先天性马蹄内翻足动物模型胚胎后肢(芽)评分系统的建立

目的 建立一套稳定的评分系统,提供客观的观察指标来确认胚胎早期先天性马蹄内翻足(congenital clubfoot,CCF),进行序列胚胎研究.方法 60只Wistar大白鼠,体重220～250 g,随机分成实验组和对照组各6组.从怀孕第10天起,将维甲酸玉米油混悬液经胃管单次注入,以建立马蹄内翻足动物模型,分别在受孕第13、14、15、16、17、18天取出胎鼠的后肢芽并经过一系列处理.应用评分系统对胎鼠进行评分.结果 经评分系统得出的动物模型CCF发病率为80.9%,经评分系统矫正后的CCF发病率较既往报道高.在实验组和对照组之间的软骨分化存在显著差异.结论 应用评分系统可以有效地筛选出CCF,可以对筛选出的CCF胚胎在关键的研究时间窗口进行系列研究,有效地解决了长期困扰CCF研究难以深入的瓶颈问题.     

胰岛素样生长因子结合蛋白6在维甲酸诱导的大鼠马蹄内翻足畸形中的表达研究

目的 探讨大鼠先天性马蹄内翻足(CCF)软骨组织内胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)的表达规律.方法 应用生物学活性物质全反式维甲酸(ATRA)构建大鼠CCF动物模型;光镜和透射电镜观测大鼠的足部软骨组织病理学改变;RT-PCR及Western印迹杂交检测胎鼠足部软骨组织中IGFBP-6 mRNA及蛋白质的表达水平.结果 120 mg/kg的ATRA诱导实验组35%的胎鼠出现CCF畸形,其他畸形包括:内翻足、小脑畸形、腭裂、无尾畸形等;在骨骼畸形胎鼠的足部距骨内软骨发生中心带缩小,软骨细胞数量减少,软骨细胞核内粗面内质网扩张,线粒体嵴紊乱;正常胎鼠软骨组织内IGFBP-6基因呈低水平表达状态,而骨骼畸形胎鼠IGFBP-6的mRNA和蛋白质表达则明显升高300%和197%(P＜0.05).结论 正常大鼠软骨组织内IGFBP-6基因有低表达.CCF大鼠软骨组织内IGFBP-6的高表达可能与骨骼发育畸形的发生密切相关.     

应用神经示踪技术观察先天性马蹄内翻足大鼠腓肠肌运动神经元的变化

目的观察先天性马蹄内翻足大鼠支配腓肠肌的脊髓运动神经元数量和形态的变化,为先天性马蹄内翻足病因学说中神经肌肉病变学说的研究提供客观依据。方法用全反式维甲酸(alltrans-Retinoicacid,at-RA)诱导大鼠产生先天性马蹄内翻足动物模型,将胎儿外科与显微注射技术相结合,对正常胎鼠和先天性马蹄内翻足胎鼠支配腓肠肌的脊髓运动神经元用荧光金(fluorogold,FG)进行逆行性神经示踪,留取脊髓标本进行冰冻切片,在荧光显微镜下进行FG标记神经元的定量计数和形态观察。结果荧光金标记的神经元主要分布在脊髓前角腹外侧区。RA致畸组中合并神经管发育异常的胎鼠,脊髓冰冻切片未计数到形态正常的FG标记神经元,实验中共有10只胎鼠;未合并神经管发育异常的胎鼠脊髓冰冻切片可观察到FG标记神经元,计数的实验胎鼠数量为25只,其神经元数量比对照组减少、细胞体积较小、突触间联系减少。神经元计数结果为:对照组FG标记神经元数量为(441±222)个;RA致畸组FG标记神经元数量为(266±134)个。结论腰骶段脊髓运动神经元的发育异常可能直接影响其支配部位的肌肉,产生肌肉结构异常和功能障碍,引起肌力不平衡导致足部骨骼形态的改变,最终形成先天性马蹄内翻足畸形的病理改变。     

