用cDNA阵列技术研究黄曲霉毒素B1诱发树鼩肝癌形成过程中的基因变化

目的 对树鼩肝癌形成过程中的基因表达差异进行动态分析,探讨肝癌发生的分子机制。 方法用cDNA阵列技术,将2例黄曲霉毒素B1诱发的树鼩肝癌组织分别与其癌旁组织和其肝癌形成前的活检肝组织、实验前对照和同期对照肝组织进行基因表达水平的6种比较分析。结果 不同的比较方式所显示的差异表达的基因谱不同,可归为4类:癌组织表达高于癌旁组织、癌旁组织表达高于癌发生前肝的组织;癌与癌旁表达水平相仿,但高于癌发生前的肝组织;癌组织下调,低于癌旁组织;癌发生前表达上调,在癌发生后表达下调。 结论 对肝癌形成过程中不同时期的肝组织基因表达水平进行动态对比分析,有助于阐明肝癌发生的分子机制并最终筛选出与肝癌发生有关的关键基因。     

树鼩实验性肝癌发生过程p53基因的变化

目的 探讨由人乙型肝炎病毒(HBV)和黄曲霉毒索B1(AFB1)诱发的树鼩肝细胞癌变过程,p53基因的表达及变化。方法 将树鼩分为四组:A组:HBV AFB1;B组:只感染HBV;c组:只摄入AFB1;D组:作空白对照。定期肝活检,用免疫组织化学、分子生物学等技术对实验树鼩肝及肿瘤组织进行检测。 结果 (1)接受HBV及AFB1双因素的A组,肝细胞癌(HCC)发生率(66.7％)明显高于只接受HBV的B组或AFB1的C组(30％),而且HCC的平均发生时间也明显早于C组,(120.0±16.6)周与(153.3±5.8)周,t=3.336,P<0.01。(2)在第75周前各组动物肝均未检出突变的p53蛋白。(3)105周时,A组p53蛋白表达率为78.6％,B组为60％,C组为71.4％,D组为10％(x2≥5.03,P<0.05)。在A、C组检出p53基因异常带。(4)树鼩肝癌p53基因突变点分别位于275、78及13密码子;其野生型p53基因的核苷酸及氨基酸序列与人的p53基因的核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为91.7％、93.4％。 结论 再次证实HBV和AFB1有协同致肝癌作用;突变的p53蛋白出现于肝细胞发生癌变之前,p53基因的突变促进了肝癌的发生和演进。HBV可能协同AFB1致p53基因突变。     

肝癌细胞中Twist基因表达变化与WNT信号传导通路的关系

[摘要]目的探讨肝癌细胞中Twist基因表达与WNT信号传导通路激活的关系。方法将0．05mol／L氯化锂加入人肝癌SMMC7721细胞中培养2h激活VeNT通路,然后分别培养6、12、24h,分别为A1、A2、A3组;将0．1mol／L氯化锂加入人肝癌SMMC7721细胞中培养2h激活WNT通路,然后分别培养6、12、24h,分别为B1、B2、B3组;另设空白对照组。用RT—PCR及荧光定量PCR法检测各组细胞的TwistmRNA。结果lit．PCR法测得TwistmRNA在A1、A2、A3组分别为0．38±0．05、0．60±0．08、0．69±0．06,B1、B2、B3组分别为0．56±O．05、0．59±0．06、0．69±0．04,以上各组细胞TwistmRNA与对照组的0．18±0．03相比,P均〈0．05。荧光定量法测得TwistmRNA在A1、A2、A3组分别为0．43±0．01、0．56±0．01、0．67±0．01,BI、B2、B3组分别为0．52±0．01、0．58±0．00、0．65±0．00,以上各组细胞TwistmRNA与对照组的0．21±0．00相比,P均〈0．05。结论肝癌细胞中Twist基因的表达程度与WNT通路的激活有关。     

高转移肝癌MHCC97细胞中Twist基因变化与Wnt信号传导通路的关系

目的研究高转移肝癌MHCC97细胞中Twist基因表达与Wnt信号通路的关系。方法取对数生长期MHCC97细胞分为五组,A、B组分别加入0.05 mol/L氯化锂分别培养12、24 h,C、D组予0.1 mol/L氯化锂分别培养12、24 h激活Wnt通路,E组不干预。采用RT-PCR和荧光定量PCR方法观察各组Twist mRNA表达情况。结果两种检测方法均显示Twist mRNA在A、B、C、D组表达均明显高于E组,P〈0.05;A、B组,C、D组,A、C组,B、D组间比较,P均〉0.05。结论MHCC97细胞中Wnt通路激活后Twist基因表达明显升高未激活,即Twist基因表达与Wnt信号传导通路激活关系密切,Wnt传导通路激活与氯化锂浓度及作用时间无明显相关性。     

