尼美舒利对脱氧胆酸诱导的HT-29人结肠癌细胞增殖的抑制作用的研究

目的观察尼美舒利对脱氧胆酸(DCA)诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖的抑制作用,探讨其可能的机制。方法200μmol/L DCA加到HT-29细胞培养液中,同时给予不同浓度尼美舒利(50、75、100μmol/L),采用MTT法测定细胞增殖;RT-PCR法检测环氧合酶-2(COX-2)mRNA,免疫组化染色法检测细胞COX-2表达,放免法检测前列腺素E2(PGE2)含量。结果DCA作用HT-29细胞6h,COX-2蛋白表达阳性率较对照组明显升高〔(64.2±6.2)%或(7.1±1.9)%〕,PGE2合成增加〔(23.9±1.3)ng/L或(10.5±0.9)ng/L〕,尼美舒利对DCA诱导的HT-29细胞作用6h可抑制细胞增殖,并可抑制DCA诱导的COX-2mRNA表达,抑制PGE2合成,上述作用均呈浓度-时间依赖性。结论尼美舒利可抑制DCA诱导的HT-29人结肠癌细胞增殖,抑制COX-2 mRNA表达和蛋白表达及PGE2合成,这可能是尼美舒利抑制HT-29细胞增殖的机制之一。     

尼美舒利对人结肠癌细胞生长的抑制作用及对E-钙粘蛋白表达的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞生长及E-cad表达的作用.方法以人结肠癌细胞株HT-29,HCT-116为研究对象,体外药物敏感实验(MTT)法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应;应用免疫组化S-P方法检测尼美舒利作用前后细胞E-cad表达的变化.结果尼美舒利对人结肠癌细胞HT-29、HCT-116生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性方式,对HT-29细胞抑制效果强于HCT-116细胞.尼美舒利上调HT-29细胞E-cad表达,而对HCT-116细胞E-cad的表达无显著差异.结论尼美舒利可明显抑制COX-2表达阳性的结肠癌细胞HT-29生长,同时提示尼美舒利可能通过抑制COX-2酶活性而上调肿瘤细胞E-cad的表达,从而降低增癌细胞播散及转移机率.     

两种非甾体类抗炎药抑制结肠癌细胞增殖的机制

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利与非选择性COX-2抑制剂舒林酸对结肠癌细胞株LOVO生长的影响,探讨其可能的机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察两药对结肠癌细胞增殖的抑制,流式细胞仪(FCM)分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响,放免法分析其对PGE2的影响。结果:MTT显示尼美舒利、舒林酸均能抑制LOVO细胞的增殖,呈剂量和浓度依赖性。FCM显示两药均能促进细胞的凋亡,并能使G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低,与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。上清中PGE2表达水平呈剂量依赖性下调。结论:尼美舒利、舒林酸可抑制结肠癌细胞株LOVO的生长,促进其凋亡,其机制可能与其阻止细胞周期的进展,抑制COX-2的活性及PGE2的合成有关。     

选择性环氧化酶-2抑制剂NS-398抗结肠癌机制及对5-氟尿嘧啶化疗的辅助作用

目的 研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398的抗结肠癌作用机制及其在5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗中的辅助作用。方法 (1)用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测结肠癌HT-29、SW480细胞COX-2 mRNA表达后,将NS-398作用于两株细胞,用ELISA法测定前列腺素E2(PGE2)水平。(2)将NS-398、5-Fu、NS-398 5-Fu分别作用于两株细胞,24、48和72h后用MTT法检测细胞增殖状态。以流式细胞技术观察药物对细胞凋亡的影响。结果 (1)HT-29细胞中COX-2 mRNA呈高表达,NS-398作用后PGE2表达水平明显降低;SW480细胞中COX-2 mRNA表达呈阴性,NS-398作用后PGE2水平无明显变化。(2)NS-398、5-Fu呈剂量依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡;NS-398 5-Fu抗增殖的作用较单一用药时更明显,而凋亡诱导作用与单一用药差异无显著意义。结论 选择性COX-2抑制剂NS-398具有抗结肠癌作用;NS-398抗结肠癌作用可能不依赖于COX-2和PGE2的表达水平;NS-398与5-Fu具有协同的抗增殖作用。     

