蛋白激酶C-δ与细胞凋亡

PKC-δ是PKC家族的一种亚型。其激活和转位机制可能与其不同的活化因子或底物和不同位点的氨基酸残基磷酸化有关。目前较多的研究发现，PKC-δ通过线粒体和细胞核途径促进细胞凋亡，其缺乏与肿瘤形成及耐药有关。但同时也有研究证实，几种类型肿瘤细胞的PKC-δ具有抗凋亡作用，并与肿瘤浸润和转移相关。     

肺癌中蛋白激酶C-α、βⅡ及δ的表达及意义

目的检测PKCα-、β-Ⅱ、-δ在肺癌中的表达以探讨其与肺癌发生、发展的关系。方法采用免疫组化SP法分别检测84例肺癌原发灶及30例非小细胞肺癌淋巴结转移灶中PKC-α、-βⅡ、-δ的表达,分析其在肺癌的不同组织类型、不同分化程度以及原发灶与淋巴结转移灶之间表达的差异及意义。结果PKC-α、-βⅡ与-δ在84例肺癌的阳性率分别为61.9%、70.2%和66.7%,在不同肺癌组织类型之间差异无显著性。PKC-α阳性率在小细胞癌(SCLC,58.3%)与非小细胞肺癌(NSCLC,62.5%)及其高中分化组(70.2%)与低分化组(48.0%)之间差异无显著性。PKC-βⅡ阳性率在SCLC(41.7%)与NSCLC(75.0%)及其高中分化组(74.5%)之间差异有显著性,在SCLC与低分化组(48.0%)之间差异无显著性。PKC-δ阳性率在SCLC(41.7%)与NSCLC(70.8%)及其高中分化组(78.7%)之间差异有显著性,在SCLC与低分化组(56.0%)之间差异无显著性。比较PKC-α、-βⅡ与-δ在30例淋巴结转移NSCLC的原发灶与转移灶的表达,3组阳性率差异无显著性。结论PKC-α、-βⅡ与-δ的异常激活,在肺癌发生、发展过程中起重要作用。但3种亚型的作用各有不同,PKC-βⅡ可能是促进癌前病变的增生;PKC-α过表达与PKC-δ表达降低促进癌细胞增殖与凋亡减少,而癌分化降低、恶性程度增加。     

PKC-α、δ亚型在AVP改善缺氧处理VSMC反应性中的作用及其与MLC20磷酸化调节的关系

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）-α、δ亚型在精氨酸血管加压素（AVP）改善缺氧处理血管平滑肌细胞（VSMC）反应性中的作用及其与肌球蛋白轻链（MLC20）磷酸化、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）和肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）的关系。方法：贴块法取大鼠肠系膜上动脉（SMA）血管平滑肌细胞原代培养并传代至第3—5代后用于实验,观察缺氧1．5h后PKC-α、δ亚型抑制剂处理对AVP调节VSMC收缩反应性的影响,以荧光素标记的牛血清白蛋白在Transwell小室中的渗透率变化反映VSMC的收缩反应性;用酶反应法测定缺氧VSMCMLCK／MLCP活性。同时取失血性休克大鼠（30mmHg,2h）SMA,观察PKC-α、δ亚型在AVP调节休克血管MLC20磷酸化水平（Western blotting）中的作用。结果：PKC-α抑制剂G66976预处理可明显抑制AVP引起的缺氧VSMC收缩反应的升高,而PKC-δ抑制剂rottlerin也部分抑制AVP的作用。缺氧VSMC的MLCP活性明显升高、MLCK活性降低,同时休克血管平滑肌的MLC20磷酸化水平降低;AVP预处理可使缺氧VSMCMLCP活性降低、MLC。磷酸化水平升高,而Go 6976可明显拈抗AVP的作用,rottlerin仅有轻度的抑制作用。AVP和PKC-α、δ抑制剂对MLCK活性的变化无明显影响。结论：AVP通过调节血管平滑肌细胞MLCP活性和MLC。磷酸化水平来恢复休克后血管反应性和钙敏感性,PKC-α是其中重要的调节分子。     

