腰椎椎间盘退行性变大动物模型的建立方法

<正>椎间盘退行性变(IDD)是脊柱外科的常见病和多发病,随着人口老龄化进程的加速,其发生率大幅上升~([1-2])。IDD是引起腰背痛的主要原因~([3-4]),为了寻求治疗腰背痛的有效手段,IDD与椎间盘再生的基础研究近年来受到了广泛关注。由于穿刺或者椎间盘造影会破坏椎间盘完整性,加速退行性变,在人体上进行的椎间盘研究只能进行观察而不能开展直接干预的有创研究,而动物模型在许多方面可以模拟人体IDD的发生过程,从而可     

微RNA-129-5p靶向Fas相关死亡功能域蛋白基因对体外培养人椎间盘髓核细胞凋亡的影响

目的研究微RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向Fas相关死亡功能域蛋白(FADD)基因对人椎间盘髓核细胞(hNPC)凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法运用脂质体法将miR-219-5p抑制子转染至hNPC中抑制miR-219-5p表达,将pcDNA-FADD转染至hNPC中使FADD过表达,将miR-219-5p抑制子和FADD siRNA共转染至hNPC中抑制miR-219-5p和FADD表达。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测抑制miR-219-5p表达后hNPC细胞中FADD、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2和Bax蛋白表达量。通过Targetscan软件预测miR-129-5p和FADD靶向结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验检测二者的靶向关系。结果抑制miR-219-5p、过表达FADD均可明显促进hNPC凋亡。Targetscan软件预测发现FADD 3′-UTR上存在miR-219-5p的结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实miR-129-5p和FADD具有靶向结合关系。抑制miR-219-5p的表达后,hNPC中FADD表达上调,同时促凋亡蛋白Caspase-3表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调。抑制FADD可逆转miR-219-5p低表达对hNPC凋亡的促进作用。结论低表达miR-219-5p可促进hNPC凋亡,其机制可能与miR-129-5p靶向FADD有关。     

腰椎椎间盘退行性变动物模型建立方法的研究进展

腰痛是目前全球首位致残疾病,给患者、家庭和社会造成极大的痛苦和沉重的负担.与增龄有关的椎间盘退行性变(IDD)是腰痛的最主要原因.随着工作与生活节奏的加快,IDD 呈现年轻化的趋势.建立符合IDD 规律、成功率高、可重复性好、操作简单、成本低且适合医学研究的IDD 动物模型,对明确腰椎IDD 的发生机制及开展防治工作具...     

模拟人类脊柱生物力学及运动学无创性构建犬腰椎椎间盘退行性变模型

目的 利用自研定制的腰椎复合运动机使犬腰椎模拟人类脊柱生物力学及运动学特点,通过累积性施加腰椎运动负荷,无创性构建腰椎椎间盘退行性变动物模型。方法 将20只成年雌性草犬随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组犬麻醉后以垂直坐位固定于运动机上,在持续轴向载荷下(245 N)进行一定周期数的腰椎六位相(前屈、后伸、左右侧曲、左右旋转各45°)复合运动,每天运动6 h;对照组犬麻醉后以垂直坐位固定于运动机上,不予任何干预。实验组犬在进行复合运动前及运动2万、5万、10万、15万次时进行腰椎影像学检查,采用侧位X线片测定椎间隙高度指数(DHI)下降情况,MRI及T2-mapping成像定量分析评定椎间盘退行性变程度,采用改良Pfirrmann分级系统进行退行性变程度分级,当椎间盘在MRI T2加权像上出现明显退行性变(改良Pfirrmann分级>5级)时即认定为造模成功,停止复合运动,观察是否存在逆转现象。结果 实验组犬下腰椎3个节段DHI值随着复合运动量的累积而缓慢下降,当复合运动10万次时,L₆/L₇、L₇/S     