环氧合酶-2小分子干扰RNA对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究环氧合酶-2(COX-2)小分子干扰RNA(siRNA)对COX-2高表达的人结肠癌细胞的增殖和凋亡的影响.方法 筛选出最佳的靶向COX-2 siRNA转染人结肠癌HT-29细胞,采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)Western印迹分别从mRNA和蛋白水平检测抑制效果,四甲基偶氮唑蓝(MTT)和Hoechst染色检测COX-2表达被抑制后细胞增殖和凋亡的情况.结果 COX-2 siRNA能在mRNA和蛋白水平下调人结肠癌细胞株HT-29中COX-2基因的表达(P＜0.05),以转染72 h时最显著.COX-2表达被抑制后,转染后72 h时HT-29细胞生长受到明显抑制(P＜0.05),凋亡细胞显著增加.结论 COX-2与结肠癌细胞的生长和凋亡密切相关,抑制结肠癌细胞中COX-2表达可抑制结肠癌细胞生长,促进结肠癌细胞凋亡.     

尼美舒利对人宫颈癌Hela细胞株的抑制作斥及其机制研究

目的探讨尼美舒利体外抗宫颈癌的活性及相关机制。方法采用体外培养的Hela细胞株为研究对象,MTT法检测尼美舒利对Hela细胞的抑制率．倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变,Westernblot检测细胞凋亡关键蛋-环氧化酶-2（COX-2）、Caspase-3的表达变化。结果尼美舒利可显著抑制Hela细胞增殖,形态学观察发现尼美舒利可诱导肿瘤细胞凋亡;尼美舒利还可抑制Hela肿瘤细胞COX-2表达,引发Caspase-3促凋亡蛋白Caspase-3高表达。结论尼美舒利具有明确的抑制宫颈癌细胞的作用,其机制之一可能是通过抑制COX-2引发肿瘤细胞的凋亡。     

尼美舒利对氯化钴诱导的BGC-823细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的:研究选择性COX-2抑制剂尼美舒利对低氧模拟剂氯化钴诱导的胃癌细胞株BGC-823 HIF-1α、VEGF表达的影响.方法:分别应用150μmol/L氯化钴单独或联合10μmol/L、40 μmol/L、80μmol/L的尼美舒利作用于BGC-823细胞24 h,收集细胞,应用RT-PCR和Western blot技术检测HIF-1 α及VEGF的表达.以胎牛血清加RPMI 1640培养基培养细胞作正常对照.结果:与正常对照组比较,150μmol/L氯化钴刺激24 h,可显著提高细胞HIF-1 α蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表达(P＜0.01),但对HIF-1α mRNA表达无影响.与氯化钴单独作用比较,尼美舒利和氯化钴联合作用24 h,细胞HIF-1 α蛋白、VEGF mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01),并呈剂量依赖性,但对HIF-1α mRNA表达无影响.结论:COX-2抑制剂尼美舒利可抑制氯化钴诱导的HIF-1α、VEGF表达,这可能是其抗肿瘤血管生成的机制之一.     

尼美舒利对人结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响。方法以人结肠癌细胞株HT-29、HCT-116为对象,用体外药物敏感实验（MTT）法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布变化情况。结果（1）尼美舒利对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,且对HT-29细胞作用强于HCT-116细胞;（2）尼美舒利可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布,明显降低增殖指数。结论尼美舒利可通过抑制COX2酶活性而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖,诱导其凋亡,干预结肠癌的发展。     

