使用GMA及PAS-Ⅲ2种添加液冷藏保存血小板的体外研究

目的比较2种不同添加液对4℃冷藏血小板的体外形态、活力和活化程度等指标的差异,分析特定的添加液对4℃冷藏血小板的保护作用。方法取8份单采血小板,将其一分为二,各保留35%血浆,分别添加葡萄糖甘露醇腺嘌呤血细胞保存添加液(GMA)和血小板保存添加液Ⅲ(PAS-Ⅲ)2种不同保存添加液,置4℃条件下保存,于5d后取样测定有关指标。结果在保存5d期间,GMA-PCs的低渗休克反应明显高于PAS-Ⅲ-PCs;而P-选择素的表达则显著低于后者;另外,前者IL-6的产生亦显著低于后者;2组PCs的血小板形变能力、GPⅠbα表达、乳酸生成无显著性差异。结论在4℃冷藏条件下采用血小板保存添加液替代血浆保存单采血小板,对保持血小板体外质量,GMA优于PAS-Ⅲ。     

血小板保存相关添加剂研究现状

血小板在止血、炎症、肿瘤转移、伤口愈合及防御反应中起到了重要作用,然而其常规保存需要特定温度且保存时间一般为5～7 d,同时,血小板储存损伤和细菌滋生会影响其保存时间及保存质量。此外,常规输注后会产生非溶血性发热、过敏、循环超负荷及输血相关急性肺损伤等严重不良反应。这些都限制了血小板制品在临床中的应用。但是,与血小板保存相关的添加剂可以降低它们发生的可能性。因此,我们就近年来血小板保存相关添加剂的研究现状,以及改善血小板储存损伤、提高血小板保存特性等方面进行了综述。     

不同比例血浆对GMA添加液4℃保存血小板体外质量的影响

目的分析低温液态条件下血浆对保存于葡萄糖甘露醇腺嘌呤（GMA）血细胞添加液中血小板体外质量的影响。方法取白膜法制备的浓缩血小板（PCs）7单位。每单位等分成3份,分离部分血浆后,按比例加入GMA血细胞添加液,制成10％血浆-PCs、35％血浆-PCs和100％血浆-PCs,置4℃冷藏5d。检测0d和5d的血小板计数、pH、平均血小板体积（MPV）、血小板低渗休克反应（HSR）、血小板形变能力（ESC）、P-选择素（P—selectin）、磷脂酰丝氨酸（PS）、血小板表面糖蛋白GPIbα以及乳酸和RANTES（Regulated On Activation,Normal,T—cell Expressed,and Secreted）的生成。结果4℃冷藏5d后,35％血浆-PCs与100％血浆-PCs比较,血小板计数、pH、MPV、HSR、P—selectin、GPIbα和PS以及乳酸和RANTES的差异无显著性（P〉0．05）;而10％血浆-PCs与35％血浆-PCs和100％血浆-PCs比较,P—selectin和PS表达的增加,差异有显著性（P〈0．05）,而HSR下降,但差异无显著性（P=0．09）;10％血浆-PCs与100％血浆-PCs比较,血小板计数下降,乳酸的生成增加,差异有显著性（P〈0．05）。结论用GMA保存液4℃保存血小板时,35％ACD血浆可维持冷藏血小板的膜的完整性、正常代谢和功能。     

冷冻干燥保存血小板的研究进展

血小板是血液中的一种重要组成成分,它主要参与血栓形成和凝血过程.在大量失血和化疗、放疗等处理后造成的血小板减少症患者的治疗过程中,需要进行血小板输注.因此,保证足够的血小板贮备和供应显得尤为重要.目前,临床应用血小板存在供应不足和浪费问题,主要是血小板保存技术在方法学上的局限性所造成的.血小板的保存方式有以下三种:①常温(22±2℃)保存,此条件下保存的血小板由于部分活性的丧失和微生物的污染,根据美国药品监督管理局规定最多只能保存5天;②冰冻保存,这种保存方法可以大大延长血小板的保存时间,临床实验证明冻-融血小板聚集功能仅为新鲜血小板的50%～60%,而且需要笨重的冰箱和存储设备;③冷冻干燥保存,冷冻干燥血小板可以在常温下长时间保存,不需要冷冻存储设备.在此,本文对冷冻干燥保存血小板(简称冻干血小板)进行综述.     

