淀粉样β蛋白42及其亚单位疫苗预防接种对APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的保护作用

背景研究表明,淀粉样β蛋白42疫苗接种可以诱导阿尔茨海默病转基因小鼠产生特异性抗淀粉样β蛋白42抗体,清除其脑内的淀粉样β蛋白沉积,改善其学习记忆能力,在对阿尔茨海默病的防治中具有良好的应用前景.目的研究淀粉样β蛋白42及其亚单位肽疫苗预防接种对APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的影响.设计以动物为研究对象,完全随机分组实验.单位一所大学医学院人体解剖学教研室脑研究室.材料实验于2003-04/2004-02在中山大学实验动物中心和人体解剖学教研室脑研究室进行.5月龄APPSWE转基因小鼠32只,购自美国Taconic company,在本室繁育成功.实验随机分成对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组,每组8只.干预淀粉样β蛋白42.及其亚单位疫苗配伍MF59佐剂,基础接种采用皮下注射,加强接种采用鼻黏膜免疫,共接种8个月.疫苗接种前用Y迷宫作行为学测试,接种后用Morris水迷宫作行为学测试.主要观察指标空间学习记忆能力,平均逃避潜伏期,穿过平台次数,第一象限游泳距离百分率,20%边缘区游泳距离百分率.结果疫苗接种前对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组APPSWE转基因小鼠Y迷宫作行为学测试10次中正确反应的次数分别为7.50±0.81,7.06±0.71,7.19±0.91,7.50±0.86,各组小鼠间的空间学习记忆能力差异无显著性意义(P＞0.05);疫苗接种8个月后,对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组小鼠定位航行试验8个单元训练的平均逃避潜伏期分别为(67.3±2.8)s,(23.6±1.6)s,(26.4±2.0)s和(36.5±2.2)s,淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组较对照组明显缩短,淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组之间差异无显著性意义(P＞0.05);对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组小鼠空间探索试验穿过平台次数分别为0.71±0.29,8.14±1.37,7.28±1.34和3.29±0.67,第一象限游泳距离百分率分别为(24.3±2.9)%,(50.6±11.6)%,(49.9±9.3)%和(35.4±7.0)%,20%边缘区游泳距离百分率分别为(46.4±7.3)%,(11.6±3.9)%,(14.4±2.6)%和(25.8±3.3)%,淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组较对照组穿过平台次数显著增多、第一象限游泳距离百分率升高和20%边缘区游泳距离百分率降低,其中淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组比较差异无显著性意义(P＜0.05).结论淀粉样β蛋白42及其亚单位疫苗预防接种可有效减轻APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的损害.     

复方金思维对阿尔茨海默病大鼠脑组织ProSAP／Shank蛋白表达的影响

目的：观察突触后蛋白ProSAP／Shank在模型大鼠脑内表达的变化，探讨复方金思维对阿尔茨海默病大鼠的神经保护作用。方法：实验于2004-11-15／2005-02在北京中医药大学东直门医院药理实验室及首都医科大学宣武医院神经生化室进行。取雄性SD大鼠32只，随机分为4组，每组8只：①生理盐水组：脑海马注入2μL生理盐水，3d后灌胃3mL的双蒸水。②模型组：脑海马缓慢注入2μL淀粉样B蛋白1～42(5g／L)，复制拟阿尔茨海默病模型，造模后3d灌胃3mL的双蒸水。③盐酸多奈哌齐组：造模同模型组，造模后3d灌胃盐酸多奈哌齐(0．92mg／kg)。④金思维组：同前造模，造模后3d灌胃复方金思维(由人参、肉苁蓉、石菖蒲，郁金等组成，浓度0．36g／mL，剂量0．7μL／g)。所有给药均1次／d，连续4周。4周后以Morris水迷宫测试大鼠学习期间的逃避潜伏期和游泳距离，记忆测定中的记忆能力，以进行行为学评价：检测大鼠脑海马CA1区、皮质突触后蛋白ProSAP／Shank的变化应用免疫组化方法。结果：经补充后32只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫的学习、记忆测试结果：模型组大鼠逃避潜伏期、游泳距离及记忆能力显著低于生理盐水组(P&;lt;0．01)，盐酸多奈哌齐组、金思维组大鼠逃避潜伏期、游泳距离及记忆能力较模型组高(P&;lt;0．05)，盐酸多奈哌齐组和金思维组无差异(P&;gt;0.05)。②脑海马CA1区ProSAP／Shank蛋白免疫组化测定结果：模型组平均面密度低于生理盐水组和金思维组(14．35&;#177;3．66，21．21&;#177;5.66，19．67&;#177;3．83，P&;lt;0.05)，模型组的平均吸光度也低于生理盐水组、盐酸多奈哌齐组和金思维组(68．74&;#177;5．98，121．93&;#177;8．69，84．36&;#177;13．56，84．58&;#177;8．24，P&;lt;0．01)。③脑皮质区ProSAP／Shank蛋白免疫组化测定结果：模型组的平均吸光度低于生理盐水组和金思维组(84．12&;#177;19．40，138．93&;#177;28．62，106．53&;#177;5．08，P&;lt;0．01)。结论：淀粉样B蛋白海马注射可致海马CA1区及皮质Shank蛋白表达下降，说明淀粉样B蛋白聚集损害了海马突触的功能和可塑性。而复方金思维不但显著提高了大鼠的学习、记忆能力，而且使Shank蛋白的表达明显增加，说明它对突触的功能和可塑性具有改善作用。     

