三氧化二砷通过升高细胞内钙离子浓度介导肺癌细胞凋亡

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人肺腺癌细胞株AGZY 83 a的抑制作用 ,探讨As2 O3 诱导人肺腺癌细胞株凋亡的机制。方法　采用MTT法、透射电镜、激光扫描共聚焦仪及流式细胞术等方法观察三氧化二砷对人肺腺癌细胞株AGZY 83 a的影响。结果　①As2 O3 能抑制人肺腺癌细胞株AGZY 83 a的生长 ,呈剂量依赖关系 (P <0 0 1) ,IC50 =1 6 1mg·L-1;②在光学显微镜及电镜下 ,可见As2 O3 作用后的人肺腺癌细胞株AGZY 83 a呈现凋亡中、早期的变化特征 :表面绒毛脱失 ,染色质块状散于核内 ;③流式细胞术显示 :As2 O3 作用后的人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞凋亡百分率与药物剂量呈依赖关系 ;④LSCM显示 :As2 O3 作用后的人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞内钙浓度 ([Ca2 + ]i)升高 (P <0 0 1) ,呈剂量时间依赖关系。结论　As2 O3 能明显抑制人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞的生长 ,并诱导人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞凋亡 ,细胞内 [Ca2 + ]升高可能是诱导细胞凋亡的机制之一。     

巴豆生物碱诱导Hela细胞凋亡及其作用机制

目的研究巴豆生物碱(CA)在体外诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制。方法 MTT法检测CA对Hela细胞增殖的抑制率;AnnexinV-PI染色检测细胞凋亡;Caspase-8试剂盒检测Caspase-8在Hela细胞中的活性;RT-PCR检测Caspase-8 mRNA的表达。结果巴豆生物碱对Hela细胞生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系。流式细胞术结果提示CA可诱导Hela细胞凋亡。CA处理Hela细胞后发现Caspase-8活性明显增加,Caspase-8的mRNA高表达。结论 CA对人宫颈癌Hela细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导Hela细胞凋亡的分子机制可能与上调Caspase-8基因表达有关。     

葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响及其作用的分子机制。方法体外培养BGC-823细胞,MTT法观察葫芦素B对细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9的活性,采用Western blot方法检测葫芦素B对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果葫芦素B对BGC-823细胞的增殖有抑制作用,且此作用呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测结果显示,葫芦素B诱导BGC-823细胞凋亡,呈剂量依赖性。葫芦素B处理后Caspase-3、Caspase-9活性升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bak的表达增加。结论葫芦素B可以抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

酪氨酸激酶受体抑制剂AL3810对人肺腺癌细胞A549的抗肿瘤作用

目的 评价酪氨酸激酶受体抑制剂AL3810对人肺腺癌细胞A549的体外及体内抗肿瘤作用.方法 ①采用MTT法评价AL3810对13种人体肿瘤细胞株和人胚肺细胞的体外增殖抑制作用.②采用流式细胞仪检测AL3810诱导细胞凋亡的能力及其对细胞周期的影响.③采用流式细胞仪检测AL3810诱导Caspase-3活化的作用.④划痕试验评价AL3810对A549细胞体外迁移的影响.⑤以人肺腺癌A549裸鼠异种移植瘤模型评价AL3810对肿瘤生长抑制作用的量效关系.结果 AL3810对大部分细胞均有很强的生长抑制作用.其能诱导A549细胞凋亡且具有时效性,能将细胞周期阻滞于G0-G1期;能将无活性的Caspase-3前体活化且具有时效关系;能时间依赖性地显著抑制A549细胞的体外迁移;对A549异种移植瘤生长具有良好的抑制作用,且具有量效关系.结论 酪氨酸激酶受体抑制剂AL3810具有显著的抗肿瘤活性,能剂量依赖性地抑制A549的生长.可能机制为诱导肿瘤细胞凋亡和阻滞细胞周期于G0-G1期、诱导细胞内Caspase-3活化、抑制细胞迁移等,值得进一步开发.     