晶体盐溶液保存血小板的初步研究

对2种不同纽成成分的晶体盐液分别进行过滤除菌或高压灭菌处理,并用自体血浆作对照,分别保存同一份血小板样品。晶体盐液Medium_(13)(MD_(13))含有枸橼酸盐、磷酸盐和葡萄糖等成分,Medilum t(MD_t)除上述成分外,还含有茶碱(1,3-二甲基黄嘌呤),血小板在不同类型的介质中保存7天后,血小板的功能及形态变化各组间无显著差别,但pH与第一天相比均显著下降;MDt溶液保存血小板7天后,其乳酸含量明显低于同期在血浆中保存者,而pH基本维持在同一水平。根据试验结果,我们认为MD_(13)和MD_t2种晶体盐溶液能代替自体血浆保存血小板。     

-80℃保存机采浓缩血小板的实验研究

血小板在成分输血中的地位已越来越重要 ,输注比例正逐年显著提高 ,血小板的体外保存也因此成为国内外输血医学的研究热点 [1 ,2 ]。笔者用两年多的时间对 -80℃保存机采浓缩血小板 (以下简称冰冻血小板 )进行了较深入的实验研究 ,比较了不同保存时期冰冻血小板的功能及回收率 ,现将实验结果报告如下。材料与方法1　主要仪器设备　 CS-3 0 0 0 Plus血细胞分离机 ;TYXN-91 A智能血液凝集仪 ;F-82 0血细胞计数仪 ;局部 1 0 0级净化间 ;-80℃深低温冰箱。2　冰冻血小板的制备、保存与解冻　选择符合国家规定体检标准的献血者 ,依照 CS-3 0…     

血小板保存3天后再冷冻保存的实验研究及临床应用

本研究探讨血小板常温保存3天后再进行-80℃冰箱内冷冻保存及临床应用的可行性。对当天冷冻和保存3天后再冷冻血小板进行了计数，并检测聚集力、黏附力以及CD62p的表达，并通过可对比性病例观察保存3天后再冷冻与当天冷冻血小板，临床应用的可能性。结果表明：在保存期3天之内血小板数量、低渗性休克反应、黏附功能无显著差异性改变（P〉0．05），但聚集功能和CD62p的表达率的变化有显著性差异（P〈0．05）。当天保存并冷冻的血小板与保存3天后再冷冻的血小板各项指标的变化都无显著性差异。CD62p的再表达率（CD62p凝血酶激活后阳性率-CD62p激活前的阳性率）也无显著性差异，分别是51．1±4．5和51．1±4．4（P〉0．05）。临床应用当天冷冻和保存3天后再冷冻血小板的CCI值分别是48％和49％，无显著性差异（P〉0．05）。结论：血小板保存3天后可以再-80℃冷冻保存，其临床应用效果与当天冷冻血小板比较后无明显差异。     

血小板添加液保存单采血小板的研究

目的研发一种新型血小板添加液(H-sol),并评价其对血小板的保存效果。方法新型血小板添加液(H-sol)的组成成分:氯化钠80.0mmol/L、醋酸钠25.0mmol/L、氯化钾5.0mmol/L、氯化镁2.0mmol/L、枸橼酸钠15.0mmol/L、葡萄糖15.0mmol/L、碳酸氢钠13.0mmol/L、磷酸二氢钠4.0mmol/L、L-精氨酸180.0μmol/L。将超浓缩单采血小板(PLT≥10×109/ml)悬浮在H-sol和100%血浆(对照组)介质中,置22℃±2℃振荡条件下保存,分别于1、5、7d取样检测血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、pH、葡萄糖、乳酸、血小板低渗休克反应(HSR)、血小板形变能力(ESC)、CD62P表达率。结果血小板保存至7d时,H-sol组(含<10%的血浆)与对照组比较,PLT、MPV、PDW、CD62P表达率、HSR、ESC的差异无统计学意义(P>0.05),其pH高于对照组(P<0.01),1～7d葡萄糖平均消耗量和乳酸平均产生量明显低于对照组(P<0.01)。结论单采血小板在H-sol中的保存效果与100%血浆相同,血小板在H-sol中保存能更好地维持pH的稳定。     

两种不同的血小板保存液保存的高浓缩血小板的血小板活性

背景为改善血小板(PLT)质量,比较加入T-Sol和PAS-27a两种不同保存液的超浓缩血小板(hcPCs)和标准的浓缩血小板(stdPCs)的血小板活性,PAS-27a与T-So的差别在于前者含有葡萄糖,磷酸盐、钾、镁、碳酸氢盐。研究设计与方案从每名献血者进行2次机器单采血小板(n=14),每单位又分成两份。这样从每名供者获得4份hcPCs:每份含有2000×109血小板,保存于T-Sol或PAS-27a,stdPCs每份含1400×109血小板,保存于65%T-Sol或PAS-27a和35%酸性柠檬酸盐葡萄糖血浆中。在1到4天,做混旋计分、血小板计数、血小板平均体积、pH、血气、葡萄糖、乳酸盐测…     

