脓毒症大鼠多器官Toll样受体4基因表达的改变及意义

目的　探讨脓毒症大鼠肝、肺、肾及小肠组织中Toll样受体4(TLR4)基因表达的变化 规律及其意义。方法　雄性Wistar大鼠100只,动物随机分为正常对照组、假手术组、盲肠结扎穿孔 (CLP)致脓毒症组和杀菌/通透性增加蛋白(BPI)治疗组。分别检测肝、肺、肾、小肠组织TLR4、TNF αmRNA表达以及组织、血浆中内毒素水平的改变。结果　CLP后6～12h肝、肺、肾及小肠组织 TLR4mRNA表达显著升高达峰值(P<0.05或P<0.01);BPI早期治疗可显著降低各组织内毒素 水平,CLP后12h肝、肺、肾、小肠组织和24h肾组织TLR4mRNA表达亦明显抑制(P<0.05或 P<0.01)。相关分析显示,肝、肺、肾组织TLR4mRNA表达分别与相应组织及血浆内毒素水平、组 织TNF αmRNA水平均呈显著正相关。结论　CLP后细菌内毒素可迅速侵入血循环和多种组织, 它对于诱导体内TLR4基因表达上调具有显著影响,而TLR4基因广泛表达可能参与了脓毒症的病 理生理过程。     

Toll样受体2、4与全身性感染研究进展

全身性感染是由感染所致的临床综合征,是一种高发率和高病死率疾病,目前仍然是一项严重的临床问题。尽管在全身性感染治疗方面,人们已经取得了长足的进步,但是迄今为止,仍然没有有效的病因学治疗方法应用在全身性感染患者身上。这很可能是由于全身性感染的免疫病理学发病机制没有得到完全阐明。近来,TLR在全身性感染免疫机制中所起到的作,用在多种动物体内得到验证,TLR、TLR4在其中的作用尤为关键。TLR导致的体内信号传导,使炎症反应级联放大。此外,TLR还能诱发机体免疫功能紊乱．致使机体对病原体清除效率降低。这些原因都可以导致全身性感染的病情的进一步进展。所以阻断TLR传导道路可能会抑制全身性感染发生和发展的进程。这也为临床医生最终攻克全身性感染提供了崭新的思路和临床治疗靶点。     

脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化和意义

目的探讨脓毒症大鼠心肌组织内毒素信号转导复合受体．Toll样受体4（TLR4）／髓样分化蛋白．2（MD2）基因表达的变化情况。研究其与心肌组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因表达的关系。方法采用腹腔注射5mg／kg体重内毒素（LPS）制作大鼠脓毒症模型。动物分为正常对照组（10只），内毒素注射后1、2、6h组（各10只），利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测心肌组织TLR4／MD2以及TNF-α的基因表达。结果LPS注射后1h，TLR4／MD-2及TNF-α基因表达开始升高，2h达高峰，6h逐渐下降，各时间点的表达均显著高于对照组（P〈0．01）。相关分析表明，心肌TUM／MD2基因表达分别与TNF-α基因表达呈显著正相关（P〈0．05）。结论LPS可上调心肌组织TLR4／MD-2基因表达并诱导早期炎症细胞因子TNF-α基因表达。TLR4识别LPS信号是以TLR4／MD-2复合受体的形式完成的。而且在识别过程中，MD-2是TLR4必需的作用分子。     

性别差异对脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的影响

目的探讨性别差异对脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白- 2(MD-2)基因表达的影响。方法以脂多糖(LPS)按5 mg/kg体重由大鼠腹腔注射制作脓毒症动物模型,注射后2 h留取肝脏组织检测TLR4、MD-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达,同时测定各组大鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及雌二醇含量。结果正常雌雄性大鼠肝脏组织均可表达少量TLR4、MD-2、TNF-α基因,其中雌性组分别为0．175±0．034、0．211±0．044、0．201±0．068; 雄性组分别为0．205±0．061、0．243±0．049、0．243±0．063,两组数据差异无统计学意义(P> 0．05),但LPS刺激后雌性大鼠肝脏组织上述指标分别为0．615±0．089、0．708±0．181、0．730± 0．118,血浆中ALT含量为(81．07±10．72)U／L;雄性组分别为0．723±0．091、1．123±0．272、 0．881±0．156,ALT含量为(106．39±14．21)U／L,雌性组各项指标均明显低于雄性大鼠(P< 0．05)。相关分析表明雌性及雄性脓毒症大鼠肝脏组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0．05)。结论 LPS刺激后大鼠肝脏组织TLR4、MD-2及 TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠肝脏组织损伤较雄性轻。     

