顺铂诱导Tca8113细胞凋亡及周期特异性

目的探化疗药物顺铂（ＣＤＤＰ）对口腔鳞癌细胞凋亡及细胞周期特异性的诱导作用。方法选用人舌鳞状细胞癌细胞系Ｔｃａ８１１３为研究对象,应用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪等方法进行观察。结果ＣＤＤＰ作用Ｔｃａ８１１３细胞后,细胞增殖变慢,增殖指数下降,细胞变小,变圆,失去贴壁性,从附着处脱落。ＤＮＡ染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈现橙红色,半月形,不规则块状等凋亡形态变化。透射电镜观察,细     

Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用

目的体外观察顺铂（DDP）诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用, 同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT- PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖, 其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0 μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡, Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。     

维甲酸诱导Tca8113细胞凋亡及其机理探讨

目的：研究维甲酸在体外对Tca8113（人舌部细胞系）细胞系凋亡的诱导作用。方法：在细胞培养液体系中加入不同浓度的维甲酸（Retinoic Acid，RA）进行诱导，以流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期时相变化，同时应用光镜、电子显微镜技术检测细胞形态学改变。结果：RA对Tca8113细胞凋亡率为23％，细胞周期时相变化以G1期细胞为显著。光镜下观察经RA诱导后的Tca8113细胞变圆、细胞间隙变大，游离细胞增多。电子显微镜观察细胞核凝固变小、凋亡小体增加，细胞内线粒体肿胀、变性。结论：RA能够诱导Tca81173细胞发生凋亡，G1期细胞受阻，不能进入S期。     

Tca8113细胞系耐药性的实验研究

目的：建立耐顺铂（CDDP）人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113/CDDP,对其耐药特性进行研究,方法：应用间歇性加药,逐步递增剂量,体外连续透导培养方法,获得Tca8113耐药细胞,采用MTT法,琼脂糖凝胶电泳和免疫组化法对细胞增增时间、裸鼠成瘤性、化疗药敏感性,P-gp和GST－π蛋白表达进行研究。结果：初步建成耐CCDP的人舌鳞癌细胞系（Tca8113／CDDP）,其耐CDDP浓度为10μmol/L。该细胞同时对卫猛（Vm-26)、博来霉素（BLM）、长春地辛、（VDS）、表阿霉素（E－ADM）、泰素（Taxol)等化疗药物产生交叉耐药。连续传代1月后,倍增时间从29．9h降至16．7h,具有裸鼠成瘤性,瘤体倍增加速。CDDP作用Tca8113细胞后,电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带,耐药细胞Tca8113／CDDP则无。P－gp（P－糖蛋白）及GST－π表达量升高,表明MDR－1mRNA表达水平增高,结论：CDDP能致Tca8113细胞耐药性。Tca8113／CDDP细胞系具有多药耐药特性,GSH／GST解毒系统可能与Tca8113／CDDP耐药性的产生。     

紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的作用

目的：研究紫草素对体外培养的口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察紫草素对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用光镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术及流式细胞术观察紫草素对Tca8113细胞凋亡的影响。采用SPSS12．0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验。结果：MTr检测显示．紫草素在0-50μmol／L浓度范围内。对Tca8113细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性（P〈0．01）．电镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体,DNA琼脂糖凝胶电泳观察到典型梯状条带,流式细胞仪结果显示亚G1期细胞明显增加,各组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．01）。结论：紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用．可用于口腔鳞癌化学防治的新尝试。     

替尼泊甙对口腔鳞癌化疗敏感性的体外研究

目的　探讨替尼泊甙 (teniposide ,VM 2 6 )这一鬼臼毒植物碱类化疗药物对口腔鳞癌的体外抗瘤效果 ,为其治疗口腔鳞癌提供实验依据。方法　有 81例纳入研究的患者 ,切取经病理证实的口腔鳞癌术后标本或活检标本行体外药敏检测。检测VM 2 6时以顺铂 (cisplatin ,CDDP)作对照 ,药物应用 5倍的峰血浆浓度。VM 2 6终浓度为 6 0mg/L ,CDDP为 15mg/L。结果　 81例标本完成药敏检测 75例 ,药敏检测成功率为 92 .6 %。 75例患者按UICC标准的TNM分期结果为 :I期 2例 ,II期 11例 ,III期 34例 ,IV2 8例。这组患者病理分级结果为I级 18例 ,I～II级 37例 ,III级 2 0例。VM 2 6和CDDP对口腔鳞癌细胞的生长抑制率分别为 6 3.34%和 2 4 .0 8%,前者生长抑制率明显高于后者 (P <0 .0 1)。结论　VM 2 6对口腔鳞癌的抗瘤敏感性明显高于CDDP ,VM 2 6有望成为治疗口腔鳞癌的首选化疗药物。     

