局灶性缺血再灌注大鼠脑线粒体损伤的实验研究

采用大鼠大脑中动脉缺血（MCAO）再灌注模型，观察缺血再灌注不同时相（分为五组）脑线粒体损伤的变化规律。结果为脑缺血再灌注后线粒体基质游离钙含量（MCa）明显高于假手术组Na^＋、K^＋-ATP酶、Ca^2＋、Mg^＋-ATP酶活性明显下降，且随时间的延长下降明显；再灌注0．5h的MDA和SOD均元明显变化，再灌注1h后线粒体MDA含量明显升高，SOD活性明显下降。说明脑缺血再灌注线粒体损伤与线粒体钙超载及线粒体内膜氧化磷酸化有关。     

葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。40只SD雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、小剂量葛根素治疗组（小剂量组）、大剂量葛根素治疗组（大剂量组）。应用TTC染色观察梗死体积,应用免疫组化染色及TUNEL染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达及凋亡细胞数。结果大、小剂量组梗死体积和凋亡细胞数明显少于缺血组（P〈0.01）,Bcl-2明显多于缺血组（P〈0.01）,小剂量组Bax少于缺血组（P〈0.05）,大剂量组Bax明显少于缺血组（P〈0.01）。大剂量组梗死体积和凋亡细胞数少于小剂量组（P〈0.05）,Bcl-2多于小剂量组（P〈0.05）。大、小剂量组Bax无统计学意义（P〉0.05）。结论葛根素可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,疗效与剂量有关。     

脑缺血再灌注后早期神经细胞凋亡的实验研究

目的：观察缺血再灌注后早期皮层、尾壳核和海马细胞凋亡的变化。方法：采用线栓法制成大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型(n=21)，应用末端转移酶介导的dUTP-DIG缺口末端标记法(TUNEL)，标记凋亡细胞断裂的DNA。结果：脑缺血再灌注后12h，左侧大脑中动脉缺血区皮层和尾壳核出现大量凋亡细胞，于再灌注后24h～48h达高峰。结论：神经细胞凋亡可发生于缺血再灌注后的早期．     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Nogo-A表达和神经元凋亡

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注后轴突生长抑制因子Nogo-A表达和神经细胞凋亡。方法：36只成年健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组和缺血1h再灌注2h、6h、12h、1d,2d、3d、7d、14d组,每组4只。应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,分别用TUNEL法和免疫组织化学法观察神经细胞凋亡和Nogo-A表达。结果：假手术组海马、皮质和纹状体区可见少量凋亡神经细胞。再灌注2h凋亡细胞逐渐增多,3～7h达高峰,随后下降。Nogo-A表达于再灌注2h开始明显增加,并一直保持在较高水平。结论：脑缺血再灌注后Nogo-A表达增高,细胞凋亡也增加。     

丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后促凋亡蛋白表达的影响

目的探讨促凋亡(Smac)蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后不同时间点的表达变化及丁苯酞对其的影响。方法180只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、丁苯酞治疗组、丁苯酞预防组、丁苯酞预防加治疗组。各实验组又分为缺血再灌注后6h、12h、24h亚组。采用改良的线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,病理学HE染色观察形态学变化,免疫组化法检测脑组织中Smac蛋白的变化,TUNEL法原位检测凋亡细胞,Western免疫印迹检测Smac蛋白水平的表达。结果脑缺血再灌注损伤6h后胞浆中Smac蛋白的免疫阳性细胞增多,24h表达最多,并且胞浆和胞核都着色。缺血再灌注组中Smac蛋白呈强阳性表达,与假手术组、治疗组、预防加治疗组比较有统计学意义,其中治疗组与预防加治疗组中Smac蛋白阳性表达较弱,两组比较有统计学意义。结论丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤导致的神经细胞坏死和凋亡具有良好的保护作用,其可能是通过抑制Smac蛋白的释放起到保护神经元的作用。     