血管性痴呆患者脑脊液中tau蛋白、淀粉样β蛋白42及血清中转化生长因子α和淀粉样β蛋白42的相关性分析

目的：测定脑脊液中tau蛋白及淀粉样β蛋白42和血清中转化生长因子α和淀粉样β蛋白42表达水平对血管性痴呆患者的评估价值。方法：所有实验对象均来自沈阳医学院附属中心医院。选择2000-01／2004-10神经内科门诊和住院的包括血管性痴呆患者31例为血管性痴呆组．无痴呆脑梗死患者31例为无痴呆脑梗死组及同期健康体检者31名为健康对照组。均知情同意。运用成人韦氏记忆量表，Hachinski缺血量表和社会功能活动调查评定患者认知功能。采集所有实验对象的脑脊液及血清，用酶联免疫吸附实验测定脑脊液中tau蛋白和淀粉样β蛋白42的含量，采用放射免疫法测定血清中转化生长因子α、淀粉样β蛋白42的含量。结果：所有实验对象均采集到脑脊液及血清，测定值全部进入结果分析。①脑脊液中tau蛋白检测结果：血管性痴呆组比无痴呆脑梗死组明显升高[(528．49&;#177;296．35)，(208．48&;#177;136．49)ng／L，q=4．72，P&;lt;0．05]，比健康对照组明显升高[196．32&;#177;125．29)ng／L，q=4．82，P&;lt;0．05]，无痴呆脑梗死组与健康对照组无差异(q=1．91，P&;gt;0．05)。②脑脊液中淀粉样B蛋白42含量：血管性痴呆组比无痴呆脑梗死组明显下降[(278．21&;#177;69．25)，(496．45&;#177;81．13)ng／L，q=4．64，P&;lt;0．05]，比健康对照组明显升高[(504．25&;#177;79．81)ng／L，q=4．69，P&;lt;0．05]，无痴呆脑梗死组与健康对照组无差异(q=1．89，P&;gt;0．05)。③血清中转化生长因子q含量：血管性痴呆组比无痴呆脑梗死组明显升高[(11．05&;#177;3．08)，(5．45&;#177;1．89)μg／L，q=4．71，P&;lt;0．05]，比健康对照组明显升高[(4．31&;#177;1．79)μg／L，q=5．06，P&;lt;0．05]，无痴呆脑梗死组与健康对照组无差异(q=1．87，P&;gt;0．05)。④血清中淀粉样β蛋白42含量：血管性痴呆组比无痴呆脑梗死明显下降[(90．25&;#177;0．29)，(51．21&;#177;0．44)ng／L，q=4．67，P&;lt;0．05l，比健康对照组明显升高[(55．19&;#177;0．54)ng／L，q=4．79，P&;lt;0．05]，无痴呆脑梗死组与健康对照组无差异(q=1．96，P&;gt;0.05)。⑤相关性分析：血管性痴呆患者血清中转化生长因子α水平升高和淀粉样β蛋白42水平下降呈负相关(γ=-0．83，P&;lt;0．05)：结论：血管性痴呆患者脑脊液中tau蛋白和淀粉样β蛋白42含量明显增高，提示对有危险因素患者联合测定两者，有助于早期诊断和治疗中的评估。血管性痴呆患者血清中淀粉样β蛋白42降低和转化生长因子α水平并呈明显负相关，提示在血管性痴呆患者的病理过程中可能与淀粉样β蛋白42的过度沉积有关。     

淀粉样β蛋白对大鼠学习记忆的损伤

目的：通过Morris水迷宫实验来观察淀粉样β蛋白1-40对大鼠学习记忆的影响。方法：实验于2005-08／11在河南科技大学医学院完成。选用SD成年健康雄性大鼠30只，随机分为3组：正常对照组、生理盐水注射组、淀粉样β蛋白1--0注射组。淀粉样β蛋白1-40注射组给予双侧海马CA1区定向注射凝聚态淀粉样β蛋白1-40.5μL（2g／L），生理盐水注射组给予等量生理盐水，正常对照组不施以任何处理。术后2周行Morris水迷宫测试。学习时每只大鼠按东、西、南和北4个人水点分别放入水池（头朝池壁轻轻地放人）。记录动物的入水时间。记录潜伏期（动物自入水到找到站台后四肢爬上站台时所需的时间）；同时记录动物入水后的游泳轨迹。动物爬上站台后，让动物在站台上站立20s。若动物在入水后60s以内未能找到水池中的站台或未能爬上站台，则以60s记，引导其上台。实验历时5d。结果：30只大鼠均进入结果分析。Morris水迷宫训练第1天正常对照组、生理盐水注射组和淀粉样β蛋白1-40注射组的潜伏期分别是：（59．21&;#177;1．31）s，（60．00&;#177;0．00）s，（60．00&;#177;0．00）s，3组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。训练第2-5天，淀粉样β蛋白1-40注射组的潜伏期为（53．34&;#177;10．19）s，（38．15&;#177;10．77）s，（33．49&;#177;9．12）s，（28．52&;#177;9．87）s，均明显长于正常对照组和生理盐水注射组[正常对照组的潜伏期为（37．80&;#177;8．53）s，（23．50&;#177;6．54）s，（11．60&;#177;6．5）s，（7．71&;#177;3．56）s；生理盐水注射组的潜伏期为（38．13&;#177;9．83）s，（22．65&;#177;9．23）s，（13．05&;#177;8．67）s．（9．29&;#177;7．72）s]（P〈0．01）．正常对照组和生理盐水注射组的潜伏期差异无显著性意义（P〉0．05）。3组的游泳轨迹也显示正常对照组和生理盐水注射组从训练第5天起即由随机式转为直线式，而淀粉样β蛋白1-40注射组5d的游泳轨迹一直为随机式。结论：海马注射淀粉样β蛋白1-40可导致大鼠学习记忆功能明显受损。     