TrkA、p75NTR mRNA在肛门直肠畸形胎鼠直肠末端的表达

目的通过检测肛门直肠畸形(ARM)胎鼠直肠末端神经生长因子受体TrkA、p75NTR mRNA的表达水平,探讨ARM直肠末端肠神经系统发育情况。方法成年SD孕鼠16只。其中实验组10只,对照组6只。实验组孕鼠在孕11 d、13 d 2次给予10 g.L-1乙烯硫脲(125 mg.kg-1)灌胃,制作先天性ARM动物模型;对照组灌胃注入等量9 g.L-1盐水。2组孕鼠在孕20 d时行剖宫手术取出胎鼠,取其直肠末端并保存于-80℃冰箱;采用反转录/实时定量PCR(RT-PCR)方法检测正常胎鼠和ARM胎鼠直肠末端TrkA、p75NTR mRNA表达情况。结果 TrkA、p75NTR mRNA在正常胎鼠直肠末端的相对表达量分别是162.221±104.675,129.778±51.976,在ARM胎鼠直肠末端中表达分别是78.937±33.425,87.145±25.812,两组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05);琼脂糖凝胶电泳显示TrkA、p75NTR基因扩增后产物cDNA片段与引物设计的扩增片段完全吻合,TrkA、p75NTR基因条带亮度对照组均高于实验组。结论 TrkA、p75NTR mRNA在ARM胎鼠直肠末端的表达异常,提示神经生长因子及受体TrkA、p75NTR可能参与ARM肠神经系统的发育。     

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏中NKx2.5基因表达的影响

目的探讨叶酸缺乏孕鼠子代心脏发育过程中NKx2.5基因和蛋白表达改变。方法成熟雌性36只SD大鼠随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5 d、孕17.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR检测NKx2.5基因mRNA表达。Western-blotting测GATA-4蛋白表达水平。结果NKx2.5基因mRNA及其蛋白在孕13.5 d、孕17.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论叶酸缺乏影响NKx2.5基因和蛋白表达水平,可能导致心脏发生发育中形态改变,从而造成心脏功能缺陷。     

类先天性马蹄内翻足动物模型的建立及病理演变研究

目的：了解先天性马蹄内翻足的发病机制并探索其病理发生，发展规律而建立先天性马蹄内翻足的实验动物模型，方法：应用63只雌雄性Wistar大白鼠从怀孕第10d起将维甲酸（120mg/kg)石蜡油悬液（40mg/ml）经胃管单次注入，建立CCF胎鼠实验动物模型，结果：实验动物模型的马蹄内翻足发病率为53．7％，单足为79．4％，双足为20．65，胫骨远端，距骨持续停滞在胚胎阶段，距骨，跟骨间重叠不良的重要时期即有足的马蹄内翻且畸形随生长发育而加重，其病因可能与脊髓神经病变相关。     

先天性肛门直肠畸形胎鼠直肠末端NGF及受体TrkA与p75的表达

目的 观察神经生长因子(NGF)及其受体TrkA、p75在先天性肛门直肠畸形(ARM)动物模型胎鼠直肠末端的表达及分布.方法 选用成年SD孕鼠16只,实验组10只,对照组6只,实验组在孕11d及13d时分别以1％乙烯硫脲(125mg/kg)灌胃制作ARM动物模型,对照组灌入等量生理盐水,两组孕鼠在孕20 d手术取出宫内胎鼠,进行形态学观察及畸形率统计,并取胎鼠盆腔、会阴部矢状面大体标本HE染色及直肠末端石蜡包埋切片,免疫组化检测NGF及其受体TrkA、p75在正常胎鼠和ARM胎鼠直肠末端的分布情况并半定量分析.结果 正常组:胎鼠存活率100％,肛门开口正常,实验组:存活率80.7％,实验组ARM发生率98.7％、短尾畸形5.1％、无尾畸形94.8％、双足内翻6.4％、脊柱裂6.4％,盆腔会阴部矢状切面HE染色显示:ARM胎鼠肛门为一闭合盲端,无正常肛门结构,直肠盲端为增生鳞状上皮组织及增厚的肌层,未见肠腺分布,直肠末端黏膜下及肌间神经丛数量:ARM组为46.40±16.08,对照组为96.33±18.57,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);免疫组化结果显示:NGF、TrkA、p75主要分布在胎鼠直肠末端黏膜下、肌间神经丛,其中NGF主要分布在细胞核,TrkA分布在细胞质,p75在细胞核、细胞质均有分布,其积分光密度(IOD值):对照组分别为731.75±232.18、262.82±101.72、134.67±67.13,ARM组分别为17.97±74.95、33.15±11.13、113.01±36.47,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 NGF及其受体TrkA、p75可能共同参与ARM的发生、发展过程.     

