p14ARF基因通过p53途径对肝癌细胞的生长的影响

目的　探讨 p14 ARF对含有野生型 p5 3(wtp5 3)的肝癌细胞生长的影响及其作用机制。方法　将含p14 ARF的基因转染到人肝癌细胞HepG2中 ,通过流式细胞仪及生长曲线观察其对HepG2细胞周期及细胞生长的影响。利用Western Blotting方法及 p2 1waf1启动子荧光素酶活性检测p14 ARF对HepG2细胞 p5 3蛋白表达的影响。 结果　转染p14 ARF基因的HepG2细胞的生长速度从第 3天开始较空载体 pcDNA 3组减慢 ,处在G0 G1期细胞数 ( 70 .6 6 % )与空载体组 ( 6 1.5 5 % )相比明显增加 ,转染 pcDNA3p14 ARF( 1.0 92 3± 0 .0 370 ) p2 1waf1启动子荧光素酶活性较空载体组( 0 .76 73± 0 .0 180 )明显升高 ( P <0 .0 5 )。Westernblotting结果表明 ,p5 3表达也明显增加。 结论p14 ARF基因通过上调HepG2细胞的 p5 3表达导致 p2 1waf1的表达升高使细胞阻滞于G0 G1期 ,从而抑制细胞的生长。     

导入野生型p53基因对人胶质瘤细胞生长及化疗敏感性的影响

目的 研究野生型p53基因对人胶质瘤细胞生长及化疗敏感性的影响。方法 将载有野生型p53基因的表达质粒PC53-SN3导入U251细胞。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测p53基因在转染细胞中的表达,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和流式细胞仪检测p53基因对U251细胞生长抑制及凋亡的影响以及它与顺铂联合作用后的效果。结果 通过RT-PCR证实了野生型p53基因在U251细胞中的表达。MTT检测发现p53基因对U251细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率为(79.60±5.69)％。顺铂对 U251细胞的抑制作用随着顺铂浓度的增加(1、2、4、8 mg/L)而增强,抑制率分别为(19.40±6.69)％、(24.41±2.68)％、(51.84±13.38)％、(66.22±5.02)％,但不如 p53基因的抑制作用强。当野生型 p53基因与顺铂联合作用于 U251细胞时,抑制率明显增加,分别为(91.64±1.00)％、(94.98±1.67)％、(95.32±2.01)％、(95.65±1.00)％。p53基因转染所产生的 U251细胞凋亡率为 17.38％。顺铂引起的细胞凋亡率随着顺铂浓度的增加(1、2、4、8mg/L)而增加,分别为5.71％、5.93％、6.27％、6.81％。当p53基因与不同浓度的顺铂(1、2、4、8mg/L)联合作用于U251细胞时,凋亡率也明显增加,分别为23.50％、23.54％、23.89％、28.88％。结论 野生型p53基因与     

线粒体融合素基因2联合氟尿嘧啶对肝癌细胞的作用

目的研究线粒体融合素基因2(mfn2)转染联合氟尿嘧啶对肝癌细胞的作用。方法用脂质体2000将质粒pEGFPmfn2、空质粒pEGFP N2分别转染HepG2细胞,实验分三组:重组质粒pEGFPmfn2转染HepG2细胞为实验组,空质粒pEGFP-N2转染HepG2细胞为阴性对照组,HepG2细胞为空白对照组。RT-PCR和Western Blot分别检测转染后各组细胞mRNA和蛋白水平的表达。采用MTT法检测mfn2基因转染联合5-氟尿嘧啶对肝癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测转染后细胞周期的分布情况。结果经脂质体2000转染后,RT-PCR结果显示转染mfn2基因的HepG2细胞基因组中存在有目的基因特异性片段,表明转染成功;Western Blot检测结果表明转染后细胞中有Mfn2蛋白表达;流式细胞术对细胞周期分布检测的结果表明,细胞被阻滞在G0/G1期,转染pEGFPmfn2组G0/G1期所占比例为(83.2±1.5)%,明显高于转染空质粒pEGFP组与对照组G0/G1期所占比例(P<0.05)。MTT法检测结果提示转染mfn2基因的HepG2细胞可增强化疗药物氟尿嘧啶对细胞的增殖抑制作用。结论线粒体融合素基因2联合氟尿嘧啶作用肝癌细胞能够加强氟尿嘧啶的增殖抑制作用,明显增强肝癌细胞对氟尿嘧啶的敏感性。     

