酪氨酸激酶受体B和脑源性神经生长因子与头颈肿瘤

酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptors,TrkB）信号传导通路在肿瘤的发生、发展过程起到重要的调控作用。脑源性神经生长因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）与TrkB结合,是激活TrkB信号传导通路最主要的途径。研究发现多种恶性肿瘤中有TrkB及BDNF过度表达且与肿瘤预后相关。本文就TrkB及BDNF在头颈肿瘤中的研究进展做一综述。     

酪氨酸激酶受体B在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的：探讨酪氨酸激酶受体B（TrkB）及其配体脑源性神经营养因子（BDNF）的表达水平在鼻咽癌（NPC）发生与发展中的作用。方法：用免疫组织化学染色法检测TrkB及其配体BDNF在NPC患者活检切片中的表达。结果：TrkB和BDNF在NPC组中的阳性表达率分别为82．5％（47／57）和52．6％（30／57）,均高于鼻咽炎组（均P〈0．05）;TrkB在NPC组中的表达水平与肿瘤的TNM分期及临床分期有关,在T3＋T4、Ⅲ＋Ⅳ期比在T1＋T2、Ⅰ＋Ⅱ期高（均P〈0．05）;NPC伴颈部淋巴结转移组较非转移组的表达高（P〈0．05）;TrkB和BDNF的表达在NPC组织学类型之间差异无统计学意义（P〉0．05）;BDNF的表达与NPC TNM分期、临床分期及有无颈部淋巴结转移无关（均P〉0．05）;NPC组中TrkB与BDNF的表达无相关性（r=0．049,P〉0．05）。结论：TrkB及其配体BDNF表达上调对NPC的发生具有重要作用,NPC组织中TrkB及其配体BDNF蛋白表达水平可作为预测NPC发生及浸润转移的重要指标。     

脑源性神经营养因子及其受体在变应性鼻炎鼻黏膜中的表达

目的 探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及其受体酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase B,TrkB)在变应性鼻炎发病中的作用.方法 采用6～8周健康SD大鼠,随机分成实验组20只和对照组10只,以卵清蛋白致敏激发制成变应性鼻炎模型,免疫组化染色检测鼻黏膜中BDNF及TrkB的表达及分布.结果 BDNF及TrkB在实验组和对照组大鼠鼻黏膜中主要表达在鼻黏膜上皮细胞、腺细胞及导管细胞和固有层炎性细胞的胞质内及部分腺细胞胞核内:实验组和对照组鼻黏膜中BDNF的积分光密度(integrated optical density,iOD)值分别为77344.17±8567.02和54124.82±18515(P<0.05),TrkB的iOD值分别为93087.57±17001.97和74914.78±15895.92(P<0.05),均具有显著性差异.BDNF与TrkB呈正相关(rs=0.589,P<0.01).结论 BDNF与变应性鼻炎的发生有着密切的联系,可能主要通过与TrkB结合而参与变应性鼻炎的发生、发展.     

微小RNA-489调控脑源性神经营养因子在甲状腺乳头状癌中的作用机制研究

目的　分析微小RNA（microRNA，miR）-489在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）发生发展过程的影响，并探讨其在甲状腺乳头状癌临床诊断的价值。方法　采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测甲状腺乳头状癌组织中脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）及miR-489的表达变化；TargetScan和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-489可靶调控BDNF；CCK-8、Transwell迁移侵袭实验等探究miR-489和BDNF对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的影响；构建裸鼠植瘤模型探究miR-489在体内实验中对甲状腺乳头状癌的影响。结果　miR-489在甲状腺乳头状癌组织及转移的肿瘤组织中的表达降低（P＜0.01）；BDNF是miR-489的靶基因；过表达BDNF能逆转miR-489对TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用（P＜0.05)；miR-489可抑制裸鼠肿瘤的生长（P＜0.01）。结论　miR-489通过抑制靶基因BDNF的表达在甲状腺乳头状癌中扮演抑癌基因的角色。     

脑源性神经营养因子促进鼻咽癌细胞CNE-2迁移的分子机制

目的 检测脑源性神经营养因子BDNF对鼻咽癌细胞CNE-2迁移过程的影响,以探讨BDNF对无TrkB表达的鼻咽癌细胞促进迁移的作用及其机制.方法 应用免疫印迹方法检测CNE-2细胞BDNF和TrkB蛋白的表达,采用细胞划痕实验检测BDNF对CNE-2细胞迁移能力的影响.结果 CNE-2细胞中高表达BDNF但不表达TrkB.BDNF依然能够促进CNE-2细胞迁移而且具有剂量依赖性,其中25 ng/mL BDNF促细胞迁移的作用具有明显的统计学差异(P＜0.01).K252a抑制Trk激酶活性不影响BDNF促细胞迁移作用(P＜0.01).结论 BDNF在不表达其高亲和力受体TrkB的鼻咽癌细胞中依然能够发挥促细胞迁移的作用,而且这一作用的机制很可能是通过其他受体及通路进行介导的.     