改良型脑性瘫痪大鼠模型的建立与评估

目的 探讨孕后期脂多糖混合溶液腹腔注射及序贯缺氧缺血对幼鼠出生28 d时体质量、行为学的影响及脑组织病理学变化,评定新型脑性瘫痪动物模型构建的优势.方法 孕鼠(首次怀孕10 d)15只,随机取12只为实验组,孕16d时予脂多糖腹腔注射及缺氧处理,隔日1次,直至分娩,新生大鼠与母鼠为同一组,新生大鼠出生7d结扎双侧颈总动脉;对照组孕鼠于相应日期予9 g/L盐水腹腔注射至分娩,分娩后新生大鼠与母鼠为同一组.2组新生大鼠监测出生28 d生长发育情况,包括体质量、睁眼时间、抓力实验、旋杆实验,并行脑组织病理学检测.结果 实验组与对照组新生大鼠出生体质量分别为(5.6±0.9)g和(6.2±0.8)g,睁眼时间分别为左眼(16.9±2.0)d和(13.0±2.0)d,右眼(23.1±2.6)d和(13.7±1.7)d;2组比较差异有统计学意义(P均＜0.05)抓力测试过程中得分分别为(2.7±0.8)分和(1.5±0.4)分.神经功能缺损评分分别为(4.9±2.5)分和(1.2±1.0)分,2组相比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).实验组和对照组旋杆实验得分分别为(1.9±0.6)分和(1.9±0.4)分,2组比较差异无统计学意义(P=0.871).实验组脑组织病理切片HE染色显示神经元排列紊乱,丢失,白质变薄,脑实质有炎性细胞浸润,并可见到明显细胞海绵状变性;对照组灰质层清晰,神经元规则排列,灰白质界限清楚.结论 孕后期予脂多糖腹腔注射及序贯缺氧缺血能构建稳定的脑性瘫痪模型.     

肛门直肠畸形大鼠盆底肌胚胎发育过程中细胞凋亡的研究

目的 研究肛门直肠畸形鼠盆底肌胚胎发育过程中的凋亡现象, 探索凋亡在盆底肌异常发育中的可能致病作用.方法 体重250～300 g的Wistar大白鼠74只随机分组,雌雄午夜合笼后次晨雌鼠阴道涂片,显微镜下见到精子即确认已交配,此日计妊娠第0天.ETU组:52只大鼠于妊娠第10天经胃管注入125 mg/kg的乙烯硫脲.正常对照组:22只大鼠于妊娠第10天经胃管注入等量的生理盐水.妊娠第16、17、19、21天刮宫取胎, 经连续石蜡切片及提取盆底横纹肌复合体, 应用TUNEL染色及DNA Ladder方法检测盆底肌的凋亡, 免疫组织化学及RT-PCR方法分析Bcl-2/Bax在盆底肌中的表达.结果 ①正常对照组共孕雄性胎鼠108只,未见畸形发生.ETU致畸组共得雄性胎鼠247只,肛门直肠畸形173只, 其中伴发脊柱裂或脊膜膨出21只(12.1%:21/173),3.5%(6/173)伴有肢体畸形(肢体缺如或马蹄内翻足);②在正常组中.孕17 d后出现TUNEL阳性染色,散在分布于横纹肌复合体与球海绵体肌交界区及直肠后两侧横纹肌复合体汇合处;畸形组, 孕16 d已有TUNEL阳性染色,大量的阳性染色细胞主要分布在横纹肌复合体的背侧;两组DNA电泳时出现均出现DNA梯度,以畸形组明显;③在两组中,孕17d时开始小现Bax及Bcl-2的表达,孕19d及孕21 d表达增强.与正常组相比,Bcl-2表达下凋(分别为0.44±0.06比0.49±0.07,0.69土0.09比0.90±0.14,0.51±0.07比0.71±0.11),孕19d及21 d时差异有统汁学意义.而Bax基因在畸形组中表达上调(分别为0.39±0.05比0.31±0.05, 0.47±0.06比0.37±0.06,0.40±0.05比0.37±0.05),孕17d及19d时差异有统汁学意义.RT-PCR的结果提示畸形组Bax表达显著增强而Bcl-2表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05).结论 肛门直肠畸形鼠盆底肌存在异常凋亡及Bax/Bcl-2表达紊乱, 过早、过度及异位的凋亡可能是肛门直肠畸形时盆底肌发育异常机制之一;Bax/Bcl-2在盆底肌中的时空表达, 提示其在盆底肌凋广过程中的重要调节作用.     

