生物发光法测定红细胞三磷酸腺苷含量的优化与评价

生物发光(荧光素-荧光素酶)测定法是近年来应用较多的测定三磷酸腺苷(ATP)的方法，但其测定红细胞ATP时影响因素较多，本研究对该方法进行了优化和评价。     

ATP生物发光法预测白血病药敏的临床应用

本研究了31例白血病病人体外ATP生物发光法药敏试验和临床疗效的关系。24例体外敏感，20例体内敏感．敏感度83．3%，7例体外不敏感．6例体内亦无效，特异度85．7%。总符合率83.9%。体内外试验的配对资料一致性，检验表明，两有非常显的一致性(P<0．01)。阳性符合组与阴性符合组在体外试验药物敏感性上有显的差异。以上结果表明．ATP生物发光法药敏试验在预测白血病药敏方面具有简便、快速、敏感的优点，与临床有很好的符合性。     

用萤光素酶检测三磷酸腺苷作为定量卡介苗活力的方法

活菌计数是卡介苗(BCG)质量控制的一个重要项目,常规方法是用生物发光计数菌落形成单位(CFU),以测量BCG活力。本文报道用腺苷三磷酸双磷酸酶处理BCG,释放并提取三磷酸腺苷(ATP),然后用发光光度计检测。ATP是所有活细胞代谢的重要物质,在活细胞中ATP量相当恒定,但细胞死亡后ATP迅速缺失。因此测量ATP可作为估计活细胞数目的可靠依据。作者选用40批冻干BCG,每支安瓿装0.75mg、15mg、30mg     

用萤火虫生物发光反应快速检测BCG活菌数

经典的检测BCG活菌数的技术需时长,且需要复杂的培养基,生物发光反应是利用萤火虫荧光素酶测定细菌所含的ATP,作为计算活菌数的指标。从分枝杆菌提取ATP较困难,因此,作者比较了三种不同的提取方法(煮沸Tris/EDTA缓冲液、加热与氯仿处理相结合及丁醇提取)的效果。结果表明,正丁醇提取法最好。现将正丁醇提取法介绍如下:将ECG Moreau株的培养物制成悬液,按2和10倍稀释待用。取1ml此样品加入9ml 0.01M pH7.0的Tris缓冲液,然后取3ml此液加入3     

三磷酸腺苷生物发光法分析莪术油等中药抑制肝、胃癌细胞增殖活性的研究

目的 研究抗癌中药莪术油、华蟾素、龙葵碱与肝癌绌胞株SMMC7721、胃癌绌胞株NKM45作用后的ATP水平,探讨药物对瘤细胞增殖活性的抑制作用。方法 应用三磷酸腺苷生物发光法（ATP—BLA法）测定莪术油、华蟾素和龙葵碱与肝、胃癌细胞作用后的ATP含量,并与5-氟脲嘧啶（5-FU）的作用进行比较。结果 莪术油、华蟾素、龙葵碱与SMMC7721、NKM45作用后的ATP含量明蛀下降（P〈0．05～P〈0．01）;与5-FU作用后的ATP含量比较,无明显差异（P〉0．05）。结论 应用ATP—BLA研究抗癌中药对肿瘤细胞增殖活性的抑制作用,对于筛选抗肿瘤药物具有广阔的应用前景。     

急性白血病患者药物敏感性测定及临床意义

采用ATP生物发光法和MTT比色分析法同时测定13例AL患者对8种化疗药物的敏感性。各药对白血病细胞的抑制率，两法7种药物间的符合率为76．9～84．6％。DNR、H、MX、和Acla的抑制率＞40％，两法间无显著性差异。其中DNR抑制率最高，两法分别为68.42±26．76％和68．23±20．70％。生物发光法和MTT法检测的药物敏感性与临床疗效有较高的一致性，前者更为灵敏、可靠。     

磷酸三邻甲苯酯对母鸡中枢神经组织线粒体中ATP含量及ATPase的影响

目的观察磷酸三邻甲苯酯(tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)对母鸡中枢神经组织线粒体ATP含量及ATP合成酶(ATP synthase,ATPase)的影响,探讨有机磷化合物诱导迟发性神经毒性(organophosphorus ester-induceddelayed neurotoxicity,OPIDN)的机制。方法成年罗曼母鸡96只随机分为实验组和对照组。实验组分别按185、375和750 mg/kg经灌胃一次性染毒TOCP,对照组给予等体积玉米油。分别于染毒1、5、15和21 d处死动物,迅速剥离大脑和脊髓,分离提纯其线粒体,生物发光法检测线粒体ATP含量的改变,并分别采用RT-PCR和Western blotting技术检测了ATPase mRNA水平及蛋白水平的改变。结果实验组与对照组相比,母鸡大脑中线粒体ATP含量没有明显改变,脊髓中3个剂量组均从第5天开始即出现明显降低,第21天线粒体ATP含量较第15天有所升高。RT-PCR结果表明,TOCP染毒后母鸡中枢神经组织中ATPase 6 mRNA水平与正常对照组相比均明显降低。Western blotting结果显示大脑和脊髓中均呈现先升高后降低的趋势,脊髓ATPaseβ蛋白含量变化比大脑变化更明显。结论 TOCP能使母鸡中枢神经组织线粒体ATP含量发生改变,并能引起ATPase mRNA水平和蛋白水平的改变。     

