抑制hIAP-2在MCF7乳腺癌细胞中的表达增强抗肿瘤药物的抑癌作用

目的 探讨抑制hIAP-2在MCF7乳腺癌细胞中的表达增强对肿瘤化疗药物抑癌作用的影响。方法 采用MTT法检测mU6/hIAP-2质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的联合作用。结果 比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点,siRNA表达质粒mU6/hIAP-2与化疗药物顺铂、环磷酰胺或5-氟尿嘧啶合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率均明显提高,差异有显著性（p<0.01）,但与秋水仙碱合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率明显降低,差异有显著性（p<0.01）;对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5-氟尿嘧啶的抗癌性能具有显著的协同增强作用（二者合用效应Q值均≥1）,但对靶向微管的药物秋水仙碱具有拮抗作用（Q值<1）。结论 在敲除乳腺癌细胞中人凋亡抑制蛋白-2功能的基础上进行药物化疗,可能是乳腺癌治疗的一个新的可行方向。     

hIAP-2 siRNA表达质粒的构建及其对乳腺癌细胞MCF-7的作用

目的:构建人凋亡抑制蛋白2(hIAP-2)基因的小分子干扰RNA(siRNA)的表达质粒,并检测其对乳腺癌细胞MCF-7的作用.方法:利用含U6启动子的mU6pro载体构建hIAP-2 siRNA表达质粒,RT-PCR和Western印迹法检验其对MCF-7细胞的RNA干扰(RNAi)效果.用MTT法分析其对细胞增殖,流式细胞仪检测其对细胞周期,以及Hoechst染色法观察其对细胞形态的影响.同时,用胱天蛋白酶-3(caspase-3) Ac-DEVD-pNA底物法检测caspase-3活性的变化,Western印迹法检测一些相关蛋白质的表达变化.结果:hIAP-2 siRNA表达质粒高效而特异地剔降MCF-7细胞中hIAP-2的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.01),阻断MCF-7细胞在G1期.随着hIAP-2基因被沉默,MCF-7细胞变得多核化和巨核化,caspase-3酶原表达升高并被激活(P<0.01).此外,IκBα和p21waf1蛋白表达升高,NF-κB(p65)则降低,Cyt C维持不变.结论:RNA干扰hIAP-2对MCF-7细胞增殖和细胞周期调控有重要影响,细胞裂亡可能是导致其细胞死亡的主要原因,DNA受损后其细胞周期阻滞在G1期可能与上调p21waf1有关.     

抗肿瘤药物在恶性血液病中的应用

代恶性血液病的疗效主要归功于大剂量联合化疗的临床应用。实验证明 ,化疗剂量每增加 1倍 ,其杀伤力可增加 10倍。一次足量的化疗约可杀灭体内 2～ 5个对数级的白血病细胞。经验证明 ,急性白血病越是早期获得完全缓解 ,随后接受充分的继续强化治疗者持续完全缓解期就越长 ,治愈     

抗肿瘤药物作用机制的研究进展

恶性肿瘤是危害人们生命健康的重大疾病。目前我国有约220万肿瘤患者，抗肿瘤药物的研发任重而道远。近年来，随着肿瘤生物学及相关学科的飞速发展，抗肿瘤药物的研发理念也发生了重大转变。不同于传统细胞毒药物选择性差、不良反应强、易产生耐药性等特点，抗肿瘤药物已达到了高选择性、低毒性的治疗效果，其研发迎来了一个新的时代。本文结合大量研究结果介绍了近年来抗肿瘤药物作用机制的研究进展。     

新城疫病毒HN基因真核表达质粒的构建及其抗肿瘤作用的初步研究

构建新城疫病毒血凝素神经氨酸酶基因真核表达质粒,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ从ＮＤＶ中克隆ＨＮ ｃＤＮＡ,并构建ＨＮ的真核表达载体,转染ＣＯＳ－７细胞表达,注射至小鼠Ｂ１６黑素瘤模型,检测其抗肿瘤作用。结果成功地克隆了ＮＤＶ ＨＮ ｃＤＮＡ,所构建的ｐｃＤＮＡ３－ＨＮ有良好的表达,动物实验显示,ｐｃＤＮＡ３－ＨＮ有增强荷瘤小鼠ＣＴＬ,ＮＫ杀伤活性的作用。结论ＮＤ     