大鼠变应性鼻炎鼻黏膜中脑源性神经营养因子mRNA的表达

目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)在大鼠变应性鼻炎发病中的作用。方法:选健康SD大鼠30只,雌雄不限,随机分为实验组20只,对照组10只。实验组用卵清蛋白行腹腔注射基础致敏,继之鼻局部激发建立大鼠变应性鼻炎模型;对照组以生理盐水代替卵清蛋白。采用RT-PCR方法检测实验组和对照组大鼠鼻黏膜中BDNF mRNA的表达。结果:实验组大鼠鼻黏膜中BDNF/β-actin(内参照)为0.49±0.07,对照组大鼠鼻黏膜中BDNF/β-actin(内参照)为0.28±0.01,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:BDNF在大鼠变应性鼻炎的发病中具有重要作用。     

变应性鼻炎患者外周血中神经营养因子mRNA的表达

目的：检测变应性鼻炎（AR）患者外周血中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、神经营养蛋白-3（NT-3）mRNA的表达水平,分析基因表达与AR病情严重程度的关系。方法：采用成组对照试验,抽提AR患者外周血总RNA,以正常成年人为对照。使用实时定量RT-PCR检测NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达水平,2-△△Ct法计算AR患者基因表达的变化倍数。结果：相较于正常成年人,AR患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的2-△△Ct值依次为2.436 8、4.458 8、1.781 8;NT-3mRNA表达的2-△△Ct值随着AR严重程度加重呈递增趋势。结论：AR患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达量上调,可能与AR的发病有关;NT-3可作为评价AR严重程度的分子生物学指标。     

脑源性神经营养因子与睡眠呼吸暂停综合征的相关性

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSA HS）是一种严重危害人类健康的慢性睡眠呼吸疾病,可累及心血管、神经、代谢及内分泌等全身多个系统及器官,引起一系列的并发症。脑源性神经营养因子（B DNF）是由脑组织合成的一种蛋白质,在神经营养因子家族中含量最多、分布最广,近年来研究较多。越来越多证据表明,B DNF在OSA HS很多并发症中表达常有异常。论文总结最新的研究成果,对B DNF在OSA HS并发的多个系统及器官疾病中的可能作用机制进行综述,为后续研究拓宽可能存在的线索。     

脑衍生的神经营养因子及其受体trk B在老年性大鼠耳蜗中的表达

目的：探讨脑衍生的神经营养因子（BDNF）及其受体trk B在老年性大鼠耳蜗中的表达。方法：采用实时定量PCR的方法对正常老年大鼠（老年非耳聋组）与老年性耳聋大鼠（老年耳聋组）及非老年正常大鼠（对照组）耳蜗组织中的BDNF和trkB mRNA表达进行定量分析。结果：定量分析结果显示，老年耳聋组耳蜗神经元和毛细胞中BDNF的表达比对照组明显减少（P＜0．01）；老年非耳聋组BDNF的表达与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。表达于神经元的trk B在老年耳聋组、老年非耳聋组和对照组差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论：老年性大鼠耳蜗中BDNF的表达与老年性大鼠耳聋的发病机制可能密切相关。     

脑源性神经营养因子和神经生长因子对顺铂诱导的内耳毒性的保护作用

目的研究豚鼠耳蜗内脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经生长因子(nerve growthfactor,NGF)在顺铂致耳中毒后的表达,并探讨其对内耳的保护作用。方法将豚鼠分成对照组、顺铂组,分别给生理盐水、顺铂腹腔注射,于注射后3、5、7天取豚鼠耳蜗行石蜡切片,进行BDNF和NGF免疫组织化学染色,观察螺旋神经节BDNF和NGF蛋白表达。结果对照组耳蜗螺旋神经节细胞中BDNF几乎不表达,NGF呈中度阳性表达。顺铂组BDNF在3天时达到高峰,以后减弱;NGF在5天时达到高峰,以后减弱。结论正常豚鼠耳蜗有中度NGF的表达,表明NGF可能对内耳的正常生理功能起重要作用。顺铂干预后螺旋神经节BDNF和NGF出现高表达,提示BDNF和NGF对顺铂诱导的螺旋神经元损伤有保护作用。     