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏超微结构及心脏发育相关基因表达的影响

目的探讨叶酸缺乏孕鼠的子代心脏发育过程中GATA-4、NKx2.5基因表达和超微结构的改变。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验组和对照组,分别喂以缺乏叶酸和含叶酸饲料2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5d（E13.5d）、孕17.5d（E17.5d）胚胎及新生鼠心脏。用实时扩增聚合酶链反应（RT-PCR）检测胚胎及新生鼠心脏GATA-4、NKx2.5基因3个时期的表达。电镜观察新生鼠心脏的超微结构。结果1.经切片观察E13.5d胚胎实验组发现明显发育延迟占35.14%,E17.5d胚胎实验组发现明显心脏畸形占43.24%,新生鼠实验组发现明显心脏畸形占69.44%。2.GATA-4、NKx2.5基因在3个时期相对表达量实验组低于对照组（Pa〈0.05）。3.实验组新生鼠心脏电镜下肌细胞胞浆内膜性结构退行性变、肌丝明暗带（z带）不清、线粒体内基质凝结、肌浆网扩张;对照组正常或破坏很轻。结论孕鼠叶酸的缺乏影响子代心脏GATA-4、NKx2.5基因水平的表达,并导致心脏超微结构和大体结构的改变,从而造成心脏发育缺陷。     

妊娠期糖尿病胎鼠心脏T-同源盒转录因子表达研究

目的 探讨T-同源盒转录因子5（TBX-5）在母鼠妊娠糖尿病（GDM）胎鼠心脏中的分布、表达规律及其在胎鼠心脏发育异常中的作用。方法 将成年SD雌鼠随机分成GDM组和对照组,通过阴道涂片确定怀孕后分别注射链脲佐菌素（STZ）及柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（PBS）制备GDM模型,于孕0、3、6、9、12、15、19天对母鼠进行尾静脉采血测血糖,并分别于孕后第12、15、19天进行胎鼠心脏取材,HE染色观察心脏组织病理变化,免疫组化检测TBX-5的表达并进行半定量检测。结果 与对照组相比,GDM组胎鼠出现液化吸收胎、死胎、畸心胎的例数增多（P〈0.01）。在大体观及高倍镜下,GDM组12、15、19天胎鼠心脏发育异常比例多于对照组（P〈0.01）。在正常对照组及GDM组各亚组中,TBX-5均在第12天时表达最强,明显高于15、19天（P〈0.01）。TBX-5在15天及19天时的表达无明显差别（P〉0.05）。孕12、15、19天GDM组TBX-5在心肌细胞表达显著增强,与相应时间点的对照组相比均明显增高（P〈0.01）。结论 TBX-5蛋白在妊娠糖尿病母鼠孕12、15、19天三个观察点胎鼠心脏的表达水平明显增高,提示其过度表达可能与妊娠期糖尿病致胎鼠心脏畸形的发生存在关联。     

维生素E拮抗邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯尿道发育毒性的实验研究

目的 探寻维生素E(Vitamin E,VitE)对邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexy1)phthlate,DEHP]所致大鼠尿道发育毒性的拮抗作用及其可能机制.方法 GD12(gestation day12)SD孕鼠随机分为4组,每组20只:玉米油对照组、DEHP组(500 mg·kg-1·d-1)、DEHP(500mg·kg-1·d-1)+VitE(200mg·kg-1·d-1)组和VitE组(200mg·kg-1·d-1).各组分别于母鼠孕期12～19d(GD12～19)持续经口灌注给药.各组分别留取10只孕鼠让其正常分娩,出生第一天,即对新生大鼠计数,并在解剖显微镜下测量雄性新生鼠的肛门生殖器距离(anal genital distance,AGD)并称体重;雄性仔鼠70日龄时逐个检查尿道下裂的发生情况.余孕鼠在GD19d行破宫产取仔代鼠,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测胎鼠阴茎TGF-β1,TGF-βR3 mRNA的表达水平.DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)检测胎鼠阴茎尿道上皮细胞凋亡情况.结果 各组TGF-β1mRNA表达水平分别为:正常组为0.63±0.07、DEHP组为0.96±0.12、DEHP+VitE组为0.65±0.07、VitE组为0.62±0.06,DEHP组表达明显较其他各组增高(P＜0.05).各组TGF-βR3mRNA表达水平分别为:正常组为0.47±0.10、DEHP组为0.75±0.10、DEHP+VitE组为0.49±0.09、VitE组为0.46±0.09,DEHP组表达明显较其他各组增高(P＜0.05).各组胎鼠阴茎凋亡指数分别为:正常组为(30±2.0)%、DEHP组为(8.8土1.1)%、DEHP+VitE组为(28.9±1.6)%、VitE组为(29.6±2.0)%,DEHP组凋亡细胞数较其他各组相比明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).导致大鼠尿道下裂的发生.VitE可降低DEHP上调的胎鼠阴茎TGF-β1,TGF-βR3 mRNA表达水平,恢复胎鼠阴茎尿道上皮细胞的凋亡水平.结论 VitE对DEHP所致尿道发育毒性具有拮抗作用,其机制可能与调控TGF-βs及胎鼠阴茎尿道上皮细胞的凋亡有关.