cDNA芯片检测耐药急淋患者细胞凋亡调控相关基因的差异表达

目的通过观察耐药／非耐药急性淋巴细胞性白血病（急淋）患者细胞凋亡调控相关基因的差异表达,探索多药耐药的分子病理机制。方法用TRIzol抽提外周血标本总RNA,逆转录生成cDNA并标记后,与含有4096个人类已知基因的cDNA表达谱芯片杂交,检测细胞凋亡调控相关基因在两者间的差异表达。结果耐药组与非耐药组有150个基因表达显著差异,包括耐药组83个基因低表达,67个基因高表达,其中凋亡调控相关基因有6个低表达,8个高表达。结论细胞凋亡调控相关基因表达异常可能是白血病多药耐药的分子病理机制之一。     

骨桥蛋白下游信号分子在肝细胞癌中的表达

目的 通过肝癌组织芯片检测骨桥蛋白(OPN)下游的信号蛋白,以确定其在肝癌组织中的信号传导途径.方法构建肝细胞癌组织芯片,用免疫组织化学染色法检测并分析OPN及其相关分子、整合素αV、CD44v6、磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)、p-Src、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平及其关系.计数资料用卡方检验(或Fisher's确切概率法),各指标之间的相关性采用Spearman相关分析.结果OPN及其受体整合素αV、CD44v6和相关信号分子p-FAK、p-Src、Src、p-ERK、p-AKT在肝癌组织的表达水平均明显高于癌周正常肝组织(P＜0.05).FAK在肝癌和癌周组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).OPN的表达与整合素oV(P＜0.01)、p-ERK(P＜0.01)、CD44v6(P＜0.05)密切相关,与p-FAK、p-Src、p-AKT无相关性(P＞0.05).但p-FAK(P＜0.05)、p-Src(P＜0.01)和p-AKT(P＜0.05)均与OPN受体整合素αV密切相关,p-FAK还与OPN的受体CD44v6密切相关(P＜0.01).结论 OPN通过其受体整合素αV、CD44v6激活下游的丝裂原活化蛋白激酶途径以促进肝癌转移.

Abstract：

Objective Osteopontin (OPN) has close relationship with metastasis in hepatocellular carcinoma but its downstream signal pathways have not been well defined in hepatocellular carcinoma. The object of this study is to identify the associated signal pathways in human HCC tissues. Methods The expressions of OPN, intergrin α V, CD44v6, P-FAK, FAK, P-Src, Src, P-ERK and P-AKT were assayed using TMA analysis. The relationship of OPN with P-ERK, P-Src and P-AKT were explored and the role in HCC metastasis was analysed. Results The expression levels of OPN, intergrin α V, CD44v6, P-FAK, P-Src, Src, P-ERK and P-AKT in HCC tissue were significantly higher than that in normal tissue (P ＜ 0.05). No significant difference was found between the expression levels of FAK in HCC tissue and normal tissue (P ＞0.05). OPN expression was significantly associated with Integrin α v (P ＜ 0.01 ), CD44V6 (P ＜ 0.01) and P-ERK (P ＜ 0.05) but not with P-Stc, P-FAK and P-AKT (P ＞ 0.05). The expressions of P-FAK (P ＜ 0.05), P-Src (P ＜ 0.01) and P-AKT (P ＜ 0.05) were significantly associated with Integrin α v and the P-FAK expression was also significantly associated with CD44V6 (P ＜ 0.01). Conclusion OPN promotes HCC metastasis though Integrin α v/CD44V6/MAPK pathway in human HCC.     

应用基因芯片研究肝细胞癌组织差异基因表达谱

目的：应用基因芯片技术研究原发性肝细胞癌组织中的差异基因表达谱改变，以寻找肝细胞癌相关基因。方法：抽提正常肝组织和肝癌组织中的mRNA来制备探针，经杂交、洗涤后，通过计算机扫描分析正常肝组织和肝癌组织基因表达谱的差异情况。结果：在10000个候选基因中，筛选出102条差异表达基因，表达上调的有42条，表达下调的有60条。未知基因12条。结论：基于DNA微阵矩技术的肿瘤基因表达谱分析能够高通量筛选与肝癌发生发展相关的基因。     