17-AAG联合EGCG对人鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究

目的　研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）单药或联合使用对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法　MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果　①17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关（P＜0.01）;两者联合抑制作用显著增 加,且表现出时间、剂量依赖性（P＜0.01）。②RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论　17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。     

Parkin基因在鼻咽癌中转录表达及临床意义

目的　研究Parkin基因在鼻咽癌中转录表达及临床意义。方法　运用半定量逆转录PCR的方法检测54例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽上皮组织Parkin基因转录表达 水平,分析Parkin基因转录表达与鼻咽癌患者临床病理特征关系。结果　54例鼻咽癌组织Parkin基因相对转录表达水平为0.3430±0.4947,16例正常鼻咽上皮组织Parkin基因相对转录表达水平为1.0052±0.4911,鼻咽癌组织Parkin转录表达明显下调,Parkin基因转录表达与患者年龄、性别、T分级、TNM分期、病理类型无明显关系,而与淋巴结转移有关。结论　Parkin在鼻咽癌的发生发展中起抑癌基因作用,Parkin基因转录表达可作为判断鼻咽癌临床预后预测指标。     

热休克蛋白27与NF-κBp65在喉鳞状细胞癌中的基因表达及临床意义

目的研究热休克蛋白27（heat shock protein27,HSP27）及核因子NF-κBp65（NF-κBp65）在喉癌及癌旁组织中基因表达水平,并探讨两者与喉癌临床病理因素的相关性。方法采用RT-PCR方法分别检测HSP27 mRNA和NF-κBp65 mRNA在喉癌组织及癌旁组织中的表达水平,并统计两者与喉癌不同临床病理因素的关系。结果 HSP27 mRNA和NF-κBp65 mRNA分别在喉癌组织中的表达高于癌旁组织,两基因与喉癌不同病理分型有相关性,与临床分期及有无淋巴结转移无关,且NF-κBp65 mRNA和HSP27 mRNA在喉癌中呈负相关性（r=-0.4367,P〈0.05）。结论 HSP27 mRNA和NF-κBp65mRNA表达水平随喉癌恶性程度的增高HSP27 mRNA表达量逐渐下降,而NF-κBp65 mRNA表达量逐渐升高,推测HSP27在人喉癌中可能负性调节NF-κB信号传导通路,HSP27有望成为喉鳞癌基因治疗新的作用靶点。     

鼻咽癌细胞株C666-1细胞中酪氨酸激酶受体B的表达与抗失巢凋亡的关系

目的 探讨酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)对鼻咽癌细胞系C666-1失巢凋亡特性的影响和调控.方法 用反转录聚合酶链反应(PT-PCR)以及蛋白质印迹法检测培养的C666-1细胞中TrkB以及其配体脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达.采用TrkB的抑制剂K252a以及其配体BDNF分别作用于C666-1细胞,采用软琼脂集落形成实验观察细胞的集落形成能力以及悬浮培养后用活细胞计数kit-8(cell counting kit-8,CCK-8)法和膜联蛋白V碘化丙啶(annexin V-propidium iodinate,Annexin V-PI)双染色法检测对细胞的增殖和凋亡的影响.通过蛋白质印迹法观察TrkB、BDNF、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(serine threonine kinase,Akt)等蛋白在实验前后的表达变化的情况.结果 培养的C666-1细胞表达TrkB及BDNF.C666-1细胞受K252a作用后在软琼脂中集落细胞数减少,而在BDNF作用下集落细胞数增加.在悬浮培养状态,K252a对C666-1细胞的增殖具有抑制作用,经K252a作用后C666-1细胞的TrkB表达下调,并同时下调磷酸化的Akt蛋白(p-Akt);而BDNF作用后,内源性BDNF表达增强,且TrkB和p-Akt的表达上调.结论 TrkB具有抑制鼻咽癌细胞C666-1失巢凋亡的作用,K252a能够抑制TrkB的表达从而诱导凋亡,是具有潜力的酪氨酸激酶抑制剂.     

VIL-10下调鼻咽癌细胞TAP-1基因表达的研究

目的研究VIL-10对鼻咽癌细胞株TAP-1表达的影响。方法收集在不同时间不同浓度VIL-10处理的鼻咽癌细胞,RT-PCR检测TAP-1的表达。结果①10 ng/mlVIL-10处理的CNE-1、CNE-2和N-2-BMI-1细胞株在24、48 h时TAP-1表达无明显变化;②100 ng/ml VIL-10处理的CNE-1、CNE-2和N-2-BMI-1细胞株在24 h时TAP-1表达明显减弱。结论 100 ng/ml VIL-10在24 h可明显抑制TAP-1表达,EB病毒在鼻咽癌免疫抑制过程中起一定作用。