乙型肝炎病毒x蛋白对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白 (hepatitisBvirusxprotein ,HBx)在体内外对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带HBx基因的表达质粒 pHA HBx转染HepG2细胞 ,通过检测细胞生长曲线、倍增时间和3 H TdR掺入率观察HBx对细胞增殖活性的影响 ;将整合HBx基因的HepG2细胞接种裸鼠 ,建立表达HBx的人肝癌裸鼠模型 ,用阿霉素进行裸鼠腹腔化学药物治疗 ,观察肝癌组织的生长状况 ;用TUNEL方法检测切除的裸鼠癌标本中凋亡细胞的比例。结果转染HBx基因的HepG2细胞倍增时间为 2 8 5h ,对照组为 32 5h ;3 H TdR掺入率 :转染HBx基因组为 (10 2 1± 78)cpm ,对照组为 (85 9± 6 9)cpm ,转染组细胞明显高于对照组细胞 (t =2 5 4 ,P <0 0 1) ;转染HBx基因的细胞在裸鼠体内形成的癌重量为 (3 10± 0 39) g ,对照组癌重量为 (2 6 1± 0 2 8) g ,两组之间差异有显著意义 (t=2 0 3,P <0 0 5 ) ;裸鼠腹腔化学药物治疗后 ,转染组的癌细胞凋亡为 3 5±0 75 ,对照组为 2 2 5± 6 5 ,转染HBx基因的细胞凋亡明显减少 (χ2 =6 6 9,P <0 0 1)。结论HBx可以提高HepG2细胞的增殖活性 ,促进裸鼠体内肝癌生长 ,对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡具有抑制作用。     

胆管癌抗原肽对转染全长野生型p53的树突状细胞免疫功能的影响

目的研究胆管癌抗原肽对转染全长野生型p53的树突状细胞(wtp53DC)免疫功能的影响。方法先将全长野生型p53导入脂质体内并转染小鼠骨髓来源的DC,然后用胆管癌抗原肽修饰wtp53DC,检测这种树突状细胞的抗原提呈功能。结果抗原肽修饰的wtp53DC和单纯DC的上清3种细胞因子含量明显增加,分别为(545.2±12.1)ng/L,(511.1±13.3)ng/L,(537.1±11.1)ng/L(P<0.05);wtp53DC刺激小鼠脾脏T细胞增殖水平明显高于对照组(P<0.01);该细胞高表达B7-1、B7-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ(P<0.05);能够特异性地杀伤胆管癌细胞,杀伤率81.6%。结论全长野生型p53基因转染+胆管癌抗原肽联合修饰树突状细胞能诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞的特异性。     

RhoC基因对肝癌细胞促血管生长因子表达的影响

目的:观察RhoC基因对肝癌HepG2细胞表达促血管生长因子（VEGF，bFGF）的影响。 方法:将pcDNA3.1-RhoC重组质粒和空载体pcDNA3.1转染HepG2细胞，用RT-PCR及免疫组化检测HepG2细胞的RhoC mRNA及RhoC蛋白表达情况;RT-PCR及免疫组化检测HepG2细胞VEGF和bFGFmRNA及蛋白的表达。将转染pcDNA3.1-RhoC重组质粒和空载体pcDNA3.1的HepG2细胞接种裸鼠，观察肿瘤的成瘤率。结果:与转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞相比，转染pcDNA3.1-RhoC重组质粒的细胞表达RhoC mRNA及RhoC 蛋白增强，其表达VEGF和bFGFmRNA及蛋白明显增强（P＜0.01）;重组质粒转染组成瘤率高于空载体组。结论:RhoC表达可促进HepG2细胞表达血管内皮生成因子。RhoC可促进肝癌细胞分泌促血管生长因子，可能是促进肝癌侵袭、转移的机制之一。     

