雷帕霉素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞表达和释放HMGB1的机制

目的：探讨雷帕霉素抑制LPS诱导小鼠RAW264.7细胞表达和释放HMGB1的作用机制。方法:传代培养的小鼠RAW264.7细胞分5组接种于6孔板，即仅加培养液的对照组；加250 μg/L LPS的诱导组； 诱导组基础上加100 μg/L雷帕霉素的干预组；干预组基础上加rTNF-α 50 μg/L的抗干预组；及抗干预组基础上加抗鼠TNF-α 100 μg/L的抗体中和组。培养4 h后，ELISA法检测对照组、诱导组和干预组上清液中TNF-α水平；培养24 h后，RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞内HMGB1 mRNA表达水平和上清液中HMGB1含量。结果:培养4 h，干预组上清液中TNF-α水平与对照组比无显著差异（P>0.05），但明显低于诱导组（P<0.05）；培养24 h, 与对照组比，诱导组细胞内HMGB1 mRNA表达明显增强（P<0.05），上清液中HMGB1含量也明显增多（P<0.05）；干预组明显减少了HMGB1 mRNA表达及上清液中HMGB1含量（P<0.05）； 与干预组比，抗干预组细胞HMGB1 mRNA表达及上清液中HMGB1含量明显增加（P<0.05）；抗体中和组细胞HMGB1 mRNA表达水平及上清液中HMGB1含量和干预组无显著差异（P>0.05）。 结论:雷帕霉素抑制LPS诱导RAW264.7细胞表达和释放HMGB1，可能部分地与其抑制TNF-α的表达有关。     

苦参碱抑制LPS诱导巨噬细胞IL-1β、TNF-α分泌及机制研究

目的:探讨苦参碱抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞分泌炎症因子包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)对Toll样受体4(TLR4)、c-Jun表达的影响。方法:购买并培养小鼠RAW264.7巨噬细胞株,分成四组,即空白对照组、苦参碱组、LPS组、苦参碱干预组,通过浓度为100μg/L的LPS DMEM孵育1 h,之后将LPS弃去,然后加入不含血清的DMEM或125.25 mg/L苦参碱DMEM继续培养。分别收集上述四组细胞处理完毕后5、30、60、120min的细胞及培养液。通过PCR法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞TLR4及c-Jun mRNA的表达,通过免疫细胞化学法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞c-Jun蛋白的表达;通过ELISA法测定各组培养液中TNF-α、IL-1β的分泌。结果:苦参碱诱导组与空白对照组相比,TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量和TNF-α及IL-1β分泌量各项指标差异无统计学意义(P0.05);LPS组各个时间点TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量和TNF-α及IL-1β分泌量明显高于空白对照组,且高水平能够维持2 h以上(P0.05);苦参碱干预组能够有效的抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4 mRNA、c-Jun mRNA及c-Jun蛋白的表达量,降低炎症因子TNF-α、IL-1β的分泌量。结论:苦参碱可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞丝裂原活化的蛋白激酶信号通路上TLR4、c-Jun的过表达从而有效的降低终末炎症因子TNF-α及IL-1β的释放,进而有效的抑制炎症反应,减轻内毒素炎症反应的程度。     

丙酮酸乙酯抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞HMGB1的表达

目的:探讨丙酮酸乙酯(EP)抑制脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞高迁移族率蛋白B1 (HMGB1)的表达及分子机制.方法:培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,分为LPS( 100 ng/mL)组及LPS( 100 ng/mL)+EP(5 mmol/L)组,刺激后0、6、12、18、24、30、36 h提取总RNA及胞质胞核蛋白,用RT-PCR法测细胞培养液中HMGB1 mRNA 表达;用Western blot测胞质和胞核HMGB1蛋白含量;用ELISA法测培养上清中HMGB1、TNF-α和IL-6的含量;用免疫细胞化学共聚焦显微镜观察细胞内HMGB1的转位分布.结果:LPS+EP组HMGB1 mRNA基因表达于24、36、48 h比LPS组明显减少;Western blot结果示,LPS+ EP组HMGB1蛋白含量胞质明显低于LPS组,而胞核明显高于LPS组;ELISA结果示,LPS+EP组细胞培养上清中HMGB1、TNF-α和IL-6的含量明显低于LPS组;免疫荧光、激光共聚焦显微镜结果示,LPS+ EP组细胞质内绿色荧光染色明显弱于LPS组,细胞核内绿色荧光染色明显强于LPS组.结论:EP能有效抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1的表达和释放.     

TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用

目的 研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路发挥的作用,以及沉默TLR4基因后,对TLR2信号通路的影响.方法 利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,将细胞随即分为正常组(N组)、正常+烟曲霉孢子刺激组(N+Af组)、正常+TLR4-siRNA组[TLR4(RNAi)组]、正常+TLR4-siRNA+烟曲霉孢子刺激组[ TLR4(RNAi) +Af组],RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白的表达变化.结果 (1)TLR4基因沉默前:与N组比较,N+Af组TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达量均显著升高(P＜0.05).(2)TLR4-siRNA( 100nmoL/L)转染RAW264.7细胞,沉默效率达83％.(3)TLR4基因沉默后:与N组比较,TLR4( RNAi)组TLR2、MyD88 mRNA的表达量均显著降低(P＜0.05);与N+Af组比较,TLR4( RNAi)+Af组的TLR2、MyD88 mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低(P＜0.05);与TLR4( RNAi)组比较,TLR4(RNAi)+ Af组MyD88 mRNA表达量显著升高(P＜0.05),而TLR2 mRNA及TNF-α蛋白表达量却无显著变化(P＞0.05).结论 RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用;当沉默TLR4基因后,TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用,可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用.     

TREM-1促进巨噬细胞的迁移并参与脂多糖诱导的小鼠心肌功能障碍

目的探讨髓系细胞触发受体-l(triggering receptor expressed oil myeloid cells-1,TREM-1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌功能障碍的作用以及对巨噬细胞RAW264.7迁移的影响。方法将健康C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+LP17组、LPS+TAK-242组并进行相应处理,6 h后超声心电图检测小鼠心功能指标,12 h取心肌组织HE染色观察病理改变,免疫组化染色观察巨噬细胞表面分子F4/80阳性表达,ELISA检测血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及IFN-γ的表达情况,实时荧光定量PCR检测TREM-1、BNP以及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的mRNA水平;培养巨噬细胞RAW264.7,将细胞随机分为正常组、LPS组、LP17+LPS组、TAK-242+LPS组并进行对应处理,实时荧光定量PCR检测TREM-1与TLR4的mRNA水平,ELISA检测细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及IFN-γ的表达情况,Transwell小室观测RAW264.7细胞迁移情况,蛋白免疫印迹检测RAW264.7中TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白水平。结果与对照组相比,超声心电图检测结果显示LPS组小鼠的EF与FS下降,LVD增大,IVS减小,LVPW变薄,变化均显著(P0.05),实时荧光定量PCR结果显示TREM-1 mRNA与BNP mRNA表达水平上升(P0.05),免疫组化染色法显示F4/80有大量阳性表达(P0.01),ELISA检测显示炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的含量增加(P0.05),实时荧光定量PCR检测也表明这些炎性因子mRNA水平升高(P0.05);与LPS组小鼠相比,注射TREM-1抑制剂LP17使EF、FS上升,有效抑制了LVD增大、IVS减小以及LVPW变薄的现象(P0.05),TREM-1 mRNA与BNP mRNA表达水平均降低(P0.05),心肌损伤减轻,F4/80阳性表达减少(P0.01),炎症因子水平也明显下降(P0.05),与注射TLR4抑制剂TAK-242的效果一致。与对照组相比,LPS诱导RAW264.7细胞后,细胞中TREM-1 mRNA与TLR4 mRNA水平升高(P0.05),炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的含量增加(P0.05),细胞大量迁移(P0.01),细胞中TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平升高(P0.05);与LPS组相比,TREM-1抑制剂LP17预处理后再给予LPS诱导,细胞中TREM-1 mRNA与TLR4 mRNA水平降低(P0.05),炎症因子的含量下降(P0.05),RAW264.7细胞迁移被抑制(P0.01),TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平也明显降低(P0.05)。结论给小鼠注射TREM-1抑制剂可有效减轻LPS诱导的心肌功能障碍,抑制RAW264.7细胞TREM-1表达可抑制细胞的迁移,TLR4/NF-κB途径可能参与了这一过程。     

N-乙酰半胱氨酸酰胺对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症的保护作用及机制研究北大核心CSCD

