成年大鼠破骨细胞体外培养及细胞凋亡的观察

目的　为研究骨重建过程中破骨细胞的关键作用,建立成年大鼠（１２ ～５０ 周龄） 破骨细胞的体外培养方法并进行细胞凋亡观察。方法　大鼠处死后,在无菌条件下取出股骨,剪去两骺端,以αＭＥＭ 将骨髓细胞冲洗出, 并离心洗细胞２ 次,置于αＭＥＭ 培养液,内含αＭＥＭ,体积分数为１０％ 的胎牛血清（ＦＣＳ） 和１α,２５（ＯＨ）２ Ｖｉｔ Ｄ３ １０ －８ ｍｏｌ／Ｌ,在２４ 孔板内,以体积分数为５ ％ 的ＣＯ２ ,３７ ℃,培养８ 天。按原位ＤＮＡ 末端标记（ＴＵＮＥＬ）检测试剂盒方法染色细胞,以荧光显微镜观察细胞凋亡。结果　经活体观察、ＨＥ染色、抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ） 染色,光学显微镜、扫描电镜观察骨片之陷窝的形成,证实培养的细胞为破骨细胞;ＴＵＮＥＬ 检测,荧光显微镜下可见破骨细胞核染色质浓缩、裂解等凋亡细胞的典型变化与未凋亡的破骨细胞。结论　本实验建立了成年大鼠破骨细胞的体外培养方法并进行细胞凋亡观察。     

成年大鼠破骨细胞体外增减及细胞凋亡的观察

目的 为研究骨重建过程中破骨细胞的关键作用，建立成年大鼠（１２～５０周龄）破骨细胞的体外培养方法并进行细胞凋亡观察。方法 大鼠处死后，在无菌条件下取出股骨，剪去两骺端，以αＭＥＭ将骨髓细胞冲洗出。并离心洗细胞２次，置于αＭＥＭ培养液，内含αＭＥＭ，体积分数为１０％的胎牛血清（ＦＣＳ）和１α，２５－（ＯＨ）２ＶｉｔＤ３ １０＾－８ｍｏｌ／Ｌ，在２４孔板内，以体积分数为５％的ＣＯ２、３７℃，培养８天。     

成人破骨细胞骨髓培养法的建立与鉴定

目的　在国内前人建立动物破骨细胞骨髓培养方法的基础上,首次建立人破骨细胞骨髓培养法。方法　采取１３例２５－７５岁行全髋置换术的成人股骨上端红骨髓,经密度梯度离心得骨髓单个核细胞（ｍａｒｒｏｗｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ,ＭＭＮＣ）,在浓度为１ｘ１０－８ｍｏｌ／Ｌ的１,２５－（ＯＨ）２Ｄ３的促分化作用下,于预置盖玻片或人胫骨皮质骨片的２４孔培养板内,每孔接种１ｘ１０６／ｍｌ培养１－３周。结果光镜下观察有单个核细胞融合成多核细胞和单个核细胞团形成,经ＴＲＡＰ染色呈阳性反应,电镜下观察有典型的骨吸收陷窝形成。结论　这些均表明由骨髓培养破骨细胞样细胞的方法是成功的。而且利用此方法较之新生动物的直接分离法,所得破骨细胞量多,特征明显,并且方法简单易行。更重要的是为人的破骨细胞样细胞,因此培养方法更有价值。     

骨膦抗去势雌鼠骨质疏松研究

切除８月龄雌性大鼠双侧卵巢后，皮下注射骨膦１２周，与单纯卵巢切除组（ＯＶＸ组）、假手术组（ｓｈａｍ组）及口服尼尔雌醇组（Ｅ３组）比较，用骨生物力学、骨密度测量、骨形态计量学等方法对骨膦的药效进行综合评价。结果表明，与ｓｈａｍ组比较，ＯＶＸ组骨灰重、骨干重、骨钙含量及骨密度、抗弯力、骨小梁体积密度、宽度均明显降低，而成骨细胞指数和破骨细胞指数、尿羟脯氨酸则明显增高。骨膦和Ｅ３对上述指标有显著改善作用。     