杨梅素诱导人肝癌HepG2凋亡机制研究

目的对杨梅素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制进行研究。方法采用MTT法测定细胞死亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;用琼脂糖电泳观察DNA片段化。用Western印迹法分析相关蛋白的变化。结果杨梅素明显抑制HepG2细胞的增殖,诱导HepG2细胞调亡。Caspase-3,caspase-9抑制剂可明显抑制100μg/ml杨梅素诱导的凋亡。Western印迹结果显示100μg／ml杨梅素作用于细胞后,细胞色素c水平明显升高。结论杨梅素（100μg／ml）通过激活线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

二氢杨梅素通过SIRT1/JNK途径提高耐药恶性黑素瘤细胞对卡铂的敏感性

目的 探讨二氢杨梅素对卡铂耐药恶性黑素瘤细胞的增敏作用并研究其机制。方法 MTT法检测卡铂耐药A375细胞（A375-R）在卡铂和二氢杨梅素处理下的细胞活力。Western blot法检测卡铂和二氢杨梅素对A375-R细胞SIRT1表达水平,caspase-9、caspase-3活化水平及JNK蛋白磷酸化水平的影响。流式细胞术检测A375-R细胞在卡铂和二氢杨梅素联合处理下的细胞凋亡率。结果 MTT实验结果显示,卡铂对A375-R细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）显著高于A375细胞,二氢杨梅素辅助治疗能明显降低卡铂对A375-R的IC₅₀。Western blot实验结果显示A375-R中SIRT1的表达水平显著高于A375细胞,二氢杨梅素处理能显著抑制A375-R细胞SIRT1的表达。二氢杨梅素能明显促进卡铂对A375-R细胞JNK的磷酸化,转染SIRT1质粒或用JNK特异性抑制剂（SP600125）处理后,二氢杨梅素联合卡铂对A375-R细胞的杀伤活性、凋亡诱导活性和JNK、caspase-9及caspase-3的活化均受到明显抑制。结论 二氢杨梅素通过SIRT1/JNK途径提高耐药恶性黑素瘤细胞对卡铂的敏感性。     

雷公藤甲素诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡

目的探讨雷公藤甲素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法应用不同浓度雷公藤甲素(10、20、40、80、160ng/ml)作用于体外培养的人胰腺癌PANC-1细胞。MTT方法观察药物对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR法和Western blot法分别检测热休克蛋白70(HSP70)mRNA和蛋白表达;半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性检测分析其凋亡机制。结果雷公藤甲素明显呈剂量依赖性抑制人胰腺癌PANC-1细胞的增殖,诱导细胞凋亡(P<0.05)。应用雷公藤甲素后,PANC-1细胞内HSP70mRNA和蛋白表达明显呈浓度依赖性降低,同时细胞质内Caspase-3活性随剂量增加而增加(P<0.05)。结论雷公藤甲素体外能够抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长,诱导细胞凋亡发生。其机制可能与抑制细胞HSP70表达和增加Caspase-3活性有关。     

三羟基苯甲酸二聚体诱导HL-60细胞凋亡的作用

三羟基苯甲酸二聚体是从菱角中分离出的抗肿瘤单体化合物。本研究主要探讨三羟基苯甲酸二聚体对人早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60细胞的抑制作用及诱导其凋亡的分子机制。通过MTT法检测三羟基苯甲酸二聚体对HL-60细胞的增殖抑制作用; 流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞内活性氧及线粒体膜电位的变化; 蛋白印迹 技术 ( Western blotting ) 检测胞浆和线粒体细胞色素c水平, 分光光度法测定Caspase-9、Caspase-3蛋白活性。结果发现, 三羟基苯甲酸二聚体显著抑制HL-60细胞的增殖, 其作用呈时间和剂量依赖性。与对照组比较, 三羟基苯甲酸二聚体可增加HL-60细胞内活性氧水平, 降低HL-60细胞线粒体膜电位, 促进线粒体中细胞色素c释放入胞浆, 激活Caspase-9、Caspase-3蛋白。因此三羟基苯甲酸二聚体可能通过线粒体信号传导途径诱导HL-60细胞凋亡。     

新型多胺缀合物NNAMB诱导B16细胞凋亡及分化作用

目的评价新型多胺缀合物NNAMB对B16黑色素瘤细胞诱导凋亡及分化作用。方法以MTT法、台盼蓝拒染法检测细胞活力;Hoechst33258染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期变化、凋亡率及线粒体膜电位的变化;酶标仪检测caspase-3、-8、-9的活性及B16细胞内黑色素含量、酪氨酸酶活性等的变化。结果NNAMB在高剂量(>0.1μmol·L-1)下呈现剂量及时间依赖性的抑制B16黑色素瘤细胞的生长、诱导凋亡、降低线粒体膜电位、促进Caspase-3及-9的活化,但caspase-8活性与对照组细胞相比变化差异无显著性;NNAMB在低剂量(<0.1μmol·L-1)下通过增强酪氨酸酶活性,增加黑色素生成等诱导B16细胞分化。结论NNAMB在高剂量下通过线粒体/caspase-9/caspase-3途径诱导B16细胞凋亡;低剂量诱导细胞分化。     