尼美舒利、阿司匹林对COX-2不同表达水平的食管鳞癌细胞株的抑制作用

目的比较选择性和非选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法选取食管鳞癌细胞株EC109和TE-1,采用Western blotting法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增生以及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡(PI标记),观察阿司匹林及尼美舒利对2株细胞增生、凋亡的作用。结果 Westernblotting结果显示,EC109细胞表达COX-2,TE-1细胞不表达COX-2。选择性COX-2抑制剂———尼美舒利可抑制EC109细胞的增生,抑制率为(17.5±3.3)%~(80.1±3.9)%。尼美舒利仅在0.4 mmol/L时对TE-1细胞有抑制作用,抑制率为(16.2±7.0)%。尼美舒利可使EC109细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。非选择性COX-2抑制剂———阿司匹林在0~4 mmol/L浓度区间对EC109和TE-1均有抑制作用,并呈剂量依赖关系。阿司匹林作用后,EC109与TE-1的细胞周期均被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率分别为(10.55±0.01)%及(8.52±6.65)%。结论食管鳞癌(esophagealsquamous cell carcinoma,ESCC)细胞株中COX-2的表达水平影响了选择性COX-2抑制剂的抑制作用,而对非选择性COX-2抑制剂影响较小。阿司匹林可能通过非COX-2依赖途径从而发挥对肿瘤的抑制作用。     

尼美舒利对三阴性乳腺癌干细胞体外增殖和凋亡的影响

目的体外研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对三阴性乳腺癌(TNBC)干细胞体外增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中分别加入不同浓度的尼美舒利,作用24、48、72 h后,应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,电镜观察细胞形态,Western blot法检测Cox/Bax/Bcl-2蛋白表达。结果尼美舒利能显著抑制TNBC干细胞增殖,呈时间和浓度依赖性;并使G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,引起明显的细胞凋亡。电镜可见典型的细胞凋亡形态学特征:细胞体积缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量依赖。Western blot分析显示,尼美舒利作用细胞后,随着浓度的增加细胞COX-2和Bcl-2表达水平降低,但Bax表达水平增高。结论尼美舒利体外能够显著抑制TNBC干细胞增殖,诱导其凋亡,COX-2、Bcl-2及Bax等凋亡相关基因可能参与了尼美舒利诱导的TNBC干细胞凋亡过程。     

延龄草总皂苷抑制结肠癌细胞增殖作用及机制研究

目的观察延龄草总皂苷对结肠癌细胞HT-29、SW-620的增殖、环氧合酶2（cyclooxygenase 2,COX-2）表达与功能及β-连环素（β-catenin）表达的影响。方法培养结肠癌细胞HT-29与SW-620,加入不同浓度的延龄草总皂苷（0～300.00mg/L）,采用四甲基偶氮唑盐（microculture tetrazolium,MTT）比色法,观察延龄草总皂苷对HT-29、SW-620增殖的影响,以蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中COX-2、COX-1和β-catenin蛋白的表达,以酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测细胞培养液中前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）的浓度。结果延龄草总皂苷可有效抑制HT-29、SW-620的增殖,其IC50分别为：（9.87±1.15）mg/L,（36.63±1.07）mg/L。延龄草总皂苷可剂量依赖性地降低COX-2、β-catenin的表达和PGE2的浓度。结论延龄草总皂苷可有效抑制结肠癌细胞HT-29、SW-620增殖,可能机制为其降低了COX-2的表达及功能与β-catenin的表达。     

选择性及非选择性COX-2抑制剂对结肠癌细胞生长的影响

目的探讨选择性及非选择性环氧合酶-2（cylooxygenase-2,COX-2）抑制剂对体外培养的结肠癌细胞生长的影响及凋亡的诱导作用。方法体外培养HT-29、SW480及LS174-T三种结肠癌细胞,分别加入不同浓度的非选择性COX-2抑制剂阿司匹林（aspirin）、选择性COX-2抑制剂塞来昔布（celecoxib）及美洛昔康（meloxicam）作用于HT-29及SW480细胞。采用MTT法检测结肠癌细胞增殖;用免疫细胞化学法及免疫印迹技术分别检测结肠癌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）及细胞COX-2的表达;流式细胞技术分析对结肠癌细胞周期的影响;用Annexin V／PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果aspirin、celecoxib及meloxicam均能有效抑制体外培养的HT-29、SW480结肠癌细胞生长,并具有良好的量-效关系。Western blot表明,HT-29细胞表达COX-2,而SW480细胞不表达COX-2。Aspirin及celecoxib处理组细胞PCNA表达较对照组明显下调。10mmol／L的aspirin及50μmol／L的celecoxib能诱导HT-29及SW480细胞凋亡,凋亡率分别为4．8％,17．7％;5．1％,20．4％。结论选择性及非选择性COX-2抑制剂均能有效抑制结肠癌细胞生长,这种作用亦存在于COX-2阴性表达的结肠癌细胞。     