GADD45β基因表达诱导对不同p53状态的肝癌细胞作用

目的：体外合成GADD45β基因全序列表达质粒后，研究GADD45β基因表达诱导对呈不同p53状态的肝癌细胞的作用及可能机制。方法：采用RT-PCR法获得GADD45β基因全序列，插入pDrive穿梭克隆载体和pIRES2-EGFP荧光表达载体后大量扩增获得DNA，结合p53全基因表达质粒pp53-EGFP转染HepG2、Hep3B细胞后，以[^3H]胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法(^3H—Tdr)和细胞克隆形成法分析DNA合成变化及细胞生长能力；以双抗体夹心ELISA法测定TGF-β1表达变化。结果：成功合成GADD45β基因全序列和表达质粒，通过流式细胞仪收集转染阳性的荧光表达细胞能显著提高转染效率；转染GADD45β后．具有野生型p53基因的HepG2细胞的细胞克隆形成能力和DNA合成能力明显受到抑制，细胞凋亡明显增加，TGF-β1的表达亦明显受抑。与之相反，缺失p53基因的Hep3B需要同时共转染p53基因后，方出现抑制效应。结论：GADD45β基因能够有效抑制肝癌细胞的生长．其功能需要完整p53基因的辅助和(或)调控。GADD45表达和（或)功能异常，导致p53介导的DNA损伤修复途径异常或阻断，是肝脏细胞恶性转化及形成肿瘤的可能机制。     

p16基因对大鼠肝癌生长抑制作用的研究

1 .材料与方法 :大鼠肝癌细胞系CBRH 7919来自中科院上海细胞生物研究所。Wistar大鼠 30只 ,体重 (15 0± 2 0 )g ,雌雄不限 ,购自天津市医学实验动物中心。pcDNA3 0 /p16真核表达质粒转染CBRH 7919细胞后MTT法检测细胞增殖 ;流式细胞仪检测细胞周期 ;双层软琼脂培养观察细胞克隆形成能力 ;大鼠原位肝癌基因治疗观察其体内成瘤能力。结果用统计软件SPSS行t检验。2 .结果 :(1)重组质粒转染CBRH 7919细胞P16蛋白免疫组化显示有P16蛋白表达。 (2 )流式细胞仪分析pcDNA3 0 /p16质粒转染 7919细胞细胞周期结果 (表 1)。 (3)双层软琼…     

雌激素受体β1上调p53基因表达促进乳腺癌细胞的凋亡

目的观察外源性雌激素受体β1(estrogen receptor β1,ERβ1)基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后对p53基因表达和细胞凋亡的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别用荧光实时定量PCR法、Western blot法检测转染前、后细胞中ERβ1与p53 mRNA和蛋白表达的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞生长曲线显示转染前、后细胞增殖能力的改变。结果转染外源性ERβ1真核表达质粒后,MDA-MB-231细胞中ERβ1及p53 mRNA和蛋白表达明显增强(P0.01);细胞凋亡率明显增加(P0.01),增殖能力明显减弱(P0.01)。结论在乳腺癌中,ERβ1可以通过上调p53基因表达促进乳腺癌细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。     

重复加热对肝癌HepG2细胞增殖周期及bcl-2的影响

目的探讨多次热疗后残存的肝癌HepG2细胞增殖速度变化及其相关的可能原因。方法HepG2细胞43℃加热，每次80min，2次／d，10个循环，分析细胞倍增时间，检测细胞周期及bcl-2 mRNA及bax mRNA的表达。结果热处理后的HepG2细胞增殖加快，细胞周期中G2期和S期细胞的比率增高，bcl-2 mRNA的表达增强，bcl-2／bax比值增大。结论热处理后的HepG2细胞的增殖加快与其完成DNA复制而进入分裂的细胞比率高、抗凋亡基因bcl-2mRNA的强表达及bcl-2／bax比值的增加有关。     