H_2O_2诱导人类肝细胞、内皮细胞细胞凋亡时Ca~(2 )流变化的对比研究

探讨过氧化物诱导人类肝细胞（ＬＯ２细胞）、内皮细胞（ＥＶＣ３０４细胞）凋亡时Ｃａ２＋流变化不同特点和意义及丹参提取物Ｒｘａ通过Ｃａ２＋信号系统介导的细胞保护效应。方法用膜联蛋白荧光素（Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ－Ｆｌｕｏｓ）与碘化丙啶（ＰＩ）双标记流式细胞术（ＦＣＭ）分析Ｈ２Ｏ２作用不同时限Ｒｘａ处理组与未处理组凋亡细胞指数分布;用全细胞膜片钳放大系统显微荧光检测术同步分析同期Ｃａ２＋流变化。结果Ｈ２Ｏ２诱导细胞凋亡时ＬＯ２细胞［Ｃａ２＋］ｉ、Ｃａ２＋跃升,Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ＋细胞指数均较ＥＶＣ３０４细胞为高;［Ｃａ２＋」ｉ＞４００ｎｍｏｌ／Ｌ后１～２小时可观察到细胞凋亡早期膜翻转现象。Ｒｘａ组［Ｃａ２＋］ｉ、Ａｎｎｅｘｉｎ．Ｖ＋和ＰＩ＋细胞指数均较未处理组为低。结论Ｈ２Ｏ２可诱导ＬＯ２、ＥＶＣ３０４细胞Ｃａ２＋依赖性细胞凋亡;［Ｃａ２＋］ｉ＞４００ｎｍｏｌ／Ｌ可能为细胞凋亡启动的早期信号;ＬＯ２细胞较ＥＶＣ３０４细胞抗凋亡能力为差;Ｒｘａ能有效降低［Ｃａ２＋］ｉ,减轻细胞损伤程度。     

1,25—二羟基维生素D3对小鼠骨髓细胞形成破骨细胞样细？…

目的动态观察１，２５－二羟基维生素Ｄ３「１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３」对ＮＨ小鼠骨髓细胞培养在体外形成破骨细胞及其骨吸收的剂量效应和作用时象。方法收集ＮＨ小鼠骨髓细胞于含１０％胎牛血清的α－ＭＥＭ培养基中行体外培养，设置不同的１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３浓度组和给药时间组，并于培养第３、６、９、１２天观察记录抗酒石酸酸性磷酸酶（ｔａｒｔｒａｔｅ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＴＲＡ     

破骨细胞体外培养生存数的观察与鳗鱼降钙素的影响

应用改良的Ｆｅｎｔｏｎ方法由出生２４小时内的新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠分离破骨细胞（ＯＣ）培养于盖玻片与骨片上，并应用改良的ＶａｎＤｅＷｉｊｎｇａｅｒｔ和Ｍｏｓｔａｆａ方法对培养在骨片上的ＯＣ进行ＴＲＡＰ染色，观察体外培养ＯＣ的形态与生存时间。培养于骨片上的ＯＣ生存时间可长达２４０小时。１×１０（－９）ｍｏｌ／Ｌ鳗鱼降钙素能明显减少体外培养的多核ＯＣ生存数，但对单核前ＯＣ数没有明显影响     

破骨细胞对磷酸三钙陶瓷人工骨生物降解的研究

目的 采用破骨细胞与磷酸三钙（ＴＣＰ）陶瓷体外混合培养方法，观察其对ＴＣＰ陶瓷的降解作用。方法 从新生ＳＤ大鼠长骨骨髓中分离出破骨细胞，与ＴＣＰ陶瓷圆盘混合培养，分别于４８及９６小时终止培养并观察。结果 在倒置显微镜下见破骨细胞胞体呈圆形或椭圆形，多核，胞浆伸出许多细胞突起。抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色阳性。ＳＥＭ观察见在ＴＣＰ陶瓷圆盘表面出现许多散在分布的圆形吸收空隙，直径一般〈２０μｍ，     

l，25(OH)2D3诱导鼠骨髓细胞形成多核破骨细胞的实验研究

目的：观察１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对骨髓干细胞形成破骨细胞的调控作用，从而为破骨细胞骨吸收机制的研究奠定方法学的基础。方法：将不同浓度１，２５（ＯＨ）２Ｄ３加入原代培养的刀骨髓细胞培养液中，利用抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色，监测不同时间点破骨细胞的形成情况，利用倒置光相差异微镜和扫描电镜检测所诱导形成破骨细胞的骨吸收功能情况。结果：培养前３天，细胞ＴＲＡＰ染色阴性，第４天出现ＴＲＡＰ阳性单核细     

破骨细胞质子泵的研究

破骨细胞质子泵的研究邓华云综述王洪复，陈可靖审核近几年，人们在破骨细胞（Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ，ＯＣ）质膜上发现一种囊泡型质子泵，其主要功能是承担ＯＣ的酸分泌，在体内骨吸收和骨重建中起重要作用。由于ＯＣ体外培养技术的建立和生物化学、生物物理、细胞分子生...