瘦素协同纤连蛋白对早孕绒毛细胞滋养细胞浸润特性的影响

目的:探讨瘦素(leptin)、纤连蛋白(FN)对细胞滋养细胞浸润能力的影响及其协同作用。方法:①取孕6-8周的人工流产妊娠绒毛,分离、培养细胞滋养细胞并经光镜、电镜、免疫细胞化学鉴定。②用RT-PCR方法检测细胞滋养细胞中瘦素的表达。③应用体外培养侵袭模型检测瘦素、FN及二者协同时对细胞滋养细胞浸润能力的影响。结果:①分离、纯化所得细胞滋养细胞有瘦素mRNA表达。②瘦素组、FN组和瘦素与FN协同组浸润穿过matrigel的滋养细胞数均显著多于对照组(P<0.01),其中瘦素与FN协同组滋养细胞浸润能力最强。结论:①瘦素能增强细胞滋养细胞的侵袭能力。②FN对细胞滋养细胞的浸润具有趋化作用。③瘦素与FN对细胞滋养细胞的浸润有正协同作用。     

ROCKⅡ对细胞滋养细胞ERM蛋白表达及细胞浸润能力调节的研究

目的:探讨Rho/ROCK/ERM通路与细胞滋养细胞浸润能力的关系。方法:免疫荧光细胞化学法定位ROCKⅡ和ERM在体外培养细胞滋养细胞中的表达,Western blot检测ROCKⅡ活性被抑制时细胞滋养细胞中p-ERM表达变化,MTT实验、体外细胞侵袭实验和细胞运动实验检测ROCKⅡ活性被抑制时细胞滋养细胞生长、运动、浸润能力的改变。结果:ROCKⅡ和ERM在细胞滋养细胞的胞浆中表达;随着ROCKⅡ活性下降,p-ERM表达下降,细胞生长、浸润、运动受到抑制,呈浓度依赖关系。结论:ROCKⅡ在体外培养的细胞滋养细胞中可能通过调节ERM蛋白来调节细胞的生长、浸润和运动能力,提示Rho/ROCK/ERM通路可能在人孕早期胚泡植入过程中发挥作用。     

粘附分子与子宫内膜

总结细胞粘附分子在子宫内膜／蜕膜中的表达、功能及影响因素，探讨细胞粘附分子与不育症、子宫内膜异位症等的关系。发现，一些在多种细胞上表达、本质上属糖蛋白的细胞粘附分子参与子宫内膜细胞分布、细胞间信息交流和相互作用及与内膜网状组织(包括胶原、纤溶酶、基质蛋白等)间相互作用。根据结构与功能，细胞粘附分子分5大类：整合素、钙粘蛋白、免疫球蛋白超家族、CD44、选择素等。其与子宫内膜细胞间信息传递、细胞移行；与细胞外基质粘附及受精、植入、胎盘形成有密切关系。     

调节性T细胞在妇科肿瘤发生发展中的作用及其研究进展

调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)是具有独特免疫调节功能的T细胞亚群。根据Treg细胞表面标志物不同,可以将Treg细胞分为CD4+Treg细胞、CD8+Treg细胞、NKT Treg细胞和双阴性Treg细胞,目前对CD4+Treg(尤其CD4+CD25+Treg)研究较深入和成熟。Treg细胞具有广泛的免疫抑制性,尽管在机体免疫稳态维持、预防自身免疫性     

内毒素调节细胞滋养细胞侵入能力的机制

目的:探讨内毒素(lipopolysacchraride,LPS)对细胞滋养细胞侵入能力的影响。方法:留取正常早孕绒毛,分离细胞滋养细胞,用无血清培养基培养。对照组:培养基中不添加内毒素。实验组:培养基中加入不同浓度的内毒素,其终浓度分别为25、50、100、200ng/m l。Transwell小室检测细胞滋养细胞的侵入能力;采用激光共聚焦-免疫荧光技术检测基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、9)蛋白的表达;RT-PCR检测MMP-2、MMP-9 mR-NA表达水平。结果:内毒素降低细胞滋养细胞侵入Transwell小室的能力,在浓度为0、25、50、100、200ng/m l的LPS作用24h后,细胞滋养细胞侵至滤膜下表面的细胞为145.6±20.7、139.6±18.8、123.1±17、76.5±18、47.9±16,差异有统计学意义(P<0.01);内毒素显著抑制细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA的表达。结论:内毒素能够抑制细胞滋养细胞的侵入能力,可能是通过抑制基质金属蛋白酶表达来实现。     

