KH902抑制大鼠角膜新生血管的实验研究

目的 观察抑制病理性新生血管生长的基因工程药物KH902结膜下注射对碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的抑制效果。 方法 采用碱烧伤制作大鼠角膜新生血管模型,随机分为4组:KH902实验组,30 mg/mL KH902结膜下注射;阴性对照组,1 mg/mL地塞米松结膜下注射;阴性对照Ⅰ组用KH902溶剂结膜下注射,阴性对照Ⅱ组用生理盐水结膜下注射。造模后第28 d对4组角膜新生血管最长长度、新生血管面积及血管内皮细胞生长因子(VEGF)免疫组化染色的平均光密度值进行比较。 结果 在造模后第28 d,KH902实验组角膜新生血管生长面积小于地塞米松阳性对照组,以及阴性对照Ⅰ组、Ⅱ组(P<0.05或P<0.01),VEGF的表达亦明显降低(P<0.01)。 结论 30 mg/mL KH902结膜下注射能抑制碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管生长和形成。     

薏苡仁提取液抑制大鼠角膜新生血管的实验研究

目的：研究薏苡仁提取液对大鼠角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用,并比较滴眼和结膜下注射两种给药途径的效果。方法：选取80只Wistar大鼠,随机抽取5只用于空白对照,余下75只取左眼制作碱烧伤模型,随机分为3组,对照组（A组）,薏苡仁提取液滴眼组（B组）和薏苡仁提取液球结膜下注射组（C组）,显微镜下观察各组角膜新生血管（CNV）生长情况并计算CNV面积;免疫组织化学方法检测各组CNV内皮细胞生长因子（VEGF）在不同时间点的表达情况。结果：薏苡仁提取液能明显抑制CNV生长,C组比B组抑制作用更明显（P〈0.05）。结论：薏苡仁提取液能有效抑制大鼠角膜碱烧伤后CNV的形成,其机制与降低CNV的VEGF表达有关。     

重组内皮抑素对碱烧伤诱导角膜新生血管抑制作用

目的 探讨重组内皮抑素对碱烧伤诱导兔角膜新生血管(CNV)的抑制作用.方法 新西兰大白兔20 只,随机分为两组,每组10只.采用碱烧伤法制备兔CNV 模型后,实验组球结膜下注射重组人内皮抑素0.05 mL,对照组球结膜下注射生理盐水0.05 mL,均隔日1 次,共注射19 d.每日裂隙灯显微镜下观察并测量自角膜缘长出的CNV长度和数量,并摄影,输入计算机经图像分析系统计算CNV面积.术后19 d处死动物,取角膜, CD34染色,显微镜下检测微血管密度(MVD).结果 实验组第7、14、19天CNV面积及MVD明显少于对照组,差异有显著性(t=4.191～8.003,P<0.01).结论 重组内皮抑素可有效抑制CNV生长,为临床防治CNV 提供了一种新的方法.     

角膜缝线与碱烧伤诱导兔角膜新生血管的实验观察

目的利用角膜缝线、碱烧伤两种常用方法来诱导兔角膜新生血管（CNV）产生。观察CNV产生早期的过程中,其生长情况及血管内皮生长因子（VEGF）在兔角膜中的表达情况。方法将新西兰白兔75只随机分为3组,A组-正常对照组5只;B组-角膜缝线组35只;C组-碱烧伤组35只。每日裂隙灯显微镜观察角膜炎性反应情况与混浊程度,检测第3天、7天、14天角膜新生血管长度和数量并摄影记录;B、C两组分别于实验后第1、2、3、5、7、10、14天观察、取材。免疫组织化学（IHC）检测VEGF在兔角膜中的表达情况。结果伤后3 d,新生血管开始侵入角膜;7 d,新生血管生长活跃;10 d,新生血管达到生长高峰;14 d后B组与C组新生血管均出现回退迹象。角膜缝线组CNV面积明显小于碱烧伤组（P〈0.01）,10 d后VEGF在碱烧伤组的表达明显高于缝线组（P〈0.01）。结论碱烧伤组相对于缝线组可以诱导产生更多的新生血管（CNV面积）,且CNV退化的时间晚,这些可能与VEGF的表达有关;但角膜缝线更容易控制CNV产生的范围。     