联合索拉非尼与TRAIL对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的:研究多激酶抑制剂甲苯磺酸索拉非尼(SOR)是否具有增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析亚二倍体(sub-G1)细胞百分率。比色法测定细胞Caspase-3活性。AO/EB双染色荧光显微镜观察凋亡细胞形态。结果:SOR(5μmol/L)和TRAIL(100ng/mL)以及两者合用作用48小时HT-29细胞的sub-G1百分率分别是4.65%±2.33%、5.29%±2.80%和42.6.50%±4.65%;HT-29细胞的Caspase-3的活性分别是培养基组的1.24、1.37和9.51倍。两者合用展示出细胞核染色质固缩和碎裂的典型凋亡细胞形态。结论:亚细胞毒性浓度的SOR具有增强TRAIL诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。     

EGCG抑制结肠癌HT-29细胞生长及血管生成的作用机制

目的   探讨表没食子儿茶素没食子酸酯( EGCG )对人结肠癌细胞HT-29生长的影响及抑制血管生成的相关机制。方法   EGCG（0、25、50、100μg /mL）作用于结肠癌细胞株HT-29 24h后, 采用MTT法检测EGCG对HT-29细胞生长的作用,应用RT-PCR及Western blot分别检测EGCG干预前后HT-29结肠癌细胞中TGFβ1、 15-PGDH、COX-2、VEGFmRNA及蛋白的表达情况。结果   MTT显示EGCG抑制HT-29细胞的生长,并随着浓度的增加及时间的延长抑制作用逐渐增强（P＜0.05）; TGF-β1、15-PGDH mRNA及蛋白表达量随着EGCG 浓度的增加而增加,COX-2、VEGF mRNA及蛋白表达量随着EGCG 浓度的增加而下降(P<0.05) 。结论   EGCG呈浓度及时间依赖性抑制HT-29细胞的增殖,可能通过诱导HT-29细胞中TGF-β1、15-PGDH, 抑制COX-2、VEGF mRNA及蛋白表达预防结肠癌的血管生成。     

罗格列酮体外抗结肠癌作用的实验研究

目的探讨罗格列酮（Rosiglitazone,ROZ）体外抑制结肠癌生长的作用。方法体外培养人结肠癌细胞HT-29,不同浓度ROZ（10、20、40、80μmol／L）干预。MTT法测定细胞增殖,透射电镜、TUNEL法及流式细胞术观察细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测各组细胞中Bax及Bcl-2的表达。结果MTT法显示ROZ抑制HT-29细胞生长,且具有时间和浓度依赖性,透射电镜、TUNEL法及流式细胞术可观察到ROZ具有诱导结肠癌细胞凋亡的作用,免疫组化法显示经ROZ处理后的结肠癌细胞Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱。结论ROZ体外具有抑制结肠癌细胞生长的作用,与其诱导细胞凋亡有关,可能通过增强Bax的表达及减弱Bcl-2的表达实现。     

蟾蜍毒素诱导结肠腺癌细胞HT-29凋亡中对相关蛋白的影响

目的 探讨蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡及其机制.方法 MTI检测蟾蜍毒素对结肠腺癌细胞HT-29增殖抑制;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞凋亡;Western-Blot检测livin、Bcl-2、Bax及Capase-3蛋白的表达.结果 蟾蜍毒素抑制HT-29细胞增殖,呈时间、剂量依赖关系;蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡,形态学观察到典型的凋亡小体;流式细胞仪检测到明显亚二倍体凋亡峰;蟾蜍毒素诱导细胞凋亡过程中下调livin、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,并活化Caspase-3蛋白.结论 蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡可能与下调livin、Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白表达并活化Caspase-3有关.