肌细胞增强因子2A基因真核表达质粒的构建及对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响

目的：构建肌细胞增强因子2A（MEF2A）基因真核表达重组质粒,并转染乳腺癌细胞株观察其对细胞增殖能力的影响。方法：实时定量聚合酶链反应（RT-QPCR）检测MCF-7、BT474及MDA-MB-231等3种乳腺癌细胞中MEF2A mRNA的表达。采用全基因合成法合成MEF2A编码区序列,克隆入pcDNA3.1（＋）-HA载体,构建重组质粒pcDNA3.1-MEF2A-HA。重组质粒转染乳腺癌细胞,采用Western blot及RT-QPCR检测MEF2A的表达效率。细胞计数实验检测细胞的增殖能力。结果：3株乳腺癌细胞中,MDA-MB-231细胞中MEF2A mRNA表达水平较低;其基因测序结果显示与预期片段大小一致,表明MEF2A重组质粒构建成功。将MEF2A重组质粒瞬时转染MDA-MB-231细胞后,MEF2A表达质粒组与对照组比较,其MEF2A表达升高,细胞增殖能力增强。结论：成功构建MEF2A过表达重组质粒,在MDA-MB-231中过表达MEF2A促进细胞的增殖能力。     

岩松达抗肿瘤作用的实验研究

本文观察了岩松这单独灌胃给药，和同时腹腔注射化疗药物环磷酰胺（ＣＴＸ），对艾氏腹水癌小鼠的抗癌作用。结果表明，岩松达具有一定的抗癌作用，能明显增强环磷酰胺的抗癌效果，并能降低环磷酰胺所致小鼠外周白细胞减少等毒副作用。岩松达还有显著对抗环磷酰胺所致免疫器官重量下降及提高小鼠网状内皮系统吞噬功能的作用。提示岩松达具有祛邪、扶正、增效、减毒等作用。     

羧酸酯酶在抗肿瘤药物研究中的作用

哺乳动物羧酸酯酶(carboxylesterase,CESs)是一个多基因家族,其基因产物定位于多种组织的内质网中.羧酸酯酶能有效催化酯类和酰胺类化合物水解,承担多种前体药物的生物转换功能药物.综述羧酸酯酶的结构、分类、生化性质、作用机制及其在抗肿瘤药物研究中的最新进展.     

胄松达抗肿瘤作用的实验研究

本文观察了岩松达单独灌胃给药，和同时腹腔注射化疗药物环磷酰胺（ＣＴＸ），对艾氏腹水癌小鼠的抗癌作用。结果表明，岩松达具有一定的抗癌作用，能明显增强环磷酰胺的抗癌效果，并能降低环磷酰胺所致小鼠外周白细胞减少等毒副作用。岩松达还有显著对抗环磷酰胺所致免疫器官重量下降及提高小鼠网状内皮系统吞噬功能作用。提示岩松达具有祛邪、扶正、增效、减毒等作用。     

ErbB2在MCF-7细胞中的过度表达意义

目的 研究ErbB2的过度表达是否能促进MCF-7细胞株的生长和侵袭。方法通过逆转病毒，将ErbB2转入MCF-7细胞内，并证实ErbB2被表达并具有生物活性。检验实验组和对照组(AP2)的侵袭力和浸润力。结果ErbB2、MCF细胞中被过度表达并产生效果。在体外，相对于对照组，ErbB2组表现了更强的浸润率和侵袭力。但可以被ErbB2的抵制剂赫塞汀所抵制。结论ErbB2过度表达可以促进细胞的浸润和侵袭。抵制实验则提供了一种新的癌症治疗手术方法。     

凋亡抑制蛋白ILP-2对乳腺癌细胞MCF-7氧化应激损伤的保护作用

【立论依据】 文献表明氧化应激会损伤体内核酸等生物大分子物质而促进肿瘤的发生发展;凋亡抑制蛋白ILP-2在生长中的乳腺癌有高表达,由此,我们猜想乳腺癌中高表达的ILP-2可能与氧化应激的损伤作用存在联系 【设计思路】 实验以乳腺癌细胞株MCF-7制备氧化应激的细胞模型,研究氧化应激状态下MCF-7内ILP-2的表达情况;RNAi ilp-2基因表达,分析ILP-2与氧化应激损伤之间的关系 【实验内容】 利用H2O2对乳腺癌细胞株MCF-7进行氧化应激造模,流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),分光光度法检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平;通过瞬时转染敲低MCF-7 ilp-2表达,利用RT-PCR和蛋白质印迹法检测基因和蛋白质表达情况;干扰细胞ilp-2表达并同时进行氧化应激处理,通过MTT、Scratch、FCM等方法检测细胞的存活状态 【材料】 乳腺癌细胞株MCF-7,H2O2,转染试剂,RNeasy Mini Kit,QuantiFast Probe Assay,RIPA 裂解液,一抗,二抗,ROS试剂盒,GSH试剂盒,MDA试剂盒,MTT试剂盒等。 【可行性】 该研究内容所需技术在生物分子研究领域已经非常成熟,所需设备完善,可操作性强 【创新性】 首次研究ILP-2促癌细胞生长作用与氧化应激损伤之间的关系,为进一步阐明ILP-2的作用机制奠定基础。     

