尿可溶性抗原检测早期诊断军团菌肺炎的实验研究

为探讨应用生物素－亲和素的酶联免疫测定法检测军团菌可溶性抗原对早期诊断军团菌肺炎价值，用ＢＡ－ＥＬＩＳＡ法检测２７只Ｌｐ１型军团菌肺炎豚鼠尿标本，发现感染后第１ｄ３６．８％（７／１９）的豚鼠尿中可测出军团菌可溶性抗原，至感染后第５ｄ达８３．３％（２０／２４），累计敏感性达１００％。４７只非军团菌感染豚鼠尿检示该法的特异性为９１．５％（４３／４７），与金黄色葡萄球菌（金葡菌）及某些假单胞菌有交叉反应     

军团菌肺炎误诊四例分析

分析了4例军团菌肺炎的误诊原因,并从临床表现的异同点对此病进行了总结,在经验教训中指出:对于经验治疗失败的肺炎病例要注意军团菌肺炎的检测,尿军团菌可溶性抗原阳性为现症感染的依据,可做为早期诊断军团菌肺炎的指标之一。     

结核分枝杆菌rCFP10—ESAT6融合蛋白诱发豚鼠迟发型超敏反应的实验研究

目的探讨以rCFP10-ESAT6融合蛋白为抗原用皮试法评价其对结核分枝杆菌（Mtb）和卡介苗（BCG）致敏豚鼠的鉴别意义。 方法分别用灭活H37Rv和BCG活菌致敏豚鼠．4wk后用不同剂量的rCFP10—ESAT6对同一只豚鼠作皮试，同时设立5IU结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）阳性对照及生理盐水（NS）阴性对照，于注射后24、48、72h测量红肿或硬结的直径。 结果以rCFP10-ESAT6为抗原的皮肤试验检测Mtb致敏豚鼠的特异性和敏感性分别为100．0％（21／21）、90．9％（10／11），以PPD为抗原的皮肤试验检测Mtb致敏豚鼠的特异性和敏感性分别为47．6％（10／21）、90．9％（10／11），以rCFP10-ESAT6为抗原的迟发型超敏反应（DTH）中，以1．0μg剂量效果最好．观察时间以皮试后24h效果最好，1．0μg重组融合蛋白在Mtb致敏豚鼠上引发的红肿、硬结比5IU PPD引发的红肿、硬结大。 结论rCFP10-ESAT6能诱导Mtb致敏豚鼠发生DTH，能特异区分Mtb致敏豚鼠及BCG免疫豚鼠，抗原剂量及反应时间是rCFP10—ESAT6诱导豚鼠DTH的主要影响因素。     

单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原（CAg）的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体（单抗3F1和4H2）夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1（3F1、4H2）,1株为IgM（2A2）,杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：25600、1：25600和1：12800,诱生腹水ELISA效价分别为1：80000、1：80000和1：40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84．2％（48／57）和87．2％（41／47）,广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86,4％（19／22）,与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A。。值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3P1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。     

酶联免疫吸附试验检测丙型肝炎病毒核心抗原的临床价值

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测丙型肝炎核心抗原（HCV—Ag）诊断丙型肝炎病毒（HCV）感染的方法及临床价值。方法采用ELISA法检测疑为HCV感染患者86例,采血半小时内分离出血浆,部分于当日进行丙型肝炎病毒核糖核酸（HCV—RNA）和丙型肝炎病毒抗体（HCV—Ab）检测,其余置-20℃冰箱保存,用于HCV—Ag检测。结果HCV—IqNAPCR、HCV-Ag、抗-HCV阳性率分别为46．5l％、43．02％、37．21％;同HCV～RNAPCR检测结果显示,HCV—Ag检测符合率89．53％（77／86）、假阳性率3．49％（3／86）、假阴性率6．98％（6／86）;抗-HCV检测符合率81．40％（70／86）、假阳性率4．65％（4／86）、假阴性率13．95％（12／86）。结论ELISA法检测HCV—Ag敏感性及特异性较高,可明显缩短HCV感染的窗口期,且简捷、价廉,适合大规模筛查和基层医院开展。     