凋亡相关基因 bcl-2、bax、bad与乳腺癌

目的探讨乳腺癌发生、发展过程中bcl-2、bax及bad基因表达水平变化及与乳腺癌其他生物因素的相关性。方法复习国内、外相关文献并进行综述。结果在从正常乳腺组织到乳腺癌逐渐演化的过程中凋亡抑制基因bcl-2的表达水平变化尚有待进一步研究,而凋亡促进基因bax、bad的表达水平呈递减趋势。bcl-2基因表达水平与乳腺癌中一些公认的正性因子如雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)呈正相关,与其他一些负性因子如p53、表皮生长因子受体、c-erbB-2、腋窝淋巴结转移情况等呈负相关。bax基因的表达水平与乳腺癌ER、PR水平以及p53表达水平等无关。对于bad基因与乳腺癌其他生物因素的相关性尚未见报道。结论乳腺癌中bcl-2基因表达水平的变化对乳腺癌预后以及治疗的作用尚存在争议,bad基因与乳腺癌预后的关系亦不清楚,而bax基因表达水平与乳腺癌的预后呈正相关。对于它们的研究将为我们评价乳腺癌的预后提供新的指标,为乳腺癌的治疗开辟新的思路。     

增生性瘢痕中凋亡相关基因转录的变化

目的　探讨凋亡相关基因bcl -2、bax、p5 3和c- myc在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因转录变化。方法　提取 16例不同发生时期的增生性瘢痕和 8例正常皮肤的总RNA后 ,分离mRNA ,用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测bcl- 2、bax、p5 3和c -myc基因在不同组织中的表达。结果　在增殖期的瘢痕中 ,凋亡促进基因bax、c- myc和 p5 3的表达量分别是正常皮肤的(62 .8± 14 .7) %、(78.0± 17.0 ) %和 (4 9.8± 4.3 ) % ,基因表达明显降低 (P <0 .0 5 ) ,而在成熟期的瘢痕中 ,这 3种基因的表达量都明显高于增殖期的瘢痕 ,恢复到正常皮肤水平。在正常皮肤中 ,bcl- 2基因表达水平较低 ,而在增殖期和成熟期的增生性瘢痕中表达量都显著升高 (P <0 .0 5 )。结论　bax、c- myc和 p5 3基因表达降低 ,bcl- 2基因表达增强可能是瘢痕中细胞凋亡减少 ,形成增生性瘢痕的机制之一 ,而bax、c- myc和 p5 3基因表达增强可能与瘢痕达到成熟状态有关。     

mdm2基因和P53基因在膀胱癌中预后的价值

用ｍｄｍ２基因单抗ＳＭＰ１４和抗Ｐ５３基因单抗ＤＯ－７对７０例原发性膀胱移行细胞癌（ＴＣＣ）标本进行免疫组织化学（ＩＨＣ－ＡＢＣ）检测。结果ｍｄｍ２基因蛋白核染色阳性表达率为４４．２９％（３１／７０）与肿瘤的分级，分期有关，而与肿瘤的生长方式无关，且复发或转移率较低（Ｐ〈０．０５），Ｐ５３基因蛋白总阳性表达率为４５．７１％（３２／７０），其中Ｇ３和Ｔ２－４肿瘤的Ｐ５３基因蛋白阳性表达率较高（Ｐ〈０     

抗凋零基因bcL—2在胆囊癌组织中的表达及意义

为研究抗凋零基因ｂｃＬ－２在胆囊癌组织中的表达，收集我院经病理确诊的４２例胆囊癌标本和１２例性性胆囊炎标本，采用免疫组化染色，探讨抗凋零基因ｂｃＬ－２在胆囊癌组织中的表达。结果显示４２例胆囊癌组织中，ｂｃＬ－２阳性者２４例（占５７％），表现为肿瘤细胞胞浆内呈棕黄色细颗粒，而１２例胆囊炎标本中，仅１例呈弱阳性，两组比较Ｐ＜０．０１。结果提示：胆囊癌组织中抗凋零基困ｂｃＬ－２具有高表达。本研究为进一步根据胆囊癌细胞凋零特点，通过改变其凋零表型治疗胆囊癌提供了理论依据。     