不同常规保存血小板冰冻保存效果研究

目的了解常规保存不同时间的机采血小板冰冻前后质量指标变化及输注疗效，探讨血小板冰冻处理前常规保存调控的最佳方案。方法对120袋机采血小板随机分成6组，在（22±2）℃平床振荡条件下，分别保存0、1、2、3、4、5d然后制备冰冻血小板，并对血小板冰冻前与复温后分别计数血小板，检测pH值，跟踪调查输注冰冻血小板的患者，计算回收率。结果有效期内（22±2）℃振荡保存的血小板产品中血小板计数无显著性差异，pH值下降明显；冰冻前后血小板计数有显著性差异，pH值无差异。保存3d内的血小板冰冻后血小板的输注回收率无差异，与保存4d、5d的血小板冰冻后的回收率有显著差异。结论（22±2）℃振荡保存3d内的血小板可以制备冰冻血小板，保存4-5d的血小板可以输注但不宜制备冰冻血小板。     

1-磷酸鞘氨醇对血小板活化的影响

目的研究磷脂类代谢产物1-磷酸鞘氨醇(S1P)对血小板活化的影响。方法利用酶联免疫法检测血小板中S1P的含量,利用流式细胞仪检测血小板凋亡、活化状况。结果随着保存时间的延长,血小板悬液中的S1P含量(μmol/L)持续增加,从第1天至第5天分别为:1.38±0.17、2.07±0.25、2.78±0.31、3.53±0.28、4.56±0.46。加入不同浓度的外源性S1P,对保存5d期间的血小板生理指标进行动态监测。不同处理组间,血小板的活化率随加入的S1P浓度的增加而升高,凋亡程度增加,血小板结构发生改变。上述实验结果的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论随着血小板保存时间的延长,血小板血浆中S1P含量逐渐增加,血小板功能逐渐降低。提示血小板释放的有生物活性的磷脂代谢产物可能对血小板的功能施加某种影响,可能是引起血小板输注无效的一个重要原因。     

四种血小板制品滤除白细胞效果的实验研究

目的观察过滤对血小板的影响,遴选适于过滤的血小板制品。方法对机采血小板、手工浓缩血小板和相应的两种冰冻血小板进行过滤,观察血小板回收率、白细胞去除率和血小板聚集率等多项血小板功能指标。结果机采血小板回收率为86．81％,手工浓缩血小板回收率仅为73．08％;两种冰冻血小板制品损失量达60%～70％;过滤后机采血小板达到去白细胞标准,而手工血小板未达到去白细胞标准;过滤对液态保存血小板制品的功能无明显影响,但手工浓缩血小板功能低于机采血小板。结论冰冻保存的血小板制品不适于去白细胞过滤;手工浓缩血小板制备工艺尚需进一步改进和提高,并研制与之相适应的去白细胞滤器;机采血小板质董拔好．国产滤器可达到去白细胞标准．是当前适于滤除白细胞的血小板制品。     

血小板参数在原发性血小板减少性紫癜患儿的临床应用分析

目的 探讨血小板参数在原发性血小板减少性紫癜（ITP）的临床应用价值.方法 以42例ITP患儿为研究对象,观察不同严重程度患儿血小板参数及所有ITP患儿治疗前后血小板参数的变化情况.结果 轻、中、重三组血小板计数（PLT）、平均血小板体积（MPV）、血小板体积分布宽度（PDW）、大血小板比率（P-LCR）两两比较均有统计学差异（P〈0.05）;ITP患儿治疗前后血小板参数PLT、PDW、MPV、P-LCR比较也均有统计学差异（P〈0.05）;血小板参数相关性分析,PLT与MPV呈负相关（r=-0.513,P〈0.05）,MPV与P-LCR呈正相关（r=0.713,P〈0.05）,其他均无相关性（P〉0.05）.结论 血小板参数的检测对于ITP疾病的诊断、病情判断及疗效评估均有重要的临床意义.     

