一种用来进行姐妹染色单体交换区别染色的特制高压汞灯

在姐妹染色单体交换(SCE)与姐妹染色单体区别染色(SCD)中,在使用市售高压水银荧光灯的基础上我们设计了一种高压水银灯。用以照射经用5—溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记之染色体标本。照射前标本如先用 Hoechst—33258处理,照射时间只需10—15分钟。如直接照射,则要延长至25—30分钟。再进行 Giemsa 染色。这种方法的优点在于灯具备光源与热源之作用,从而简化了用普通紫外线灯照射外加水浴或其它加温方法的 SCD 步骤;节省时间;提高 SCD 效果;易于防护;设备简单和价钱便宜等。     

改进姐妹染色单体交换检查法中细胞制备及区别染色方法的初步探讨

在筛试环境致突变物和致癌物中,姐妹染色单体交换(SCE)检查法是一种反映生物体去氧核糖核酸(DNA)受损的较敏感的方法。为了在遗传毒理学的研究中更好地应用这一方法,本文介绍了单用高压水银荧光灯代替紫外线灯照射加水浴等加温样本玻片的方法,并取消了常规法固定时间等,以简化姐妹染色单体区别(SCD)技术。     

姊妹染色单体分化染色方法的改进

姊妹染色单体交换(下称SCE)测定方法,国内外报道甚多,主要是分化染色方法的差异。这些方法尚有不足之处,如加温硷处理法,中期分裂相极易漂浮丢失;多种盐溶液处理步骤繁复;荧光染色猝灭太快,标本不能长久保存等。本文介绍采用紫外线照射及柠檬酸三钠盐液同时处理后,经两次吉氏染色方法,能获得清晰满意标本。它具有试剂来源方便、设备条件简单、分化不受制片的新鲜程度限制,可长期保存读片等优点。方法一、人外周血淋巴细胞培养及5′-溴脱氧尿苷(5′-Brdu)掺入:无菌条件下,于培养瓶     

姐妹染色单体差别染色效果相关因素的研究与改进

目的探讨影响姐妹染色单体差别染色效果的因素,明确作为课堂实验教学项目的可行性。方法用常规外周血淋巴细胞培养、染色体制备技术制备染色体标本片,细胞培养过程中分别加入新配制和-20℃保存10年的BrdU溶液。标本制备后分别取新鲜(1 d龄)和-20℃冻存1,2,3,4,5周龄的染色体片用紫外线照射,照射条件为50,56,60℃三种温度,10,20,30 min三个时间,然后Giemsa染色10 min。根据姐妹染色单体着色效果与色差评价各因素对差别染色的影响。结果在-20℃冻存10年的BrdU与新鲜配制的BrdU掺入DNA后的染色效果无显著差异,终浓度以10μg/ml为佳。新制备和-20℃保存1-5周的染色体标本片,在50-60℃的片温范围内,紫外照射10-30 min均获得良好的差别染色效果。结论BrdU溶液在-20℃长期冻存不影响DNA掺入效果;姐妹染色单体差别染色对相关因素容差性较强,改进后作为课内教学实验项目具有很好的可行性。     

用高压汞灯进行姐妹染色单体区别染色(SCD)的研究

在改进姐妹染色单体区别染色(SCD)方法研究中,在对高压水银荧光灯的研究基础上,我们研制成灯泡内壁不涂以白色荧光粉的高压水银灯。用此灯对用5溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记并用荧光染料双苯并咪唑(Hoechst33258,25μg/ml,PH6.8磷酸盐缓冲液配制),染色5—10分钟之染色体样品照射10～15分钟,再进行 Giemsa 染色。SCD 效果良好。这种方法之优点在于一灯兼起光源与热源之作用,代替了用普通紫外线灯照射外加水浴或其它加温方法的 SCD 步骤节省时间,提高 SCD 效果,自动计时使用方便;设备简单,价钱便宜。     

细胞学检查瑞氏染色不佳标本的简易处理

血片、骨髓片、脱落细胞及穿刺细胞学涂片检查 ,采用瑞氏染色 ,常因各种原因造成染色不佳现象 ,如偏碱 (酸 )或染色过深等。遇此情况一般采用褪色复染处理 ,但这种处理较为烦琐且效果不佳。我们试用磷酸盐缓冲液浸泡处理 ,效果满意 ,现介绍如下。1　材料和方法1.1　 p H 6.4～ 6.8磷酸盐缓冲液[1 ] 。1.2　标本来源　经瑞氏染色出现偏碱 (酸 )或染色过深的标本。1.3　方法　将染色不佳的标本片 ,浸入盛有 p H 6.4～ 6.8磷酸盐缓冲液的染色缸中 ,偏碱 (酸 )者需浸泡 5 min左右 ,染色过深者 10 min左右 ,然后取出 ,干燥后镜检。2　结果经此处…     