重组人血管内皮抑制素抑制角膜新生血管的实验研究

探讨重组人血管内皮抑制素(恩度)对于缝线诱导兔角膜新生血管的抑制作用。方法新西兰大白兔24只,按随机数字表法分为3组(A组、B组、C组、每组8只),采用缝线诱导法制备兔角膜新生血管。A组采用球结膜下注射生理盐水0.1mL,隔日1次;B组采用球结膜下注射恩度0.1mL,隔日1次;C组采用球结膜下注射地塞米松0.1mL(0.5mg),隔日1次。每日裂隙灯下观察并测量角膜长出的角膜新生血管的长度,计算出新生血管的面积,共3周时间。结果 B组和C组各时间点新生血管的长度和面积均小于A组,差异有统计学意义(P<0.001)。B组在第13天和第18天新生血管的长度和面积均小于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论动物实验表明恩度可以有效地抑制角膜新生血管的生长。     

Bevacizumab(Avastin)抑制兔眼角膜新生血管的实验研究

目的:观察Bevacizumab(Avastin) 球结膜下注射对兔眼角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)模型的治疗作用。方法:新西兰大白兔48只,随机分为正常对照组(A组,3只)、模型组(B组,9只)和Bevacizumab(Avastin)治疗组(C组,36只),C组又再次分为4组:1 d小剂量治疗组(C1组,9只),1 d大剂量治疗组(C2组,9只),14 d小剂量治疗组(C3组,9只),14 d大剂量治疗组(C4组,9只)。B组和C组采用角膜缝线法制备CNV模型,C组分别在相应时间点眼球结膜下注射Bevacizumab(25 mg/ml),小剂量组0.1 ml,大剂量组0.2 ml。术后每天观察兔眼角膜CNV生长情况并计算其面积,且于建模后7、14、28 d分别拍照记录,免疫组化方法检测各组角膜组织中VEGF的表达情况,ELISA法检测房水内VEGF含量。结果:CNV生长情况:7、14、28 d C1和C2组均较Ｂ组明显减轻(P<0.01),28 d时C3、C4组较B组明显减轻(P<0.01);28 d时C1组较C3组明显减轻(P<0.01),C2组较C4组明显减轻(P<0.01)。角膜组织中VEGF表达和房水中VEGF含量:B组随时间推移逐渐增高,且与CNV面积大小呈正相关(P<0.01);7、14、28 d 时,C1、C2组均低于B组(P<0.01);28 d时C3、C4组均低于B组(P<0.01);28 d时C1组低于C3组(P<0.01),C2组低于C4组(P<0.01)。C1和C2组之间以及C3和C4组之间在CNV面积、角膜和房水中VEGF水平方面均无显著差异。结论:球结膜下注射Bevacizumab可抑制CNV生长,且早期用药比晚期用药疗效更加显著,Bevacizumab的作用可能与其下调角膜组织VEGF的表达及房水中的VEGF含量有关。     

重组人内皮抑素两种给药途径抑制角膜新生血管的实验研究

目的:研究重组人内皮抑素(recombinant human endostatin,rHES,恩度)两种给药途径对碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管的抑制作用. 方法:48只Wistar大鼠随机分为4组:A组(12只眼),对照组,不做处理;B组(12只眼),角膜碱烧伤后球结膜下注射生理盐水0.05ml,隔日1次;C、D组(各12只眼),右眼角膜碱烧伤后分别应用100mg/ml重组人内皮抑素点眼,4次/日和球结膜下注射0.05ml,隔日1次治疗.观察各组角膜新生血管的生长情况,免疫组化检测VEGF蛋白的表达.结果:C组、D组在碱烧伤后各时间点新生血管面积均小于B组,C组、D组与B组新生血管面积的差异有统计学意义(P<0.05);D组较C组对新生血管的抑制作用略强,差异无统计学意义(P>0.05).碱烧伤后第16天免疫组织化学检查显示除C组与D组间,其余各两两比较VEGF蛋白量差异有统计学意义,C组与D组VEGF蛋白量差异无统计学意义(P>0.05).结论:点眼和球结膜下注射重组人内皮抑素(恩度)即均可有效抑制CNV.     