依达拉奉对淀粉样β蛋白25～35致PC12细胞氧化损伤的神经保护作用

目的：观察特异性清除羟自由基的神经保护剂依达拉奉对淀粉样β蛋白25-35诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法：实验于2005-03／07在吉林大学中日联谊医院神经内科进行。将培养的PC12细胞分为3组：①正常对照组：加入含体积分数0．25的胎牛血清的DMEM维持液培养。②依达拉奉预处理组：加入依达拉奉20μmol／L预处理12h，然后加入淀粉样β蛋白25～35 30μmol／L继续孵育24h。③淀粉样B蛋白25～35干预组：淀粉样β蛋白25～35 30μmol／L孵育24h。采用MTT法测定细胞生存率；采用ELISA法测定羰基蛋白和晚期糖基化终产物的含量；硫代巴比妥酸法测定丙二醛的浓度。结果：①3组细胞生存率比较：正常对照组为（100．0&;#177;5.7）％，依达拉奉预处理组显著高于淀粉样β蛋白25～35干预组[（86．4&;#177;17．7炀，（42．5&;#177;9．4）％，P〈0．001]。②3组细胞内羰基蛋白含量比较：正常对照组为（0．35&;#177;0．09）μmol／g，依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25～35干预组[（0．41&;#177;0．12），（0．81&;#177;0．17）μmol／g，P〈0.01]。③3组晚期糖基化终产物水平比较：正常对照组为（12．21&;#177;3．26）mg／L，依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25-35干预组[（14.65&;#177;4．25），（26．57&;#177;5，18）mg／L，P〈0．01]。④丙二醛浓度：正常对照组为（4．11&;#177;0．98）μmol／L，依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25～35干预组[（4．92&;#177;1．30），（7.58&;#177;1．01）μmol／L，P〈0.01]。结论：依达拉奉能够减少淀粉样β蛋白25～35对PC12细胞内蛋白质氧化产物、晚期糖基化终产物及脂氧化终末产物的生成，具有神经保护作用。     

中药当归主要活性成分阿魏酸钠抑制淀粉样β蛋白激活炎症因子的量剂反应

目的：观察中药当归提取的主要活性成分阿魏酸钠对淀粉样β蛋白激活的小鼠腹腔巨噬细胞α肿瘤坏死因子、诱导型一氧化氮合酶和一氧化氮水平的影响。方法：实验于2004-03／10在锦州医学院药理实验室和解剖实验室完成。选择8～10周龄的小鼠36只，随机分为6组，每组6只。正常对照组：巨噬细胞接种24h后用培养基继续培养。淀粉样β蛋白组：巨噬细胞接种24h后在培养基中加入经老化处理的终浓度为10μmol/L的淀粉样β蛋白。淀粉样β蛋白＋10，100，500μmol／L，1mmol／L阿魏酸钠组：在加入淀粉样β蛋白的同时加入10，100，500μmol/L，lmmol／L的阿魏酸钠共同孵育。培养48h后采用酶联免疫吸附法、免疫组织化学方法和Griess反应分别检测肿瘤坏死因子α分泌量、诱导型一氧化氮合酶表达和一氧化氮的生成量。结果：36只小鼠均进入结果分析。①巨噬细胞的肿瘤坏死因子α分泌量：淀粉样β蛋白组明显高于正常对照组[（28154&;#177;14．85），（1755&;#177;4．84）ng／L，（P〈0．01）]。淀粉样β蛋白＋10，100，500μmol／L，1mmol／L阿魏酸钠组可以不同程度地减少由淀粉样β蛋白诱导产生的肿瘤坏死因子α的分泌量[（238．05&;#177;6．21）．（186．90&;#177;7．44），（117．55&;#177;8.08），（71．77&;#177;10．50）ng/L，P〈0．011，且有明显剂量依赖关系（P〈0．05）。②巨噬细胞的一氧化氮生成量：淀粉样口蛋白组明显高于正常对照组[（85.04&;#177;6．16），（26．10&;#177;3．25）μmol／L，（P〈0．01）]，淀粉样β蛋白＋10，100，500μmol／L，1mmol/L阿魏酸钠组可以不同程度地减少由淀粉样β蛋白诱导产生的一氧化氮的量[（69.80&;#177;4.96），（54.52&;#177;345），（43.88&;#177;4.04），（33．83&;#177;3．13）μmol／L，P〈0．011，且有明显剂量依赖关系（P〈0．05）。⑧诱导型一氧化氮合酶的表达：正常对照组只有零星细胞染色阳性；而淀粉样β蛋白组多数细胞胞浆被染成黄褐色。各剂量组的阿魏酸钠可以不同程度地抑制由淀粉样β蛋白激活巨噬细胞造成的诱导型一氧化氮合酶的表达，该抑制作用呈明显剂量依赖性。结论：①淀粉样β蛋白能激活巨噬细胞，使其分泌大量的肿瘤细胞坏死因子α和一氧化氮，诱导型一氧化氮合酶表达也相应增加。②阿魏酸钠通过其抗炎作用呈明显剂量依赖性抑制淀粉样β蛋白对巨噬细胞的激活作用，从而使巨噬细胞生成肿瘤细胞坏死因子α、诱导型一氧化氮合酶、一氧化氮水平降低。     

游泳对小鼠肠动力功能的影响

目的：观察游泳对小鼠小肠推进运动的影响。方法：以昆明种小鼠为实验动物，随机分为2组：对照组，实验组；以小肠推进百分比为指标观察小鼠游泳前、20min游泳中、游泳后20min小肠推进运动的变化。结果：20min游泳运动中小鼠小肠推进百分比降低，对照组为(60&;#177;7)％，实验组为(37&;#177;5)％；游泳运动后20min小鼠小肠推进百分比提高，对照组为(61&;#177;4)％，实验组为(66&;#177;5)％，差异均有显著性意义(t=10．254，2．908，P=0．000，0．008)。结论：20min游泳运动中小鼠肠动力减弱；游泳运动后小鼠肠动提高。     