不同剂量替尼泊苷联合化疗方案治疗口腔鳞癌的前瞻性研究

目的　前瞻性研究大、小剂量的替尼泊苷 (VM2 6)分别联合顺铂 (CDDP)和平阳霉素(PYM)对口腔颌面部鳞状细胞癌患者临床化疗效果和毒副作用。方法　共有 6 5例患者纳入研究 ,随机分为 2组 (33例和 32例 ) ,分别进行高剂量VM2 6(32 0mg)化疗方案 (PTP1)和低剂量VM2 6(15 8mg)化疗方案 (PTP2 )的治疗 ,观察、评价各自短期化疗效果和毒副反应。结果　接受高剂量VM2 6方案化疗患者 33例 ,共完成 38周期的化疗 ,化疗总有效率 (PR CR)为 81 82 % (2 7/33) ;另外32例接受低剂量VM2 6方案化疗 ,共完成 36个周期化疗 ,有效率为 81 2 5 % ,两组间化疗效果差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;两组间患者血液毒副反应差别明显 ,高剂量VM2 6化疗组的骨髓抑制率 (1～ 4级 )达到 4 8 4 8% ,明显高于低剂量VM2 6组 (2 5 0 0 % ,P <0 0 1)。结论　鉴于低剂量VM2 6化疗方案(PTP2 )治疗口腔颌面部鳞癌的有效率及相对较轻的不良反应 ,可在口腔鳞癌临床化疗中推广应用低剂量VM2 6联合CDDP、PYM组成的化疗方案。     

三氧化二砷诱导舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的实验研究

目的：观察三氧化二砷对舌癌细胞系Tca8113的诱导凋亡作用。方法：以人舌鳞癌细胞Tca8113为研究对象，使用荧光染色光镜、透射电镜观察三氧化二砷不同浓度、不同时间作用后的肿瘤细胞的形态学变化，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：一定浓度的三氧化二砷作用Tca8113细胞24h、48h后，细胞形态学观察可见有明显的细胞凋亡发生；流工细胞仪检测Tca8113细胞的基础凋亡率为0．5％－1．2％，三氧化二砷作用后肿瘤细胞的凋亡率可提高到15％－20％。结论：三氧化二砷可诱导人舌鳞癌细胞系细胞凋亡。     

β-榄香烯对Tca8113细胞株诱导分化的研究

目的：研究β-榄香烯对Tca8113（口腔舌鳞癌细胞株）细胞株诱导调亡机制。方法：应用MTT比色法和流式细胞仪测定细胞周期的变化，并应用电子显微镜技术观察诱导分化后的亚细胞结构。结果：β-榄香烯对Tca8113细胞株有明显的抑制作用。流式细胞仪分析不同的药物浓度、不同的作用时间细胞凋亡的发生均有显著意义，Gl期细胞减少，S期细胞增多。亚细胞结构细胞线粒体肿胀变性，核固缩。结论：β-榄香烯能抑制Tca8113细胞增殖，促进细胞凋亡，阻止S期细胞过程。     

转染骨形成蛋白(BMPs)Ⅱ型突变受体前后Tca8113细胞周期相关因子表达及凋亡的研究

目的 :明确转染BMP -II型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用 ,以进一步探讨、认识BMPs对口腔上皮恶变的作用机理。方法 :检测转染BMP -II型突变受体的Tca8113舌癌细胞 (Tca8113ZR细胞 )和Tca8113细胞的细胞周期相关因子 (CyclinD1,CDK -4 ,p2 7和p5 7)的表达及凋亡 ,以明确突变受体对细胞周期及生长的影响。结果 :转染了BMPⅡ型突变受体后 ,肿瘤细胞的增殖能力显著减弱。结论 :BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用 ,BMPs信号的改变可能导致细胞恶性程度的改变。     

顺铂诱导的自噬在口腔鳞癌Tca83细胞中的作用

目的:探讨顺铂诱导的自噬在口腔鳞癌Tca83细胞中的作用。方法:利用顺铂作用于口腔鳞癌Tca83细胞,不同时间后MTT法检测细胞生存率的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞胞浆中自噬体的形成情况,Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:顺铂作用于Tca83细胞2h即可出现明显的自噬性变化。细胞凋亡率随顺铂作用时间的延长而逐渐增加。结论:顺铂可以诱导口腔鳞癌Tca83细胞发生自噬,过度激活的自噬作为细胞的一种死亡程序,可以与凋亡一起促进细胞死亡。     