TFPI-2基因在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨TFPI-2基因在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集临床胃癌患者术后大体标本64例,采用免疫组织化学方法检测TFPI-2蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达,采用RT-PCR法检测TFPI-2 mRNA在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达。结果:TFPI-2蛋白在正常胃黏膜组织中的表达高于胃癌组织(P0.05),无淋巴结转移胃癌组织的TFPI-2蛋白表达高于有淋巴结转移的胃癌组织(P0.05)。TFPI-2 mRNA在正常胃黏膜组织中的表达明显高于胃癌组织(P0.05),无淋巴结转移胃癌组织的TFPI-2 mRNA表达高于有淋巴结转移的胃癌组织(P0.05)。结论:TPFI-2基因是胃癌发生、侵袭和转移的重要调节因子,其低表达与胃癌淋巴结转移的生物学行为密切相关。     

CDKN2基因的变异在人前列腺增生症中发病机制的研究

目的：研究抑癌基因CDKN2的突变、缺失在人前列腺增生症（BPH）病因中的作用机制。方法：用PCR-银染SSCP技术分析了20例正常前列腺组织和41例BPH中CDKN2基因纯合性缺失和突变的情况。结果：13例BPH有CDKN2基因缺失，总缺失率为31.6％：正常前列腺组织中有1例出现CDKN2基因缺失.缺失率为5％（P＜0.05）;无CDKN2基因的突变。结论：CDKN2基因的变异与BPH的发病机制有关，纯合性缺失是CDKN2基因在前列腺增生中主要灭活机制之一。     

hIL-2基因修饰人肝细胞的腹腔移植抗肿瘤作用

目的　探讨hIL 2基因修饰人肝细胞腹腔移植的抗肿瘤作用。方法　采用鼠尾胶原包裹转hIL 2基因人肝细胞并移植入癌性腹水型小鼠模型腹腔,观察移植 1、4、7、10 d后小鼠脾淋巴细胞的增殖反应、脾淋巴细胞杀伤活性、血清hIL 2浓度及移植小鼠生存期。结果　移植4 d后,小鼠血清hIL 2浓度达到(76 2±2 2) pg/ml,脾淋巴细胞的增殖反应 OD值和脾淋巴细胞杀伤活性达到峰值,分别为(0 674±0 046)%和(35 6±1 9)%,与对照组和 L 02 细胞移植组相比,差别均有非常显著意义(P<0 05);移植 L 02/IL 2 肝细胞的小鼠生存率显著高于对照组和 L 02 细胞移植组(P=0 0003)。结论　IL 2基因修饰肝细胞移植于腹腔,可上调淋巴细胞的增殖和杀伤功能,达到抗肿瘤的目的,对肝细胞结合转基因的应用研究有积极意义。     

胆囊收缩素对胆管癌细胞凋亡的调节作用及机制

目的 探讨胆囊收缩素（CCK）对胆管癌细胞凋亡的调节作用及机制。方法 采用TUNEL染色、定量RT-PCR和反义寡核苷酸技术分别研究CCK-8S对QBC939人胆管癌细胞系诱发性凋亡指数（AI）和bcl-2/bax mRNA表达的影响、以及bcl-2在CCK抑制凋亡中的作用。结果CCK-8S组 AI显著降低、bcl-2mRNA表达显著增强,同时加入CCK受体拮抗剂L364.718或L365.206可拮抗;反义bcl-2寡核苷酸转染能逆转CCK-8S对凋亡的抑制作用。结论CCK能提高凋亡阈值、抑制胆管癌细胞凋亡,其机制与上调bcl-2基因表达有关。     

抑癌候选基因Ndrg2在结直肠癌组织中的表达特点及意义

目的 探讨抑癌候选基因Ndrg2在不同分化级别结直肠癌组织中的表达特点,分析其调控结直肠癌细胞分化的意义.方法 收集50例不同分化级别结直肠癌组织标本,分别通过免疫组织化学染色及蛋白印迹分析检测Ndrg2的表达;以150点结直肠癌组织芯片大样本分析Ndrg2的表达特点.结合组织芯片相关病例信息进行统计学分析.结果 32例结直肠癌组织Ndrg2表达显著低于其自身癌旁组织及正常组织,癌旁组织中的表达也显著低于正常组织中的表达.组织芯片统计分析显示,不同分化程度结直肠癌组织Ndrg2的表达差异有统计学意义(P=0.005);而Ndrg2表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位、结直肠癌浸润深度、淋巴转移及UICC分期无关.结论 Ndrg2可能参与调控结直肠癌细胞的分化过程.