终板下椎体缺血诱导兔椎间盘退行性变模型的建立及终板中内皮素1的表达

目的通过终板下注射无水乙醇阻碍椎体-终板营养,建立一种新型兔腰椎椎间盘退行性变模型,并观察终板退行性变过程中内皮素1(ET-1)的表达情况。方法健康4月龄新西兰兔32只,随机分成4组,每组8只,选取L5,6椎体(对应L4/L5及L5/L6椎间盘)注射300μL无水乙醇,选取L4椎体(对应L3/L4椎间盘)注射磷酸盐缓冲液(PBS)作为实验对照,L7椎体(对应L6/L7椎间盘)未注入任何物质作为正常对照。其中1组造模后1个月提取软骨终板细胞,行免疫细胞化学染色检测ET-1表达;余3组分别于造模后1、3和5个月进行椎间盘X线和MRI检查,取椎间盘组织行HE染色观察形态学改变,免疫组织化学染色观察ET-1表达。结果注射无水乙醇后,随着时间进展,X线片显示椎间隙高度显著下降、椎间隙变窄、边缘骨赘增生,MRI T2WI显示椎间盘低信号;苏木精-伊红染色(HE)显示终板的生长板厚度变薄,终板结构破损,同时软骨终板细胞退化、直至消失,髓核中细胞发生转化(由空泡细胞转变为软骨样细胞,进而形成纤维软骨样细胞)造成髓核纤维化,纤维环结构排列紊乱、纤维化程度逐步加重;免疫组织化学染色显示,发生退行性变的终板组织内有ET-1表达,但随着退行性变加剧,ET-1表达强度下降;提取的退行性变软骨终板细胞(造模后1个月)也显示细胞质内ET-1强表达。结论通过注射无水乙醇阻碍椎体-终板营养途径可成功建立兔椎间盘退行性变模型,终板退行性变过程中伴随ET-1的表达。     

腺相关病毒介导hBMP-2体内转染对兔退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响

目的:了解腺相关病毒介导骨形态发生蛋白-2(adeo-associated virus mediated human bone morpho-genetic protein-2,AAV-hBMP-2)基因体内转染兔退变椎间盘后对髓核细胞Fas与Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法:36只普通级新西兰大白兔,采用针刺兔椎间盘的方法制作L2/3、L3/4、L4/5椎间盘退变模型。造模4周后,在MRI影像学中,髄核的信号比正常减弱,证明造模成功,再随机分为注射20μlAAV-hBMP-2组(6×106pfu,A组)、AAV组(6×106pfu,B组)和生理盐水组(C组),分别于注射2周、4周及8周后对椎间盘进行MRI检查,然后取材,石蜡包埋,组织切片应用SP免疫组织化学法和TUNEL法分别观察Fas与Caspase-3蛋白表达及髓核细胞凋亡情况,IPP6.0图像分析系统测定各指标的平均光密度。结果:注射后2周、4周及8周时A组MRI髓核信号结果与B组、C组比较有统计学意义(P0.05)。各组Fas,Caspase-3及TUNEL染色结果随着时间推移逐渐增强,A组Fas、Caspase-3及TUNEL的平均光密度明显低于B组和C组(P0.01),B组与C组间比较无显著性差异(P0.05)。结论:体内转染AAV-hBMP-2能抑制兔腰椎间盘髓核细胞凋亡。     

退变大鼠颈椎间盘细胞凋亡的实验研究

目的：动态观察大鼠颈部动静力失去平衡后颈椎间盘细胞凋亡的改变。方法：建立动静力失衡性颈椎间盘退变模型，透射电镜、TUNEL法、流式细胞仪PI法检测造模3、5、7月后椎间盘细胞凋亡程度。结果：迟变椎间盘内有典型凋亡的细胞，以软骨细胞为主。与对照组比较，各个模型组软骨细胞凋亡指数明显升高(P＜0．01)；模型组间比较，5月、7月较3月细胞凋亡指数明显升高(P＜0．01)。结论：退变椎间盘软骨细胞凋亡数目增多可能是椎间盘退变的机理之一。     