脑卒中后抑郁状态模型大鼠学习和记忆水平的Morris水迷宫测定

目的：观察脑卒中后抑郁状态模型大鼠学习和记忆水平的变化。方法：实验于2004-01／04在北京中医药大学基础医学院科研中心实验室进行。取雄性Wistar大鼠36只随机分为正常组、脑卒中组、抑郁组各12只。正常组大鼠不干预，脑卒中组大鼠首先制造局灶脑缺血，抑郁组大鼠在局灶脑缺血模型基础上复制大鼠脑卒中后抑郁状态模型。以蔗糖水消耗量进行行为学评价，以OPEN-FIELD测定直立活动和水平活动得分，以Morris水迷宫测试评价各组大鼠其学习和记忆水平。结果：36只大鼠均进入结果分析。①蔗糖水消耗量：脑卒中组大鼠[(23．51&;#177;3．42)g]低于正常组[(26．13&;#177;3．80)g]，但差异无统计学意义(P&;gt;0．05)；抑郁组[(19．85&;#177;3．06)g1]低于正常组，差异有非常显著性意义(F=10，10，P&;lt;0．01)。②水平和直立活动得分：抑郁组较脑卒中组得分显著降低[(12．25&;#177;3．60．7．08&;#177;1．73)比(26．00&;#177;6．78．15．83&;#177;4．37)，P&;lt;0．01]。③Morris水迷宫学习成绩：随着学习时间的延长，各组平均逃避潜伏期均显著下降，但抑郁组下降趋势较正常组和脑卒中组缓慢。第3，4天抑郁组平均逃避潜伏期[(13．78&;#177;4．45)．[10．49&;#177;4．99)s]较正常组[(8．09&;#177;5．40)，(6．18&;#177;2．90)s]和脑卒中组显著延长[(7．53&;#177;4．42)，(737&;#177;241)s．P&;lt;0．01．P&;lt;0．05]。④Morris水迷宫记忆成绩：脑卒中组和抑郁组的初始角度[(50.39&;#177;12.51)&;#176;，(58．37&;#177;18．28)&;#176;]均较正常组大[(34．59&;#177;13．25)&;#176;，P&;lt;0．05；P&;lt;0．01]，穿越平台次数[(3．42&;#177;1．62)．(1．83&;#177;1．03)次]较正常组显著减少[(6．25&;#177;1．81)次．P&;lt;0．01]；抑郁组较脑卒中组穿越平台次数也明显减少(P&;lt;0．05)；抑郁组在跨越目标象限时间和距离占整个游泳的时间和距离的百分率[(18．26&;#177;3．03)%，(19.42&;#177;6．16)％]也较正常组显著减少[(25．64&;#177;8．40)％，(26．65&;#177;5．54)％．P&;lt;0．01]。结论：脑卒中后抑郁模型大鼠存在学习和记忆能力的显著受损．其降低水平较去皮质血管造成的缺血动物组严重，可能于海马在皮质缺血和应激过程受到的累积损害有关。     

脑梗死并糖尿病认知障碍患者脑脊液中tau蛋白和淀粉样β蛋白42水平的测定

目的：探讨脑梗死并2型糖尿病认知障碍患者脑脊液中tau蛋白和淀粉样β蛋白42(Aβ42)水平测定的意义，以及2型糖尿病对脑梗死认知障碍患者脑脊液中tau蛋白和Aβ42水平的影响。方法：所有病例为1996-05／2003-06沈阳医学院附属中心医院收治患者，病例组为入选的脑梗死并2型糖尿病组认知障碍患者21例，对照组1为脑梗死并糖尿病无认知障碍组21例，对照组2为脑梗死认知障碍无糖尿病患者21例。认知功能测定选用韦氏成人记忆量表(WMS)。用酶联免疫吸附法(ELISA)对各组患者的脑脊液中tau蛋白和AB42水平进行检测。结果：病例组脑脊液中tau蛋白水平明显升高，为(532．59&;#177;323．15)ng／L，Aβ42水平明显下降，为(289．00&;#177;70．91)ng／L，与对照组1[(200．59&;#177;147．63)，(493．80&;#177;83．29)ng／L]和对照组2[(312．11&;#177;289．56)，(409．33&;#177;76．35)ng／L]比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)?结论：检测脑脊液中tau蛋白，Aβ42水平有助于脑梗死并糖尿病认知障碍临床诊断，而且2型糖尿病进一步促进脑梗死认知障碍患者脑脊液中tau蛋白进一步释放，Aβ42水平进一步下降。     

奥氮平与喹硫平对阿尔茨海默病相关基因共转染N2a细胞分泌淀粉样β蛋白42的影响

背景：许多研究表明淀粉样β蛋白在阿尔茨海默病的发病中起着主要的作用，淀粉样β蛋白的减少将延缓阿尔茨海默病的发展，因此减少淀粉样β蛋白的产生成为干预阿尔茨海默病的一项重要策略。许多阿尔茨海默病患者因精神行为异常而接受抗精神病药物治疗，非典型抗精神病药物奥氮平与喹硫平能够明显地改善阿尔茨海默病患者临床整体印象评分，早期开始的长期干预能够改善患者预后。目的：观察奥氮平与喹硫平对双转染(瑞典淀粉样β蛋白前体蛋白基因和早老素1基因)鼠成神经瘤细胞分泌淀粉样β蛋白42的作用。设计：以细胞为研究对象，完全随机分组设计，对照实验研究。材料：所有研究工作均在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所进行。鼠N2a成神经瘤细胞与双转染N2a细胞由康奈尔大学医学院神经病学及神经科学系提供。干预：双转染N2a细胞分别予200μmol／L奥氮平及50μmol／L喹硫平处理24h后，应用酶联免疫吸附反应法测定细胞内外淀粉样β蛋白的水平。应用四甲基偶氮唑盐方法检测细胞活性、βCA法测定细胞的蛋白质含量、免疫印迹检测N2a与双转染N2a细胞淀粉样β蛋白前体蛋白的表达、酶联免疫吸附法测定双转染N2a细胞分泌到培养液及细胞内的淀粉样β蛋白42水平。主要观察指标：测定双转染N2a细胞分泌到培养液及细胞内的淀粉样β蛋白42水平。结果：双转染N2a细胞淀粉样β蛋白前体蛋白的表达明显高于N2a细胞。奥氮平处理组细胞外淀粉样β蛋白浓度[(4．78&;#177;0．54)nmol／L]明显低于对照组[(7．69&;#177;0．62)nmol／L](t=3．52，P&;lt;0．05)；喹硫平处理组细胞外淀粉样β蛋白浓度．[(4．09&;#177;0．18)nmol／L]明显低于对照组[(7．50&;#177;0．50)nmol／L](t=5．61，P&;lt;005)。奥氮平处理组细胞内淀粉样β蛋白浓度与对照组比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；喹硫平处理组细胞内淀粉样β蛋白浓度与对照组比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：奥氮平与喹硫平能够减少双转染鼠N2a细胞外淀粉样β蛋白42的分泌，奥氮平与喹硫平的应用有可能通过减少神经细胞淀粉样β蛋白42的分泌延缓阿尔茨海默病的发展。     