植物药对MDR1基因的调控及对P-gp功能的影响

P糖蛋白（P-gp）是由人类MDR1基因编码的磷酸糖蛋白,是三磷酸腺苷（ATP）转运蛋白超家族成员之一,具有ATP依赖性的药物外排泵功能。定向诱变研究显示,P-gp各处都分布着药物结合位点,甚至是ATP结合区域。P—gp在肝、肾、胰腺、小肠、结肠、肾上腺的上皮细胞及血脑屏障表面高度表达,在药物的吸收、分布、排泄过程中发挥着重要作用。     

三磷酸腺苷生物发光法在白血病细胞株K562化疗药物敏感实验中应用探讨

目的:探讨三磷酸腺苷生物发光法(ATP-BLA法)在白血病细胞药敏实验中的可行性.方法:采用ATP-BLA法,用液体闪烁记数仪检测ATP标准品以及白血病细胞株K562在不同细胞浓度、药物浓度、培养时间下的荧光发光值.结果:ATP标准品浓度、K562细胞浓度的对数与荧光发光值的对数具极好的线性关系(P＜0.001);药敏实验时,结束细胞培养的时间以第4 d为宜,药物浓度的选择以1×PPC为最佳.结论:ATP-BLA法在白血病药敏试验中是可行的,有一定的临床应用价值,值得进一步研究.     

黄连抑菌活性的谱效关系研究

目的以黄连为对象探讨中药谱效关系研究新方法。方法建立优化基于ATP生物发光的微量抑菌检测方法,与微量稀释法抑菌结果进行相关性考察。以所建立的抑菌检测方法检测黄连抑菌活性,整合黄连的化学与抑菌活性图谱,探讨黄连化学组分与活性之间的关系。结果所建立的基于ATP生物发光抑菌检测法与微量稀释法相关性良好,分别检测大肠杆菌和金黄色葡萄球菌所得相关系数（r）分别为0.998和0.957。黄连谱效相关研究结果显示,黄连中除主要有效成分黄连素外,还可能含有微量高效抑菌成分。结论基于ATP生物发光的抑菌活性检测方法适用于中药抑菌活性的谱效关系研究,为中药质量控制和药效评价提供新的技术手段。     

生物发光研究及其应用进展

目的了解生物发光种类、机理及其在医学、生物科学、食品、环保等领域的应用。方法对有关的文献中生物发光种类、机理及其在上述领域的具体应用进行综述。结果生物发光有两类,机理明确,应用广泛。结论生物发光在很多领域的应用日趋广泛,对其深入了解和研究至关重要。     

线粒体DNA突变与大鼠乙醇性肝纤维化的关系

目的 对线粒体DNA ATP酶6,8基因(mtDNA ATPase 6,8gene)突变与乙醇性肝损伤发生发展之间的关系进行研究,从一个新的角度对乙醇性肝病(ALD)的发病机制进行探讨.方法 应用乙醇加橄榄油灌胃的方式建立大鼠乙醇性肝损伤动物模型并设对照组(等量生理盐水),成模后进行肝脏组织学观察,PCR扩增各组线粒体DNA ATPase 6,8基因并进行序列测定.以生物发光法分别测定各组肝组织中ATP含量,判定ATPase 6,8基因突变对肝细胞内ATP能量合成的影响.结果 模型组大鼠肝细胞线粒体出现形态学的改变;线粒体DNA ATPase 6亚基基因发现两处点突变;对照组未检出突变.模型组大鼠肝细胞内ATP含量明显降低(P＜0.05).结论 持续过量的乙醇摄人可造成肝细胞线粒体形态和mtDNA ATPase基因突变,这可能是乙醇性肝损伤的重要发病机制.     