Fas及其配体与椎间盘退变关系的研究进展

Fas是肿瘤坏死因子受体家族成员,FasL是Fas在体内的天然配体。FasL在细胞外与细胞膜表面的Fas结合后,Fas交联成三聚体或多聚体,Fas分子N端死亡效应结     

不同类型椎间盘退变动物模型的评价与比较

椎间盘退变发生机制以及再生和修复一直是脊柱外科研究的热点和重点,而作为重要研究载体的椎间盘退变动物模型承担着从基础理论到临床实践,从临床问题再到实验论证的不可或缺的重要角色。经过近80年来的不断研究,椎间盘退变动物模型已有数十种构建方法,主要分为生物力学改变、生物结构破坏、自发退变和全身疾病4大类型[1],每个类型又包含几种类似的造模方法。这些造模方式在模型设计、可靠性、操作性、重复性等方面各有优劣,     

芍药苷对5-氟尿嘧啶耐药的CD44阳性胃癌细胞的抑制作用

目的：探讨芍药苷对5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药的CD44阳性胃癌细胞株SGC-7901（CD44+SGC-7901/5-FU）细胞增殖与凋亡的影响。 方法：采用反复短期暴露并逐步递增药物浓度法建立5-氟尿嘧啶耐药胃癌细胞株SGC7901/5-FU,鼠抗人CD44抗体,流式细胞术检测分选CD44+SGC-7901/5-FU细胞。将不同浓度的芍药苷作用于体外扩增培养的CD44+SGC-7901/5-FU细胞后,分别用倒置显微镜观察细胞形态学改变、MTT法检测细胞的增殖情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果：各浓度芍药苷作用于CD44+SGC-7901/5-FU细胞后,细胞形态与对照组细胞比较发生了明显变化;与对照组比较细胞生长明显受到抑制、细胞凋亡率明显增加,且呈明显的时间与浓度依赖性（均P<0.05）。 结论：芍药苷能在体外抑制5-FU耐药的人胃癌细胞的生长。     

超声波联合悬吊治疗腰椎间盘突出症的临床疗效对比分析

目的比较超声波治疗、悬吊治疗以及超声波联合悬吊治疗对缓解腰椎间盘突出症患者疼痛及功能障碍的疗效对比分析。 方法前瞻性收集2019年1月至2019年6月在河北医科大学第三医院康复科门诊及住院收治的30例患者，年龄28~45岁，男性与女性患者各15例。均符合腰椎间盘突出症的诊断标准。将30例患者按照随机数字表法随机分为3组，每组各10人。分别为超声波治疗组、悬吊治疗组、超声波联合悬吊治疗组。每组每天治疗一次，连续治疗2 w，治疗前后进行疼痛VAS评分、ODI指数评分来评价患者疼痛及功能的改善情况。 结果30例患者获得随访，随访时间为治疗后4~8 w。三组治疗后VAS评分均较治疗前明显降低，差异有统计学意义（F=20.582，P<0.001）。三组治疗后VAS评分均较治疗前降低，差异有统计学意义（F=3.069，P=0.043）。三组治疗后VAS评分，超声波组联合悬吊组降低最明显（t=12.676，P<0.001）。三组治疗后ODI指数评分均较治疗前降低，差异有统计学意义（F=399.67，P<0.001）。三组治疗后ODI指数评分，超声波组联合悬吊组最低（t=12.737，P<0.001）。 结论超声波及悬吊治疗均可以减轻腰椎间盘突出症患者的疼痛及改善功能障碍。超声波联合悬吊治疗能更有效的减轻腰椎间盘突出症患者的疼痛及改善功能障碍。     