何首乌对淀粉样β蛋白致海马神经元的凋亡和学习记忆障碍的作用

目的：探讨凋亡机制在凝聚态淀粉样β蛋白(beta-awyloid protein，Aβ)脑内致阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)作用中的意义及何首乌(PMB)对Aβ脑内神经毒性的干预效果。方法：实验于2002-09／2003-02在湘雅医学院解剖学实验室进行。取SD大鼠40只，经Y迷宫测试淘汰4只，36只随机分为生理盐水组，假手术组，模型组和何首乌组。用Aβ1～40微量注射至大鼠右侧海马，建立AD模型，用何首乌进行干预，于不同时间点分别进行电Y迷宫测试，用免疫组化染色法测定Bcl-2阳性神经细胞数的表达，及TUNEL法检测海马神经细胞凋亡的表达。结果：模型组的学习记忆尝试次数为(27．8&;#177;7．5)次，海马Bcl-2蛋白表达为(8．71&;#177;1．83)个／视野，凋亡细胞为(13．83&;#177;3．26)个／视野：何首乌组的学习记忆尝试次数为(15．2&;#177;2．9)次，海马Bcl-2蛋白表达为(13．5&;#177;2．17)个／视野，凋亡细胞为(9．57&;#177;2．16)个／视野，与对照组比差异仍有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。结论 Aβ1～40人海马引起大鼠学习记忆损害，可能与其诱导脑内神经元的凋亡，抑制Bcl-2的表达有关，何首乌对模型鼠的学习记忆障碍具有保护作用，可能与促进Bcl-2的表达而减轻Aβ致AD鼠脑海马神经细胞的凋亡有关。     

慢性苯染毒小鼠DNA损伤及体内抗氧化酶的变化

背景：苯是重要的工业溶剂，长期接触可导致苯可导致DNA损伤，染色体畸变，DNA加合物的形成，基因突变等。目的：了解苯对体内DNA的损伤作用、机制以及抗氧化酶体系的变化情况。设计：随机对照的实验研究。单位：哈尔滨医科大学附属第一医院检验科，哈尔滨医科大学公共卫生学院。材料：实验在哈尔滨医科大学公共卫生学院动物室完成。选用健康雄性昆明种小鼠24只。体质量18—22g，由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心提供。干预：分为正常对照组、低剂量苯损伤组和高剂量苯损伤组。除对照组外，其余各组小鼠进行静式吸入苯蒸气染毒，4h／d，2个月后处死，分离骨髓细胞及外周血淋巴细胞，取肝、脾、脑组织并制备匀浆。主要观察指标：用单细胞凝胶电泳技术对骨髓细胞及外周血淋巴细胞DNA损伤进行检测；同时检测肝、脾、脑组织中超氧化物歧化酶(supemxide dismulase，SOD)、谷胱肝肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)的活性及丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量。结果：染毒组小鼠骨髓细胞及外周血淋巴细胞彗星百分率分别为骨髓细胞(83．56&;#177;10．28)％，(92．54&;#177;15．93)％，外周血淋巴细胞(41．27&;#177;6．03)％，(65．79&;#177;11．62)％，显著高于对照组(4．13&;#177;0．52)％。(2．21&;#177;0．31)％(P&;lt;0．01)，并呈剂量-反应关系。高、低浓度组小鼠肝匀浆SOD活力分别为(11573．31&;#177;1938．72)．(12574．68&;#177;1938．72)nkat／g，GSH—Px活力分别为(309．40&;#177;82．85)，(375．41&;#177;55．18)nkat／g，均显著低于对照组【分别为(16668．67&;#177;3137．96)，(588．62&;#177;110．52)nkat／g】(P&;lt;0．05)，但不同剂量组间差异无显著性意义；高、低浓度组小鼠脾匀浆GSH-Px活性分别为(421．75&;#177;124．02)、(523．10&;#177;45．18)nkat／g，均显著低于对照组(618．42&;#177;57．01)nkat／g(P&;lt;0．05)，且不同剂量组间差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；高、低浓度组小鼠脑匀浆GSH-Px活性分别为(87．35&;#177;19．84)，(95．02&;#177;14．00nkat／g，均显著低于对照组(118．36&;#177;7．67)nkat／g(P&;lt;0．05)，但不同剂量组间无显著性差异；高浓度组小鼠脑匀浆MDA含量为(3．99&;#177;1．15)μmol／g，显著高于对照组(2．58&;#177;0．53)p．mol／g(P&;lt;0．05)。结论：慢性苯染毒可致小鼠骨髓细胞及外周血淋巴细胞DNA损伤，体内抗氧化酶活性降低。     