脑温对大鼠灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的　研究预高温和缺血时轻度高温、亚低温对脑缺血再灌注损伤组织脂质过氧化和缺血脑组织病变的影响。方法　 75只Wistar大鼠按不同脑温和缺血条件被随机分为生化组 (5组 ,n=7) 和病理组 (5组 ,n=8) ,采用Nagasawa脑缺血模型 ,观察脑缺血再灌注损伤组织超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)、还原型谷胱甘肽 (GSH)、丙二醛 (MDA)及缺血脑组织病理变化。结果　轻度高温加重常温脑缺血组织SOD、GSH的降低和MDA的增高 ,使GSH Px呈降低趋势 ,而亚低温相反 ;预高温对常温脑缺血各项指标影响不显著。轻度高温组脑缺血病理损伤最重 ,亚低温和预高温有改善脑缺血损伤的作用。结论　高温加重而亚低温抑制脑缺血损伤 ,分别与其增加或减少内源性抗氧化酶消耗、降低或增强缺血脑组织清除氧自由基的能力有关 ;预高温对缺血脑组织有保护作用 ,未能肯定此作用与内源性抗氧化酶消耗减少和缺血脑组织清除氧自由基的能力增强有关     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-9蛋白的表达

目的 研究Caspase-9蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中表达水平的动态变化.方法 建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用HE染色和免疫组织化学方法观察神经细胞死亡情况,再灌注6 h、12 h、24 h后缺血皮层Caspase-9蛋白表达.结果 与假手术组比较Caspase-9蛋白表达在各手术组明显升高,并随着缺血再灌注时间的延长Caspase-9表达逐渐升高,于再灌注24 h到达最高(P<0.01).结论 Caspase-9蛋白参与了脑缺血再灌注损伤过程.     

降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的　探讨降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法　健康雄性Wistar大鼠 15 6只 ,随机分为降纤酶组和生理盐水组 ,采用大脑中动脉线栓模型 ,腹腔注射降纤酶 8U kg ,应用氯化三苯四氮唑染色、SP免疫组织化学检测胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) ,观察缺血不同时间大鼠脑梗死体积比、神经元改变和星形胶质细胞数量、周长和积分光度值改变。结果　降纤酶治疗组大鼠脑梗死体积明显小于生理盐水组 ;反应性星形胶质细胞数量、周长、染色强度均明显高于生理盐水组 ;出血梗死明显少于生理盐水组。结论　降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用 ,反应性星形胶质细胞增生 ,血管内皮细胞损伤的减轻是其脑保护机制之一     

增龄对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响

目的 观察增龄对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤(CI/RI)的影响.方法 应用线栓的方法,对10、16周龄的雄性SD大鼠作局部脑缺血2 h、再灌24 h模型,观察增龄对大鼠神经症状缺失评分、脑损伤面积、病理形态、脑组织乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)及血清中LDH和肌酸激酶(CK)的影响.结果 CI/RI 24 h, 两个年龄组神经症状缺失评分及脑损伤面积明显增大,病理形态改变严重、脑组织LD及LDH明显下降,血清中LDH和CK明显升高,以16周龄更为严重.结论 CI/RI随年龄增长损伤程度增加,可能与脑的老龄化相关.     

纳洛酮对脑局灶性缺血-再灌注大鼠血红素加氧酶-1表达的影响

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后血红素加氧酶1(HO1)蛋白在缺血灶周围区的表达和纳洛酮干预后的影响。方法SD大鼠45只,随机分为三组:即假手术组、缺血再灌注组及纳洛酮组,每组15只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,在插入栓线及抽出线栓成功再灌注后,分别给予纳洛酮组大鼠腹腔注射纳洛酮3mg/kg(总量6mg/kg),假手术组及缺血再灌注组腹腔注射等量等渗盐水。以免疫组化法检测HO1的表达,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法观察脑细胞凋亡细胞数。结果每个高倍视野下,缺血再灌注组HO1阳性细胞数与假手术组相比明显增多,平均为(51.6±10.8)个对(9.8±2.8)个,P<0.05;纳洛酮组与缺血再灌注组比较,缺血灶周围区HO1阳性细胞数平均为(63.5±10.0)个对(51.6±10.8)个,P<0.05。纳洛酮组TUNEL阳性细胞数显著低于缺血再灌注组[(20.5±3.5)个对(29.8±4.0)个],但高于假手术组[平均为(4.2±2.0)个],组间比较,差异有显著性(P<0.05)。结论纳洛酮可减少MCAO局灶性脑缺血再灌注导致的神经细胞凋亡,其机制可能与纳洛酮增加HO1的表达有关。     