妊娠滋养细胞肿瘤的辅助治疗

妊娠滋养细胞肿瘤是一组来源于胎盘滋养细胞的疾病,包括侵蚀性葡萄胎、绒癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤和上皮样滋养细胞肿瘤。前两者在临床上统称为妊娠滋养细胞肿瘤。总体来说,妊娠滋养细胞肿瘤     

滋养层细胞培养方法研究进展

滋养层细胞在胚胎的植入过程中扮演重要角色 ,其增殖、功能调节失常与多种妊娠相关疾病的发生发展有密切关系。滋养层细胞的培养是进行这些相关实验的基础。然而 ,目前正被应用的滋养层细胞分离、培养、纯化方法均存在一定程度的缺陷。原代培养的滋养层细胞存在产率低、杂细胞污染等方面的缺憾 ,而滋养层细胞又在细胞特性上发生了变化。此外 ,目前在鉴定分离培养的细胞是否就是滋养层细胞这一关键问题上尚无统一标准     

早孕期人细胞滋养层细胞的分化及分离、培养、鉴定

目的:分离正常早孕期人细胞滋养层细胞并分析其分化功能。方法:用不同的消化方法分离正常早孕期人细胞滋养层细胞,分别在体外培养24h,用相差显微镜、Giemsa染色、免疫细胞化学法、扫描电镜、Transwell分析其形态及分化功能。结果:①采用低浓度胰酶一次性消化法获得绒毛外滋养层细胞,特异表达细胞角蛋白7,不表达波形蛋白,细胞互相聚集但不聚合,具有高度增殖活性和侵袭能力;②采用高浓度胰酶、长时间连续消化法分离得到绒毛滋养层细胞,具有高度融合、分泌hCG-β的合体滋养层细胞特性;③采用低浓度胰酶连续消化法获得的细胞包含绒毛外滋养层细胞和绒毛滋养层细胞,其共性是表达细胞总角蛋白,不表达波形蛋白。结论:利用不同的分离方法可有效、经济地获得具有不同分化功能的早孕期人细胞滋养层细胞。     

脂多糖经线粒体途径诱导细胞滋养细胞凋亡

目的:探讨脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导细胞滋养细胞凋亡的机制。方法:从正常早孕绒毛分离细胞滋养细胞,用无血清培养基培养。在培养基中加入不同浓度的LPS,使其终浓度分别为0、25、50、100、200ng/ml。用光镜和透射电镜观察细胞滋养细胞的形态学变化;用Western blot检测Bax、Bcl-2和Caspase-8的表达。结果:LPS作用后24h,光镜和电镜下见细胞滋养细胞出现凋亡的形态学变化;Western blot检测结果表明,LPS抑制Bcl-2表达,促进Bax和Caspase-8表达。结论:LPS能够经线粒体途径诱导细胞滋养细胞凋亡。     

细胞过度凋亡是脂多糖抑制细胞滋养细胞侵入能力的重要机制

目的:探讨脂多糖(LPS)对细胞滋养细胞侵入能力的影响及细胞凋亡在此过程中的作用。方法:对体外培养的早孕细胞滋养细胞,给予不同浓度的LPS(0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml),采用Transwell检测侵入能力的改变,荧光显微镜、电镜观察凋亡细胞的形态学改变,流式细胞仪定量检测细胞凋亡指数,western blot检测Caspase-3、MMP-2和MMP-9的表达。结果:LPS诱导细胞滋养细胞出现过度凋亡,抑制其侵入能力,促进Caspase-3的表达,抑制MMP-2、MMP-9的表达。以上各指标组间差异显著,P值均＜0．01。细胞凋亡指数与其侵入能力以及MMP-2和MMP一9的表达呈负相关,P值均＜0．01。结论:LPS对细胞滋养细胞的侵入能力有显著的抑制作用,细胞过度凋亡是这一作用发生的重要机制。     

HeLa和SiHa细胞中Skp2、p27和C-myc的表达

目的:检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)、C-myc、p27在宫颈癌HeLa及SiHa细胞系中的表达,明确这些指标在宫颈癌细胞系表达的意义。方法:通过细胞免疫组化、Westernblot、RT-PCR技术分析Skp2、p27和C-myc在蛋白和mRNA水平表达的差异。结果:免疫组化显示:He-La细胞中Skp2和C-myc表达强度高于SiHa细胞(P=0.032和P=0.026),而HeLa细胞中p27蛋白表达弱于SiHa细胞(P=0.035)。Westernblot显示:在HeLa细胞中Skp2和C-myc蛋白表达分别是SiHa细胞表达量的2.8倍和1.5倍;而SiHa细胞中的p27蛋白的表达水平是HeLa细胞中表达的2.7倍。RT-PCR结果显示:HeLa细胞中内源Skp2和C-myc的mRNA表达水平高于SiHa细胞(P=0.034和P=0.028),而SiHa细胞中的p27的mRNA表达水平高于HeLa细胞的表达水平(P=0.002)。结论:Skp2及C-myc在HeLa细胞中的表达水平高于SiHa细胞中的表达水平,而p27在HeLa细胞中的表达水平低于SiHa细胞中的表达水平。     