沂蒙山区3年32例阿尔茨海默病患者淀粉样β蛋白及其前体基因表达量的相关性分析

背景：淀粉样β蛋白沉积是引致阿尔茨海默病的重要原因，淀粉样β蛋白前体基因过度表达或某部分发生突变，可能与阿尔茨海默病的发生有关。目的：观察沂蒙山区阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白及其前体基因的关系。设计：病例-对照分析。单位：临沂市人民医院神经内科。对象：选择临沂医专附属临沂市人民医院神经内科2001-01／2003-12住院阿尔茨海默病患者32例，以性别、年龄相当的非颅脑损伤的外科手术老年人30例为对照组（简易精神状态量表评分〉27分）。方法：应用ELISA法检测脑脊液淀粉样β蛋白水平，应用荧光定量聚合酶链反应技术检测淀粉样β蛋白前体基因表达量。结果：62例全部进入结果分析。①阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样β蛋白水平明显高于对照组[（13．63&;#177;9．34），（6．75&;#177;5．37）μg／L，t=3．354,P〈0．01]。②阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样B蛋白前体表达量明显高于对照组[（1624&;#177;298），（1275&;#177;269）拷贝／μL。t=4．42，P〈0．01]。③阿尔茨海默病组淀粉样β蛋白水平与淀粉样β蛋白前体基因表达量呈正相关（r=0．44，P〈0．01）。结论：沂蒙山区阿尔茨海默病患者脑脊液中淀粉样β蛋白及其前体基因表达增高，且淀粉样β蛋白水平越高，其前体基因表达越高。痴呆程度越重。提示阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白、淀粉样β蛋白前体密切相关。但淀粉样β蛋白前体表达量在阿尔茨海默病诊断中不具特异性。     

施普善对D—半乳糖拟衰老小鼠学习记忆功能的影响

目的：探讨施普善对D—半乳糖拟衰老小鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法：采用D—半乳糖诱导的脑老化小鼠动物模型，分别用游泳水迷宫测定小鼠学习记忆能力；用化学发光法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性：用硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛含量、结果：D—半乳糖模型组小鼠的游泳时间明显延长[（44．91&;#177;12.86)s]、正确次数明显降低[(2．58&;#177;1．87)次／d]，与正常对照组[(28．11&;#177;12．75)s，（4．33&;#177;1．72)次／d]相比，差异有显著性意义（t=3．694，t=3．258，P&;lt;0．01)。应用施普善6周后，其大、中剂量组小鼠的游泳时间明显降低[(28．06&;#177;13．06)，(27．85&;#177;13．21)s]，正确次数明显增加(4．58&;#177;1．66)，(4．63&;#177;1．81)次／d]，与D—半乳糖组相比，差异均有显著性意义(t=3．574，3．508；t=3．416，3．349，P&;lt;0．01)；并能显著提高脑组织中SOD的活性[(30232．38&;#177;5133．53)，(29653．26&;#177;4878．64)nkat]，降低丙二醛含量[(630．00&;#177;59．40)，(626．74&;#177;49．68)nmol／g]，与D—糖组[(22892．74&;#177;4540．07)nkat，(749．69&;#177;92．80)nmol／g]相比，差异均有显著性意义(t=3．418，3．277；t=3．168，3．337，P&;lt;0．01)。结论：施普善能明显的改善D—糖诱导的脑老化小鼠学习记忆能力，提高脑组织中SOD的活性，降低丙二醛的含量。     

经颅磁刺激后脑梗死大鼠学习记忆与海马c-Fos的表达

目的：研究经颅磁刺激对脑梗死后大鼠学习记忆功能和脑海马区c-Fos表达的影响。方法：实验于2004-09／12在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科实验室完成。48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、经颅磁刺激组，每组16只。模型组和经颅磁刺激组大鼠采用线栓法制作一侧大脑中动脉闭塞的脑梗死模型。经颅磁刺激组在制模后第2天给予每天2次、每次30个脉冲的经颅磁刺激治疗，疗程4周。每组中的8只大鼠分别于4周后检测Y-迷宫中的学习记忆成绩和梗死侧海马c-Fos的表达。结果：经颅磁刺激组大鼠学习记忆功能明显改善(学习尝试次数：18．36&;#177;4．87：记忆再现次数：6．05&;#177;1．34)，与模型组比较(学习尝试次数：26．40&;#177;5．45；记忆再现次数：3．72&;#177;1．18)，差异均有显著性意义(t=3．65．3．28；P均&;lt;0．01)；经颅磁刺激组大鼠海马各区c-Fos阳性表达细胞数显著增加(CAl：28．55&;#177;3．62，CA2：25．27&;#177;3．09，CA3：27．65&;#177;3．53．齿状回：34．92&;#177;6．56)，与模型组比较(CAl：9．42&;#177;1．28．CA2：7．58&;#177;1．18，CA3：8．63&;#177;1．24，齿状回：11．36&;#177;2．04)，差异均有显著性意义(t=17．22，19．32，17．57，11．87；P均&;lt;0．01)。结论：应用转基因技术获得的c-fos基因突变的小鼠，表现出明显的空间学习记忆障碍．提示c-fos等即早基因的激活可能是学习记忆形成的必要条件。经颅磁刺激能增加脑海马各区c-Fos阳性细胞的表达，有促进脑梗死大鼠学习记忆功能恢复的作用。     