目的研究N-乙酰半胱氨酸酰胺(NACA)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症的保护作用及作用机制,为NACA治疗脓毒症提供理论依据。方法CCΚ-8法检测NACA和N-乙酰半胱氨酸(NAC)对RAW264.7细胞活力的影响;采用ELISA检测NACA和NAC对LPS诱导的RAW264.7细胞上清中TNF-α和IL-6水平;qRT-PCR检测NACA对LPS诱导的RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、ATF4、CHOP的mRNA表达的影响;Western blot检测NACA对LPS诱导的RAW264.7细胞中TLR4/NF-κB及PERΚ/ATF4/CHOP信号通路中关键蛋白表达的影响。结果0.1~5 mmol/L的NACA和NAC对RAW264.7细胞活力无明显的影响(P>0.05)。1 mmol/L和5 mmol/L的NACA和NAC可显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞上清中TNF-α和IL-6的水平(P<0.01),且NACA的降低效果优于统计量的NAC。1 mmol/L和5 mmol/L的NACA也可显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、ATF4、CHOP mRNA的表达(P<0.05、P<0.01)。Western blot结果表明,1 mmol/L和5 mmol/L的NACA可显著降低TLR4、p-IκB、p-65、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、Bip和CHOP蛋白的表达(P<0.05、P<0.01)。结论NACA可能通过TLR4/NF-κB及PERΚ/ATF4/CHOP信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,为NACA治疗脓毒症的抗炎性药物筛选提供了实验依据。     

土荆皮乙酸对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应及M1表型偏移的抑制作用

目的初步探讨土荆皮乙酸(PLAB)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞抗炎作用及影响M1表型偏移的分子机制。方法 LPS诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,给予0.5μmol/L PLAB和1μmol/L过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)阻滞剂GW9662处理。流式细胞术检测细胞周期变化,实时定量PCR检测PPARγ和M1型巨噬细胞标志物白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)信号通路相关信号分子水平。结果 PLAB能够明显降低LPS诱导RAW264.7细胞的IL-1β、TNF-α的mRNA水平,上调PPARγ的mRNA水平。下调NF-κB p65、p NF-κB p65、IKKα、IKKβ、p IKKα/β、IκBα、p IκBα的蛋白水平,使RAW264.7细胞阻滞在G0和G2期。GW9662可以抵抗PLAB的抗炎作用。结论 PLAB抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应并抑制巨噬细胞向M1表型偏移,与影响细胞周期分布、调控NF-κB/PPARγ通路有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导RAW264.7细胞Toll样受体4表达及髓过氧化物酶活性的机制研究

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对RAW264.7细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA、蛋白表达及髓过氧化物酶(MPO)活性的影响及其致炎致动脉粥样硬化(AS)机制.方法:体外培养RAW264.7细胞, 用不同浓度的AngⅡ(1、 10、 100、 1000 nmol/L)及100 μg/L脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞24 h后, RT-PCR法测RAW264.7细胞TLR4 mRNA水平, Western blot检测RAW264.7细胞TLR4蛋白表达, 比色法测细胞培养上清中MPO活性.同时, 预先加入不同剂量的TLR4阻断剂(1 mg/L、 5 mg/L)后, 再用AngⅡ(100 nmol/L)刺激RAW264.7细胞24 h, 检测细胞培养上清中MPO活性.结果:AngⅡ浓度依赖性地增加RAW264.7细胞TLR4 mRNA及蛋白表达(P<0.01), LPS也可诱导RAW264.7细胞TLR4 mRNA及蛋白表达(P<0.01); AngⅡ浓度依赖性地升高RAW264.7细胞MPO活性(P<0.01), LPS也可升高RAW264.7细胞MPO活性(P<0.01), 而TLR4阻断剂明显抑制AngⅡ这一效应(P<0.01).结论:AngⅡ上调RAW264.7细胞TLR4表达, 通过跨膜受体TLR4诱导MPO分泌, 加重炎症反应, 促进AS的形成和发展.     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制脂多糖诱导巨噬细胞趋化因子的表达

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)表达的影响。方法小鼠RAW264.7巨噬细胞用1 mg/L LPS进行刺激,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测MCP-1与MIP-2 mRNA水平、ELISA检测培养液中MCP-1与MIP-2的蛋白含量。结果 1 mg/L LPS可显著刺激RAW264.7细胞MCP-1和MIP-2 mRNA表达,单独EGCG对MCP-1和MIP-2基因表达无明显影响,但EGCG可以抑制LPS诱导的MCP-1和MIP-2的表达,并存在剂量依赖效应。结论 EGCG能以剂量依赖方式抑制LPS诱导的巨噬细胞MCP-1和MIP-2的表达。     

