免疫性血小板减少症气不摄血证小鼠模型血管内皮活性物质变化动态研究

目的从血管内皮活性物质角度探讨免疫性血小板减少症(immunethrombocytopenia,ITP)气不摄血证血管损伤情况及出血机制的动态变化。方法采用睡眠剥夺复合免疫法制备ITP气不摄血证小鼠模型,第1周进行睡眠剥夺,第2、3周睡眠剥夺同时注射抗血小板血清(APS)进行免疫。将Balb/C小鼠分为正常组和模型组,各组再分为7、10、21 d时间点,每个时间点正常组10只、模型组12只,观察各时间点小鼠体征,检测小鼠体质量及血小板、抓力、脾脏指数、胸腺指数,ELISA检测血清血管性血友病因子(vWF)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)含量,Aim Plex流式高通量多因子法检测血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)含量。结果与正常组比较,模型组第7日小鼠精神状态萎靡,倦怠蜷缩,极少活动,此状态随时间延长日益加重,体质量、抓力、血小板、脾脏指数、胸腺指数显著降低(P0.01),v WF、NO、ET-1显著升高(P0.01);注射APS后,模型组小鼠腹部、腿部有出血点,便血情况发生,第2次注射后出血最为严重,此后逐日减轻,小鼠体质量、抓力、血小板、胸腺指数、VEGF-A、sVCAM-1显著降低(P0.01,P0.05),脾脏指数、vWF、NO、ET-1显著升高(P0.01);第21日模型组小鼠出血较轻,体质量、抓力、血小板、胸腺指数显著降低(P0.01),脾脏指数、vWF、NO、ET-1、sICAM-1显著升高(P0.01)。结论 ITP气不摄血证小鼠模型存在血管损伤:造模第7日以血管内皮凝血功能紊乱为主,第10日以血管内皮通透性改变为主,第21日以血管内皮免疫功能紊乱为主。     

原发免疫性血小板减少症气不摄血证小鼠模型的建立与评价

目的:探讨睡眠剥夺复合免疫法建立原发免疫性血小板减少症气不摄血证小鼠模型的可行性。方法:Balb/c小鼠分为正常组、模型组,模型组在第1周仅睡眠剥夺,第2、3周睡眠剥夺复合免疫法(腹腔注射抗血小板血清),实验周期为3周。实验结束后,采用血球计数仪检测血小板数量、称量小鼠脾脏重量并计算脾脏指数、流式仪检测T淋巴细胞亚群(CD3~+、CD4~+、CD8~+),此外,观察并检测小鼠一般体征,采用大小鼠抓力测定仪检测抓力,MouseOx Plus小动物无创监护仪检测脉搏幅度,数码照相机采集舌面特征。结果:疾病指标:模型组与正常组相比血小板计数明显降低,注射部位、耳部、足部等有点状或块状出血,脾脏指数明显升高,T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+均显著降低,且CD4~+/CD8~+明显降低;证候指标:模型组与正常组相比抓力显著降低,脉搏幅度显著降低,舌象R/G值明显降低。结论:睡眠剥夺复合免疫法可以成功建立与临床接近的原发免疫性血小板减少症气不摄血证小鼠模型。     

三种提取工艺制备的益气通阳汤对免疫性血小板减少小鼠治疗作用的比较研究

目的比较3种提取工艺制备的益气通阳汤对免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)小鼠的治疗作用。方法分别用全方水提、全方水提醇沉、水提和醇提同时应用等3种工艺制备益气通阳汤,得益气通阳1号、2号、3号;用豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)腹腔注射小鼠,复制ITP小鼠模型,灌胃给予等剂量的益气通阳1号、2号、3号,连续11 d,比较其对ITP小鼠血小板(Platelet,PLT)数、血红蛋白(Hemoglobin,Hb)、骨髓巨核细胞数和脾脏系数的影响。结果不同提取工艺的益气通阳汤均可提高ITP小鼠的PLT,其中益气通阳1号组和2号组PLT升高较接近正常;益气通阳3号组Hb降低,低于正常对照组和模型组(P0.05)。与模型组相比,益气通阳1号组和2号组脾脏系数下降(P0.05),益气通阳3号组脾脏系数上升(P0.05)。各益气通阳汤组小鼠骨髓产板巨核细胞数均增加(P0.05),其中益气通阳2号组与正常对照组比较无统计学差异(P0.05)。结论益气通阳汤3种提取工艺治疗都能够升高ITP小鼠PLT,其中益气通阳2号治疗效果最佳。     