降钙素原、血小板监测对脓毒症患者的预后判断价值

目的：探讨降钙素原（PCT）、血小板（PLT）监测对脓毒症患者预后判断的临床价值。方法：90例脓毒血症患者分别在人ICU第1、3、5、7天进行PCT和PLT检测,根据预后情况分为生存组（n=60例）和死亡组（n=30）,比较两组间PCT、PIJT与APACHEⅡ评分的关系。结果：与生存组比较,死亡组PCT明显增高,且持续保持较高水平（P〈O．05）;PLT明显下降,且呈进行性下降趋势（P〈0．05）。PCT、PIJT水平和APACHEⅡ评分明显相关（P〈0．05）。结论：PCT、PLT对判断脓毒症患者预后有一定的临床价值。     

输注辐照血小板后血液病患者免疫参数变化的临床观察

目的研究输注辐照血小板后患者体液免疫参数的变化以及这些免疫参数与血小板无效输注（PTR）的相关性。方法选取多次输血的恶性血液病患者随机分为观察组和对照组,分别输注γ辐照机采血小板和普通机采血小板,比较两组输注的有效率和输血不良反应的发生率,检测输血前后免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）、补体（C3、C4）、循环免疫复合体（CIC）、C反应蛋白的变化。分析发生无效输注患者的免疫参数特点。结果输注机采血小板后血清免疫球蛋白（IgG、IgM）、补体（C3、C4）、CIC在观察组变化差异不大（P〉0.05）;在对照组明显升高（P〈0.05）;两组输血后CRP均明显升高,IgA均无明显变化。观察组的输注有效率84.9%,与对照组56.1%相比差异有统计学意义,输血不良反应的发生率也明显减低。对血小板无效输注（PTR）患者进行分析,输血前其血清（IgG、IgM）、补体C3、CIC水平异常者比例较高,PTR患者在输血后体液免疫指标升高更明显（P〈0.05）。结论免疫球蛋白（IgG、IgM）和补体（C3、C4）、CIC、CRP可能参与了血小板无效输注,输注γ辐照机采血小板可以在一定程度上减轻患者的体液免疫反应,提高输注效率。     

Investigations of Platelet Function in Whole Blood with BAPA as Anticoagulant

BACKGROUND: Citrate anticoagulation of blood results in non-physiologically low calcium concentration and rapid deterioration of platelet viability. Benzylsulfonyl-D-Arg-Pro-4-amidinobenzylamide (BAPA) as anticoagulant maintains the physiological calcium level and seems to retain platelet function (PF) over a time period of at least 24 h. We evaluated PF in BAPA-anticoagulated peripheral whole blood (WB) between 0.5 and 30 h after blood collection. METHODS: In WB from 21 healthy volunteers (15 women, 6 men, age range 19-57 years) platelet aggregation (PA) was determined by impedance method and ATP release by luminometry. Platelet response was tested by ADP (10 and 20 μmol/l) and collagen (1 and 2 μg/ml) between 0.5 and 30 h after blood collection. RESULTS: Parameters of ADP-induced PA showed stable values until 6.5 h after blood collection followed by a significant decline. PA in response to collagen was stable up to 25 h of storage. ATP release induced by collagen displayed a continuous, significant decrease over time. CONCLUSION: Preservation of platelet response in BAPA-anticoagulated blood depends on the applied agonist showing that collagen-induced PA is more stable compared to ADP known as a weak agonist in WB.     

颅脑损伤患者血小板参数的变化及临床意义

目的探讨中型和重型颅脑损伤后患者血小板（platelet,Plt）参数的变化特点及临床意义。方法选取2009年3月-2010年3月脑外伤后24h内入院的颅脑损伤患者75例作为观察组,于伤后1、3、7、14d采血测定Pit数量、血小板平均体积（meanplateletvolume,MPV）、血小板体积分布宽度（plateletdistributionwidth,PDW）,并同时进行格拉斯哥昏迷评分（Glasgowcomascale,Ca：S）。同时选取60例健康体检者,测定Plt、MPV和PDW作为对照组。结果观察组伤后1、3、7dPh计数分别为（106．21±36．31）、（102．76±35．23）、（108．37±31．32）×10。／L,较对照组~（210．41±68．56）×10。／L？明显降低（P〈O．05）;观察组伤后1、3、7dMPV分别为（12．34±1．34）、（11．21±1．52）、（10．78±1．36）fL,PDW分别为（15．78±1．26）、（17．67±1．16）、（16．72±1．21）fL,均较对照组EMPV：（8．24±1．76）fL,PDW：（12．86±1．42）fL]明显升高（P〈O．05）;伤后14dPit、MPV和PDW均较对照组差异无统计学意义（P〉O．05）。GCS≤8分组伤后1dPit计数为（96．85±36．52）×10。／L,明显低于GCS〉8分组[（123．85±35．78）×10。／L],而GCS-~．8分组MPV为（12．14±1．32）fL,PDW为（18．63±1．21）fL,均明显高于GCS〉8分组EMPV：（9．78±1．34）fL,PDW：（16．72土1．34）fL],差异均有统计学意义（P〈0．05）。伤后第1天Ph与随访6个月COS评分呈正相关（r＝O．625,P〈O．05）。结论中型和重型颅脑损伤后Pit计数明显降低,MPV和PDW值明显升高,且与伤情及预后有关。Plt及其参数的检测有助于对伤情、预后的判断。     