小檗碱促进巨噬细胞系RAW264.7由M1促炎表型向M2抗炎表型极化

目的探讨小檗碱(BBR)对巨噬细胞系RAW264.7极化分型的影响。方法将RAW264.7细胞分为对照组、高脂和炎性反应模型组(以100μg/L脂多糖和100μg/L聚合型低密度脂蛋白刺激)和小檗碱低、中、高浓度(5、10、20μmol/L)处理组。用ELISA和流式细胞计量术检测RAW264.7两种极化分型(M1型和M2型)相关标志物TNF-α、MCP-1、CD86、IL-4、IL-13、TGF-β1和CD206的表达,以观察细胞极化。用Western blot和RT-qPCR检测载脂蛋白E(apoE)、极低密度脂蛋白受体(VLDLR)或载脂蛋白E受体2(apoER2)的表达。结果 BBR引起M1型巨噬细胞相应标志物TNF-α、MCP-1和CD86表达减少(P0.05); M2型巨噬细胞相应标志物IL-4、TGF-β1和CD206表达增加。同时也能够促进RAW264.7细胞内apoE的蛋白表达和VLDLR的mRNA表达(P0.001)。结论 BBR可能促进apoE与VLDLR的结合,进而诱导RAW264.7从M1促炎表型向M2抗炎表型极化。     

Effects of propofol on lipopolysaccharide-induced expression and release of HMGB1 in macrophages

This study aimed to determine the effects of different concentrations of propofol (2,6-diisopropylphenol) on lipopolysaccharide (LPS)-induced expression and release of high-mobility group box 1 protein (HMGB1) in mouse macrophages. Mouse macrophage cell line RAW264.7 cells were randomly divided into 5 treatment groups. Expression levels of HMGB1 mRNA were detected using RT-PCR, and cell culture supernatant HMGB1 protein levels were detected using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Translocation of HMGB1 from the nucleus to the cytoplasm in macrophages was observed by Western blotting and activity of nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells (NF-κB) in the nucleus was detected using ELISA. HMGB1 mRNA expression levels increased significantly in the cell culture supernatant and in cells after 24 h of stimulating RAW264.7 cells with LPS (500 ng/mL). However, HMGB1 mRNA expression levels in the P2 and P3 groups, which received 500 ng/mL LPS with 25 or 50 μmol/mL propofol, respectively, were significantly lower than those in the group receiving LPS stimulation (P<0.05). After stimulation by LPS, HMGB1 protein levels were reduced significantly in the nucleus but were increased in the cytoplasm (P<0.05). Simultaneously, the activity of NF-κB was enhanced significantly (P<0.05). After propofol intervention, HMGB1 translocation from the nucleus to the cytoplasm and NF-κB activity were inhibited significantly (each P<0.05). Thus, propofol can inhibit the LPS-induced expression and release of HMGB1 by inhibiting HMGB1 translocation and NF-κB activity in RAW264.7 cells, suggesting propofol may be protective in patients with sepsis.     

核仁素对LPS诱导的白细胞介素1β释放的影响

目的: 探讨核仁素在脂多糖(LPS)所致炎症模型中的表达及其对LPS所致的白细胞介素1β(IL-1β)释放的影响。方法: 小鼠腹腔注射LPS(15 mg/kg)建立内毒素血症模型,LPS(500 μg/L)处理建立RAW264.7细胞炎症模型,采用免疫印迹观察核仁素在炎症模型中的表达。利用瞬时转染技术抑制或增加RAW264.7细胞内核仁素表达后,LPS处理,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养基中IL-1β的含量。结果: 在内毒素血症小鼠的肺组织和RAW264.7细胞炎症模型中,110 kD核仁素表达上调,80 kD核仁素片段表达减少。与转空载体对照组比较,核仁素过表达组LPS所致的IL-1β释放明显增加(P<0.05);与正常细胞组和随机寡核苷酸组比较,核仁素低表达组LPS所致的IL-1β释放明显减少(P<0.05)。结论: 在LPS所致的炎症模型中,110 kD核仁素表达上调, 80 kD核仁素片段表达减少;核仁素促进LPS所致的IL-1β释放。     

