心理应激对大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞MMP-3和 TIMP-3表达的影响

目的：探讨心理应激对大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和金属蛋白酶组织抑制剂-3（TIMP-3）表达的影响及其机制。方法将48只成年 Wistar 雄性大鼠随机分为实验3 w 组、实验6 w组、实验去除刺激6 w 组（恢复组）和空白对照组,每组12只。对3个实验组大鼠施加电击、制动、气候箱、食物诱惑等刺激,使大鼠处于心理应激状态。将各实验组大鼠分别于3 w、6 w 和刺激去除后6 w 处死;对照组同恢复组大鼠一起处死。取颞下颌关节标本制作切片,免疫组织化学染色,光镜下观察髁突软骨细胞 MMP-3和 TIMP-3的表达情况。结果4组大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞中 MMP-3表达强度不同,差异有统计学意义（P ＜0．05）;实验3 w 组和实验6 w 组 MMP-3的表达强度均高于对照组（P ＜0．05）。4组大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞中TIMP-3表达强度不同,差异有统计学意义（P ＜0．05）;恢复组 TIMP-3的表达明显高于对照组（P ＜0．05）。结论MMP-3和 TIMP-3分别在实验3 w、6 w 组和恢复组高表达,MMP-3和 TIMP-3表达平衡可能是应激影响髁突软骨的途径之一,合理调控该平衡可能会阻断应激对软骨的破坏。     

改变食物硬度对大鼠生长期髁状突软骨中TIMP-3表达的影响

目的：通过改变食物硬度造成大鼠生长早期颞下颌关节软骨的负荷改变,检测金属蛋白酶组织抑制剂因子-3（TIMP-3）表达变化,探讨其在髁状突软骨发育中的意义。方法：40只21日龄SD雌性大鼠同时哺乳与喂食粉末样食物,第28天断奶,随机分为两组：对照组仍喂食粉末样食物,实验组改喂同种成分的硬块状食物,食物改变后,在第24 h,48 h,7 d,14 d时每组各处死5只大鼠。PCR半定量检测4个时段两组间TIMP-3表达。结果：半定量分析表明,在开始实验后,整个髁状突软骨TIMP-3在软、硬食物组中的表达,在最初24 h时间上有统计学差异,软食物组的高于硬食物组（P〈0.05）,而在随后的时间点无明显差异。TIMP-3的表达在软（硬）食物组中24 h与48 h、24 h与7 d、24 h与14 d的时间点上均有统计学意义（P〈0.05）。结论：改变食物负荷后,早期TIMP-3表达变化的时间和负荷依赖性,提示负荷的改变引起TIMP-3在髁状突软骨生长发育过程中的变化是一种在生理范围内的,敏感、暂时、适应性的改变。     

实验性单侧前牙反修复体对大鼠髁突软骨中肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:探讨实验性单侧前牙反修复体致大鼠颞下颌关节骨关节病样变过程中髁突软骨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达变化。方法:60只6周龄SD雌性大鼠随机分为3个实验组和3个对照组,每组10只。在实验组大鼠左侧上、下切牙粘接金属不良修复体,使其呈反关系。分别于2、4、8周后取颞下颌关节,苏木精-伊红染色观察其组织形态学变化,免疫组织化学染色及实时定量PCR检测TNF-α的表达情况。结果:8周实验组髁突软骨时出现典型退行性变。TNF-α主要表达于髁突软骨肥大层,4周实验组TNF-α的蛋白(P<0.01)及基因(P<0.05)表达较对照组显著增多,8周实验组TNF-α的蛋白(P<0.01)及基因(P<0.05)表达较对照组显著减少,而2周实验组与同龄对照组之间无差异(均P>0.05)。结论:TNF-α参与了髁突软骨骨关节病样变的病理性改建活动。     

功能矫形后退大鼠下颌后髁突软骨改建的分子机制

目的：探讨功能矫形后退大鼠下颌后髁突软骨改建的分子调控机制.方法：SD大鼠40只,实验组配戴模拟临床功能矫治器,强制大鼠下颌后退,对照组不戴模拟矫治器,实验后3天、1、2、3周处死大鼠取髁突,HE染色观察组织学变化,免疫组织化学方法结合图像分析检测TGF-β1、TGF-β R1、IGF-1在髁突中的表达及分布.结果：实验组大鼠下颌后退1～2 mm,镜下见颞下颌关节髁突软骨厚度增加,以生发层和过渡层增加明显,细胞数增多,细胞体积增大,核肥大深染.髁突各层软骨细胞均有TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达,免疫组织化学阳性染色相对面积和积分灰度的比较显示：在功能矫形后退下颌后,实验组TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达较对照组明显增强,其差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论：功能矫形后髁突软骨表现为增生改建、分化功能增强,其发生与TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达密切相关.     