Abstract：

Objective To study the therapeutic effects of Vitamin E (VitE) on urethral development toxicity induced by di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP). Methods From gestational day 12 to gestational day 19 (GD 12-19) , the timed-pregnant Sprague-Dawley (SD) rats were fed with the eiwith 20 in each group: DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group. The control rats were fed with corn oil. Ten pregnant rats of each group delivered full-term infant rats. The male infant rats were counted, and the anal genital distance (AGD) and body weight were measured. Hypospadias morbidity was also counted on male rats after 17 postnatal days. In the rest 10 pregnant rats of each group, fetuses were harvested on GD19. Semi-quantitive RT-PCR was used to measure mRNA expression of TGF-β1 and TGF-βR3. TUNEL staining was used to measure cell apoptosis in the fetus' genital tubercles. Results Hypospsdias was observed in male rat after 17 postnatal days. The TGF-β1 mRNA of the control group, DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group is 0. 63 ± 0. 07,0. 96±0. 12, 0. 65 ±0. 07, and 0. 62± 0. 06, respectively. The TGF-βR3 mRNA of the control group,DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group was 0. 47 ± 0. 10, 0. 75 ± 0. 10, 0. 49 ± 0. 09,and 0. 46 ± 0. 09, respectively. The TGF-β1 mRNA and TGF-βR3 mRNA was up-regulated in the fetus of DEHP group (P＜0. 05). Cell apoptosis rate in fetus' genital tubercles on GD19 of the control group, DEHP group, DEHP + VitE, and VitE group was 30% ± 2. 0%, 8. 8% ± 1.1%, 28. 9% ±1.6%, and 29. 6% ± 2. 0%, respectively. Cell apoptosis rate was significantly reduced in the fetus of DEHP group (P＜0. 01). In the GD19 fetus treated with VitE, hypospadias morbidity, the TGF-β1 and TGF-βR3 mRNA expressions were significantly decreased. And cell apoptosis rate was significantly increased. Conclusions Vitamin E ameliorates the urethral development toxicity induced by DEHP via regulating TGFβs expression and cell apoptosis in rat fetus.     

HoxA13基因在尿道下裂胎鼠阴茎中的表达及意义

目的研究尿道下裂胎鼠阴茎中HoxA13核酸及其蛋白的表达,探讨其与尿道下裂发生的相关性。方法选用清洁级C57BL／6小鼠,用邻苯二甲酸二（2-乙基）己脂（DEHP）诱导并建立先天性尿道下裂模型;交配怀孕后,孕鼠随机分为玉米油对照组、实验组（DEHP500mg·kg^-1·d^-1）;各组持续灌胃;于怀孕第19天取出仔鼠,测量各组雄鼠体重、AGD;统计各组胎鼠尿道下裂的发生率,并观测阴茎的组织病理学变化;应用常规RT-PCR及免疫组织化学方法检测诱导出的尿道下裂胎鼠及正常对照胎鼠阴茎组织中HoxA13的mRNA及蛋白表达水平。结果对照组、实验组的AGD值分别为（0．208±0．01）cm、（0．181±0．12）cm,P〈0．01;尿道下裂发生率分别为0％、75．7％,P〈0．01。实验组胎鼠尿道板及包皮于阴茎腹侧隆起融合落后,该组尿道与腹侧皮肤间的皮下组织明显减少。DEHP500mg·kg^-1·d^-1诱导的尿道下裂胎鼠阴茎组织中HoxA13mRNA及蛋白表达较对照组明显降低。结论DEHP能影响胎鼠的生长发育及体重,并导致雄鼠外生殖器发育异常;HoxA13mRNA及蛋白的表达在DEHP诱导的尿道下裂胎鼠阴茎中均较正常对照组降低,提示HoxAl3基因异常表达可能是尿道下裂的发生机制之一。     