The effects of CpG DNA on HMGB1 release by murine macrophage cell lines

DNA containing cytosine-guanine dinucleotide (CpG) motifs (CpG DNA) has potent immunostimulatory activities that resemble those of lipopolysaccharide (LPS) in its effects on the innate immune system. Among its activities, LPS can induce the release of high mobility group protein (HMGB1) by macrophages, a dual function molecule that can mediate the late effects of LPS. To determine whether CpG DNA can also induce HMGB1 release, the effects of a synthetic CpG oligonucleotide (ODN) on HMGB1 release from RAW 264.7 and J774A.1 cells were assessed by Western blotting of culture supernatants. Under conditions in which the CpG ODN activated the cell lines, as assessed by stimulation of tumor necrosis factor alpha and interleukin-12, it failed to cause HMGB1 release into the media. Although unable to induce HMGB1 release by itself, the CpG ODN nevertheless potentiated the action of LPS. With RAW 264.7 cells, lipoteichoic acid and polyinosinic-polycytidylic acid, like LPS, stimulated HMGB1 release as well as cytokine production. These results indicate that the effects of CpG DNA on macrophages differ from other ligands of Toll-like receptors and may lead to a distinct pattern of immune cell activation in the context of infection or its use as an immunomodulatory agent.     

黄连乙醇提取物与盐酸小檗碱体外抗炎对比研究

目的:比较黄连乙醇提取物与盐酸小檗碱体外抗炎活性,探索体外抗炎机制。方法:通过脂多糖体外刺激小鼠单核巨噬细胞建立细胞炎症模型,给药干预后,LPS 长时间刺激RAW264.7 细胞,MTT 比色法分析黄连乙醇提取物及盐酸小檗碱对RAW264.7 细胞生长活性的影响。酶联免疫吸附法检测细胞上清液中IL-β、IL-6、TNF-α、NO、前列腺素E2 (PGE2)含量。实时荧光定量RT-PCR 法检测iNos、HO-1、TNF-αmRNA 表达。结果:在5 ~80 mg/ L 范围内,黄连乙醇提取物及盐酸小檗碱对RAW264.7 细胞无抑制作用;各浓度给药组IL-6、IL-1β、TNF-α、NO、前列腺素E2 (PGE2 )含量与LPS 刺激模型组比较均有显著性(P<0.01),且浓度与剂量无效应相关。实时荧光定量RT-PCR 结果显示,各浓度给药组均明显降低iNos、HO-1、TNF-αmRNA 表达(P<0.05,P<0.05,P<0.01),且与浓度不呈效应关系。结论:黄连乙醇提取物具有体外抗炎作用,抗炎活性优于盐酸小檗碱,其作用机制可能与抑制TNF-α、NO 等炎症因子的活化,进而影响花生四烯酸(AA)代谢有关。     

双氢青蒿素抑制核因子κB受体激动剂配体诱导RAW264.7细胞分化破骨细胞的研究

目的 探讨双氢青蒿素(DA)对核因子κB受体激动剂配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞的影响。方法 通过细胞计数试剂盒(CCK-8)确定不同浓度(1、5、10、50、100、200 μmol/L)DA对RAW264.7细胞的生存影响。分别用50 ng/mL RANKL及50 ng/mL RANKL+5、10、50、100 μmol/L DA诱导RAW264.7细胞形成破骨细胞,共3 d。对形成的破骨细胞用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数,TRAP染色阳性且细胞核数目＞3个认为是成熟的破骨细胞。50 ng/mL RANKL及50 ng/mL RANKL+10、100 μmol/L DA培养RAW264.7细胞24 h,用Trizol试剂提取总RNA,并使用荧光实时定量PCR检测破骨细胞分化相关基因NFATc1、c-fos及Cathepsin K的表达。结果 1、5、10、50、100 μmol/L DA对RAW264.7细胞毒性较小,细胞存活率均＞90%。TRAP染色显示,5、10、50、100 μmol/L DA可以减少RANKL诱导成熟破骨细胞的数目,并呈剂量依赖关系(F=139.156, P＜0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,10、100 μmol/L DA具有下调破骨细胞分化关键基因NFATc1和c-fos表达的作用,且100 μmol/L抑制作用比10 μmol/L明显,但两种浓度DA对Cathepsin K的表达无明显影响。结论 DA对RAW 264.7细胞毒性较低,通过下调RAW 264.7细胞NFATc1和c-fos基因表达抑制RANKL诱导破骨细胞形成。DA可以作为治疗骨质破坏性疾病的潜在药物。     