失重对大鼠髁突软骨细胞中TNF—α mRNA表达的影响

目的观察尾部悬吊模拟失重大鼠细胞因子TNF-α表达水平,探讨失重对颞下颌关节的影响机制。方法选用SD大鼠60只,在模拟应激条件下建立颞下颌关节的失重应激反应动物模型,提取连续刺激1、3、5周。运用ELISA法和RT—PCR测量髁突软骨细胞中TNF-α的含量和TNF-αmRNA的表达量。结果TNF-α mRNA在失重后1周表达最强,以后逐渐达到正常水平。结论失重能使髁突软骨TNF-α改变,可能促使颞下颌关节发生病变。     

不对称咀嚼力作用下CTGF在髁突软骨中的表达

目的探讨不对称咀嚼肌力对SD大鼠髁突软骨改建的影响.方法通过手术切除一侧颞肌和肉毒神经毒素A注射一侧咬肌,建立不对称咀嚼肌力SD大鼠动物模型,每组6只,分别于建模后3、6、9周处死动物,免疫组织化学检测CTGF在大鼠髁突软骨中的表达.结果 CTGF在髁突软骨增殖层、成软骨细胞层和肥大层表达;实验组CTGF的表达均较空白对照组增强(P<0.05);实验组双侧髁突CTGF表达无明显差异(P>0.05);实验组术后6周CTGF表达强于术后3周,术后9周强于术后6周(P<0.05).结论不对称咀嚼肌力可上调髁突软骨细胞CTGFmRNA的表达,CTGF介导了应力对髁突软骨的改建.     

异常咬合对成年大鼠颞颌关节影响的初步研究

目的：探讨异常咬合关系对成年大鼠颞下颌关节的影响。方法：选用19周龄雄性Wistar大鼠50只作为研究对象,按实验目的将大鼠随机分为实验组（30只）、操作对照组（10只）和空白对照组（10只）。应用螺旋拉簧以60g力作用于实验组大鼠的上颌第一磨牙,使其近中移动,形成异常咬合关系。加力后2周、3周、4周、5周、6周分别处死6只实验组大鼠,2只操作对照组大鼠和2只空白对照组大鼠。取其颞下颌关节做HE染色、Masson染色,观测髁状突的变化。结果：1.实验组髁状突纤维层表层的胶原纤维间水肿,组织松解,形成细小的裂隙;胶原纤维从表面剥离;肥大层变薄;初期骨小梁出现轻度的排列紊乱,其后骨小梁排列趋于恢复;2.髁状突软骨厚度变化：实验组可见髁状突软骨厚度下降,由后向前依次变薄。前带厚度随时间变化不明显,后带的变化程度最大;3.Masson染色结果：在实验组中髁状突软骨和软骨下骨出现红染增加。结论：异常咬合将导致大鼠颞下颌关节出现退行性变,主要表现为髁状突软骨变薄和纤维层的轻度破坏。     

GDF5在大鼠颞下颌关节发育早期髁状突软骨中作用的研究

目的通过观察生长分化因子-5（GDF-5）在大鼠颞下颌关节发育早期髁状突软骨中表达的时空变化特点,探讨GDF-5在髁状突软骨发育中的意义.方法建立大鼠胚胎（E）13、15、17、19、21 d的颞下颌关节发育模型,应用免疫组化法检测GDF-5在颞下颌关节早期发育的不同时期髁状突软骨中的表达.结果免疫组织化学检测GDF-5在髁状突软骨的发育过程中具有时空特异性,GDF-5在E13 d的髁状突细胞凝聚区中开始表达,在E15 d的增殖层及成软骨细胞层表达较强,之后表达减弱;GOF-5在肥大细胞层表达由弱至强又减弱;GDF-5在髁状突软骨不同发育时间、不同分化阶段的表达水平不同.结论 GDF-5参与调控髁状突软骨细胞增殖、分化及成熟的过程.     

不同食物负荷对大鼠生长期髁状突软骨基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的：研究在髁状突软骨早期生长阶段改变食物负荷对基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达变化的影响,探讨其在髁状突软骨发育中的意义。方法：100只14d龄雌性大鼠同时哺乳与喂食粉末样食物,在21d龄断奶后,随机分为2组,实验组改为极硬块状食物,对照组仍然喂粉末样食物,大鼠分别于食物改变后第6、12、24、48小时以及第9天被处死,取完整髁状突软骨组织,用免疫组化方法分析MMP-13表达的变化。结果：MMP-13主要表达在髁状突软骨增殖层和上层肥大层的软骨细胞。半定量分析表明,在开始实验后,整个髁状突软骨MMP-13的表达在软、硬食物组6h点上差异有统计学意义（P〈0.05）,软食物组的表达高于硬食物组。但是在随后的时间点无明显差异（P〉0.05）。MMP-13的表达在软食物组6h与9d、12h与9d、24h与9d、48h与9d的时间点上差异均有统计学意义（P〈0.01）;在硬食物组,MMP-13的表达在6h与9d、12h与9d、24h与9d、48h与9d以及6h与12h、6h与24h、6h与48h的时间点上差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：在改变食物负荷后极早期MMP-13表达变化的时间和负荷呈依赖性,提示MMP-13表达差异是一种在生理范围内的,对负荷改变的一种敏感、暂时、适应性的软骨代谢改变。     