真核表达质粒PIRESneo3/miR-194的构建及其在乳腺癌细胞MCF-7中的表达

目的构建含miR-194基因的真核表达质粒,建立miR-194稳定表达的MCF-7乳腺癌细胞株。方法设计合成miR-194引物序列,PCR法从乳腺癌231细胞中扩增出目的片段,经双酶切后定向连入PIRESneo3载体,构建PIRES-neo3/miR-194真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的正确性。脂质体法将重组质粒转入MCF-7细胞,G418药物筛选出稳定转染的细胞,实时荧光定量PCR法检测稳定转染MCF-7细胞中miR-194基因的表达水平。结果构建的PIRESneo3/miR-194质粒经酶切、测序等检验表明质粒构建成功,筛选获得稳定高表达miR-194的MCF-7乳腺癌细胞株。结论成功构建了PIRESneo3/miR-194真核表达质粒以及稳定高表达miR-194的MCF-7细胞株。为进一步观察该基因对乳腺癌细胞的体外效应和以miR-194为靶点的乳腺癌基因治疗研究提供实验基础。     

5-Aza-CdR对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响

目的研究5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7细胞12~96h,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和流式细胞仪分别检测药物处理前后细胞的增殖活性和凋亡率;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各阶段RASSF2A mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR(MSP)观察该基因甲基化的改变。结果用1、5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理MCF-7细胞24、48、72和96h后,细胞生长均受到抑制,呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,3种药物浓度处理细胞72h后凋亡率增加,5和10μmol/L组凋亡率分别为(25.5±3.5)%和(58.2±3.2)%,与对照组(13.4±2.0)%相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测显示,不同浓度药物处理MCF-7细胞后,RASSF2A mRNA表达水平随着药物浓度的增加而逐步上调;进一步MSP检测发现这些癌细胞中RASSF2A甲基化状态得到了不同程度的逆转。结论 5-Aza-CdR可通过逆转RASSF2A基因异常甲基化导致该基因表达上调来抑制MCF-7细胞增殖,RASSF2A是一个乳腺癌相关抑癌基因。     

Grb2在MCF-7 乳腺癌细胞中的核定位研究

目的　构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法　用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,瞬时转染MCF 7乳腺癌细胞株 ,用荧光显微镜观察Grb2的核定位情况。结果　pDsRed1 C/Grb2质粒有正确的阅读框 ,融合表达蛋白DsRed1 C/Grb2可定位于MCF 7乳腺癌细胞核内。结论　成功构建了Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,在MCF 7乳腺癌细胞株中 ,Grb2除存在于胞浆外 ,也可定位于细胞核内 ,可能与其参与核内基因的转录调控有关。     

补骨脂素对乳腺癌MCF-7细胞的体外抗肿瘤作用

目的观察补骨脂素对人乳腺癌MFC-7细胞的抑制作用及对其细胞周期、细胞早期凋亡的影响。方法应用MTT法检测不同浓度的补骨脂素对人乳腺癌MCF-7(ER阳性)细胞株的体外生长抑制作用,并运用流式细胞仪观察细胞的周期变化,AnnexinV和PI双染法检测早期细胞凋亡情况。结果补骨脂素对人乳腺癌MCF-7细胞株有明显的抑制作用,IC50为15.16μg/ml;作用24h后,流式细胞仪检测显示细胞周期S期细胞减少,G1及G2期细胞增加,并且早期凋亡细胞明显增多。结论补骨脂素对人乳腺癌MCF-7细胞有明显体外抑制作用,其抑制机制与影响细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