不同血小板计数方法的比较及对临床血小板输注的影响

目的比较手工法、自动血细胞分析仪法与免疫法计数血小板的结果,探讨低水平血小板准确计数能否减少临床血小板输注。方法采用手工法、自动血细胞分析仪法与免疫法同时计数血小板。以免疫血小板计数值（×10^9／L）将标本分为4组：≤5、6～10、11～20及〉20,对三种方法的计数结果进行比较。然后根据同一输注标准统一输注阈值（5×10^9／L）,计算并比较以三种方法计数结果决定的血小板输注例数。结果免疫血小板计数（×10^9／L）≤5的标本,免疫血小板计数结果低于手工计数法,远低于仪器计数法;免疫血小板计数（×10^9／L）为6～10的标本,免疫血小板计数结果与手工计数的差异无统计学意义,低于仪器计数法结果;免疫血小板计数〉10×10^9／L的标本,三者计数结果的差异无统计学意义。根据同一输注标准统一输注阈值（5×10^9／L）,与其他方法相比,采用免疫血小板计数结果决定的血小板输注例数有所增加。结论应使用免疫血小板计数法准确计数低水平血小板,尤其是低于10×10^9／L的标本;以5×10^9／L为输注阈值,采用免疫血小板计数可增加血小板输注例数。     

Current Strategies in Diagnosis of Inherited Storage Pool Defects

Inherited platelet defects lead to bleeding symptoms of varying severity. Typically, easy bruising, petechiae, epistaxis, and mucocutaneous bleeding are observed in affected patients. The platelet defects are classified into disorders affecting either platelet surface receptors or intracellular organelles of platelets. The latter are represented by platelet storage pool diseases (SPD) which share a defect of platelet granules. Platelet α-granules, δ-granules, or both may be affected resulting in the clinical picture of α-SPD (e.g. Gray platelet syndrome, Quebec platelet disorder, arthrogryposis, renal dysfunction, and cholestasis syndrome), δ-SPD (e.g. Hermansky-Pudlak syndrome, Chediak-Higashi syndrome, Griscelli syndrome), or αδ-SPD (e.g. X-linked thrombocytopenia, Wiskott-Aldrich syndrome). Diagnosis of SPD is very extensive and requires platelet aggregation and flow cytometry analyses with interpretation from a specialist. Many of these disorders share common treatments, however, efficacy can vary between different patients. Therapy regiments with tranexamic acid, DDAVP, activated FVIIa, and platelet transfusions have been published. Stem cell or bone marrow transplantations are preserved for severe defects. Here, we describe the pathophysiology, clinical manifestations, and diagnosis of the major human SPDs.     

单独采集血小板和浓缩血小板在保存期中的活化情况

研究单独采集血小板 (单采血小板 )和浓缩血小板在保存期中的活化情况。用流式细胞术对这两种血小板的CD62 p和CD41表达量进行测定。结果表明 :在保存 0 ,1 ,3和 5天时 ,单采血小板的CD62 p阳性率和CD41的平均荧光强度分别为 (1 8 91± 6 2 5) % ,(1 9 48± 8 2 7) % ,(2 2 82± 6 0 6) % ,(56 71± 1 1 79) %及 (8 0 9±2 38) % ,(8 1 3± 2 45) % ,(8 44± 2 51 ) % ,(1 9 87± 6 1 3) % ,而浓缩血小板的分别为 (30 65± 1 2 33) % ,(31 46± 1 1 86) % ,(32 51± 1 3 0 5) % ,(63 55± 1 3 2 7) %及 (1 0 33± 4 37) % ,(1 1 0 9± 6 61 ) % ,(1 3 46± 9 69) % ,(2 4 41± 1 0 1 5) %。二项指标均随保存时间推移而上升。对这两种血小板的计数和 pH值测定显示 ,二者均随保存时间推移而下降。在保存 0 - 3天内两种血小板的计数 ,pH值 ,CD62 p和CD41表达量无显著差异。在第 5天血小板计数和pH值出现显著下降 (P <0 0 0 1 ) ;而CD62p和CD41表达量出现显著上升 (P <0 0 0 1 )。结论 :单采血小板优于浓缩血小板