Toll样受体/核因子κB信号通路与脓毒症的研究进展

脓毒症和由此引起的多器官功能障碍综合征是当前重症监护患者死亡的主要原因[1] 。脓毒症是指由感染引起的全身炎症反应综合征。目前认为其发生的根本原因在于机体过度释放细胞因子和炎性介质导致炎症反应失控和免疫机能紊乱。而这些物质的生成大多受核因子κB(NF κB)的调控 ,NF κB是一种转录因子 ,它对许多与免疫有关的基因有调控作用 ,因此在脓毒症的发生中起到了关键的作用。而免疫细胞又是如何识别病原体最终引起NF κB的活化呢 ?Toll样受体是 1997年Medzhitov等[2 ] 在巨噬细胞上发现的 ,可作为病原体的识别受体 ,激活胞内的信…     

Toll样受体与脓毒症的研究进展

脓毒症系感染引起的全身性炎症反应 ,进一步可发展为脓毒性休克和多器官功能障碍综合征 ,是严重创、烧伤患者死亡的主要原因之一 ,但其确切的发病机制迄今尚未完全阐明。以往研究表明 ,多种病原微生物的细胞壁成分 [如革兰阴性菌的内毒素(ＬＰＳ)、革兰阳性菌的肽聚糖 (ＰＧＮ     

Toll样受体4的基因多态性与脓毒症

脓毒症是指机体感染微生物后发生的全身炎性反应综合征.在该疾病发生发展中是基因多态性影响着机体对该综合征的遗传易感性.其中Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)作为识别病原微生物的主要受体之一,在自身免疫中起着重要的作用.已有研究表明TLR4的基因多态性与脓毒症的遗传易感性密切相关,其中TLR4基因的Asp299Gly和Thr399Ile位点的突变与脓毒症的发生发展及预后有关.现就TLR4的功能、信号转导通路及其基因多态性与脓毒症易感性的相关关系作一综述.     

肝移植术病人围术期中性粒细胞Toll样受体2表达与术后SIRS的关系

目的 研究肝移植术病人围术期中性粒细胞Toll样受体2(TLR2)表达与术后全身炎性反应综合征(SIRS)的关系.方法 择期行肝移植术的终末期肝病病人20例,年龄33～58岁,体重52～73 kg,心功能Ⅱ或Ⅲ级,ASAⅢ或Ⅳ级.于麻醉诱导前(T1)、无肝期25 min(T2)、新肝期3 h(T3)、新肝期24 h(T4)时,中心静脉采血样,采用流式细胞仪测定中性粒细胞TLR2表达;ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-8(IL-8)浓度;按术后7 d内是否发生SIRS,分为SIRS组与非SIRS组.2组TNF-α、IL-1β和IL-8浓度和TLR2表达进行Spearman相关分析.结果 术后7 d内有10例病人发生SIRS.与T1时比较,SIRS组T4时中性粒细胞TLR2表达上调,T2-4时TNF-α浓度升高,T3,4时IL-1β浓度升高,T3时IL-8浓度升高(P＜0.05或0.01);与NSIRS组比较,SIRS组T4时中性粒细胞表达上调,血清IL-1β浓度升高,T3时血清IL-8浓度升高(P＜0.05或0.01).SIRS组TNF-α浓度与中性粒细胞TLR2表达呈正相关(r=0.607,P＜0.05).结论 肝移植术后病人发生SIRS可能与新肝期24 h中性粒细胞TLR2表达上调有关.     