脂质胞壁酸诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡的作用

目的　探讨脂质胞壁酸 (LTA)诱导的延迟预适应对大鼠局灶性脑缺血 /再灌注损 (I/R)后神经细胞凋亡的作用。方法　采用改良Longa法制作大鼠右大脑中动脉 (MCA)闭塞 2h造成局灶性脑缺血模型 ,恢复血液灌流 1 2h。大鼠在脑缺血前 2 4h腹腔注射LTA(1mg/kg)诱导延迟预适应 ,检测脑组织再灌注 1 2h后大鼠神经症状、组织超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA)水平 ,以及组织中一氧化氮 (NO)的含量 ,同时用TUNEL染色法检测神经细胞的凋亡 ,用免疫组织化学的方法检测神经组织Bcl 2蛋白的表达。结果　LTA诱导的延迟预适应能明显改善脑I/R后的神经功能 ,减少神经缺欠评分值 (P <0 0 1 ) ,脑I/R后组织中MDA的含量明显减少 (P <0 0 1 ) ,SOD活性显著提高 (P <0 0 1 ) ,同时LTA预适应能明显降低I/R导致脑组织中NO含量的升高 (P <0 0 1 )。LTA预适应还显著减少神经细胞的凋亡百分率 (P <0 0 1 ) ,明显增加脑组织中Bcl 2蛋白的表达 (P <0 0 1 )。结论　LTA诱导的延迟预适应能显著减少大鼠脑组织再灌注损伤 ,减少组织坏死和细胞凋亡。其作用机制与减少脑I/R后自由基和NO毒性作用 ,增加Bcl 2蛋白的表达有关。     

纳洛酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用

目的：探讨纳洛酮对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：24只Wister大鼠随机分为3组,采用腔内线栓法制备动物模型,检测纳洛酮治疗组及对照组髓过氧化物酶（MPO）含量。结果：大鼠脑缺血再灌注后脑组织MPO含量明显增加（P〈0.05）,应用纳洛酮后缺血侧脑组织MPO含量显著下降（P〈0.05）。结论：纳洛酮可以减轻脑缺血再灌注损伤,纳洛酮具有神经保护作用。     

牛磺酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护

目的探讨牛磺酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 SD雄性大鼠44只,分为假手术组(4只),对照组(20只)牛磺酸组(20只)。应用Bederson评分方法对大鼠脑缺血6、24 h进行神经功能评分。激光多普勒血流仪测量脑血流变化。HE染色检测神经元核周体。结果牛磺酸组较对照组神经功能评分减小,神经功能改善;牛磺酸组缺血24 h后脑血流量增加,脑组织血流供应改善;假手术组脑组织未出现神经元坏死的特征,牛磺酸组神经元核周体损伤体积明显低于对照组(P<0.01)。结论牛磺酸对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

尼莫同对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响及意义

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后早期应用尼莫同对线粒体促凋亡蛋白Smac表达的影响,研究尼莫同对神经细胞的保护作用.方法 36只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、尼莫同治疗组.采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察尼莫同对大鼠脑缺血再灌注治疗后的神经功能症状评分,病理学HE染色观察组织形态学改变,免疫组化法检测脑组织中Smac蛋白的变化,TUNEL法原位检测凋亡细胞.结果 假手术组脑组织中Smac蛋白呈弱阳性表达,缺血再灌注组脑组织中Smac蛋白呈强阳性表达,尼莫同治疗组介于二者之间,三组两两比较有统计学意义(P<0.05);假手术组脑组织中可见个别凋亡细胞,而缺血再灌注组凋亡细胞数明显较多,尼莫同治疗组凋亡细胞数介于假手术组和缺血再灌注组之间,三组两两比较有统计学意义(P<0.05).结论 尼莫同可减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,可能通过下调线粒体内Smac蛋白的表达发挥保护神经细胞的作用.     

氯化锂对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的:研究大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌凋亡以及氯化锂的干预作用.方法:健康SD大鼠随机分4组:①正常对照组(A组,5只), ②心肌缺血再灌注组(B组,15只),③心肌缺血再灌注+0.9%氯化钠组(C组,15只), ④心肌缺血再灌注+氯化锂组(D组,15只),B,C,D组又分为1 h、3 h、6 h 3个亚组,每个亚组5只大鼠.流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,RT-PCR和Western Blot分别检测凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Caspase-3的表达.结果:与A组比较,B、C组3 h心肌细胞凋亡率增高、Bcl-2减少、Casepase-3增多,差异有统计学意义;D组心肌细胞凋亡率下降、Bcl-2和Casepase-3表达与A组差异无统计学意义.结论:心肌再灌注损伤引起心肌细胞凋亡增多, Bcl-2降低以及Caspase-3增高,氯化锂能够减轻以上变化.     