PKC-α、δ亚型在AVP改善缺氧处理VSMC反应性中的作用及其与MLC20磷酸化调节的关系

目的：探讨蛋白激酶C(PKC)-α、δ亚型在精氨酸血管加压素(AVP)改善缺氧处理血管平滑肌细胞(VSMC)反应性中的作用及其与肌球蛋白轻链(MLC₂₀)磷酸化、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)的关系。 方法: 贴块法取大鼠肠系膜上动脉(SMA)血管平滑肌细胞原代培养并传代至第3-5代后用于实验,观察缺氧1.5 h后PKC-α、δ亚型抑制剂处理对AVP调节VSMC收缩反应性的影响,以荧光素标记的牛血清白蛋白在Transwell小室中的渗透率变化反映VSMC的收缩反应性;用酶反应法测定缺氧VSMC MLCK/MLCP活性。同时取失血性休克大鼠(30 mmHg,2 h)SMA,观察PKC-α、δ亚型在AVP调节休克血管MLC₂₀磷酸化水平(Western blotting)中的作用。结果: PKC-α抑制剂G 6976预处理可明显抑制AVP引起的缺氧VSMC收缩反应的升高,而PKC-δ抑制剂rottlerin也部分抑制AVP的作用。缺氧VSMC的MLCP活性明显升高、MLCK活性降低,同时休克血管平滑肌的MLC₂₀磷酸化水平降低;AVP预处理可使缺氧VSMC MLCP活性降低、MLC₂₀磷酸化水平升高,而G 6976可明显拮抗AVP的作用,rottlerin仅有轻度的抑制作用。AVP和PKC-α、δ抑制剂对MLCK活性的变化无明显影响。结论: AVP通过调节血管平滑肌细胞MLCP活性和MLC₂₀磷酸化水平来恢复休克后血管反应性和钙敏感性,PKC-α是其中重要的调节分子。     

蛋白激酶C-δ在Dectin-1-Src-Syk介导的巨噬细胞杀灭白假丝酵母菌中的作用研究

目的:研究蛋白激酶C-δ在Dectin-1-Src-Syk介导的巨噬细胞杀灭白假丝酵母菌中的作用,探讨固有免疫抗真菌的分子机制。方法:用流式细胞术检测细胞表面受体;用蛋白酶抑制剂预处理体外培养的小鼠巨噬细胞,通过Western blot分析相关蛋白的表达及磷酸化水平,并利用luminol法、荧光标记法和培养法检测巨噬细胞在白假丝酵母菌的刺激下释放活性氧分子、吞噬并杀灭真菌细胞的能力。结果:Dectin-1封闭剂与Src或Syk抑制剂均能抑制白假丝酵母菌诱导的PKC-δ磷酸化;蛋白激酶C-δ抑制剂Rottlerin对巨噬细胞吞噬白假丝酵母菌无显著影响;Rottlerin抑制白假丝酵母菌诱导的巨噬细胞p40phox磷酸化、活性氧分子的产生和对白假丝酵母菌的杀灭作用。结论:蛋白激酶C-δ抑制剂Rottlerin通过抑制巨噬细胞NADPH氧化酶复合物的活化和活性氧分子的释放降低对真菌细胞的杀灭作用,提示PKC-δ在固有免疫抗真菌中发挥重要的作用。     

全反式维甲酸对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及作用途径.方法:在人乳腺癌细胞株MCF-7培养基中加入一定浓度ATRA和PKC-δ的专一抑制剂rottlerin(RO)并分组,通过SubG1assay by FACS、琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA ladder来观察ATRA对MCF-7的影响.结果:在浓度为5μM的ATRA作用下,MCF-7的凋亡率显著高于其它各组(P＜0.01),并可观察到明显梯状DNA.结论:ATRA能够诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但受PKC-δ的专一抑制剂RO的抑制.     