异丙酚对LPS诱导中性粒细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素(LPS)诱导中性粒细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达的影响.方法 健康志愿者6名,年龄20～35岁,各采集外周静脉血样50 ml,加入20 U/ml肝素抗凝,分离提纯中性粒细胞,制备细胞悬液,然后随机分为6组,每组6皿:对照组(C组)不给予任何药物,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养12 h;异丙酚脂质溶剂intralipid组(I组)、异丙酚组(P组)和LPS组(L组):分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)、异丙酚(终浓度为5 μg/ml)或LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育12 h;intralipid+LPS组(IL组)和异丙酚+LPS组(PL组)先分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)或异丙酚(终浓度为5 μg/ml)后,置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育20 min,然后加入LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱孵育12 h.采用流式细胞仪测定中性粒细胞膜TLR2和TLR4的表达;采用荧光定量PGR检测中性粒细胞膜TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达;采用ELISA法测定培养上清液TNF-α和IL-8的浓度.结果 与C组比较,I组和P组TLB2和TLR4的表达、1NF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),L组和IL组TLR2和TLR4的表达上调,L组TNF-α和IL-8L-8的浓度升高,IL组IL-8浓度升高(P<0.05);与L组比较,IL组TLR2和TLR4的表达、TNF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),PL组TLR2和TLR4的表达下调,TNF-α和IL-8L-8的浓度降低(P<0.05).各组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚可下调LPS诱导的中性粒细胞TLR2和TLR4的表达,从而抑制炎性反应.     

脓毒症早期大鼠肾上腺Toll样受体4、肿瘤坏死因子-аmRNA表达及地塞米松影响

目的 观察脓毒症早期相对肾上腺皮质功能不全(RAI)大鼠肾上腺Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子(TNF)-а mRNA表达及地塞米松对其的影响.方法 将300只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、地塞米松预先给药组、地塞米松治疗组,各组50只动物.液相平衡放射免疫分析法(RIA)检测血清皮质醇浓度,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾上腺组织TLR4、肿瘤坏死因子(TNF)-а mRNA的相对表达量.结果 模型组促肾上腺皮质激素(ACTH)刺激前后血清皮质醇浓度无明显变化(13.84±4.47与13.58±4.13),肾上腺组织TLR4、TNF-а mRNA的表达较其他组明显升高,地塞米松预先给药组48 h生存率最高(65.12%),治疗组次之(35.00%),模型组最低(23.32%).结论 肾上腺组织,TLR4、TNF-аmRNA的表达与脓毒症相对肾上腺皮质功能不全的发生有关,小剂量地塞米松能够抑制肾上腺组织TLR4、TNF-а mRNA的表达,改善预后,且早期应用效果更好.     

严重腹腔感染大鼠JAK/STAT通路活化与多器官功能损害的关系

目的观察Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路在腹腔感染所致脓毒症大鼠组织中的活化规律及其与多器官功能损害的关系.方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)模型,大鼠随机分为正常对照组、CLP组、JAK2抑制剂(AG490)组和STAT抑制剂(雷帕霉素,RPM)组.留取肝、肺、肾、肠组织测定STAT1/3活性,同时测定血清AST、BUN含量及肺组织髓过氧化物酶(MPO)和肠组织二胺氧化酶(DAO)活性.结果CLP后2h肝、肺、肠组织中STAT1均迅速活化,6～24h活化达到高峰,而肾组织STAT1活化相对迟缓.肝、肺组织中STAT3活性亦明显升高,但肾、肠组织中未检测到活化STAT3.AG490、RPM早期处理后,除肾组织外,其他组织STAT1活性均有不同程度下降(P<0.05或0.01),肝、肺组织STAT3活性也显著降低.同时,AG490、RPM处理组血清AST、BUN水平和肺组织MPO活性在24～48h均有不同程度地下降(P<0.05或.01),但小肠DAO活性无明显改变.结论STAT1、STAT3在脓毒症时高度活化,并参与了严重腹腔感染所致脓毒症的病理过程.抑制JAK/STAT通路活化有助于多器官功能损害的防治.     

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严重感染如不及时予以控制，必将出现多器官功能衰竭(MOF)，这是外科重危病人的主要死亡原因，它的发生与创伤、休克、持续超高代谢、再灌注损害、内毒素症或脓毒症等有关。在外科急症手术后MOF的发生率约为7％～22％，在腹腔严重感染手术后则可达30％～50％，病死率为30％～60％。1991年美国胸科医师学院和危重病医学协会(ACCP／SCCM)在芝加哥召开的协调会上建议将MOF改称为多器官功能障碍(不全)综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，其理由为“衰竭”是一种静止的提法，强调了病情的终末状态，是不可逆的；而MODS则表示由轻到重、由代偿到失代偿的渐进的动态过程。简言之，MODS和MOF实质上是这一过程中不同阶段的表现。     