MP快速液体培养法在儿童支原体肺炎诊断中的应用

目的：探讨MP快速液体培养法在儿童支原体肺炎诊断中的应用价值。方法：采用MP快速液体培养法对1089例临床拟诊为呼吸道感染的患儿的咽拭子进行培养；ELISA法检测血清MP IgM抗体856次；PCR法检测MP DNA608例次。对检测结果与临床诊断进行分析。结果：MP快速液体培养法阳性467例，阳性率由42．9％（467／1089）。血清MP IgM抗体阳性率为31．9％（273／856）；PCR法阳性率为38．8％（236／608）。结论 MP快速液体培养法快速，简例，对肺炎支原体感染的早期诊断具有重要的参考价值，适应一般实验室开展应用。     

尿抗原测定快速诊断成人社区获得性肺炎的临床研究

目的了解尿抗原测定方法用于快速诊断社区获得性肺炎链球菌及军团菌感染的临床意义及我院社区获得性肺炎病原学特点。方法收集2009年11月—2010年3月我院门诊及住院社区获得性肺炎的患者,用免疫色谱层析法测定肺炎链球菌及军团菌尿抗原,对痰进行细菌分离培养与鉴定。住院患者行静脉血细菌培养与鉴定,同时进行军团菌、支原体、衣原体抗体检测。结果 73例患者中,肺炎链球菌痰培养阳性率为2.74%(2/73),血培养阳性率为1.37%(1/73),尿肺炎链球菌抗原阳性率为15.07%(11/73)。支原体抗体阳性21例(28.77%),衣原体抗体阳性4例(5.48%)。未检出军团菌阳性病例。结论尿抗原测定方法用于诊断肺炎链球菌的阳性率明显提高,对社区获得性肺炎的快速诊断具有良好的应用前景。沈阳地区社区获得性肺炎中支原体感染占主要地位,其次为肺炎链球菌。     

老年下呼吸道感染患者的军团菌抗体水平

为了解老年下呼吸道感染患者中军团菌的感染情况，对６０岁以上的下呼吸道感染患者９８例，采用血清微量凝聚法，检测军团菌（ＬＰ１～６型）抗体，同时常规做痰菌培养。结果显示：血清军团菌（ＬＰ１～６型）抗体阳性率２９６％，痰菌培养阳性６５例（６６３％），其中Ｇ－杆菌３８例，占痰菌阳性者的５８５％。在伴有慢阻肺和／或慢性全身疾病的下呼吸道感染患者中，ＬＰ１－６型抗体阳性率明显增高     

单纯疱疹病毒感染诊断方法及标本选择的探讨

目的目的探讨单纯疱疹病毒（HSV）感染诊断方法及标本的选择对诊断结果的意义。方法选择117例疑似HSV感染的皮肤科门诊患者或神经内科脑炎脑膜炎患者血清，其中53例有明显疱疹症状者同时取疱液标本，78例脑炎脑膜炎患者同时采集脑脊液标本。应用ELISA法、免疫印迹法检测血清、脑脊液中HSV—IgM抗体，应用间接免疫荧光法（IIF）检测脑脊液、疱疹液HSV抗原。结果血清、脑脊液标本ELISA法和免疫印迹法检测HSV—IgM抗体阳性率分别为70．94％、6．41％和59．83％、3．85％。脑脊液、疱疹液TIF法检测HSV抗原阳性率分别是15．38％、67．93％。结论ELISA法与免疫印迹法检测HSV—IgM抗体阳性率无显著性差异（γ=0．017，P〉0．5）；脑脊液标本供检测HSV抗原与HSVIgM抗体的阳性率差异显著（γ=13．224，P〈0．05．）；对复发感染患者采用疱疹液抗原检测相对于采用血清检测抗体对诊断HSV感染更具有临床意义。在临床上，对不同病症病程的HSV感染，选择相应适宜的诊断方法及标本种类可取得更准确的检测结果。     

急性下呼吸道感染对Hib OMP特异抗体测定的意义

我们建立了ｂ型流感嗜血杆菌（Ｈｉｂ）外膜蛋白（ＯＭＰ）特异抗体测定的间接酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ），同时联合血、尿细菌抗原检测，对７０例肺炎患儿及３０例健康儿童进行研究，结果有１９／７０（２７．１％）肺炎患儿产生Ｈｉｂ ＯＭＰ抗体反应，除外１例交叉反应，余１８例诊断为Ｈｉｂ感染，其中５例未查到Ｈｉｂ抗原，以Ｈｉｂ ＯＭＰ特异抗体反应得到诊断，表明Ｈｉｂ ＯＭＰ抗体测定可提高小儿Ｆｉｂ肺炎的病原诊     