Caspase信号调控小胶质细胞的激活和神经毒性

激活的小胶质细胞能释放有神经毒性的促炎因子,小胶质细胞的激活以及炎症介导的神经毒性在多种神经退行性疾病中扮演重要角色。最近,欧洲科学家发现凋亡执行者caspase-8和caspase-3/7的依次激活能通过PKC-δ依赖的信号通路     

PKC-βⅡ、NF-κBp50在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其意义

目的 研究蛋白激酶C-βⅡ(Protein kinase C - βⅡ,PKC-βⅡ)、核因子κBp50(Nuclear factor of kappa Bp50,NF-κBp50)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达情况与其意义.方法 采用免疫组化方法检测68例DLBCL,7例淋巴结反应性增生中PKC-βⅡ、NF-κBp50的表达.结果 PKC-βⅡ、NF-κBp50在68例DLBCL的阳性表达率分别为77.94%(53/68)和70.59%(48/68).PKC-βⅡ在DLBCL亚型中表达的差异有统计学意义(P<0.001),NF-κBp50在DLBCL亚型中表达的差异具有统计学意义(P<0.05),PKC-βⅡ、NF-κBp50在DLBCL中non-GCB(非生发中心型)中表达高于GCB(生发中心型).它们在性别、民族、年龄、部位方面的差异均无统计学意义(P>0.05).PKC-βⅡ与NF-κBp50在DLBCL中的表达呈正相关(rs=0.429,P<0.001).结论 PKC-βⅡ和NF-κBp50在DLBCL不同亚型之间表达的差异,可能有助于DLBCL亚型的诊断和预后的判断.PKC-βⅡ对NF-κBp50表达有正向调节作用,在 DLBCL的发生和发展中起着重要的作用.     

PKC—α、PKA—I反义核酸对鼻咽癌CNE—2Z细胞生长增殖的影响

目的：探讨PKC—α和PKA—I反义核酸(asODN)对鼻咽癌CNE—2Z细胞生长增殖的影响。方法：分别用脂质体(lipofectin,LP)介导asODN转染鼻咽癌CNE—2Z细胞。实验组：①0．01—1．00μmol/L PKC-α asODN；②0．01—1．00μmol/L PKA-I asODN；③0．50μmol/L PKC-α asODN。对照组：相应浓度的随机序列(rODN)。用免疫组化法检测CNE—2Z细胞PKC-α和PKA-I的表达，MTT法检测其生长指数(growth in-dex,GI)，软琼脂克隆形成串检测其体外增殖能力。结果：PKC-α asODN或/和PKA-I asODN均可阻断其相应PKC-α或PKA-I的表达(P＜0．05)。PKC-α asODN或PKA-I asODN均能显著降低CNE—2Z细胞GI和软琼脂克隆形成率(P＜0．05)，且具有量效依赖关系。PKC-α asODN PKA-I asODN共同作用可使其GI和软琼脂克隆形成率非常显著降低(P＜0．01)，无明显量效依赖关系，两者对CNE—2Z生长抑制作用强于PKC-α asODN或PKA-I a-sODN(P＜0．05)，对其软琼脂克隆形成率的抑制作用与PKC-α asODN或PKA-I asODN无显著差异(P＞0．05)。结论：PKC-α asODN和PKA-I asODN均可抑制CNE—2Z细胞体外生长和增殖，两者具有协同作用。     