化疗药物增强重组可溶性TRAIL抗肿瘤作用

目的探讨化疗药物对重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)抗肿瘤作用的影响及其分子机制.方法 13株不同肿瘤细胞经rsTRAIL处理后,采用MTS-PMS染色法和流式细胞仪技术测定细胞凋亡率,观察肿瘤细胞对rsTRAIL的敏感性;化疗药物与rsTRAIL联合作用于敏感性不同的肿瘤细胞检测细胞敏感性的变化;免疫印迹技术分析TRAIL受体DR5蛋白表达.结果 13株肿瘤细胞中约46.2%(6/13)的细胞株对rsTRAIL敏感;化疗药物CHX、CP和8-CA可显著提高肿瘤细胞株对rsTRAIL细胞毒作用的敏感性;8-CA和TRAIL联合作用可上调DR5的蛋白表达.结论化疗药物CHX、CP和8-CA可增强rsTRAIL的抗肿瘤作用.     

DHRS7对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及其在乳腺癌组织中的表达

［摘 要］目的：探究 DHRS7基因过表达和DHRS7特异性短发夹RNA(shRNA)重组质粒对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及DHRS7与乳腺癌浸润癌的关系,阐明DHRS7在乳腺癌发生、发展中的作用。方法：利用RT-PCR技术将DHRS7基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1( + )质粒中,构建pcDNA3.1-DHRS7重组真核表达质粒。实验分为pcDNA3.1-DHRS7组、阴性对照组(pcDNA3.1组)、空白对照组和DHRS7-shRNA-pGenesil组,用Fugene HD转染试剂将各种质粒转染MCF-7细胞,采用RT-PCR和Western blotting法检测各组MCF-7细胞中DHRS7的表达情况,流式细胞术分析细胞周期变化,免疫组织化学SP法检测乳腺原位癌和乳腺浸润癌组织中DHRS7蛋白的表达情况。结果：成功构建pcDNA3.1-DHRS7重组表达质粒。PCR和Western blotting结果显示,pcRNA-DHRS7组蛋白的表达量高于空白对照组（P<0.05）,DHRS7-shRNA-pGenesil组蛋白的表达量低于空白对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术显示,DHRS7表达上调使MCF-7细胞S期细胞增多（P<0.05）,DHRS7的表达下调使处于G2期的细胞增多（P<0.05）。免疫组织化学染色显示,DHRS7蛋白在原位癌中高表达,阳性表达率为100%（37/37）;在乳腺浸润癌的表达明显降低,阳性率为18.9%（7/37）,两者比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：DHRS7基因参与了MCF-7细胞细胞周期的调控过程,可以抑制细胞增殖,DHRS7蛋白的表达丢失可能促进乳腺癌浸润。     

siRNA抑制Ki-67表达对乳腺癌MCF-7/ADR细胞阿霉素耐药性的研究

目的采用Ki-67 RNA表达载体干扰沉默Ki-67基因,检测其对乳腺癌MCF-7/ADR细胞株Ki-67 mRNA及蛋白表达的影响,观察沉默Ki-67基因前后乳腺癌细胞株对阿霉素敏感性改变。方法体外合成靶向Ki-67siRNA表达载体,应用脂质体法瞬时转染Ki-67高表达的乳腺癌细胞株MCF-7/ADR,应用RT-PCR和Western印迹法检测转染后Ki-67mRNA及蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖活性及转染前后细胞对阿霉素敏感性的变化。结果 Ki-67siRNA载体转染24h后可显著抑制乳腺癌MCF-7/ADR细胞株的Ki-67 mRNA、蛋白表达及增殖活性。Ki-67 siRNA组阿霉素IC₅₀值为（6.3±0.9）μg/ml。结论 Si-Ki-67能够有效抑制Ki-67基因的表达,降低乳腺癌细胞的增殖能力。沉默Ki-67表达能部分逆转阿霉素耐药现象。     

Sprouty 2蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中表达的实验研究

目的:观察人乳腺癌MCF-7细胞上Sprouty 2蛋白的表达情况,进一步研究Sprouty 2蛋白在乳腺癌的发病机制中的生物学功能。方法:通过培养Sprouty 2蛋白表达的乳腺癌MCF-7细胞,试验组采用Sprouty 2蛋白特异性抗体孵育,对照组采用DPBS代替一抗进行孵育,以流式细胞免疫荧光法检测Sprouty 2蛋白的表达情况。结果:以流式细胞免疫荧光法发现,试验组MCF-7细胞中的Sprouty 2蛋白阳性细胞百分数为(31.1±0.6)%,免疫细胞荧光强度明显弱于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乳腺癌的发生与Sprouty 2蛋白的表达失调有关。