miR-124a对2型糖尿病小鼠胰腺组织氧化应激损伤的影响北大核心CSCD

目的探讨miR-124a对2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)小鼠的胰腺组织氧化应激损伤和β细胞功能的影响。方法将野生型C57BL/6和miR-124a低表达的C57BL/6小鼠分别随机分成2组:野生空白组(WT Con)、miR-124a^(+/-)空白组(miR-124a^(+/-)Con)、野生模型组(WT Mod)、miR-124a^(+/-)模型组(miR-124a^(+/-)Mod)。采用高脂高糖饮食联合尾静脉注射链脲佐菌素构建T2DM小鼠模型(空腹血糖≥11.1 mmol·L^(-1)),建模成功后继续高脂高糖饮食饲养8周。检测各组小鼠的体质量、FBG及INS变化。HE染色和透射电镜观察胰腺组织的病理学变化及超微结构变化。ELISA法检测小鼠血清的氧化应激因子ROS、·OH的含量及抗氧化酶Mn-SOD、CAT的活性。ELISA法检测小鼠胰腺组织的ComplexⅡ、Ⅲ、Ⅳ的活性和ATP含量。结果与WT Con对比,miR-124a^(+/-)Con小鼠血清ROS、·OH和胰腺组织的ATP含量降低(P<0.05),miR-124a^(+/-)Mod小鼠的FBG升高,INS含量降低,血清Mn-SOD和CAT活性下降,胰腺组织的ATP含量和ComplexⅡ、Ⅲ和Ⅳ活性降低(P<0.05)。与WT Mod对比,miR-124a^(+/-)Mod小鼠的FBG和血清ROS、·OH降低(P<0.05),胰岛形态好转,INS含量、Mn-SOD、CAT活性和胰腺组织的ATP含量、Complex Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性升高(P<0.05)。结论降低小鼠miR-124a表达可降低T2DM小鼠FBG,胰腺病理损伤得到缓解,其作用机理可能为提高胰腺组织的抗氧化能力,减少氧化应激对β细胞的损伤有关。     

非洲爪蟾卵母细胞上内源性ATP及GABA激活电流的比较

实验用双电极电压钳技术在具有滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞上记录三磷酸腺苷 (ATP)与γ-氨基丁酸 (GABA)激活电流 ,并对两者进行了比较。结果显示 ,在不同的非洲爪蟾卵母细胞上 ,ATP和 GABA受体分布的种类和数目不同 ;且 ATP和 GABA激活电流均与 K+通道有关     

防治成人呼吸窘迫综合征的人工重组肺泡表面活性剂研制II.生物发光法筛选制剂处方

在前期用表面化学方法进行防治成人呼吸窘迫综合征的药物制剂处方筛选基础上,通过建立尘肺动物模型,用生物发光技术从清除自由基能力角度对制剂进行处方筛选,获到了有良好表面性能和一定自由基清除能力的人工重组肺泡表面活性剂制剂处方。该制剂有待经模型动物防治试验评价。     

新型餐时血糖调节剂—那格列奈

那格列奈,N－（反式－4－异丙基环巳烷羰基）－D－苯丙氨酸为一新型餐时血糖调节剂,能抑制胰腺β－细胞中ATP敏感的K^ 通道,增加细胞内Ca^2 浓度,使血浆内胰岛素水平升高,具有起效快、作用时间短的特点。本文主要对那格列奈的作用机理、药代动力学、临床疗效进行了介绍。     

癌症对药物治疗反应的预测

自40年代采用氮芥治疗癌症以来,癌化疗已取得长足的进展。然而,肿瘤组织学相同的病人对同样药物的治疗反应不尽相同。多年来,肿瘤治疗是按肿瘤组织学而不是依肿瘤对药物的敏感性给药的。自50年代起,肿瘤学家的目标是试行个体化治疗。此后,研究了多种体外检测法在肿瘤治疗前预测疗效。70年代采用人肿瘤干细胞检定方法,一般认为使肿瘤学跨入一个在体外预测化敏试验的新纪元。近年来又有几种方法产生,如Kern法,ATP生物发光法和荧光细胞标记法。其它还有MTT法和硫代碱性蕊香红蓝法等。用所建肿瘤细胞系筛选和评价新药的潜能比评价临床样品的化敏更有希望。     

防治成人呼吸窘迫综合征的人工重组肺泡表面活性剂研制II.生物发光法筛选制剂处方

在前期用表面化学方法进行防治成人呼吸窘迫综合征的药物制剂处方筛选基础上，通过建立尘肺动物模型，用生物发光技术从清除自由基能力角度对制剂进行处方筛选，获到了有良好表面性能和一定自由基清除能力的人工重组肺泡表面活性剂制剂处方。该制剂有待经模型动物防治试验评价。     

学术交流

全国胰腺外科学术研讨会将于明年举行 第7届全国胰腺外科学术研讨会由中华医学会外科学分会胰腺外科学组主办,定于1998年9月中旬在成都市召开。 征文内容:急性胰腺炎的基础实验、临床资料及经验总结;慢性胰腺炎的基础实验及经验总结;胰腺肿瘤;胰腺内分泌肿瘤,有关胰腺疾病的基础研究;有关胰腺疾病的先进检查技术等。     

多层螺旋CT后处理技术对胰腺囊性肿瘤的诊断价值

随着影像技术的广泛应用,胰腺囊性肿瘤的检出率及发病率有所增加,其中多层螺旋CT（multi-slice CT,MSCT）扫描速度快,空间分辨率高,广泛应用于胰腺疾病,是显示胰腺囊性病变首先方法 ,其后处理技术可以更好显示胰腺囊性肿瘤病变细节及周围血管毗邻关系。笔者对36例经手术及病理证实的胰腺囊性肿瘤患者进行总结,旨在探讨MSCT及图像后处理检查技术对胰腺囊性肿瘤的诊断价值。