塞来昔布对Tca8113细胞环氧化酶-2表达及诱导凋亡的作用

目的观察选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞的生长抑制、COX-2表达调节及诱导凋亡的作用。方法在Tca8113细胞中分别加入含有不同浓度塞来昔布的培养液,培养24、48、72 h后,采用MTT方法测定细胞生长抑制率,采用免疫组化方法观察COX-2蛋白在Tca8113细胞中的表达,应用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学特征,应用Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞的早期凋亡率,相对定量荧光定量PCR检测Tca8113细胞中COX-2 mRNA的表达。结果COX-2蛋白在Tca8113细胞中呈强阳性表达,塞来昔布在抑制细胞生长的同时,抑制Tca8113细胞COX-2蛋白的表达;Tca8113细胞经塞来昔布处理后凋亡细胞多见,与对照组相比,塞来昔布处理组早期凋亡细胞增多有统计学意义;塞来昔布调节COX-2 mRNA表达的作用与对照组相比无统计学意义。结论塞来昔布主要以剂量依赖的方式抑制Tca8113细胞生长,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2蛋白表达有关,而对COX-2基因作用较弱,其作用机制有待进一步研究。     

MMP－2 siRNA促进口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡作用的研究

目的：研究基质金属蛋白酶－2（MMP－2）siRNA对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的作用。方法：采用MMP－2 siRNA慢病毒感染Tca8113,qPCR检测MMP－2表达,MTT检测细胞活性,Annexin－V单染检测细胞凋亡。结果：MMP－2 siRNA慢病毒成功抑制Tca8113中MMP－2 mRNA表达。MMP－2干扰组细胞活性显著低于阴性病毒组（P＜0．01）,且细胞凋亡率高于阴性对照组（P＜0．01）。结论：MMP－2干扰能促进Tca8113凋亡,起到抗肿瘤效应。     

神经钙黏素表达下调对舌鳞状细胞癌细胞生物学能力的影响

目的 研究神经钙黏素(N-cadherin)表达下调对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、细胞周期、凋亡以及迁移的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 利用LipofectamineTM2000将神经钙黏素siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,将细胞分为3组:①未处理组;②对照siRNA组;③神经钙黏素siRNA组.分别收集转染后48 h的细胞,采用新型的细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)8试剂分析转染神经钙黏素siRNA后对细胞增殖能力的影响;运用流式细胞术检测下调神经钙黏素表达对Tca8113细胞周期及细胞凋亡的影响;采用Boyden 小室实验分析下调神经钙黏素对舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞迁移能力的影响;进一步采用蛋白质印迹法检测神经钙黏素表达下调对细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移相关基因表达的影响.结果 神经钙黏素siRNA能明显下调舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中神经钙黏素蛋白的表达,并显著抑制Tca8113细胞的增殖(P<0.05).细胞周期结果显示,神经钙黏素siRNA组中在G0/G1的细胞比率[(65.41±0.92)%]明显高于未处理组[(41.59±1.43)%]和对照siRNA组[(43.70±2.08)%],差异有统计学意义(F=216.839,P＝0.000).神经钙黏素siRNA组中细胞凋亡的比率[(25.66±1.36)%]明显高于未处理组[(2.38±0.14)%]和对照siRNA组[(2.81±0.12)%],差异有统计学意义(F=850.364,P=0.000).Boyden 小室体外侵袭实验结果表明,与未处理组和对照siRNA组相比,神经钙黏素siRNA组中Tca8113细胞的迁移能力显著下降,差异有统计学意义(F=140.858,P=0.000).蛋白质印迹法结果表明,与未处理组和对照siRNA组相比,神经钙黏素siRNA组中的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)2和MMP-9明显下调,而p21明显上调,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 神经钙黏素在舌鳞状细胞癌的发生发展中可能具有重要的作用.