基于肌筋膜链理论手法治疗退变性腰椎失稳的疗效观察

目的:探讨基于肌筋膜链理论推拿手法治疗退变性腰椎失稳的临床疗效。方法:对2018年1月至2019年12月收治的57例退变性腰椎失稳患者进行回顾性分析,均采用推拿手法治疗。其中基于肌筋膜链理论手法治疗组(肌筋膜链组)29例,男14例,女15例;年龄40～69(51.76±5.07)岁;病程(3.4±1.6)年。基于中医经络理论手法治疗组(中医经络组)28例,男12例,女16例;年龄42～70(52.48±4.31)岁;病程(3.3±1.7)年。分别于治疗前和治疗结束后、治疗结束后1和3个月采用视觉模拟疼痛评分(visual analogue scale,VAS)评价腰痛程度,并采用日本骨科协会(Japanese Orthopaedic Association,JOA)下腰痛评分及改良的Oswe stry功能障碍指数(Oswestry Disability Index,ODI)评价腰椎功能改善情况,腰部肌肉肌张力变化评价临床疗效。结果:两组治疗后VAS评分、JOA评分、改良ODI评分及腰部肌肉肌张力均较治疗前明显改善(P0.05)。肌筋膜链组治疗前及治疗结束后的VAS评分、JOA评分、改良ODI评分及腰部肌肉肌张力与中医经络组比较差异无统计学意义(P0.05)。但肌筋膜链组治疗结束后1和3个月VAS评分、JOA评分、改良ODI评分及腰部肌肉肌张力较中医经络组改善更为明显(P0.05)。结论:基于肌筋膜链理论手法治疗退变性腰椎失稳可有效缓解腰痛症状,改善腰椎功能,值得临床推广。     

腰椎椎间隙高度与上位椎体高度的比值与椎间盘退行性变Pfirrmann分级的相关性

目的 探讨腰椎椎间隙高度与上位椎体高度的比值与椎间盘退行性变程度之间的关系,为腰椎椎间盘退行性疾病的诊断和治疗提供客观准确的依据。方法 回顾性分析2019年1月—2019年6月来本院就诊的61例腰椎椎间盘退行性变患者临床资料。在腰椎侧位X线片上测量腰椎椎间隙及相应上位椎体的高度,并计算椎间隙高度与上位椎体高度的比值;在腰椎矢状位MRI上评估腰椎椎间盘退行性变Pfirrmann分级;比较不同Pfirrmann分级椎间盘的椎间隙高度与上位椎体高度比值的差异,并采用Spearman相关分析研究椎间隙高度与上位椎体高度比值与相应节段椎间盘Pfirrmann分级之间的相关性。结果 除L₁/L₂节段,其余各节段椎间隙高度与上位椎体高度比值均随着Pfirrmann分级增加而逐渐减小,差异均有统计学意义（P < 0.05）。相同Pfirrmann分级的不同节段椎间盘之间椎间隙高度与上位椎体高度比值差异无统计学意义（P > 0.05）。Spearman相关分析结果显示,L₂/L₃、L₃/L₄、L₄/L₅、L₅/S₁节段Pfirrmann分级与椎间隙高度与上位椎体高度比值呈负相关（r =-0.568,P < 0.05）。结论 临床上测量L₂/L₃、L₃/L₄、L₄/L₅、L₅/S₁节段椎间隙高度与上位椎体高度比值对腰椎椎间盘退行性疾病的诊断可能具有重要意义。     

腰椎间盘内破裂的诊断和治疗

目的　研究腰椎间盘内破裂的诊断和治疗方法。　方法　 36例慢性失能性下腰痛病人 ,经腰椎间盘造影术证实为腰椎间盘内破裂 ,选择腰椎体间融合术 ,其中 8例行后路椎体间植骨融合椎弓根螺钉系统内固定术 (PLIF) ,2 8例行前路髓核摘除植骨融合术 (ALIF)。分别于术前、术后对病人的腰痛情况进行视觉疼痛自我评定尺 (VAS)评分 ,同时评估术后腰椎融合率。　结果　术后随访时间 6～ 2 6个月 ,平均 18个月。 8例行PLIF者 ,6例术后腰腿痛症状基本消失 ,2例仍有轻度腰痛 ,术前、术后VAS腰痛评分 ,差异有非常显著性意义 (P <0 0 1)。 2 8例行ALIF者 ,2 7例腰腿痛症状基本消失 ,术前、术后VAS腰痛评分 ,有非常显著性差异 (P <0 0 1)。行PLIF患者 ,融合率为 88% ,行ALIF者 ,融合率达 97%。　结论　腰椎椎体间融合术是治疗腰椎间盘内破裂的有效方法 ,但应严掌握手术适应证     