姜黄素对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的观察姜黄素对肺腺癌细胞A549生长的抑制作用,并探索其机制。方法四氮唑蓝法测定姜黄素作用于肺腺癌细胞A549的吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定40μmol.L-1姜黄素或空白对照培养液的肺腺癌细胞凋亡率与凋亡相关蛋白Caspase-9表达;比色法测定凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8表达;观察加用Caspase-9抑制剂后Caspase-3的表达。结果姜黄素对肺腺癌A549细胞有抑制作用,存在剂量依赖(r=0.619;P<0.01)与时间依赖(r=0.618;P<0.01);姜黄素对肺腺癌A549的凋亡率(30.25%)明显高于对照组(1.32%)(P<0.001);姜黄素组肺腺癌细胞A549的凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达明显高于对照组(P<0.001);姜黄素组加用Caspase-9抑制剂后Caspase-3表达明显下降,仍高于对照组(P<0.001)。结论姜黄素诱导肺腺癌A549细胞凋亡可能与激活Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3有关。     

藻蓝蛋白联合全反式维甲酸诱导HeLa细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨全反式维甲酸和藻蓝蛋白联合用药对HeLa细胞生长的影响,并分析两者联合用药诱导细胞凋亡可能的分子机制。方法 MTT法检测全反式维甲酸和藻蓝蛋白单独及联合用药对HeLa细胞生长的影响,TUNEL法检测单独及联合用药HeLa细胞凋亡情况,免疫组化法检测Bcl-2基因的表达情况,Westren blot法检测Caspase-3的表达情况。结果 全反式维甲酸和藻蓝蛋白均具有抑制HeLa细胞生长的作用,当达到相同的抑制率时,联合藻蓝蛋白使用可以显著降低全反式维甲酸的使用剂量从而达到降低毒副作用的目的。2种药物联合用药处于中高抑制率时,2种药物为协同作用。两者联合用药可以显著下调Bcl-2和增加Caspase-3的表达水平从而引发细胞凋亡。结论 2种药物单独使用均能抑制HeLa细胞的生长,联合用药时该抑制作用更为显著。全反式维甲酸和藻蓝蛋白联合用药诱导HeLa细胞凋亡的分子机制可能是通过抑制bcl-2基因的表达、促进Caspase-3蛋白的表达,从而促进凋亡信号的转导最终导致细胞死亡的。 关键词：全反式维甲酸;藻蓝蛋白;HeLa细胞;凋亡;增殖抑制     

唐古特大黄多糖对过氧化氢诱导的肠上皮细胞凋亡的保护作用及其可能机制

目的探讨唐古特大黄多糖(Rheum tanguticumpoly-saccharide,RTP)组分1(RTP1)对过氧化氢(H2O2)诱导的肠上皮细胞IEC-6凋亡的保护作用及其可能的机制。方法以不同浓度的RTP1(10、30、100 mg.L-1)预处理体外培养的IEC-6细胞后,加入H2O2诱导IEC-6细胞凋亡,MTT法检测细胞活力,激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生,DNA琼脂糖凝胶电泳、吖啶橙染色及流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,Western blot测定Caspase-3酶活性。结果 100μmol.L-1H2O2处理细胞2 h明显降低细胞存活率并诱导细胞凋亡,凋亡率为31.3%,细胞内活性氧水平及Caspase-3的活性明显升高,不同浓度(10、30、100 mg.L-1)RTP1预处理细胞24 h,可明显提高细胞存活率,有效抑制DNAladder的发生,流式细胞仪检测凋亡率(30、100 mg.L-1)分别降低至24.4%和21.5%,Caspase-3酶活性降低,并呈现一定的剂量依赖性。结论 RTP1可明显抑制H2O2诱导的IEC-6细胞凋亡,其细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平和抑制Caspase-3活性相关。     

槲皮素对人胃癌MKN45细胞的抑制作用研究

目的探讨槲皮素对人胃癌MKN45细胞凋亡的影响及其作用机制。方法取对数生长期的MKN45细胞分为对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组。应用MTT比色法测定细胞活性,Hoechst染色、流式细胞技术检测细胞凋亡,比色法检测凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9表达。结果槲皮素能显著抑制MKN45细胞增殖,促进细胞凋亡,升高Caspase-3、Caspase-9基因表达水平。结论槲皮素可通过增强Caspase-3、Caspase-9基因表达诱导人胃癌MKN45细胞凋亡。     

