OX40、PD-1表达,分析GD发病与Tregs、Tfrs、Tfhs及其OX40、PD-1表达的关系,同时分析各检测指标与临床指标的相关性,初步探讨其临床意义。结果：　与NC组相比,GD组Tregs数量明显升高,Tregs上PD-1表达降低,Tregs上PD-1表达与TRAb水平呈显著负相关;初发GD患者Tfrs数量明显降低,且Tfrs上OX40表达上调,Tfrs数量与TRAb呈显著负相关。结论：　PD-1在Tregs上的低表达可能通过影响Tregs功能参与GD发病,GD患者体内Tfrs数量明显减少,且其OX40表达明显升高,OX40可能通过影响Tfrs与Tfhs稳态参与GD发病,这为临床上关于GD的治疗提供了新思路。