急性出血坏死性胰腺炎肝损伤Toll样受体2/4mRNA的表达变化

目的研究急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）肝损伤Toll样受体（TLR）2／4 mRNA表达的变化规律。方法采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠（TAC）注射制造AHNP肝损伤动物模型。动物分为假手术组（S组）、胰腺炎组（P组）。RT—PCR方法检测不同时间点肝组织TLR2和TLR4 mRNA表达变化。结果P组大鼠3h肝组织TLR2和TLR4 mRNA表达开始增高,伤后6～12h肝组织TLR2和TLR4 mRNA表达迅速达到峰值（P〈0.05或P〈0．01）,肝损伤加重（P〈0.05或P〈0.01）。S组变化不明显。结论AHNP肝组织内TLR2和TLR4的基因表达上调。肝组织内TLR2和TLR4的基因表达增高可能在AHNP肝脏损伤的发生、发展中起作用。     

烧伤后侵袭性感染和多器官功能不全综合征

总结了158例烧伤侵袭性感染与多器官功能不全综合征(MODS)的关系。侵袭性感染导致MODS 有几个特点:①MODS 发病率高,达到81.6%,每例有平均2.73个器官发生功能不全。②MODS发展成 MOF 的发生率也高,约为50%。③MODS 死亡率低,而发展到 MOF 死亡率明显上升,达到90%以上。不同菌种感染中,G~ 菌致器官功能不全(OD)发生率较低,G~-菌致 OD 发生率较高,而绿脓杆菌致OD 发生率最高,后果最严重。对发病机制及防治问题进行了讨论,认为由于发病机理尚未充分了解,针对机制的有效治疗缺乏,因此防治的主要手段仍是去除诱因,即控制侵袭性感染。一旦感染发生,则要保护好各个脏器,使 OD 不致发展成器官衰竭。     

烧伤后侵袭性感染和多器官功能不全综合征

总结了１５８例烧伤侵袭性感染与多器官功能不全综合征（ＭＯＤＳ）的关系。侵袭性感染导致ＭＯＤＳ有几个特点：①ＭＯＤＳ发病率高，达到８１．６％，每例有平均２．７３个器官发生功能不全。②ＭＯＤＳ发展成ＭＯＦ的发生率也高，约为５０％。③ＭＯＤＳ死亡率低，而发展到ＭＯＦ死亡率明显上升，达到９０％以上。不同菌种感染中，Ｇ＋菌致器官功能不全（ＯＤ）发生率较低，Ｇ－菌致ＯＤ发生率较高，而绿脓杆菌致ＯＤ发生率最高，后果最严重。对发病机制及防治问题进行了讨论，认为由于发病机理尚未充分了解，针对机制的有效治疗缺乏，因此防治的主要手段仍是去除诱因，即控制侵袭性感染。一旦感染发生，则要保护好各个脏器，使ＯＤ不致发展成器官衰竭。     

脓毒症大鼠高迁移率族蛋白-1基因表达及其与内毒素血症的关系

目的观察脓毒症时高迁移率族蛋白 1(HMG 1)基因表达的变化及其与内毒素血症的关系。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)造成脓毒症模型。 10 0只动物随机分为正常对照组 (10只 )、假手术组 (10只 )、CLP组 (6 0只 )及重组杀菌 /通透性增加蛋白 (rBPI2 1)治疗组 (2 0只 )。留取肝、肺及肾组织标本分别检测HMG 1mRNA表达及内毒素水平。结果CLP术后 6～ 72h肝、肺及肾组织HMG 1mRNA表达均不同程度增强 (P <0 0 5 )。rBPI2 1治疗后 12h肝、肺及肾组织内毒素水平分别为3 1± 0 8、2 6± 0 3、2 4± 0 4EU/g ,均明显低于CLP组 (5 2± 0 8、5 0± 0 8、14 2± 4 0EU/g ,P <0 0 5 ) ;同时 ,12h肝、肺、肾组织和 2 4h肝组织HMG 1mRNA表达明显受抑制 (P <0 0 5 )。CLP后肝、肺、肾组织HMG 1mRNA表达分别与相应组织内毒素水平呈显著正相关 (r =0 2 90 ,P <0 0 5 ;r =0 4 5 5 ,P <0 0 5 ;r=0 2 87,P <0 0 5 )。结论脓毒症时细菌内毒素持续侵入血循环 ,并蓄积于局部组织 ,参与了HMG 1的诱生 ,并可在基因水平调控其表达     