溶血磷脂酸通过蛋白激酶C-α/钙离子途径促进大鼠星形胶质细胞增殖

目的：了解溶血磷脂酸（LPA）对星形胶质细胞（AS）活化增殖的影响及其作用机制。方法:原代培养的新生SD大鼠前脑星形胶质细胞分为对照组、PKC-α激动剂（PMA）组、LPA组、PKC-α抑制剂（Ro31-8220）组、Ro31-8220＋PMA组和Ro31-8220＋LPA组，用二苯基四氮唑溴盐（MTT）比色法以及流式细胞仪（FCM）检测AS增殖。以Fura－2/AM标记细胞内钙离子，紫外分光光度计检测其浓度。用蛋白印迹法检测细胞内PKC-α表达。结果:LPA和PMA能明显促进AS的增殖，并增加细胞内PKC-α的表达以及细胞内钙离子（［Ca2+］i）浓度（P<0.01）；Ro31-8220预处理后，显著缓解LPA促AS增殖程度和［Ca2+］i浓度的增加（P<0.01），［Ca2+］i浓度的变化与PKC-α表达量的变化呈正相关。结论:LPA通过PKC-α/Ca2+途径促进AS的增殖活化。     

γδT细胞及其亚群在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨γδT细胞及其主要亚群在卵巢癌患者肿瘤组织中的表达及其与卵巢癌患者临床病理特征间的关系。方法流式细胞术检测15例卵巢癌组织、10例卵巢良性肿瘤组织和4例正常卵巢新鲜组织中γδT、Vδ1 T、Vδ2 T细胞比例;免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测上皮性卵巢癌(40例)、卵巢交界性肿瘤(20例)和卵巢良性肿瘤(20例)组织切片中γδT、Vδ1 T细胞的表达,比较卵巢癌样本中阳性表达细胞数与患者年龄、肿瘤体积、病理类型、FIGO分期、组织学分化和淋巴结转移的关系。结果卵巢癌组织γδT、Vδ1 T细胞的比例显著高于卵巢良性肿瘤组织(P0.01)和正常卵巢组织(P0.01);Vδ2 T细胞在卵巢良性肿瘤组织浸润比例高于卵巢癌组织(P0.01);免疫组化染色发现卵巢癌组织中γδT、Vδ1 T细胞数量显著高于卵巢交界性肿瘤组织(P0.01)和卵巢良性肿瘤组织(P0.01);卵巢癌组织中γδT、Vδ1 T细胞数与患者FIGO分期和淋巴结转移均有统计学关系(P0.05);另外,卵巢癌中γδT细胞数与肿瘤体积具有统计学关系(P0.05)。结论卵巢癌组织中具有较高水平的γδT细胞,尤其是亚群Vδ1 T细胞,可能与卵巢癌患者疾病临床进展有重要联系。     

PKC-β在糖尿病肾病中的作用

本文全面综述了蛋白激酶C-β(Protein kinase C-β,PKC-β)Ⅰ和Ⅱ两种亚型的分子特点和功能,PKC-β在糖尿病肾病的发生及发展过程中所起的作用,以及糖代谢改变、血流动力学异常、血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β,TGF-β1)等因素对PKC-β的表达的影响。     

PKC-ζ参与调节基质细胞来源的因子-1诱导的人U937细胞VEGF mRNA表达

目的：探讨用短发夹RNA表达质粒抑制人U937细胞的蛋白激酶C-ζ（PKC-ζ）表达后，对基质细胞来源的因子-1刺激的U937细胞VEGFmRNA表达的影响。方法: 设计合成一对针对人PKC-ζ的mRNA的寡核苷酸序列，退火后将其连入载体。对重组质粒pSIRENp进行酶切鉴定。用脂质体介导的方法分别将质粒pSIRENp和对照质粒转染U937细胞，用RT-PCR检测PKC-ζ和U937细胞VEGFmRNA。结果: 酶切证实目的寡核苷酸片段已经被克隆到pSIRENp，转染后几乎完全抑制U937细胞的PKC-ζ表达；VEGF mRNA表达在SDF-1作用前后均明显低于对照。结论: shRNA方法可成功抑制U937细胞的PKC-ζ表达。PKC-ζ可能参与调节U937细胞VEGF的表达。     