妊娠晚期羊水间充质干细胞生物学特性研究

目的：研究妊娠晚期羊水来源的胎儿间充质干细胞（MSCs）的体外分离、培养及其生物学特性。方法：贴壁培养法培养妊娠晚期羊水中的胎儿MSCs，形成细胞集落后用细胞刮刀刮下细胞重新培养、扩增，用倒置相差显微镜观察细胞形态．通过细胞表面抗原、细胞核型分析、细胞因子检测等证实该细胞是否为胎儿MSCs，以及不同代细胞之间是否有生物学特性上的差异，并通过绘制生长曲线，比较各代细胞的生长趋势。结果：用贴壁培养法分离、培养出的细胞呈梭形，不同代胎儿MSCs表面抗原、细胞核型相同，不同羊水标本来源的胎儿MSCs均表达胚胎干细胞相关蛋白（Oct-d），第8代（P8代）细胞比P2、P5代细胞生长缓慢。结论：通过上述方法可以成功分离、培养妊娠晚期羊水来源的胎儿MSCs，不同代细胞间生物学特性基本相同。     

整合素在胚胎着床、生长发育及某些妇产科疾病中的作用

细胞与细胞、细胞与细胞外基质粘附及相互作用,是机体构建完整的组织、器官形态结构并行使生理功能最基本的生命现象之一。而参与细胞与细胞、细胞与细胞外基质粘附及作用的物质,近年来被发现是一些在多种细胞上表达、本质上属糖蛋白的细胞粘附分子（ｃｅｌａｄｈｅｓｉ...     

产后和妊娠期尿道细胞形态

妇女尿道脱落细胞近来成了细胞激素研究的目标。和阴道涂片与尿液细胞(尿细胞图)比较,尿道脱落细胞存在着细胞形态与细胞激素特征。妇女育龄期,脱落细胞主要由两种生长层细胞构成,一种形态和膀胱三角的细胞类似,一种具有尿道细胞浆的特征(蝌蚪状细胞、长形细胞)。激素缺乏期(儿童期、更年期、生殖腺切除后),细胞分布方面园柱形细胞在数量上占优势。对于切除卵巢的妇女,雌激素治疗能使园柱细胞消失,而被上述两种类型的生长层细胞取代。本文是研究各妊娠期的这     

调节滋养细胞侵袭力的信号传导通路

滋养细胞节制性侵袭是胚胎成功着床、胎盘形成以及胎儿生长发育的关键。近年研究显示,滋养细胞侵袭力下降可导致流产、子痫前期/子痫、胎儿生长受限等疾病。细胞信号的级联反应对细胞生长周期、细胞分化、细胞迁移和细胞凋亡等起着关键的调控作用。本文主要从局部粘附激酶、小分子G蛋白、磷酸肌醇3激酶、丝裂原活化蛋白激酶、JAK/STAT信号转导通路和Smad家族的信号蛋白等6个与滋养细胞侵袭力相关的主要信号传导通路做一综述,以期对这类滋养细胞发育不良的原发性滋养细胞疾病的发病机制研究及治疗提供新的思路和靶点。     

子宫内膜异位症患者γδT细胞及NK细胞的功能分析

目的 :分析子宫内膜异位症患者中γδT细胞和天然杀伤 (NK)细胞功能的变化 ,并探讨患者腹腔液对正常人γδT细胞和NK细胞功能的影响。方法 :采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法分析 2 2例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中的γδT细胞及NK细胞的表型与功能。结果 :子宫内膜异位症 (疾病组 )患者外周血、腹腔液中CD56+细胞与正常对照组无明显差异 ,而疾病组腹腔液中γδ+T细胞分别高于外周血和正常对照组。疾病组腹腔液中的γδT细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组。疾病组的腹腔液对正常人外周血γδT细胞及NK细胞的功能具有负相调节作用。结论 :子宫内膜异位症患者的γδT细胞及NK细胞的功能低下 ,处于被抑制状态 ,提示子宫内膜异位症患者的腹腔中存在γδT细胞及NK细胞功能的抑制因子。     