兔实验性骨关节病髁突软骨细胞表达软骨基质分子的变化及白细胞介素1β的影响

目的 :研究外源性炎症因子白细胞介素 1β(interleukin 1β,IL 1β)对颞下颌关节骨关节病与正常髁突软骨细胞代谢活动的影响 ,探讨其在颞下颌关节骨关节病进展过程中所发挥的作用。方法 :采用 2 0 μg·L-1重组白介素1β(recombinedhumaninterleukin 1β ,rhIL 1β)刺激体外贴壁培养条件下的成兔正常成熟髁突软骨细胞与兔实验性颞下颌关节骨关节病模型髁突软骨细胞 ,RT PCR方法检测、比较细胞对软骨基质成分Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚糖体、胶原酶以及内源性生长因子胰岛素样生长因子 1(insulin likegrowthfactor 1,IGF 1)和转移生长因子 β1(trans forminggrowthfactor β1,TGF β1)的mRNA表达变化。结果 :在 2 0 μg·L-1rhIL 1β的刺激下 ,(1)正常成熟髁突软骨细胞Ⅱ型胶原和软骨蛋白多糖聚糖体的表达均明显降低 ,胶原酶表达水平变化不明显 ;(2 )在IL 1β的作用下 ,骨关节病软骨细胞对Ⅱ型胶原和胶原酶的表达水平降低 ,对软骨蛋白多糖聚糖体的表达水平无明显影响 ;(3)IL 1β对正常和骨关节病髁突软骨细胞内源性生长因子IGF 1和TGF β1的表达均无明显影响。 结论 :蛋白多糖聚糖体的合成 ,导致髁突软骨病变发生 ,而且能不断干扰骨关节病髁突软骨细胞代谢 ,导致关节软骨基质环境进一步恶化。     

大鼠功能性下颌前伸后髁突软骨骨化前后PLC-γ1的变化研究

目的 探讨磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)在功能性下颌前伸后大鼠髁突后部软骨骨化过程中的作用机制.方法 60只4周龄健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,适应性饲养1周,建立SD大鼠下颌前伸模型,随机等量分为2组,实验组24 h/d佩戴自制下颌前伸斜面导板矫治器,对照组不...     

Herbst矫治器前移下颌对成年大鼠髁状突中Ⅲ型胶原表达的影响

目的探讨Herbst功能矫治器引导成年大鼠下颌前伸,对其髁状突组织中Ⅲ型胶原表达水平的影响,进一步明确Herbst矫治器对成年大鼠髁状突组织改建的作用.方法 60只14周龄雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组;实验组大鼠全天佩戴自制Herbst矫治器引导下颌前伸,对照组不佩戴矫治器.于时间点3、7、14、21和30 d分别处死各组大鼠,取右侧髁状突组织,使用免疫组化方法检测髁状突中Ⅲ型胶原蛋白的表达情况.结果对照组髁突软骨Ⅲ型胶原表达较低;3 d实验组髁突后部Ⅲ型胶原表达较相应对照组强（P〈0.05）,其余各实验组均明显强于相应对照组（P〈0.01）.实验组Ⅲ型胶原在30 d时表达最强.结论 Herbst矫治器能够诱导成年大鼠髁状突发生适应性改建.     

压力对体外培养髁突软骨细胞增殖、凋亡的影响

[目的]观察压力对体外培养SD大鼠髁突软骨细胞增殖、凋亡以及合成蛋白多糖的影响,探讨压力与软骨退变之间的相互关系.[方法]在一个大气压基础上,分别对3组体外培养髁突细胞进行加压-10kPa、10kPa,20kPa(5%CO2),以未加压组作为对照,用四唑盐法(MTT法)和流式细胞技术分别检测各组标本在加压3 h和加压24 h后细胞增殖、凋亡的情况;应用硫酸-咔唑法检测各组标本在加压3 h和加压24 h后蛋白多糖的含量.[结果]加压3 h后,各加压组与对照组相比,细胞的增殖、凋亡以及蛋白多糖含量无明显变化;加压24 h后,压力值为20kPa时可以明显拟制增殖,并诱导髁突软骨细胞发生凋亡增加,蛋白多糖含量明显减少.[结论]长时间的异常压力负荷可使髁突软骨细胞增殖减缓、凋亡增加,蛋白多糖含量减少,诱发或加重关节软骨退变.     