贝伐单抗抑制兔角膜碱烧伤新生血管的实验研究

目的通过点眼和结膜下注射贝伐单抗两种不同的给药途径,抑制兔角膜碱烧伤后的新生血管,探讨该药的这两种给药方式的疗效。方法普通白色家兔50只,取2只为正常对照组,其余48只右眼碱烧伤后随机分为三组,每组16只：A组为碱烧伤对照组,B组为点眼组,用贝伐单抗（5mg/ml）点眼,3次/d,C组为结膜下注射组,用贝伐单抗（2.5mg/0.1ml）结膜下注射。在不同的时间点（第1、4、7、14d）测量角膜新生血管的生长情况及免疫组化检测角膜血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白的表达。结果 B、C组的CNV相对于A组得到明显抑制,CNV的长度和面积及VEGF蛋白的表达差异有统计学意义,而B组和C组之间没有明显差异。结论两种用药方法对于抑制角膜新生血管没有明显差异。     

内皮素1和血管内皮生长因子在大鼠角膜新生血管中的表达

目的探讨大鼠角膜新生血管中内皮素1（endothelin-1，ET-1）和血管内皮生长因子（vascularendothelial growth factor，VEGF）的表达和意义。方法采用角膜缝线建立角膜新生血管模型。裂隙显微镜观察角膜新生血管的生长情况；用免疫组织化学技术检测ET-1及VEGF在角膜新生血管模型不同阶段的表达和变化。结果实验鼠于缝线后3d开始形成新生血管并见炎性细胞浸润，12d角膜新生血管面积达高峰。12d后新生血管和炎性细胞均明显减少。免疫组化显示ET-1和VEGF于缝线后1d表达开始升高，9d达高峰，以后逐渐下降，两种因子的表达与CNV的面积具有正相关性（ET-1与CNV的r值为0．807，VEGF与CNV的r值为0．779，P〈0．05）。结论大鼠角膜ET-1和VEGF的表达与新生血管的形成有相关性，并在其中发挥重要的作用。     

整合素α9β1对大鼠角膜缝线术后新生血管形成及血管内皮生长因子A表达的影响

目的研究整合素α9β1对大鼠角膜缝线术后新生血管（CNV）形成及血管内皮生长因子A（VEGF-A）表达的影响并探讨其
意义。方法39只SD大鼠,随机分为正常组（3只）,对照组、α9β1组、α9β1抑制组各12只。角膜行缝线术后,对照组予以左氧氟
沙星点双眼;α9β1组予以左氧氟沙星+α9β1点双眼;α9β1抑制组予以左氧氟沙星+α9β1单抗Y9A2点双眼。术后每天在裂隙灯
下观察CNV生长情况,并于3、5、7、14d分别随机取3个实验组中各3只大鼠,在裂隙灯显微镜下行角膜照相,计算CNV面积;
RT-PCR、Western blotting法检测不同时间点角膜中VEGF-A的表达。结果3组大鼠缝线后均有CNV形成,在第7天CNV面积
达最大,对照组CNV面积为3.21±0.19;和对照组比较,α9β1组CNV明显增多为4.57±0.31（P<0.05）;而α9β1抑制组CNV明显降
低,面积为2.03±0.26（P<0.05）;第14天时CNV出现部分消退。RT-PCR和Western blotting检测结果示：正常角膜仅有少量
VEGF-A表达,角膜缝线术后,VEGF-A表达明显增加。在术后第7天CNV生长达峰值;与对照组比较,α9β1组VEGF-A表达明
显增高（P<0.05）,而α9β1抑制组VEGF-A表达显著降低（P<0.05）。结论在角膜缝线术后,整合素α9β1可通过上调VEGF-A的
表达促进CNV生成;给予整合素α9β1抑制剂可下调VEGF-A的表达和显著减少CNV生成。
     

VEGF、MVD与角膜新生血管形成关系的实验研究

目的 探讨血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor , VEGF )在大鼠角膜碱烧伤后新生血管形成中的作用.方法 利用氢氧化钠烧灼大鼠角膜表面,建立大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization, CNV)模型,每日裂隙灯下观察角膜新生血管的发展,并分别于烧伤后1、4、7、14、21d处死大鼠,摘除角膜做病理切片,行微血管密度(Microvessel density,MVD)测定;免疫组化法检测VEGF的表达;图像分析系统测定该因子的蛋白表达.结果 免疫组化显示:VEGF在CNV中的阳性表达逐渐增加,于7 d表达最明显, 21 d后几乎无表达;MVD测定结果以CNV 7～14 d组血管密度最高;图像分析系统结果与免疫组化染色结果一致.结论 碱烧伤后CNV形成中,VEGF的表达增加,CNV中MVD与VEGF的表达呈正相关.     