人宫颈癌癌基因-2 促进SMMC 7721细胞分裂和增殖的机制

目的 建立稳定转染含人宫颈癌癌基因(HCCR)-2的SMMC 7721细胞株,探讨HCCR-2对肝癌细胞生物学特性的影响与在SMMC 7721细胞中HCCR蛋白表达的分子信号通路机制. 方法通过脂质体将HCCR-2的真核表达质粒稳定转染至SMMC 7721细胞,Western blot 检测转染后SMMC 7721细胞中HCCR及其下游基因bcl-2蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐法检测HCCR-2对转染后SMMC 7721细胞生长的影响;流式细胞仪检测转染后SMMC 7721细胞周期和细胞凋亡率的变化.用不同浓度表皮生长因子(EGF)处理SMMC 7721细胞24 h,以及用LY294002预孵育细胞1 h后用EGF(100 ng/m1)处理SMMC 7721细胞24 h,Western blot检测HCCR的表达变化.建立稳定转染缺陷型Akt质粒(DN-Akt-pcDNA3.1)的SMMC 7721细胞,Western blot 检测总Akt、磷酸化Akt、HCCR及其下游基因bcl-2的表达.数据以均数±标准差(-x±s)表示,进行单因素方差分析.结果 转染HCCR-2的SMMC 7721细胞较转染空载体的SMMC 7721细胞及亲本细胞的HCCR表达升高,HCCR下游基因bcl-2的表达也升高;四甲基偶氮唑盐法显示其增殖能力增强,从72 h开始转染组较空载体组增殖速度加快(P＜0.01);流式细胞仪检测其细胞凋亡率下降(7.72%±0.23%与1.28%±0.16%,P＜0.01),处于分裂周期的细胞比例明显增加(15.76%±0.73%与21.62%±1.33%,P＜0.01).EGF可促进SMMC 7721细胞中HCCR的表达,用LY294002处理细胞后EGF对其HCCR表达的促进作用被抑制.转染DN-Akt-pcDNA3.1的SMMC 7721细胞中HCCR的表达下降,其下游基因bcl-2的表达亦下降.结论 EGF可通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导人肝癌细胞SMMC 7721中HCCR蛋白的表达,HCCR可影响人肝癌细胞的细胞周期、凋亡和增殖能力.     

Identification of the differential expressive tumor associated genes in rectal cancers by cDNA microarray

AIM： To identify tumor associated genes of rectal cancer and to probe the application possibility of gene expression profiles for the classification of tumors.
METHODS： Rectal cancer tissues and their paired normal mucosa were obtained from patients undergoing surgical resection of rectal cancer. Total RNA was extracted using Trizol reagents. First strand cDNA synthesis was indirectly labeled with aminoallyl-dUTP and coupled with Cy3 or Cy5 dye NHS mono-functional ester. After normalization to total spots, the genes which background subtracted intensity did not exceed 2 SD above the mean blank were excluded. The data were then sorted to obtain genes differentially expressed by ≥ 2 fold up or down in at least 5 of the 21 patients.
RESULTS： In the 21 rectal cancer patients, 23 genes were up-regulated in at least 5 samples and 15 genes were down-regulated in at least 5 patients. Hierachical cluster analysis classified the patients into two groups according to the clinicopathological stage, with one group being all above stage Ⅱ and one group all below stage Ⅱ.
CONCLUSION： The up-regulated genes and downregulated genes may be molecular markers of rectal cancer. The expression profiles can be used for classification of rectal cancer.     

胎盘型谷胱甘肽S-转移酶在实验性肝癌中的表达

我们应用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌，研究从诱癌开始的肝组织中胎盘型谷光甘肽S-转移酶（GST-P）的动态表达，以更明确GST-P在实验性肝癌中表达的意义。     

基因芯片技术在食管鳞癌转移相关基因表达谱筛选中的应用

目的 研究人食管鳞癌转移相关基因表达谱,探讨食管鳞癌的转移机制。方法 选取392个与肿瘤转移相关的基因克隆,制备成肿瘤转移基因芯片。提取食管鳞癌组织以及正常食管组织RNA,反转录后标记为cDNA探针,与cDNA芯片杂交,经扫描及Quantarray 3．0软件分析后比较两种组织中的差异表达基因。结果 共筛查出差异表达基因58条,其中表达上调基因36条、下调基因22条,包括癌基因、抑癌基因、黏附分子、基质金属蛋白酶、信号转导因子、细胞代谢和免疫相关基因等。结论 基因芯片筛查食管鳞癌转移相关基因表达谱可为明确食管鳞癌转移机制提供重要参考。     

生存素与肿瘤信号转导通路之间的关系

生存素是凋亡抑制蛋白家族新成员,是细胞增殖和凋亡调控界面间的结点分子.生存素基因表达的肿瘤特异性使其成为目前恶性肿瘤诊断和治疗的新靶点.肿瘤细胞发生与正常细胞的信号通路异常有关,信号转导通路的活化参与细胞癌变、增殖、凋亡等多种生物学效应.本文就肿瘤中信号转导对生存素基因的表达调控机制的研究进展作一综述.