移植骨髓间充质干细胞对兔退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对兔退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响.方法 以各兔L2/3、L3/4、L4/5、L5/6节段分为正常组、退变组、成纤维细胞(SFs)移植对照组、MSCs移植治疗组.MSCs和SFs分别经绿色荧光蛋白(GFP)转染后,注射植入退变椎间盘的髓核.通过透射电镜观察退变椎间盘凋亡髓核细胞形态;用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测退变组织中髓核细胞凋亡相关基因bcl-2和box mRNA的表达;免疫荧光法标记髓核细胞凋亡相关蛋白Caspase-3,并通过TUNEL法标记凋亡髓核细胞,激光共聚焦显微镜检测髓核细胞凋亡蛋白表达率和细胞凋亡比率.结果 透射电镜下,退变椎间盘中凋亡髓核细胞呈现出核染色质边集,空泡形成,核膜断裂,凋亡小体形成等变化.MSCs移植治疗组bcl-2 mRNA的表达量高于退变组和SFs移植对照组(P<0.05),bax mRNA的表达量与退变组差异无统计学意义(P>0.05).MSCs移植治疗组细胞凋亡率和Caspase-3表达率均高于正常组[细胞凋亡率分别为(16.75±2.14)%和(6.86±1.08)%;Caspase-3表达率分别为[(20.34±1.03)%和(6.09±0.77)%](P<0.05),低于退变组和SFs移植对照组[细胞凋亡率分别为(31.87±4.16)%和(29.02±2.16)%;Caspase-3表达率分别为(31.50±3.78)%和(30.20±4.93)%](P<0.05).结论 髓核细胞凋亡在椎间盘退变过程中起重要作用.MSCs移植能有效抑制椎间盘髓核细胞凋亡,延缓椎间盘退变过程.     

转录组分析鉴定腰椎椎间盘退行性变中潜在免疫相关生物标志物

目的 通过转录组分析鉴定腰椎椎间盘退行性变（IDD）中潜在的免疫相关生物标志物,寻找IDD免疫相关的关键靶点。方法 从基因表达汇编数据库（GEO）的GSE67567数据集中获得基因表达谱,并筛选差异表达mRNA、长链非编码RNA（lncRNA）和微RNA（miRNA）。使用加权基因共表达网络分析（WGCNA）和基因集富集分析（GSEA）筛选免疫相关模块,并使用Cytoscape构建lncRNA-miRNA-mRNA竞争性内源RNA（ceRNA）网络,通过免疫浸润分析确定相关的免疫细胞,使用Pearson相关分析筛选免疫相关的关键靶点。通过GSEA筛选关键的生物过程和途径。使用GEO的GSE124272数据集验证关键靶基因的表达。结果 WGCNA结果表明,蓝绿色模块与免疫力有关。免疫浸润分析显示,CD4幼稚T细胞可能是关键的免疫细胞。Pearson相关分析表明,4个mRNA（UHMK1、ZFP36L2、ZCCHC3、ZBTB20）和1个lncRNA（LINC00641）可能是IDD免疫相关的关键靶点,建立了一个免疫调节相关的ceRNA网络。GSEA结果显示,LINC00641可能通过TGF-β信号通路调节IDD。验证结果表明,这些关键基因在GSE124272数据集中存在差异表达。结论 mRNA（UHMK1、ZFP36L2、ZCCHC3、ZBTB20）和lncRNA（LINC00641）是IDD免疫相关的关键靶点。