盐酸戊乙奎醚对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4mRNA和Toll样受体2mRNA表达的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚对内毒索性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA和Toll样受体2(TLR2)mRNA表达的影响.方法 健康SD大鼠60只,雌雄不拘,体重200～220g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=12),对照组(C组)、LPS组和低、中、高剂量盐酸戊乙奎醚组(P1组～P3组).C组腹腔注射生理盐水2ml;LPS组腹腔注射LPS 8mg/kg;P1组～P3组分别腹腔注射LPS 8 mg/kg和盐酸戊乙奎醚0.3、1.0和3.0 mg/kg.给药结束后6 h时开胸,心室取血,并取肺组织,采用ELISA法测定血清TNF-α和Ib-6的浓度,RT-PCR法测定肺组织TLR4 mRNA和TLR2 mRNA 的表达水平,并观察肺组织病理学结果.结果 与C组比较,LPS组、P1组～P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均升高(P<0.05);与LPS组比较,P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05),P1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与P1组比较,P2组和P1组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05);P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).P2组和P3组肺组织病理学损伤程度明显轻于LPS组.结论 盐酸戊乙奎醚可通过下调肺组织TLR4 mRNA和耵JR2 mRNA的表达,降低炎性反应,从而减轻大鼠内毒素性急性肺损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of penehyclidine (PHCD) on Toll-like receptor 4 (TLR4)mRNA and Toll-like receptor 2 (TLR2) mRNA expression in the lung tissue in rats with acute lung injury induced by lipopolysaccharide (LPS) .Methods Sixty healthy SD rats of both sexes weighing 200-220 g were randomly divided into 5 groups ( n = 12 each) :control group (group C) , LPS group and P1-3 groups. Acute lung injury was induced by intraperitoneal (IP) LPS 8 mg/kg in LPS and P1-3 groups. PHCD 0.3, 1.0 and 3.0 mg/kg were given IP after LPS administration in P1-3 groups. The animals were anesthetized at 6 h after IP LPS. Blood samples were collected for determination of serum TNF-α and IL-6 concentrations ( by ELISA) and then sacrificed, the lungs were immediately removed for determination of TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression (by RT-PCR), and microscopic examination. Results LPS significantly increased TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and IL-6 concentrations. PHCD 1.0 or 3.0 mg/kg significantly inhibited LPS-induced increase in TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and ILr6 concentrations.The lung histopathologic damage was significantly ameliorated in P2 and P3 groups as compared with group LPS.Conclusion PHCD can protect the lungs against LPS-induced acute lung injury through inhibiting TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and reducing the inflammatory response.     

盐酸戊乙奎醚对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4mRNA和Toll样受体2mRNA表达的影响

Objective To investigate the effect of penehyclidine (PHCD) on Toll-like receptor 4 (TLR4)mRNA and Toll-like receptor 2 (TLR2) mRNA expression in the lung tissue in rats with acute lung injury induced by lipopolysaccharide (LPS) .Methods Sixty healthy SD rats of both sexes weighing 200-220 g were randomly divided into 5 groups ( n = 12 each) :control group (group C) , LPS group and P1-3 groups. Acute lung injury was induced by intraperitoneal (IP) LPS 8 mg/kg in LPS and P1-3 groups. PHCD 0.3, 1.0 and 3.0 mg/kg were given IP after LPS administration in P1-3 groups. The animals were anesthetized at 6 h after IP LPS. Blood samples were collected for determination of serum TNF-α and IL-6 concentrations ( by ELISA) and then sacrificed, the lungs were immediately removed for determination of TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression (by RT-PCR), and microscopic examination. Results LPS significantly increased TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and IL-6 concentrations. PHCD 1.0 or 3.0 mg/kg significantly inhibited LPS-induced increase in TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and ILr6 concentrations.The lung histopathologic damage was significantly ameliorated in P2 and P3 groups as compared with group LPS.Conclusion PHCD can protect the lungs against LPS-induced acute lung injury through inhibiting TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and reducing the inflammatory response.