20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞体内外作用的研究

目的观察不同剂量的20(S)-原人参二醇(Protopanaxadiol,PPD)在体内外对人肝癌细胞株SMMC-7721抗肿瘤作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察20(S)-原人参二醇的肿瘤抑制作用。MTT比色法检测20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,Ho-echst33342核染色观察细胞凋亡形态学改变,采用FITC-An-nexinⅤ/PI双染流式细胞术分析凋亡情况,同时检测Caspase-3活性。结果在体内,PPD可抑制SMMC-7721细胞裸鼠异种移植瘤生长;在体外,PPD对SMMC-7721细胞的增殖具有明显的抑制及诱导其凋亡作用,呈时间和剂量依赖性,Hoechst33342核染色可见凋亡小体,同时伴有Caspase-3活性的增加。结论20(S)-原人参二醇在体内外均可抑制SMMC-7721细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能通过活化Caspase-3诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

塞来昔布对人肺癌A549细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用观察

目的 体外研究选择性环氧化酶2 (COX-2)抑制剂塞来昔布对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT比色法)观察不同浓度的塞来昔布对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用,TUNEL染色检测细胞凋亡,并用含半胱氨酸的门冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)活性检测试剂盒检测其活性变化.结果 塞来昔布能够以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖,药物的Ic50为33.98 μmol·L-1;TUNEL染色分析显示给予不同浓度塞来昔布的细胞与未给予塞来昔布的细胞相比凋亡率有差异(P＜0.05),经塞来昔布处理的A549细胞内caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(P＜0.05).结论 塞来昔布能够抑制A549细胞增殖,并呈药物浓度依赖性;塞来昔布能以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,其机制涉及caspase-3活化的信号转导途径.     

拓扑异构酶Ⅱ抑制剂GL331对HepG2细胞体外生长的抑制作用

目的:研究拓扑异构酶Ⅱ抑制剂GL331体外对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法:采用MTT法测定GL331对人肝癌HepG2细胞存活率的影响;克隆原形成法检测对细胞集落形成的影响;DAPI染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡百分率的变化;蛋白免疫印迹技术观察Bax,Bcl-2,Fas,FasL,Akt/p-Akt,caspase-3,clea-caspase等相关蛋白水平变化;caspase-3酶活性检测试剂盒检测对蛋白酶caspase-3活性的影响。结果:GL331可以浓度和时间依赖性地抑制HepG2细胞的增殖,同时促进HepG2细胞凋亡,提高Bax/Bcl-2比率,增加FasL的表达,降低p-Akt的表达。结论:GL331对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,其作用机制与诱导HepG2细胞发生凋亡,调节凋亡相关蛋白的表达,并抑制存活通路相关蛋白的活化有关。     

灵芝多糖诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的：研究灵芝多糖（GLPS）与化疗药氟尿嘧啶联合使用诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用。方法：MTT法测定细胞毒作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定Caspase-3、Caspase-8酶活性,Western—Blotting法检测细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达情况。结果：灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用具有显著的细胞毒作用;流式细胞术检测,随着GLPS浓度增加,细胞凋亡率升高,Caspase-3、Caspase-8酶活性亦增强;Western-Blotting检测发现GLPS作用后细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达不同程度增加。结论：灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用可通过引起细胞色素C的释放,活化Caspase诱导肝癌细胞凋亡。     

BAPTA-AM对MDCK细胞的保护作用及其机制

目的观察BAPTA-AM抗D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导MDCK细胞损伤作用,探讨其作用机制。方法采用MTT法,Annexin V-EGFP/PI与Hoechst33342/PI荧光染色,罗丹明123(Rhodamine 123)荧光染色,Caspase-8、Caspase-9活性测定及钙离子载体A23187诱导细胞内高钙等方法,分别测定D-GalN攻击下MDCK细胞活性,细胞凋亡状况,线粒体膜电位(△Ψm)、Caspase-8、Caspase-9活性和细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化等。结果 BAPTA-AM能明显抑制D-GalN所致的细胞活力下降、减少细胞凋亡、维持△Ψm,抑制Caspase-8、Caspase-9的激活,减轻A23187所致细胞损伤,降低[Ca2+]i。结论 BAPTA-AM通过减轻钙超载,保护线粒体、抑制外源及内源性凋亡通路的激活,发挥抗肾细胞凋亡作用。