改进姐妹染色单体交换技术的分化染色法

近年来国内外应用姐妹染色单体交换技术(下称SCE)对恶性肿瘤、化学毒物(特别是致癌剂)和肿瘤流行病学等研究日益增多.在对SCE的分化染色方面多采用高温高碱处理和用荧光染色或Giemsa染色,鉴于SCE分化染色步骤关系到结果好坏问题,我们做了一点改     

姐妹染色单体互换BUdR—Giemsa检测技术

姐妹染色单体差别染色(SCD),是近几年继分带技术后发展起来的检验染色体变化的更灵敏的新技术。此项新技术的发展,已为遗传、病因、环境保护、体内外突变、致癌剂的筛选、计划生育和遗传毒理学等方面的研究和应用提供了重要的实验手段。同时,利用SCD不仅能观察染色体水平的变化,而且还能检测单个基因位点的变化。可以预期,它将在DNA复制理论和细胞分裂周期的基因调控研究中起重要作用。本文介绍一种SCD效果良好、结果稳定的新方法及为获得优质标本所需的各种实验条     

吸烟及香烟冷凝物对人外周淋巴细胞姐妹染色单体交换的影响

本文采用姐妹染色单体交换(SCH)方法,作吸烟者的体内研究和香烟冷凝物(CSC)的体外研究。结果表明,CSC可引起人外周淋巴细胞姐妹染色单体交换率(SCE_(?))的增加,有剂量反应关系。吸烟者与非吸烟者比较表明,吸烟者的SCE_(?)比非吸烟者高,但未见剂量反应关系。     

介绍一种同时显示G-11染色和SCD的新方法

为了对人类第9号染色体进行 SCE 分析,我们参照 Bobrow 等、Gagne 等的 Giemsa-11染色方法和 Alvec(3)的碱性溶液直接姊妹染色单体差别染色 Sister Chromatid Differentiation,SCD),摸索建立了同时显示 G—11染色和 SCD 的新方法,现介绍于下。一、细胞培养和染色体标本制备 经肝素抗凝的外周血0.3ml 接种于5ml 培养基内(含 RPMI16404ml、小牛血清1ml、广州产 PHA 400μg、青霉素、链霉素各500国际单位),置37℃培养24～26小时,加入BrdU(最终浓度10μg/ml)避光继续培养44～46小时,培养终止前2小时加入秋水仙素(最终浓度0.8     

用免疫荧光方法对癌细胞膜抗原的探讨

<正> 近代细胞学和免疫细胞学研究指出,细胞膜双层类脂分子间的蛋白质不仅是运输物质的载体和神经解质、激素的受体,而且有些还是膜抗体(免疫球蛋白),有些具有抗原性。不同种或同种不同个体的膜抗原是不相同的。因此,异体植皮可引起排斥反应。很多学者利用荧光免疫学方法证明了动物细胞的膜抗原——小白鼠组织相容性抗原、器官抗原、同种白细胞抗原     

The 'borderline' smear in men with urethritis

Four hundred three men with signs and symptoms of urethritis were examined by stained slide and culture of urethral exudate. Of these slides, 14.1% were interpreted as "borderline" for gonorrhea, ie, showing typical Gram-negative diplococci on microscopic examination located extracellularly only. Of these, only 10.5% were culture positive for Neisseria gonorrhoeae. Patients with urethritis whose slides are "borderline" should be treated as for nongonococcal urethritis with tetracycline hydrochloride and not with aqueous penicillin G procaine.     