气不摄血证免疫性血小板减少症患者血管活性物质及相关炎症因子变化与临床意义

目的 本研究旨在探讨气不摄血证免疫性血小板减少症(ITP)患者血管活性物质及相关炎症因子在ITP发病中的作用及其临床意义。方法 气不摄血证ITP患者30例（ITP组），根据2016版ITP出血评分量表,分为未出血组、低危组（≤2分）及高危组（＞2分），健康正常人20例（对照组）。酶联免疫吸附（ELISA）法检测外周血血管活性物质一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶（NOS）及内皮素-1（ET-1）含量，AimPlex流式高通量技术检测外周血血管活性物质VEGF-A,VEGF-D及相关炎症因子IL-8,IL-10,IL-17A以及TNF-α含量。结果 与对照组相比较，气不摄血证ITP患者NOS、VEGF-A及IL-10含量显著降低（P＜0.05)，ET-1、IL-8、IL-17A以及TNF-α含量显著升高（P＜0.05)。同时，气不摄血证ITP患者中，高危组ET-1含量显著高于未出血组（P＜0.05），ET-1、VEGF-A含量与气不摄血证ITP患者出血显著相关（OR=1.012,95%CI:0.92-1.31；OR=1.065, CI:0.98-1.22,P＜0.05)。结论 血管活性物质及相关炎症因子在气不摄血证ITP患者的发病过程中具有重要作用，ET-1、VEGF-A可能是反应气不摄血证ITP患者出血风险的重要客观指标。     

健脾摄血方对ITP模型小鼠生命体征和脏器指数的影响

目的:观察健脾摄血方对ITP小鼠生命体征和脏器指数的影响,为临床应用提供支撑。方法:以抗小鼠血小板血清(APS)免疫造模法,建立BALB/c小鼠模型,体内造成ITP小鼠模型,观察强的松、健脾摄血方对ITP小鼠生命体征和胸腺、脾脏指数影响。结果:(1)各实验组小鼠体质量、体温与空白对照组比较,无统计学意义(P0.05)。(2)造模第8天,模型组、强的松组、健脾组小鼠游泳时间与空白对照组比较,有统计学意义(P0.01);实验结束后,模型组小鼠游泳时间仍低于空白组(P0.05),强的松组、健脾组小鼠游泳时间均有所延长,以健脾摄血效果最佳。(3)从注射APS第4天开始,模型组、强的松组、健脾摄血组小鼠进食量明显减少,与空白对照组比较,具有统计学意义(P0.05);干预给药第10天、第12天,强的松组模型小鼠进食量增加,与对照组比较,具有统计学意义(P0.05);第16天健脾摄血组小鼠进食量增加,与模型组比较,具有统计学意义(P0.05)。(4)从注射APS第6天开始,模型组饮水量增加,与空白组比较,具有统计学意义(P0.05);给药第10天开始,强的松组小鼠饮水量增加,与空白组比较,具有统计学意义(P0.05),而健脾摄血组小鼠饮水量无明显增加。(5)注射APS后由于免疫效应,模型组脾脏、胸腺明显增大,与空白组比较,具有统计学意义(P0.05);经强的松干预后,脾脏、胸腺缩小,与模型组比较,具有统计学意义(P0.01)。经健脾摄血方干预后,脾脏与模型组比较,无统计学意义(P0.05);胸腺具有统计学意义(P0.01)。结论:(1)注射APS复制的ITP小鼠模型符合病证结合模型特征。(2)强的松、健脾摄血方对ITP模型小鼠不耐劳力、食欲不振等脾气虚症状有明显改善效果。     

益气摄血法治疗免疫性血小板减少症概况

中医对免疫性血小板减少症的治疗多从气血相关的理论进行论治,气不摄血证是ITP临床常见的证型,补气摄血法是常用的治法。与西医相比,中医补气摄血的思路更好的抓住了止血这一关键矛盾,将辨病与辨证有机结合,达到标本兼治而副作用小的治疗目的。对ITP的研究,应探索与ITP证候具有特异性的关联性指标,尤其慢性ITP,临床多表现为气不摄血证,应从中医气血相关理论,结合现代免疫学发病机制研究,深入探索ITP气血相关的物质基础以及气不摄血证的形成过程,验证益气摄血治疗ITP的临床疗效,阐明益气摄血治疗ITP的疗效机理,为临床提供更有效的诊疗方案。     

二号再生胶囊治疗特发性血小板减少性紫癜的实验研究

目的:探讨二号再生胶囊治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP)的疗效.方法:用免疫法建立小鼠ITP模型,设正常对照组、豚鼠血清对照组、模型组、阳性药组、低剂量实验组和高剂量实验组共6组,实验组和阳性药组灌胃给予不同剂量的药物,其他各组给予等量生理盐水.实验过程中观察小鼠一般情况的改变.给药10d后处死小鼠,检测小鼠体重、脾脏和胸腺指数、血象、骨髓象、脾脏病理和T淋巴细胞亚群等各项指标的改变.结果:模型组小鼠出现紫癜和胃肠道出血症状,血小板显著降低,与其他各组相比有显著性差异(P<0.01),并有骨髓巨核细胞数增多,表现出骨髓细胞成熟障碍.实验组和阳性药组对ITP小鼠有明显的治疗作用,表现为血小板明显增多,与模型组相比差异显著(P<0.01), 骨髓细胞成熟障碍减轻,巨核细胞数恢复正常,尤其以产板巨核细胞显著增多(P<0.01),脾脏指数降低,外周血CD8降低,CD4/CD8比值升高.各实验组中以高剂量实验组效果最为明显.结论:二号再生胶囊治疗特发性血小板减少性紫癜模型小鼠疗效显著,尤其以升高血小板的作用最为明显.其作用机制与调节机体的免疫功能有关.     