肾上腺素对小鼠巨噬细胞中促炎／抗炎介质比值的影响

目的：研究肾上腺素对脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7中促炎介质［肿瘤坏死因子（TNF-α）、一氧化氮（NO）、环加氧酶-2（COX-2）］和抗炎介质［血红素氧化酶-1（HO-1）、白介素10（IL-10）］表达及NF-κB活化的影响。 方法： 以10 μg/L的LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型，加入不同浓度的肾上腺素（1、5、10、50 μmol/L）孵育24 h后，收集培养上清并提取细胞总蛋白，酶联免疫法测定上清中TNF-α、IL-10浓度，Griess法检测上清NO含量(以NO2-/NO3-表示)，免疫印迹法检测细胞总蛋白中COX-2、HO-1、IκB-α的含量。 结果： 10 μg/L的LPS明显诱导TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2、IL-10及HO-1的产生；LPS+肾上腺素组与LPS单独作用组相比促炎介质TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2的表达量显著下降，而抗炎介质IL-10、HO-1的表达却明显增强；肾上腺素与LPS共同作用组中IκB-α的含量与单独LPS作用组相比无明显差异。 结论： 肾上腺素下调LPS诱导的巨噬细胞中促炎介质的表达同时促进抗炎介质的表达，这种效应并不通过影响NF-κB的活化来实现。     

罗哌卡因通过 HMGB1 / NF-κB 通路减轻 LPS 诱导的小鼠急性 肺损伤

目的 探讨罗哌卡因 ( ropivacaine, Rop) 对脂多糖 ( lipopolysaccharide, LPS) 诱导的小鼠急性 肺损伤 (acute lung injury, ALI) 的作用及其机制。 方法 气管内滴注 LPS 诱导肺损伤小鼠模型, 并将小鼠 随机分为 6 组: 对照组、 LPS 组、 罗哌卡因 0. 25、 0. 5、 1 μmol / L 组和右美托咪定 (dexmedetomidine, Dex) 100 μg / kg 组。 Hematoxylin-eosin (H&E) 染色评估肺组织的组织病理学变化; ELISA 法测定肺组织中髓过 氧化物酶 (myeloperoxidase, MPO)、 丙二醛 ( malondialdehyde, MDA)、 超氧化物歧化酶 ( superoxide dismutase, SOD) 和谷胱甘肽过氧化物酶 ( glutathione peroxidase, GSH-Px) 的活性; 检测血清中 IL-6、 IL-1β 和肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 的表达; Western 印迹检测 HMGB1 / NF-κB 通路相关蛋 白的表达。 结果 与对照组比较, LPS 诱导肺泡外膜增厚、 出血和肺水肿; 肺损伤评分和肺含水量增加; MPO 和 MDA 活性增加, SOD 和 GSH-Px 水平降低; IL-6、 IL-1β 和 TNF-α 水平升高; HMGB1 蛋白和 NF-κB P65 磷酸化水平升高, 有显著性差异 (P< 0. 05)。 与 LPS 组比较, 罗哌卡因 0. 5、 1 μmol / L 组小鼠肺损伤 程度明显减轻; MPO 和 MDA 活性降低, SOD 和 GSH-Px 水平升高; IL-6、 IL-1β 和 TNF-α 水平降低; HMGB1 蛋白和 NF-κB P65 磷酸化水平降低, 有显著性差异 (P< 0. 05)。 结论 罗哌卡因通过抑制 HMGB1 / NF-κB 通路, 有效减弱了 LPS 引起的肺组织损伤。     

GITRL在内毒素诱导的Kupffer细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子相关蛋白配体(GITRL)在脂多糖(LPS)诱导的Kupffer细胞(KCs)凋亡中的作用。方法:分离BALB/c小鼠的KCs,转染对照siR-NA或者GITRL siRNA 24 h后,分四组培养,分别为对照(Control)组:仅加入培养液;地塞米松(Dex)组:加入Dex10μmol/L;LPS组:加入LPS 1 mg/L;LPS+Dex组:加入LPS 1 mg/L和Dex 10μmol/L。24 h后用免疫细胞化学法检测GITRL蛋白的表达,应用Annexin V/PI双染标记和流式细胞术检测KCs的凋亡率。结果:LPS刺激增加了KCs GITRL的表达(P<0.05),然而地塞米松处理降低了LPS诱导的GITRL表达。LPS刺激诱导了KCs的凋亡,但是沉默GITRL基因或者地塞米松处理抑制了LPS诱导的凋亡(P<0.05)。结论:LPS可以诱导小鼠KCs的凋亡,其作用可能依赖于GITRL信号的转导。