抗藻酸盐血清与加替沙星联合对铜绿假单胞菌生物被膜形态的影响

目的　探讨抗藻酸盐血清对黏液型铜绿假单胞菌生物被膜中细菌形态上的影响。方法采用改良的组织培养平板法建立黏液型铜绿假单胞菌生物被膜模型 ,经不同稀释度的抗藻酸盐血清与不同浓度的加替沙星联合应用处理后 ,以银染法快速鉴定 ,扫描电镜 (SEM)确认细菌生物被膜形态 ,并采用计算机图像处理系统进行图像分析。结果　计算机图像分析系统显示 ,空白组生物被膜的平均光密度为 0 82± 0 0 6 ;加入抗藻酸盐血清后 ,抗藻酸盐血清组、抗藻酸盐血清与加替沙星联合用药组生物被膜的平均光密度值分别为 0 79± 0 0 6和 0 70± 0 0 4 ,加替沙星单独用药组生物被膜平均光密度值为 0 76± 0 0 7的 ;光镜和电镜图像可见黏液样物变稀疏 ,细菌数减少 ,形态不甚规则。结论抗藻酸盐血清能够影响黏液型铜绿假单胞菌生物被膜构建和形态 ,与加替沙星联用后可以使黏液型铜绿假单胞菌生物被膜结构发生不同程度破坏。     

SCE染色单体分化染色法对癌症患者外周血淋巴细胞增殖周期的分析

用姐妹染色单体分化染色技术对结肠癌与乳腺癌患者外周血淋巴细胞增殖周期进行分析。结果表明：两种癌症患者第２次细胞分裂比率均超过５０％，第３次细胞分裂比率达３６．２６％～３７．３３％。与正常人相比、癌症患者外周血淋巴细胞的细胞周期短。     

脾脏原发性恶性淋巴瘤免疫组化及p53蛋白表达的研究

目的:复习文献对14例脾脏原发性恶性淋巴瘤(PrimaryLymphomaofSpleen,PLS)进行免疫组化的研究,并检测其p53的表达情况。方法:对瘤组织采用常规石蜡包埋、切片、HE染色及SP两步法免疫组化染色,光镜观察。结果:免疫组化染色14例瘤细胞均表达CD45阳性,13例B细胞性均表达CD20阳性,其中B-小淋巴细胞淋巴瘤(3/14例),可表达CD43、CD79α和bcl2阳性;脾边缘区B细胞淋巴瘤(4/14例),可表达CD79α、IgM、ALK阳性,IgD弱阳性;淋巴浆细胞样淋巴瘤(2/14例),表达CD43、CD79α、bcl2、IgM阳性,IgD阴性;弥漫性大B细胞淋巴瘤(4/14例),表达ALK阳性,CD30、CD3弱阳性。1例周围T细胞淋巴瘤,无其他特征型(1/14例),表达CD45Ro、CD3阳性,CD30弱阳性。14例PLS中6例(42.9%)表达p53阳性,而21例慢性增生性脾炎对照组中仅1例(5%)表达p53弱阳性,两组间有显著差异(P<0.05)。结论:PLS较罕见,免疫组化染色对其诊断,鉴别诊断及分型具有重要的意义。PLS多为B细胞型,普遍认为与脾脏白髓中B细胞恶性变有关。PLS中可有p53异常蛋白表达,其预后较脾脏继发性恶性淋巴瘤及其它恶性肿瘤为好。     

HE染色切片褪色后免疫组化染色方法研究

目的探讨HE染色切片褪色后免疫组织化学染色方法。方法HE染片放人二甲苯中浸泡,清除盖玻片和树胶;梯度酒精水化,蒸馏水洗涤;置入0．25％高锰酸钾5rain,蒸馏水洗,40．5％草酸溶液漂白,蒸馏水洗,自然晾干;滴PLLS1滴于组织片上,摇匀,将切片在60℃烘箱中烘60min烘干;PBS洗5rain×3次;组织需要进行水浴抗原热修复;与对照片按标准S-P方法进行免疫组化染色。结果所有对照片与试验片均为阳性,无一例脱片。结论此方法可用于HE片褪色做免疫组化染色,具有实用价值。     

海南省16个疟区市县“三热”病人血片抽查复检结果分析

目的了解基层疟原虫镜检人员的镜检技术、血片制作和染色水平,提高镜检质量,为海南省2018年前实现消除疟疾目标提供科学依据。方法 2008～2010年对琼海市、琼中县等16个市县＂三热＂病人血片抽样复检。结果复检血片21 817张,复检符合率为99.3%;其中阴性血片和阳性血片复检符合率分别为99.99%、93.14%;血片制作和染色优中等级血片分别占92.33%和88.89%。结论镜检符合率都达到了较高水平,但漏检、假阳性、虫种错检及染色效果不佳的问题仍然存在。因此,有针对性的加强基层镜检人员的培训,提高其镜检技术、血片制作和染色水平,以及镜检人员的责任心,是目前疟防工作的重要内容之一。     