大鼠视神经切断后视网膜双极细胞PKC-α和recoverin的表达

为了探讨视神经切断后视网膜内部是否存在突触可塑性改变,本实验采用大鼠视神经切断模型,通过免疫组织化学方法检测视神经切断后视网膜双极细胞PKC-α和recoverin的表达变化。结果显示:正常视网膜中,PKC-α和recoverin阳性产物主要见于视网膜内核层、内网层及节细胞层,另外外核层也可见少量recoverin阳性细胞。视神经切断后3d,大鼠视网膜内网层高倍镜下可见PKC-α和recoverin免疫阳性终末的数量开始增加,14d时增至最高,21d、28d呈现逐渐减少的趋势。本研究结果提示视神经切断后视网膜双极细胞与节细胞之间的突触可能存在早期增生,后期溃变的可塑性变化。     

免疫联合治疗增强Vγ9Vδ2 T细胞的抗肿瘤活性北大核心CSCD

细胞免疫疗法作为一种新型诊治手段在肿瘤治疗领域越发受到重视。γδT细胞具有良好的抗肿瘤特性,可识别恶性细胞、浸润肿瘤,在肿瘤细胞治疗和联合治疗中具有广阔应用前景。Vγ9Vδ2 T细胞是血液中最丰富的γδT细胞亚群,对卵巢癌、乳腺癌、白血病、肝癌等多种肿瘤细胞表现出良好杀伤能力。Vγ9Vδ2 T细胞虽然仅占外周血淋巴细胞少部分,但可由外周血单个核细胞大量扩增。免疫联合治疗的发展可提高基于Vγ9Vδ2 T细胞的联合治疗肿瘤杀伤效果。化疗药物、细胞因子、单克隆抗体等是诱导、扩增和干预Vγ9Vδ2 T细胞的有效药物。本文对Vγ9Vδ2 T细胞活化、肿瘤免疫杀伤作用和免疫联合治疗等进行综述。     

脑死亡对巴马小型猪心脏结构与功能的影响及其机制的实验研究

目的： 探讨脑死亡状态对巴马小型猪心脏结构与功能的影响及蛋白激酶C (PKC)在其发生机制中的作用。方法: 巴马小型猪10只，随机分为脑死亡组与对照组，每组5只。应用改进的缓慢间断颅内加压法建立脑死亡模型，对照组仅开颅麻醉维持。于脑死亡后6、12和24 h检测血清中肌钙蛋白Ｔ(cTnT)、IL-1β、IL-6及TNF-α水平，24 h开胸取心肌组织，HE染色观察心脏组织结构变化，电镜观察心脏超微结构变化，免疫组化染色观察PKC-α蛋白表达，RT-PCR法检测PKC-α mRNA表达。结果: （1）心肌组织学变化：脑死亡后24 h可见心肌结构改变，光镜下见心内膜下片状出血，心肌溶解，断裂；电镜下见线粒体水肿，肌纤维模糊融合，嵴部分消失，膜部分融合。（2）血清cTnT变化：脑死亡组血清cTnT自脑死亡后6 h开始升高，并随时间延长而逐渐升高；各时点两组相比脑死亡组明显高于对照组（P<0.05）。（3）炎症介质变化：脑死亡组IL-1β、IL-6、TNF-α水平自6 h开始升高，并随时间延长而逐渐升高；各时点两组相比脑死亡组明显高于对照组（P<0.05）。（4）心肌细胞中PKC-α mRNA及其蛋白水平的变化：脑死亡组PKC-α mRNA及其蛋白表达水平均明显高于对照组（P<0.05）。结论: 脑死亡导致巴马小型猪心脏结构与功能的损伤，炎症介质水平升高；脑死亡时心脏PKC-α 表达水平升高。PKC-α的活化可能参与了脑死亡状态下心脏的损伤过程。     