气不摄血证免疫性血小板减少症患者细胞免疫功能变化及其临床意义

目的:观察气不摄血证免疫性血小板减少症(ITP)患者细胞免疫功能变化,从细胞层面探究气不摄血证ITP的生物学基础。方法:选取2016年12月至2017年5月在中国中医科学院西苑医院与北京中医药大学东方医院门诊就诊的ITP确诊患者42例,依据中医证候积分分级标准,将患者分为轻度、中度、重度3组,同时纳入26例体检健康者作为对照组,观察各组Th1、Th2、Th17、Treg、Breg细胞的表达比例变化情况,并对上述免疫细胞的表达与中医证候积分的相关性进行分析。结果:与正常对照组比较,气不摄血证ITP患者Breg与Th17细胞的表达比例下降,Th1细胞的表达比例上升(P0.05),Th1/Th2呈Th1型(P0.05),Treg与Th2细胞的表达以及Th17/Treg比值无统计学意义。与对照组比较,轻度组(P0.05)、中度组(P0.05)、重度组(P0.05)的Breg细胞的表达显著降低,Th1细胞的表达和Th1/Th2比值显著升高,Treg、Th2以及Th17细胞的表达、Th17/Treg比值差异无统计学意义。中度组与重度组Breg细胞的表达显著低于轻度组(P0.05),其他免疫细胞的表达与轻度组比较差异无统计学意义。重度组上述免疫细胞细胞的表达与中度组比较差异无统计学意义。Bre细胞的表达与中医证候积分具有负相关性(r=-0.488,P=0.001),其余免疫细胞无相关性。结论:气不摄血证ITP患者细胞免疫功能变化表现为Th1细胞表达增加导致Th1/Th2失衡。Th17与Breg细胞表达水平下降。Breg细胞表达水平可能反映了气不摄血证患者的气虚严重程度。     

健脾益气摄血方对ITP模型小鼠外周血象的影响

目的:研究健脾益气摄血治则对ITP小鼠外周血象的影响。方法:制备豚鼠抗小鼠血小板血清(APS),注射于BALB/c小鼠体内造成ITP小鼠模型,模型稳定后给予强的松和健脾益气摄血颗粒干预,检测小鼠外周血象的变化情况。结果:注射APS造模后,小鼠外周血血小板计数减少,白细胞计数升高,血红蛋白含量降低,血小板分布宽度基本无影响;给药干预后,血小板计数回升,白细胞计数降低,但与药物作用不相关,血红蛋白含量回升,血小板分布宽度无影响。结论:健脾益气摄血治则能够有效提升ITP小鼠血小板数量及血红蛋白含量。     

“从脾论治方”对原发免疫性血小板减少症小鼠血管活性因子的影响

目的：观察“从脾论治方”对原发免疫性血小板减少症（ITP）小鼠血管活性因子的影响,探讨“从脾论治方”的止血效应机制。方法：以被动型免疫造模法建立ITP小鼠模型,以泼尼松、归脾汤、健脾益气方、健脾益气摄血方为干预药物,以ELISA检测模型小鼠血清血管内皮素-1（ET-1）、血栓素A2（TXA2）、血管性血友病因子(vWF)、血管内皮细胞黏附分子-1（VCAM-1）、前列腺素（PG）、前列环素（PGI2）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶3（NOS3）、血栓调节蛋白（TM）水平。结果：1）升血小板疗效：注射APS后第15天（给药第8天）,模型对照组小鼠外周血血小板计数（PLT）仍显著低于正常对照组,而各给药组小鼠外周血PLT与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05),并且明显高于模型对照组。2）止血疗效：注射APS后各组小鼠均有不同程度出血倾向,药物干预第6天及第8天,各观察组出血等级明显低于模型对照组。3）血管促凝活性因子：实验各组VCAM-1水平显著低于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05);健脾益气组和归脾汤组VCAM-1水平均显著高于模型对照组和泼尼松组,健脾益气摄血组VCAM-1水平明显高于泼尼松组,差异有统计学意义（P<0.05)。4）血管抗凝活性因子：实验各组TM水平明显低于正常对照组,健脾益气摄血组TM水平显著低于模型对照组,差异有统计学意义（P<0.05)。结论：“从脾论治”方可以升高ITP模型小鼠外周血PLT,降低出血分级,并且可以通过上调VCAM-1、下调TM检测值调节促凝与抗凝活性因子的动态平衡。