银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的　探讨银杏叶提取物 (GBE)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　制造大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。 40只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组、小剂量 GBE治疗组 (小剂量组 )、大剂量 GBE治疗组 (大剂量组 )。应用 TTC染色观察梗死体积 ,应用免疫组化染色及 TUNEL染色检测 Bcl- 2、Bax蛋白表达及凋亡细胞数。结果　大、小剂量组梗死体积和凋亡细胞数明显少于缺血组 (P<0 .0 1 ) ,Bcl-2明显多于缺血组 (P<0 .0 1 ) ,小剂量组 Bax少于缺血组 (P<0 .0 5) ,大剂量组 Bax明显少于缺血组 (P<0 .0 1 )。大剂量组梗死体积和凋亡细胞数少于小剂量组 (P<0 .0 5) ,Bcl- 2多于小剂量组 (P<0 .0 5)。大、小剂量组 Bax无显著性差异。结论　 GBE可通过上调 Bcl- 2蛋白表达 ,下调 Bax蛋白表达减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡 ,疗效与剂量有关。     

海风藤提取物对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的 观察海风藤提取物对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后大脑皮质缺血灶周围区caspase-3蛋白、凋亡诱导因子时相表达及神经细胞凋亡的影响.方法 应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,TTC染色观察梗死灶的分布,应用原位末端标记(TUNEL)和免疫组化技术分别观察模型组、海风藤提取物组和二甲基亚砜(DMSO)组大脑中动脉栓塞90 min再灌注6、24、72 h时缺血灶周围脑区caspase-3蛋白、凋亡诱导因子(AIF)和TUNEL阳性细胞的时相表达.结果 ①脑L/R后在缺血灶周围区均出现三者的表达,且表达有几乎一致的规律性.②缺血90 min再灌注24、72 h.海风藤组与其他两组比较,caspase-3、凋亡诱导因子阳性细胞和TUNEL染色阳性细胞的数量均明显减少(P＜0.01).结论 ①AIF、caspase-3参与了局灶性脑缺血后神经细胞的凋亡过程.②海风藤提取物可以减少AIF、caspase-3蛋白的表达,减轻迟发性神经元死亡.对缺血性脑组织有保护作用.     

地黄饮子对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

采用非开颅可逆性大脑中动脉栓塞法造成大鼠脑缺血再灌注损伤。地黄饮子10g／kg和20g／kg实验前连续灌胃给药7d。发现地黄饮子可显著减轻神经功能障碍及脑组织病理损伤,明显降低脑组织含水量。     

金香丹对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究金香丹对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型,采用细胞凋亡测试盒(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2和Caspsase-3表达的变化。结果模型组细胞凋亡指数、Bax、Bcl-2及Caspsase-3的蛋白表达显著高于假手术组,金香丹组细胞凋亡指数、Bax及Caspsase-3的蛋白表达均显著低于模型组,Bcl-2的蛋白表达显著高于模型组。结论金香丹可以抑制缺血再灌注心肌细胞的凋亡,其作用可能与上调Bcl-2蛋白的表达同时下调Bax、Casperse-3蛋白的表达有关。     

脑温对大脑灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的 研究预高温和缺血时轻度高温、亚低温对脑缺血再灌注损伤组织脂质过氧化和缺血脑组织病变的影响。方法 75只Wistar大鼠按不同脑温和缺血条件被随机分为生化组（5组，n=7)和病理组（5组，n=8),采用Nagasawa脑缺血模型，观察脑缺血再灌注损伤组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px)、还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）及缺血脑组织病理变化。结果 轻度高温加重常温脑缺血组织SOD、GSH的降低和MDA的增高，使GSH－Px呈降低趋势，而亚低温相反；预高温对常温脑缺血各项指标影响不显。轻度高温组脑缺血病理损伤最重，亚低温和预高温有改善脑缺血损伤的作用。结论 高温加重而亚低温抑制脑血损伤，分别与其增加或减少内源性抗氧化酶消耗、降低或增强缺血脑组织清除氧自由基的能力有关；预高温对缺血脑组织有保护作用，未能肯定此作用与内源性抗氧化酶消耗减少和缺血脑组织清除氧自由基的能力增强有关。