2型糖尿病大鼠阴茎海绵体内皮细胞PKC-α的表达

目的:观察高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ)注射制备的2型糖尿病(T2DM)大鼠阴茎海绵体内皮细胞蛋白激酶C-α(PKC-α)的表达。方法:6周龄勃起功能正常的SD大鼠60只,分为对照组(10只)和实验组(50只),后者高脂喂养8周后腹腔注射STZ35mg/Kg,第9周末与对照组平行尾静脉采血,测定空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA);计算胰岛素敏感性指标Homa-IR和Homa-β;并取阴茎海绵体组织进行HE染色观察组织学变化,以及免疫组化方法测定内皮细胞PKC-α的表达。结果:实验组大鼠高脂喂养8周后体重增加,注射STZ后成功复制T2DM模型。其FFA、TG、LDL-C水平显著高于对照组(P<0.05)。光镜下,实验组大鼠阴茎海绵体结构疏松,免疫组化显示阴茎海绵体内皮细胞PKC-α表达较对照组丰富(P<0.05)。结论:T2DM模型大鼠阴茎海绵体内皮细胞的PKC-α表达增加,可能与高血糖、高血脂、胰岛素抵抗、游离脂肪酸升高有关。     

PKC-α、б亚型在AVP改善缺氧处理VSMC反应性中的作用及其与MLC20磷酸化调节的关系

目的:探讨蛋白激酶c(PKC)-а、б亚型在精氨酸血管加压素(AVP)改善缺氧处理血管平滑肌细胞(VSMC)反应性中的作用及其与肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)的关系.方法:贴块法取大鼠肠系膜上动脉(SMA)血管平滑肌细胞原代培养并传代至第3-5代后用于实验,观察缺氧1.5 h后PKC-а、б亚型抑制剂处理对AVP调节VSMC收缩反应性的影响,以荧光素标记的牛血清白蛋白在Transwell小室中的渗透率变化反映VSMC的收缩反应性;用酶反应法测定缺氧VSMC MLCK/MLCP活性.同时取失血性休克大鼠(30 mmHg,2 h)SMA,观察PKC-а、б亚型在AVP调节休克血管MLC20磷酸化水平(Western blotting)中的作用.结果:PKC-а抑制剂Go6976预处理可明显抑制AVP引起的缺氧VSMC收缩反应的升高,而PKC-б抑制剂rottlerin也部分抑制AVP的作用.缺氧VSMC的MLCP活性明显升高、MLCK活性降低,同时休克血管平滑肌的MLC20磷酸化水平降低;AVP预处理可使缺氧VSMC MLCP活性降低、MLC20磷酸化水平升高,而Go6976可明显拮抗AVP的作用,rottlerin仅有轻度的抑制作用.AVP和PKC-α、б抑制剂对MLCK活性的变化无明显影响.结论:AVP通过调节血管平滑肌细胞MLCP活性和MLC∞磷酸化水平来恢复休克后血管反应性和钙敏感性,PKC-α是其中重要的调节分子.     

δ-连环蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其与患者预后之间的关系

δ-连环蛋白(δ-catenin)作为连环蛋白家族中的一员,其在肿瘤组织中的表达及其临床意义仍不明确。本组旨在探讨δ-catenin在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及其预后价值。作者对299例ESCCδ-catenin免疫组化结果进行了评估。结果发现,47例ESCC邻近正常鳞状上皮δ-catenin均为     

Selective Function of PKC-θ in T cells

T cell activation is a critical process in initiating adaptive immune response since only through this process the naive antigen specific T cells differentiate into armed effector T cells that mediate the actual immune response. During T cell activation, naive T cells undergo clonal expansion and acquire the capability to kill target cells infected with pathogens or produce cytokines essential for regulating immune response. Inappropriate activation or inactivation of T cells leads to autoimmunity or severe immunodeficiencies. PKC-θ is selectively expressed in T cells and required for mediating T cell activation process. Mice deficient in PKC-θ exhibit defects in T cell activation, survival and activation-induced cell death. PKC-θ selectively translocates to immunological synapse and mediates the signals required for activation of NF-κB, AP1 and NFAT that are essential for T cell activation. Furthermore, PKC-θ^-│- mice displayed multiple defects in the development of T cell-mediated immune responses in vivo. PKC-θ is thus a critical molecule that regulates T cell function at multiple stages in T cell-mediated immune responses in vivo.