自制爬片装置用于细胞爬片及细胞染色

目的利用自制爬片装置改进细胞爬片的制备方法。方法通过自制装置和传统方法制备细胞爬片,苏木精- 伊红染色法（HE 染色）观察细胞生长状态,比较两种细胞爬片制备方法的差异;利用自制装置制备同时给予3 种不同干预处理的细胞爬片,验证其应用于制备多干预条件细胞爬片;制备同时含有3 种不同细胞的集成爬片,验证其用于制作细胞集成爬片的应用。结果自制装置可简化细胞爬片流程,细胞直接贴于载玻片上生长,未出现污染和增殖受限,制作多干预或多种细胞集成爬片效果明确,无相互干扰现象。结论自制装置能更简便地制备以满足普通染色及特殊染色实验要求的细胞爬片,是一种更好的制备细胞爬片的方法。     

β淀粉样肽结合乙醇脱氢酶及胆碱乙酰转移酶在糖尿病小鼠海马内表达的时程变化

目的本研究通过观察β淀粉样肽结合乙醇脱氢酶(amyloid-βpeptide-binding alcohol dehydrogenase,ABAD)及胆碱乙酰转移酶(choline acetyl transferase,ChAT)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠海马CA1区表达的时程变化,探讨DM脑病发病的相关机制。方法 48只雄性昆明小鼠采用数字表法随机分为对照组(control,C,n=24)和DM组(n=24)。小鼠禁食12 h后,按200 mg/kg腹腔注射新鲜配制的链脲佐菌素(streptozocin,STZ),3 d后尾部测非禁食血糖,大于15 mmol/L者为DM模型复制成功。分别在造模后1周、4周及8周应用免疫组织化学染色方法观察C组与DM组小鼠海马CA1区ABAD及ChAT阳性细胞的变化。结果 1)ABAD免疫组织化学染色结果显示,C组小鼠海马CA1区ABAD阳性细胞数量少,染色浅;而造模后1周、4周、8周,DM组小鼠海马CA1区ABAD阳性细胞数量较C组增多,染色深。细胞计数结果显示,1周、4周及8周,DM组小鼠海马CA1区ABAD阳性细胞数量(18.50±2.72,21.10±2.47,18.90±2.08)比C组(14.30±2.63,15.30±3.13,14.10±3.07)明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。2)ChAT免疫组织化学染色结果显示,C组小鼠海马CA1区ChAT阳性细胞数量多,染色深;而造模后1周、4周及8周,DM组小鼠海马CA1区ChAT阳性细胞数较C组减少,染色变浅。细胞计数结果显示,1周、4周及8周DM组小鼠海马CA1区ChAT阳性细胞数量(21.20±2.15,19.60±3.50,21.30±3.20)比C组(25.50±3.63,26.40±3.37,26.30±4.88)明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 DM早期(1周)小鼠海马内即出现ABAD表达增加,并持续至实验终点(8周),同时DM小鼠海马内ChAT表达明显减少。ABAD可能参与DM小鼠胆碱能神经元的变性过程,在DM脑病的发病机制中具有重要作用。     

两种固定液对肺组织固定效果的比较

目的:比较Bouin和10%甲醛两种固定液对正常肺组织的固定效果。方法:取正常小鼠肺组织,分别用Bouin和10%甲醛两种固定液,按料液比1∶20固定24 h,常规制备肺组织石蜡切片,HE染色;光镜下分别在100倍和400倍比较两种切片的组织结构和染色情况并统计高倍镜下清楚细胞数;应用t检验进行统计分析。结果:Bouin固定的肺组织在低倍镜下见解剖结构无分离,组织着色均匀,细胞内外结构清晰,高倍镜下支气管上皮细胞核与质界限分明,Ⅰ型、Ⅱ型肺泡细胞清晰且易于辨别;10%甲醛固定的肺组织切片染色后,在低倍镜下观察效果与Bouin固定的肺组织切片无显著差异,高倍镜下支气管上皮细胞核与质界限不清,Ⅰ型、Ⅱ型肺泡细胞结构模糊,经t检验两者差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Bouin固定的肺组织其HE染色效果较好,为肺组织切片的制备提供参考。