应用Ilizarov技术治疗儿童复发性僵硬型先天性马蹄内翻足

目的探讨应用Ilizarov技术治疗复发性僵硬型先天性马蹄内翻足(Congenital Clubfoot,CCF)的方法与临床疗效。方法自2008年1月至2015年12月,应用Ilizarov技术治疗29例45足复发性僵硬型CCF,依据Dimeglio分型,均为Ⅲ、Ⅳ型,将连接于胫骨、跟骨,跖骨的Ilizarov外固定环互相连接、组合成复杂的三维外固定器,通过四维调节(三维空间加一维时间),逐渐矫正畸形,从而使患足达到或接近正常足的外形和功能。其中,31足单纯安装Ilizarov外固定牵伸器,9足结合经皮跟腱延长,7足结合中跗骨截骨,3足结合后足的V形截骨。术后7天开始矫正,速度1 mm/d,分4次完成,踝关节矫正至背伸约10°,后足轻度外翻后,停止矫形。矫正位带外固定器负重或保护下行走4周,拆除外固定器短腿管型石膏固定6~8周,拆石膏后夜间支具维持矫形3年。结果所有患者均获随访,随访时间11个月至6年,平均39个月。根据国际马蹄足畸形研究会(ICFSG)的评分系统,优23足,良18足,可3足,差1足,优良率91%。差的1足为DimeglioⅣ型,单纯应用Ilizarov外固定牵伸器治疗,矫形后步态改善,但遗留部分跟骨内翻畸形,2年后畸形明显复发,行三关节融合术治愈。结论应用llizarov外固定器三维矫正马蹄内翻足畸形,安全、微创、疗效确实,尤其适用于大年龄儿童之复发性僵硬型马蹄内翻足,有一定的临床应用价值。     

肾上腺素对内毒素血症大鼠早期炎症因子及急性肺损伤的影响

目的：探讨肾上腺素对内毒素( lipopolysaccharide,LPS)所致大鼠肺损伤的保护作用及其作用机制。方法30只SD大鼠随机分为3组(每组10只)：正常对照组大鼠静脉输注生理盐水2．4 ml/( kg·h);LPS组大鼠静脉注射LPS 6 mg/kg后,静脉输注生理盐水2．4 ml/( kg·h);肾上腺素组大鼠静脉注射LPS 6 mg/kg后,静脉输注肾上腺素0．6μg/( kg·min)。在LPS注射后2 h和6 h通过心导管抽血,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子( TNF)-α、白细胞介素( IL)-6和IL-10水平,并在6 h处死大鼠取肺脏组织,分别予肺组织含水量检测,HE染色观察肺组织病理学变化,以及ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)内TNF-α、IL-6和IL-10水平。结果(1)与正常对照组肺含水量(70．19%±5．87%)相比,LPS组肺含水量(85．24%±5．87%)明显升高( P <0．05),与 LPS 组相比,肾上腺素组肺含水量(78．00%±6．41%)明显降低(P<0．05)。(2)病理观察结果显示,LPS组大鼠肺泡隔内毛细血管充血、水肿及炎症细胞浸润,少部分肺组织可见肺不张及肺泡内水肿、出血。肾上腺素组大鼠肺病理损伤较LPS组明显减轻。(3)与LPS组相比,肾上腺素组各时点血清TNF-α及IL-6水平明显降低(P<0．05), IL-10水平明显升高(P<0．05)。(4)与LPS组相比,肾上腺素组大鼠BALF中TNF-α水平降低[(78±9)ng/L vs.(102±16) ng/L],IL-6水平降低[(268±42) ng/L vs.(347±50) ng/L],IL-10水平升高[(210±23)ng/L vs.(146±34) ng/L](P<0．05)。结论肾上腺素可减轻LPS诱导的急性肺损伤,其保护作用可能与降低TNF-α、IL-6水平,升高IL-10水平有关。     