Abstract：

Objective To investigate the effect of downregulation of N-cadherin expression on cell proliferation, cell cycle, cell apoptosis and cell migration in tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 cells. Methods N-cadherin siRNA was transfected into tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 cells and Tca8113 cells were divided into three groups: untreated group, control siRNA group and N-cadherin siRNA group. The cells were harvested 48 h after transfection with N-cadherin siRNA. Cell proliferation of Tca8113 cells was examined by cell counting kit(CCK)-8 after transfection with N-cadherin, and the effects of downregulation of N-cadherin on cell cycle and cell apoptosis of Tca8113 cells were investigated by flow cytometry.The effect of downregulation of N-cadherin expression on cell migration of Tca8113 cells was observed by Boyden chamber experiment, and further expression changes of gene-related cell proliferation, cell cycle and cell migration were detected by Western blotting. Results N-cadherin siRNA downregulated the N-cadherin expression and significantly inhibited cell proliferation of Tca8113 cells (P<0.05). The results of cell cycle revealed that the percentage of G0/G1 phase in N-cadherin group [(65.41±0.92) %] was significantly higher than that in untreated group [(41.59±1.43)%] or control siRNA group [(43.70±2.08)%], and there was significant difference among the three groups (F=216.839,P＝0.000).The percentage of cell apoptosis in N-cadherin group [(25.66±1.36)%] was significantly higher than that in untreated group [(2.38±0.14)%] or control siRNA group [(2.81±0.12)%], and there was significant difference among the three groups (F=850.364,P=0.000). The cell number migrated into memebrane in N-cadherin group was significantly lower than that in untreated group and control siRNA group, and there was significant difference among the three groups (F=140.858,P=0.000). Further, compared with untreated group and control siRNA group, the expressions of matrix metalloproteinase(MMP)-2 and MMP-9 proteins were significantly downregulated and expression of p21 protein was significantly upregulated (P<0.05). Conclusions N-cadherin may play a role in occurrence and development of tongue squamous cell carcinoma.     

平阳霉素抑制舌鳞癌细胞系的量效和时效关系及可能的抗癌机制

目的:探讨平阳霉素体外抑制口腔鳞癌细胞系的量效和时效关系及可能的抗癌机制。方法:用不同浓度的平阳霉素培养人舌鳞癌细胞系Tca8113不同时间,以MTT法和荧光显微镜观察细胞增殖抑制情况,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果:MTT法和荧光观察显示:不同浓度平阳霉素组间细胞生长抑制率有显著差异(P<0.05),浓度越高,抗增殖效应越明显;随药物作用时间延长,肿瘤细胞生长受抑制递增(P<0.05)。流式细胞术显示:凋亡率随药物浓度增加而增加,但与作用时间长短无关。低浓度药物无法诱导细胞凋亡。结论:平阳霉素在体外能明显抑制人舌鳞癌细胞系Tca8113生长,并具有浓度和时间依赖性。其抗癌机制可能包括细胞毒作用和启动程序化死亡信号等。     

紫杉醇诱导ACC细胞凋亡及与G2/M期阻滞关系研究

目的 研究紫杉醇能否诱导ACC－2细胞凋亡,以及凋亡诱导与G2／M期的关系。方法 紫杉醇不同浓度、不同作用时间分别处理ACC－2细胞,通过流式细胞仪、荧光显微镜、透射电镜和DNA凝胶电泳,研究紫醇诱导ACC－2细胞的凋亡及其与G2／M期阻滞的关系。结果 荧光染色观察到凋亡细胞形态,电镜观察到不同时期凋亡超微结构的典型形态。流式细胞仪DNA含量：紫杉醇在50mmol/L作用48h,72h,亚G1峰分别是17．13％、16．26％。延长药物作用时间、增加药物浓度均会增强细胞G2／M期阻滞,但只有出现G2／M期明显阻滞后,经过一定时间才出现凋亡。结论 紫杉醇能够诱导ACC－2细胞产生凋亡;G2／M期阻滞能诱导ACC－2细胞凋亡。     

RNA干扰双泛素对舌鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的 应用RNA干扰技术抑制人舌鳞状细胞癌细胞株Tca8113中双泛素(diubiquitin)的表达,探讨双泛素表达下调对舌鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响.方法 构建针对双泛素特异性小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA)真核表达载体pU-双泛素-siRNA,将其转染至Tca8113细胞,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法检测转染后的Tca8113细胞中双泛素的表达.通过流式细胞仪分析siRNA对舌鳞状细胞癌细胞周期的影响,并通过细胞侵袭能力实验观察siRNA对Tca8113细胞恶性生物学行为的变化.结果 siRNA干扰Tca8113细胞后,双泛素的表达无论是在mRNA水平还是在蛋白质水平均显著下降[mRNA:实验组(0.36±0.03)、空白对照组(0.92±0.07)、空载体组(0.95±0.05);蛋白:实验组(0.39±0.04)、空白对照组(0.64±0.05)、空载体组(0.69±0.05)](P＜0.05),细胞周期被阻滞在G1期,细胞生长缓慢,体外侵袭能力下降(P＜0.05).结论 通过RNAi技术阻断双泛素的表达,可抑制Tca8113细胞的生长、增殖、侵袭,提示双泛素在舌鳞状细胞癌的发生、发展过程中起重要作用.