体外着床模型中人孵化后早胚细胞角蛋白和肌动蛋白的表达

目的:建立理想的体外胚胎着床模型,并检测模型中人孵化后早胚细胞角蛋白、肌动蛋白和hCG。方法:孵化后早胚与人子宫内膜蜕膜化的基质细胞共培养,观察胚泡在基质细胞层上的定位、黏附、铺展和侵入过程;用免疫荧光染色技术,测定共培养系统中的细胞角蛋白和肌动蛋白;用免疫荧光分析技术,测定培养液中的hCG水平。结果:胚泡和基质细胞共培养5h起,胚泡开黏附在基质细胞层上,最终侵入蜕膜化的基质细胞间。共培养48h后,细胞角蛋白仅仅在滋养层细胞中表达;肌动蛋白在人蜕膜化的基质细胞和滋养层细胞中均有表达。囊胚与子宫内膜基质细胞共培养的培养液中的hCG水平明显高于囊胚单独培养的(P<0.01)。结论:成功建立了一个能反映人胚泡黏附、铺展及侵入到人子宫基质细胞的体外着床模型,细胞角蛋白、肌动蛋白和hCG在着床早胚细胞中起相应变化。     

卵巢癌细胞放疗抗性与上皮–间质转化的关系

目的 探究卵巢癌细胞放疗抗性与上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的关系。方法 构建A2780卵巢癌细胞放疗抵抗模型A2780R。采用平板克隆形成实验、CCK8实验检测细胞的放疗抵抗性,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用细胞划痕和Transwell侵袭迁移实验检测细胞迁移侵袭能力,采用Western blot和q RT-PCR实验检测细胞EMT相关蛋白和m RNA的表达。结果 与A2780细胞比,A2780R细胞的克隆体积大、数量多,细胞伸出伪足,与EMT的典型细胞形态类似。与A2780细胞比,A2780R细胞2 Gy细胞存活分数（survival fraction, SF2）、平均致死剂（mean lethal dose, D0）、准阈量（quasithreshold dose, Dq）、N增加（P <0.05）,D0放射增敏比（sensitization enhancement ratio of D0, SERD0）、准阈量放射增敏比（sensitization enhancement ratio of Dq, SERD...     

原代卵巢上皮性癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定

目的 研究无血清培养基悬浮培养原代卵巢上皮件癌(卵巢痛)细胞,筛选并鉴定卵巢癌千细胞样细胞.方法 卵巢癌组织取自1例卵巢浆液性囊腺痛Ⅲ期、细胞分化2级的患者,分离的原代细胞培养于无血清培养液[添加表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白血病抑制因子(LIF)和胰岛素等细胞因子]得到球样细胞团细胞,并采用常规含血清的培养液进行培养得到贴壁细胞.应用定量PCR技术检测球样细胞团细胞表达干细胞标志基因的情况,应用四甲基偶氮唑蓝比色法、Hoechst 33342染色的流式细胞仪检测球样细胞团细胞的耐药性,并榆测球样细胞团细胞的裸鼠体内致瘤性.结果 在无血清添加细胞因子的培养条件下,原代卵巢癌细胞形成球样细胞团,这些细胞能够存活、增殖、具有自我更新的功能.球样细胞团细胞Nanog、Oct-4、Sox-2、nestin、CD_(133)、CD_(117)及ABCG2等干细胞标志基因的mRNA表达量为分化贴壁细胞的14～400倍.球样细胞团细胞还具有对顺铂和紫杉醇更强的耐药性,将顺铂与紫杉醇同时作用于贴壁细胞及球样细胞团细胞48及72 h后,球样细胞团细胞抑制率为31%、29%,显著低于分化细胞(抑制率为61%、73%),分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).球样细胞团细胞中Hoechst 33342染色阳性的细胞比例为21.83%,而贴壁细胞为83.04%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).500个球样细胞闭细胞可在裸鼠体内成瘤,肿瘤组织的病理特征与原发肿瘤相似,且高表达上皮性肿瘤标志物CA_(125)和细胞角蛋白7.结论 采用无血清悬浮培养法从原代卵巢癌组织中获取的球样细胞团细胞,可能含有比例较高的具有增殖和分化能力的卵巢癌干细胞样细胞,并具有干细胞的功能.     

不同浓度枸杞多糖对人宫颈癌Siha细胞增殖的影响

目的：探讨枸杞多糖（LyciumBarbarumPolysaccharides,LBP）对宫颈癌siha细胞生长的影响及可能的机制。方法：siha细胞用500ug／ml、1000ug／ml、2000ug／mlLBP及PBS处理72小时,分别用细胞拍照、MTS及流式细胞仪检测细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡。结果：LBP以时间一剂量依赖关系抑制siha细胞的生长。缩短siha细胞周期s期时间,并促进siha细胞凋亡。结论：LBP可抑制siha细胞增殖,其机制包括阻滞细胞周期及促进细胞凋亡。