BMP/Smads信号传导通路在兔下颌持续前导后髁突的表达

目的：探讨免下颌持续功能前导后髁突软骨中BMP／Smads信号传导通路表达与髁突改建的关系。方法：60只8周龄的日本大耳白兔，随机分成实验组（n=36）和对照组（n=24），实验组动物每日24h戴用咬合前导矫正器。实验动物分别在第3天、1周、2周、4周、8周及12周时处死并取材，用免疫组化方法观测髁突组织内BMP-2和Smad1／5、4、6的分布和表达，并对其表达进行灰度测定。结果：BMP-2和Smad1／5、4、6主要在髁突软骨过渡层和肥大层软骨细胞中表达，钙化层的软骨细胞和成骨细胞中也可见BMP-2和Smad1／5、4、6的表达。实验组兔髁突软骨BMP-2和Smad1／5、4、6的表达强度在早期高于同期对照组（P〈0．05），与髁突骨组织改建的活跃程度同步。结论：下颌持续前导后，Smad1／5、4、6作为BMP-2的细胞内信号传导分子，与下颌髁突适应性生长改建关系密切。     

MMP-9和TIMP-1在新生大鼠持续高氧暴露后肺组织中的动态表达

目的:探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)在高氧致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织中的动态变化和意义。方法:足月新生大鼠生后12h分别持续吸入0.90～0.95的高氧和空气,于1,3,7,14,21d应用免疫组化和RT-PCR方法分别检测肺组织MMP-9和TIMP-1蛋白及mRNA表达。结果:MMP-9在高氧3d时蛋白和mRNA表达均较空气组增强(P<0.05,P<0.01);TIMP-1蛋白在高氧组表达高于空气组,3d和7d比较P<0.05,14d和21d比较P<0.01;TIMP-1 mRNA水平高氧组高于空气组,3d和7d比较P<0.05,和14d比较P<0.01,和21d比较无差异。结论:高氧暴露后MMP-9和TIMP-1的表达在不同阶段的变化不一致,MMP-9/TIMP-1平衡状态遭到破坏,可能是高氧后胶原异常沉积以及正常肺泡化过程受阻的重要因素。     

TNF-α在磨耗大鼠髁突软骨中的表达及临床病理相关性

目的:建立磨耗大鼠模型,观察磨耗大鼠髁突软骨中TNF-α的表达,探讨牙合磨耗对髁突软骨内细胞的增殖与分化,软骨内成骨等活动的影响。方法:将SD大鼠48只,随机分为4组,每组各12只,人工磨低大鼠不同牙列段牙齿,对照组不作处理。制作石蜡切片行免疫组织化学染色(SABC法),图像采集及分析。结果:实验组TNF-α表达明显高于对照组,且表达量随实验周期增加而增加。结论:TNF-α可能参与髁突软骨的改建过程,其主要作用是促使软骨组织及细胞内分解代谢的发生,促进软骨破坏,降解软骨细胞基质,改变软骨细胞正常结构和功能     

基质金属蛋白酶/组织金属蛋白酶抑制物表达失衡在衰老大鼠肾小管间质损害中的意义

目的研究基质金属蛋白酶(MMP)及组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)在不同鼠龄的单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管间质中的表达变化,探讨其可能的作用.方法选用3月、26月龄大鼠制备UUO模型,采用组织病理及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹等方法观察UUO术后3、7、14 d不同鼠龄大鼠的肾脏组织学改变和MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2等在梗阻肾小管间质中的表达情况;用明胶酶谱法检测UUO术后不同时间点MMP-2、MMP-9的蛋白水解活性.结果在对照组,TIMP-1、TIMP-2仅微弱表达于3月龄肾脏中,而在26月龄大鼠肾脏中其表达显著增加(P<0.01);老年鼠肾组织中MMP-2、MMP-9的蛋白水解活性显著低于3月龄大鼠(P<0.01).与对照组相比,3月龄、26月龄大鼠梗阻侧肾脏的肾小管间质纤维化面积随UUO术后时间的延长而增加,TIMP-1、TIMP-2及MMP-2、MMP-9的mRNA及蛋白质的表达在术后各时间点均显著增高(P<0.01), MMP-2和MMP-9的蛋白水解活性随UUO术后时间的延长而逐渐下降.其活性的下降与TIMP-2及TIMP-1蛋白质表达的增加呈明显的负相关.与3月龄鼠比较,26月龄鼠肾小管间质纤维化面积在UUO术后各时间点也明显增加(P<0.01),TIMP-1、TIMP-2在肾组织中各时间点的mRNA及蛋白质表达均显著增高(P<0.01),MMP-2、MMP-9的蛋白水解活性在各时间点均显著下降(P<0.01).结论衰老引起的TIMP的高表达及MMP蛋白水解活性下降可能是使衰老大鼠肾小管间质损害加重的重要因素之一.