姜黄素壳聚糖脂质体治疗兔角膜碱烧伤

目的：研究姜黄素壳聚糖脂质体对兔角膜碱烧伤的治疗作用。方法采用薄膜分散法制备姜黄素壳聚糖脂质体,测定粒径、Zeta电位和包封率。新西兰大耳白兔随机分为生理盐水组、空白壳聚糖包衣脂质体组、地塞米松组和姜黄素壳聚糖脂质体组。建立碱烧伤模型并给予相应药物。裂隙灯观察角膜新生血管（CNV）生长情况及角膜上皮愈合情况,免疫组化法检测角膜血管内皮生长因子（VEGF）表达。结果姜黄素壳聚糖脂质体粒径为（96.6±14.7）nm,Zeta电位为（58.8±2.3）mV,包封率为（51.41±1.1）%。姜黄素壳聚糖脂质体组和地塞米松组均能有效抑制CNV生长,降低角膜VEGF表达。与地塞米松组比,姜黄素壳聚糖脂质体组能促进角膜上皮恢复。结论姜黄素壳聚糖脂质体包封率较高,抑制CNV生长,促进角膜上皮修复。姜黄素壳聚糖脂质体有望成为新型治疗角膜碱烧伤的眼用制剂。     

环氧化酶-2和VEGF在角膜新生血管中的表达和相关性研究

目的观察环氧化酶-2（COX～2）和血管内皮生长因子（VEGF）在碱烧伤诱导的兔角膜新生血管（CNV）中的表达，分析其相关性，探讨CNN形成的有关机制。方法采用碱烧伤建立兔CNV模型，伤后每日裂隙灯显微镜观察CNV生长情况并计算其面积，并于第3、7、10、14天各时段，免疫组化S—P法检测COX-2和VEGF蛋自在角膜组织中的表达，分析其相关性。结果CNV生长面积在伤后第3、7、10、14天逐渐增大，COX-2和VEGF的表达逐渐增加，主要分布于炎症细胞胞质及新生血管内皮细胞，相关性分析显示二者呈显著正相关（r=0．995，P〈0．05）。结论COX-2和VEGF参与炎症相关CNV形成，其机制可能与COX-2上调VEGF表达有关。     

内皮抑素的低分子肝素修饰及对兔角膜新生血管的抑制作用

目的探讨利用低分子肝素对内皮抑素进行结构修饰,并评价其对角膜新生血管(corneal neovas-cularization,CNV)的抑制作用。方法采用化学方法用低分子肝素修饰内皮抑素,碱烧伤法建立兔角膜新生血管模型,分别在球结膜下注射低分子肝素化内皮抑素(Ⅰ组)、内皮抑素(Ⅱ组)和生理盐水(对照组),观察新生血管的生长情况。结果成功的利用低分子肝素对内皮抑素进行了结构修饰,动物实验表明Ⅰ组新生血管的长度、面积、数量、VEGF的表达均明显低于其它两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低分子肝素化内皮抑素可有效抑制角膜新生血管的生长,效果优于内皮抑素。     

MMP-2、TIMP-2与碱烧伤后角膜新生血管形成的实验研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-2组织型抑制剂(TIMP-2)在碱烧伤大鼠角膜新生血管(CNV)形成中的表达和意义。方法:采用碱烧伤大鼠角膜建立CNV模型,摘除角膜作病理切片,多形核白细胞(PMN)记数;免疫组化法检测MMP-2、TIMP-2的表达。结果:烧伤后1d角膜缘PMN开始增多,到CNV7d组PMN增加最明显,此后逐渐减少;免疫组化显示:MMP-2在CNV中阳性表达逐渐增加,于7d表达最明显,此后随炎性细胞的减少而减弱,21d后几乎无表达;TIMP-2则于早期变化不明显,7d表达开始升高,14d达高峰。结论:烧伤后CNV形成早期,MMP-2活性增高,继而TIMP-2表达增加,使MMP-2活性受抑,基底膜降解受阻,新生血管延伸停滞;CNV形成中,MMP-2的表达增加,并与角膜的炎性反应程度一致,PMN浸润可能是CNV形成的关键因素。     

抑制kB活性对碱烧伤大鼠角膜新生血管内皮生长因子表达的影响

目的观察碱烧伤后大鼠角膜组织核转录因子-kB(NF-kB)和血管内皮生长因子(VEGF)的变化,以及抑制NF-kB活性对碱烧伤大鼠角膜组织新生血管VEGF表达的影响。方法建立大鼠角膜碱烧伤诱发CNV模型,采用裂隙灯、免疫组化等方法,分别检测使用NF-kB活性抑制剂前后VEGF在SD大鼠CNV中的表达情况。结果在正常角膜,VEGF没有表达或在上皮基底膜有微弱表达;在新生血管对照组,角膜全层VEGF表达明显增强;用药组VEGF表达减少。经SPSS软件分析,三组间具有统计学差异。结论抑制NF-kB的表达可降低VEGF的表达。