军团菌肺炎10例临床分析

对１０例嗜肺军团菌肺炎患者的临床特点进行了分析，其中１例为院内感染，９例为院外机会感染。讨论了本病的肺外表现和合并症，１例合并卡氏肺孢子虫性肺炎；１例同时发生嗜肺军团菌和米克达德军团菌２种感染。讨论了本病的诊断及治疗，认为早期诊断及早期治疗是至关重要的。     

用Nested聚合酶链反应检测嗜肺军团菌的实验研究

用Nested聚合酶链反应(Nested PCR)法检测嗜肺军团菌种。Nested PCR法所用的两对寡核苷酸引物按编码24 kDa嗜肺军团菌表面抗原的基团片段序列设计的。用此两对引物对实验的军团菌种和非军团菌种细菌DNA进行扩增,只有嗜肺军团菌种DNA被扩增,而其他军团菌种和非军团菌属细菌没有被扩增。第1步和第2步PCR分别检测到最小量为10pg和10 fg的靶DNA。对不同量的嗜肺军团菌配制成的痰标本进行检测,能检测到0.1cfu/ml的嗜肺军团菌,只需12h。这些结果显示Nested PCR法检测嗜肺军团菌特异性强,敏感性高。此方法为从临床标本和环境材料中早期、快速检测到嗜肺军团菌提供了有效的工具。     

双重PCR法检测痰标本对早期诊断军团菌肺炎的意义

为探讨双重PCR方法 (DPCR)检测痰标本中军团菌DNA在早期诊断军团菌肺炎方面的意义 ,采用DPCR方法对军团菌肺炎组、临床疑似军团菌肺炎组、普通肺炎组和肺结核组 4组患者留取的痰标本进行检测。DPCR过程采用根据军团菌 1 6SrRNA基因和mip基因设计的 2对引物 ,同时扩增军团菌 3 86bp 1 6SrRNA基因片段和 2 0 6bpmip基因片段。结果 :军团菌肺炎组的DPCR阳性检出率为 1 0 0 % ,明显高于其他 3组 (分别为 1 7.2 4%、0、0 ,P均 <0 .0 1 )。模拟痰标本DPCR的最低检出限为 1× 1 0 3 cfu/mL。初步研究表明 ,DPCR方法检测痰标本中的军团菌DNA具有较好的敏感性、特异性和稳定性 ,此法在临床早期诊断军团菌肺炎方面具有一定的价值     

嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌所致社区获得性肺炎的临床对比分析

目的探讨嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌感染所致社区获得性肺炎的临床特点,提高对军团菌肺炎的认识。方法采用双重聚合酶链反应(DPCR)法对根据临床表现及血清抗体结果,临床诊断为军团菌肺炎患者的痰标本进行军团菌DNA检测。选择痰DPCR和血清抗体结果呈一致阳性的患者并根据检测结果将其分为嗜肺军团菌肺炎组(42例)和非嗜肺军团菌肺炎组(18例)。将2组患者的临床资料进行对比分析。结果痰标本DPCR结果与血清特异性抗体结果呈一致阳性,嗜肺军团菌肺炎与非嗜肺军团菌肺炎诊断明确。嗜肺军团菌肺炎多发于既往体健的青壮年,主要发病于夏秋季;非嗜肺军团菌倾向于四季散发,多发于有基础疾病的老年人。与非嗜肺军团菌肺炎相比,嗜肺军团菌肺炎患者的肺脏受累面积较大,胸腔积液及ARDS发病率高,同时全身感染中毒症状和肺外表现更为明显(P<0.05)。结论嗜肺与非嗜肺军团菌感染所致社区获得性肺炎临床特点有所不同,早期予大环内酯类/喹诺酮类抗生素治疗是改善预后的关键手段。     

应用聚合酶链式反应快速检测嗜肺军团杆菌

嗜肺军团杆菌(LP)所引起的肺炎病死率高,易暴发流行,早期病原诊断困难。本研究应用聚合酶链式反应技术对嗜肺军团杆菌血清1、3、5型中巨噬细胞感染潜能基因(mip基因)的部分编码区域进行特异性扩增,经琼脂糖凝胶电泳、溴乙锭染色检测扩增产物。结果3型LP均出现650bp特异性阳性条带。检测灵敏度为80ng,本研究结果对嗜肺军团杆菌肺炎的早期诊断、及时治疗、降低病死率及控制暴发流行有重要意义。     