β淀粉样前体蛋白17肽对糖尿病大鼠海马神经细胞线粒体膜电位和凋亡的干预

背景：糖尿病大鼠存在学习和记忆障碍，β淀粉样前体蛋白17肽具有改善这一行为的作用。糖尿病是否通过影响海马区神经细胞的膜电位及凋亡导致学习和记忆障碍以及β淀粉样前体蛋白17肽的相关作用机制尚不清楚。目的：观察糖尿病大鼠海马区神经细胞的线粒体膜电位和凋亡以及β淀粉样肽前体蛋白干预对其影响。设计：完全随机分组设计，对照实验。单位：首都医科大学宣武医院北京脑老化研究实验室和河北保定市第一中心医院内分泌科。材料：实验中指标测定部分于2002—05／2002—08在解放军总医院仪器测试中心完成。动物造模及干预阶段在首都医科大学附属宣武医院动物室完成。选用Wistar雄性大鼠18只。将大鼠按随机抽签法分为3组，正常对照组，糖尿病模型组，β淀粉样前体蛋白17肽治疗组，每组6只。方法：①糖尿病模型组和β淀粉样前体蛋白17肽治疗组大鼠禁食12h后用pH值4．4链脲佐菌素按60mg／kg腹腔注射诱发糖尿病模型。3d后测尾静脉血糖〉15mmol／L为造模成功。正常对照组大鼠不造模。β淀粉样前体蛋白17肽治疗组于背部皮下注射β淀粉样前体蛋白17肽，3．4μg／只，每周3次，共10周。正常对照组及糖尿病组给予等量的生理盐水相同部位注射，每周3次，共10周。②满10周时，将大鼠麻醉，断头取脑后冰浴下取海马组织制备单细胞悬液，采用线粒体膜电位特异性荧光探针JC-1标记线粒体及Annexin-V-FITC＆PI双染色技术，进行流式细胞仪上机检测线粒体膜电位和凋亡发生率。③数据间差异比较采用单因素方差分析。主要观察指标：各组大鼠海马神经细胞线粒体膜电位和海马单细胞凋亡率比较结果。结果：进入结果分析大鼠18只，每组6只。①海马神经细胞线粒体膜电位：糖尿病模型组明显低于正常对照组[（551．91&;#177;53．36），（809．88&;#177;82．41）道，P〈0．01]，β淀粉样前体蛋白17肽治疗组高于糖尿病模型组[（705．99&;#177;89．92）道，P〈0.05]，与正常对照组相近（P=0．146）。②海马单细胞凋亡率：糖尿病模型组明显高于正常对照组和β淀粉样前体蛋白17肽治疗组[（5．32&;#177;1．37）％，（1．03&;#177;0．55）％，（2．80&;#177;0．92）％，P〈0．01，0．05]。结论：海马线粒体膜电位下降和细胞的凋亡可能参与糖尿病脑病的发生发展；β淀粉样前体蛋白17肽具有改善这一病理过程的作用。     

白细胞介素—6在心脏成纤维细胞增殖及心肌纤维化过程中的作用

目的：观察白细胞介素—6(interleukin—6，IL—6)对心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)增殖及p27蛋白表达的影响，探讨IL—6促CFs增殖的细胞分子生物学机制。方法：以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型，采用四氮唑盐比色法检测细胞增殖，流式细胞分析仪技术测定细胞周期及p27蛋白表达的阳性率。结果：①1&;#215;10^7U／L IL—6作用48h，四氮唑盐比色法测定的CFs的A值为0．38&;#177;0．01，明显高于基础状态组(0．32&;#177;0．01)，差异有显著性意义(t=-15．983，P=0．000)。②IL—6作用组CFs的S期细胞百分率(13．00&;#177;3．53)％和细胞增殖指数(PI)(29．43&;#177;1.94)％均高于基础状态组[(7．45&;#177;0．97)％和(26．03&;#177;0．96)％]，并有差异有显著性意义(t=-3．036，P=0．023；t=-3．142，P=0．020)，而G0／G1期细胞百分率(70．58&;#177;1．94)％低于基础状态组(73．98&;#177;0．98)％，差异显著(t=3．142，P=0．020)。③IL—6作用组CFs的p27蛋白表达阳性率为(72．60&;#177;2．47)％，明显低于基础状态组(78．45&;#177;1．91)％，差异有显著性意义(t=3．753，P=0．009)。结论：IL—6能够诱导CFs增殖，其机制可能与p27蛋白表达水平下调有关。     

复智散对神经细胞胞体面积和轴突长度变化的影响

背景：自制中药复智散经已往的实验证实可延缓大鼠的自然老化过程，提示该药可能具有对抗衰老作用。目的：观察复智散培养神经细胞最佳有效浓度对神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞形态学改变的影响设计：重复测量设计。材料：实验于2002-06／2003-04在前都医科大学宣武医院北京脑老化重点实验室完成。自制中药复智散（菖蒲、远至等6味中药组成）由哈尔滨医科大学第一临床医学院神经科王德生教授和上海东方医院神经科徐晓云教授共同组方，淀粉样β蛋白25—35片段，SH-SY5Y神经母细胞瘤株。方法：用不同浓度的复智散孵育神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞，利用噻唑蓝比色法测定细胞存活率，制定量一效关系曲线，寻找最佳药物浓度；6孔板培养细胞分为正常对照组、淀粉样β蛋白25—3525μmol／L组、淀粉样β蛋白25～3525μmol／L ＋复智散45&;#215;10^-3g／L组和复智散45&;#215;10^-3g／L组，孵育24h，观察细胞形态学改变，测定神经细胞的胞体面积和轴突长度主要观察指标：①各组SH-SY5Y细胞噻唑蓝代谢率的变化。②各组神经细胞胞体面积及轴突长度。结果：①复智散可增进SH-SY5Y细胞的存活，最佳有效浓度为45&;#215;10^-3g／L。②SH-SY5Y细胞胞体面积和轴突长度：淀粉样β蛋白25-3525μmol／L组明显低于正常对照组[（505．5&;#177;122．36），（599．8&;#177;141．25）μm^2；（26．0&;#177;13．97），（363&;#177;15．58）μm，（t=3．903,3．447,P=0．000）]。复智散45&;#215;10^-3g／L组与淀粉样β蛋白25—3525μmol／L＋复智散45&;#215;10^-3 g／L组均明显高于淀粉样β蛋白25—3525μmol／L组[（918．3&;#177;178．34），（896．6&;#177;257．14），（505．5&;#177;122．36）μm^2；（968&;#177;43．31），（88．3&;#177;30．23），（26．0&;#177;13．97）μm．t=10．922，14．172，P=0．000）1。结论：在淀粉样β蛋白25—35损伤条件下复智散依旧有促进培养神经细胞存活的作用，表现在增进细胞胞体面积的增长和轴突的延伸方面。     