生长抑素对缺氧缺血性脑病肠损伤的治疗

Objective To explore the therapeutical effect of somatostatin(SST) on the damaged bowel barrier of 7-day-old SD rats with hypoxic-ischemic encephalopathy(HIE). Methods Total 7-day-old SD rats were randomly divided into untreated control group(n=6), sham-operated group(n = 6), HIE model group(n = 8) and SST-treated group(n = 8). After 6 hours of operation, abdominal aorta blood of the rats was collected to measure the level of D-lactic acid, the ileum was taken for pathological analysis and immunohistochemistry staining of SP. Results The level of D-lactic acid in HIE model group was obviously increased[(10.30 ± 1.70)mg/L], and there were significant differences compared to untreated control group, sham-operated group as well as SST-treated group respectively(P < 0.05, respectively). The cillia of ileum became widen and shorten, and the number of it decreased. At the same time, in the stratum mucosa and the neurofibrillary tangle, the expression of SP was increased (average optical density: 12.67 ± 5.46), and there were significant differences compared to untreated control group, sham-operated group as well as SST-treated group raspectively (P < 0.05,respectively).Compared with HIE model group,the level of D-lactic aeid decreased obviously[(7.35 ± 1.55) mg/L] in SST-treated group,and there were no differences compared to untreated control group and sham-operated group respectively. The intestinal villi became thinner and higher in the SST-treated group, even the number increased. Besides that, the expression of SP decreased(average optical density: 0.73 ± 0.09), and there were no differences compared to untreated control group and sham-operated group respectively. Conclusion The therapeutical effect of SST on the bowel barrier damage of 7-day-old SD rats with HIE is clear.     

CASP3基因R101H多态性与法洛四联症的相关性

目的探讨CASP3基因R101H多态性与法洛四联症(TOF)的相关性。方法选择TOF患儿112例(TOF组)。男69例,女43例;年龄(4.27±1.93)岁。同时选取200名健康体检儿童为健康对照组。男102例,女98例;年龄(5.68±2.17)岁。采用病例对照研究,应用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)进行CASP3基因R101H位点(NCBI SNP ID:rs146285839)多态性检测,分析基因型频率和等位基因频率在病例组和对照组的分布,比较不同基因型与TOF患病风险的关系。应用SPSS 15.0软件进行统计学分析。结果在312例样本中,CASP3基因R101H多态位点存在C/T多态。R101H多态位点基因型频率在TOF组与健康对照组中的分布存在统计学差异(χ2=9.752,P=0.008),等位基因频率在TOF组与健康对照组中的分布亦存在统计学差异(χ2=11.682,P=0.001),且T等位基因携带者患TOF的风险高于C等位基因携带者(OR=1.854,95%CI 1.298～2.647)。结论 CASP3基因R101H多态性与TOF具有明显的相关性,具有T等位基因的个体TOF患病风险增高,CASP3基因可能是TOF的遗传易感基因。     

全反式维生素A对Nitrofen诱导的肺发育不良的影响

目的研究全反式维生素A（RA）对Nitrofen诱导的肺发育不良的影响,探讨其对Nitrofen诱导肺发育不良的作用。方法选取正常喂养孕鼠为对照组,以Nitrofen喂养为Nitrofen组,制作胎鼠肺发育不良动物模型,依据胎鼠肺胚芽培养基中是否外源性添加RA,将24份胎鼠肺标本分为对照组、对照＋RA组、Nitrofen组和Nitrofen＋RA组（各6例）。采用图像分析方法分析各组肺胚芽的发育参数面积和周长。结果①对照组与对照＋RA组肺胚芽发育明显比Nitrofen组和Nitrofen＋RA组成熟,培养96h后,可见肺胚芽发育并增殖;Nitrofen组肺胚芽发育差,培养72h后肺胚芽逐渐出现发育停止和坏死;Nitrofen＋RA组肺胚芽发育明显改善。②培养96h后,对照组与对照＋RA组相比,肺面积（2．535±0．423）mm2vs（2．088±0．622）mm2,周长（6．544±0．710）mm vs（6．593±1．133）mm,差异均无统计学意义（P〉0．05）;Nitrofen＋RA组肺面积比Nitrofen组明显增多,为（1．867±0．032）mm2vs（1．053±0．033）mm2,差异有统计学意义（P〈0．05）,而周长比较,无统计学意义（P=0．53）,为（6．237±0．581）mmvs（4．862±0．458）mm;对照组和对照＋RA组分别与Nitrofen组相比,肺面积及周长均有统计学意义（P〈0．05）。结论在胚胎发育早期Nitrofen可导致肺发育不良,RA能明显改善Nitrofen诱导的肺发育不良。