黄曲霉毒素的酶联免疫测定法及其在肝癌流行病学研究中的应用评价

作者对黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)B_1和M_1(AFB_1和AFM_1)的酶联免疫测定法(ELISA),AFB_1摄入量和尿中AFM_1排出量与原发性肝癌死亡率间的关系;AFB_1-辣根过氧化物酶(AFB_1-HRP)的合成及其应用于AFB_1和AFM_1的ELISA检测进行了研究。指出ELISA对样品中AFM_1、AFB_1测定最佳范围分别为0.5～10、0.5～21ng/ml。 与薄层层析法(TLC)相比,ELISA有检出率高、重复性好及专一的特点。用C_(18) Seppak处理样品不仅有效且简便快速。用ELISA检查了220份食品和230份尿液样本,证明了AFT的摄入和排泄间有很好的正相关。提示在流行病调查中,尿中AFM_1可作为人群AFB_1摄入的指标。     

齐齐哈尔铁路人群五种12型军团菌自然感染的血清流行病学研究

为了解铁路人群军团菌感染规律,我们于1987年6～7月在齐齐哈尔铁路地区选择九种不同职业的1072名健康人进行了 Lp1～8、Lb、Lm、Ld 和 Lg 血清流行病学调查。结果抗体阳性率和几何平均滴度均以列车员和养路工最高,儿童和保育员最低;年龄和性别间无差异。调查结果还表明该地存在大量隐性感染、多型性感染和混合感染。另外我们就土壤和水在本病传播中的作用、抗体正常滴度上限对评价军团病血清学的意义等问题亦进行了讨论。     

捕获法检测嗜肺军团菌IgM抗体的建立及应用

目的建立一种捕获法检测嗜肺军团茵IgM抗体的方法。方法用羊抗人IgM抗体包被微孔板,选择辣根过氧化物酶标记的兔抗嗜肺军团茵抗体和培养的嗜肺军团茵抗原最适浓度,以西班牙VIR—CELL公司PNEUMOSLIDE—M间接免疫荧光试剂盒为参照,优化样品稀释液和酶结合物稀释液的最佳配方。结果酶结合物工作浓度1／2000、抗原浓度1／1000为最适浓度,在样品稀释液中加入20％羊血清,在酶结合物稀释液中加入20％兔血清可以消除因使用多克隆抗体而引起的假阳性,假阳性率降低3．24％。建立的IgM捕获法与西班牙V1RCELL公司间接免疫荧光法的阳性符合率为93．26％（83／89）,阴性符合率为93．67％（326／348）,与其他呼吸道病原体lgM抗体没有显著交叉反应,不受类风湿因子的干扰。结论建立的捕获法检测嗜肺军团菌IgM抗体方法操作方便,与商品化间接免疫荧光试剂盒有较高的符合率,具有临床诊断价值。     

Studies on the susceptibility of water buffaloes to Leptospira

Eight mature farming type, Taiwan, water buffaloes were inoculate with L. australis A while six received L. canicola. Before inoculation all animals were negative to the microscopic-agglutination test (agglutinationlysis test) using the above species as antigen.No sign of clinical leptospirosis was observed although four animals developed temperatures.Cultures made from buffalo blood, kidneys and urine and from blood of guinea pigs inoculated with kidney emulsion and urine from the inoculated buffalo were all negative for leptospiral organisms.Blood samples drawn from the water buffalo 2, 3 and 4 weeks post inoculation were negative to the microscopic-agglutination test except for one animal. Blood from the animal taken two weeks post-inoculation was positive at 1:100 dilution with L. australis A antigen but that taken at 3 and 4 weeks was negative.     

尿肺炎链球菌抗原检测儿童肺炎链球菌性肺炎的研究

目的:探讨尿肺炎链球菌抗原用于辅助诊断儿童肺炎球菌性肺炎的临床意义。方法:选择2011年5月-2012年5月我院儿科≤5岁有呼吸道感染的儿童病例,对患儿同时采集尿标本、血标本,尿标本用胶体金法测定尿肺炎链球菌抗原,血标本进行标准培养、鉴定试验。结果:276例患儿中,尿肺炎链球菌抗原阳性率16.3%,血培养阳性率9.4%,肺炎链球菌抗原阳性组尿肺炎链球菌抗原阳性率(88.5%)显著高于阴性组(8.8%)(P<0.01)。胶体金法测定尿肺炎链球菌抗原的敏感性、特异性和准确度分别为88.5%、91.2%和90.9%。结论:尿肺炎链球菌抗原可用于儿童肺炎链球菌性肺炎的辅助诊断依据。