益气养阴方对脾及睾丸切除老龄雄兔血清淀粉样β蛋白的干预效应：1周至半年不同时相点数据分析

目的：淀粉样β蛋白参与老年痴呆的发病，通过观察自拟益气养阴方剂对脾和睾丸切除术后老年雄兔淀粉样β蛋白的干预作用，为其方剂提供临床前期数据。方法：实验于2002-08／2003-02在北京铁路局大同中心医院实验室进行。选择75只3年老龄健康雄性新西兰大白兔，随机分为脾切除服药组、脾切除未服药组、睾丸切除服药组、睾丸切除未服药组及对照组5组，每组15只。脾切除的两组行开腹脾脏切除术，睾丸切除的两组行双侧睾丸切除术，术后服药的两组第1天开始服自拟益气养阴方剂浓缩液(黄芪、何首乌、枸杞子、淫羊藿，剂量各为lg／kg)，水煎浓缩后按1mL／(kg&;#183;d)灌服，2次／d，持续半年；对照组15只行假手术。术前24h、术后1，2，3，4，5周、术后2，3，4，5，6个月用放射免疫方法监测各组淀粉样β蛋白的变化。结果：75只实验动物均进入结果分析。①脾脏切除后淀粉样B蛋白明显上升，术后5周达最高峰[脾切除未服药组为(68．2&;#177;3．08)μg／L脾切除服药组为(68．55&;#177;2．65)μg／L]，以后逐渐下降，脾切除服药组淀粉样β蛋白下降明显，术后6个月较术前稍高[(33．5&;#177;2．2)，(23．74&;#177;2．37)μg／L]；脾切除未服药组术后6个月仍较术前明显为高[(49．78&;#177;2．01)，(23．68&;#177;2．25)μg／L]。②睾丸切除后淀粉样p蛋白明显上升，术后5周达最高峰[脾切除未服药组为(76．06&;#177;2．85)μg／L，睾丸切除服药组为(74．92&;#177;3．5)μg／L]，以后渐降，睾丸切除服药组淀粉样β蛋白下降明显，术后6个月接近术前水平[(26．47&;#177;2．53)，(24．02&;#177;2．15)μg／L]；睾丸切除未服药组术后6个月仍较术前明显为高[(50．25&;#177;2．69)，(22．53&;#177;1．24)μg／L]。结论：脾切除和睾丸切除术后实验动物血清淀粉样β蛋白浓度明显升高，自拟益气养阴方对血清淀粉样β蛋白降低有作用，是否用于人类老年性痴呆患者可具有同样的效应尚需探讨。     

核酸对铅染毒大鼠DNA损伤的干预效应

目的：探讨抗氧化物质核酸对铅染毒大鼠淋巴细胞和肝细胞DNA损伤的干预效应。方法：实验于2003-03／05在哈尔滨医科大学公共卫生学院完成。选用32只纯种雄性健康3月龄Wistar大鼠，清洁级，32只大鼠随机分为4组，空白组、模型组、低剂量和高剂量核酸组各8只。空白组正常饮水．其余3组饮醋酸铅水溶液8g／L。空白组、模型组灌胃蒸馏水，低剂量和高剂量核酸组分别灌胃核酸200，700mg／kg，末次灌胃后24h，尾部取抗凝血，分离淋巴细胞，制成细胞悬液，24h内待测。5周后断头处死各组动物，取出肝脏，制成肝细胞悬液，24h内待测。采用单细胞凝胶电泳技术(彗星细胞实验)对淋巴细胞和肝细胞DNA损伤进行观察，细胞中DNA损伤单链断裂时会出现拖尾的彗星细胞。每片随机观察30个细胞，计数彗星细胞百分率，用目镜测微尺测量彗星细胞尾长。结果：32只大鼠全部进人结果分析，无脱失。①淋巴细胞中彗星细胞百分率和尾长比较：模型组与核酸低、高剂量组大鼠淋巴细胞中彗星细胞百分率和尾长均显著高于空白组[(50．25&;#177;6．21)％，(41．25&;#177;6．96)％．(35-38&;#177;5．93)％，(6．88&;#177;1．13)％；(23．25&;#177;4．23)μm，(16．50&;#177;4．24)μm，(13．63&;#177;2．62)μm，(6．751&;#177;0．17)μm，(q=11．28～42．94，P&;lt;0．01)]。核酸低、高剂量组彗星细胞百分率及彗星细胞尾长均明显低于模型组(q=8．91～15．77，P&;lt;0．01)。②肝细胞中彗星细胞百分率和尾长比较：模型组与核酸低、高剂量组大鼠肝细胞彗星细胞百分率和尾长均明显高于空白组(56．25&;#177;6．71)％，(42．25&;#177;6．09)％，(39．25&;#177;7．17)％，(8．25&;#177;1．28)％：(27．63&;#177;4．98)μm，(19．25&;#177;3．54)μm，(18．50&;#177;5．48)μm，(7．88&;#177;0．99)μm．(q=14．07～45．24，P&;lt;0．01)。核酸低、高剂量组彗星细胞百分率和尾长也显著低于模型组(q=11．10～16．02，P&;lt;0．01)。结论：慢性铅染毒可导致大鼠淋巴细胞和肝细胞DNA损伤，饮食核酸能显著提高对淋巴细胞和肝细胞DNA损伤的修复作用。