慢病毒介导高表达OTUD7B对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为影响

目的 去泛素化酶OTUD7B与肿瘤的发生、发展密切相关.为了明确OTUD7B在乳腺癌中所发挥的作用,实验利用慢病毒构建高表达OTUD7B载体感染MCF-7乳腺癌细胞后对其生物学行为的影响.方法 构建带有绿色荧光蛋白标签的人OTUD7B表达质粒的慢病毒(pEGFP-hOTUD7B)及对照(pEGFP-CI)感染MCF-7乳腺癌细胞;于荧光倒置显微镜下观察病毒转染效果及应用蛋白质印迹法及免疫组化法检测OTUD7B的表达水平;MTS法检测实验组(pEGFP-hOTUD7B)、阴性对照组(pEGFP-CI)和正常对照组对MCF-7乳腺癌细胞增殖能力的影响;应用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 感染病毒后于荧光倒置显微镜下观察病毒感染效率,可见病毒感染成功.应用蛋白质印迹法检测病毒感染率并找出最适病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI),当MOI=30时,实验组、阴性对照组和正常对照组灰度值分别为3.81±0.08、2.12±0.078和2.05±0.15,差异有统计学意义,F=402.03,P<0.001.应用免疫组化法可见感染OTUD7B表达水平.MTS法结果显示,实验组、阴性对照组和正常对照组细胞24 h A值分别为0.36±0.08、0.56±0.25和0.69±0.17,F=11.819,P<0.001;48 h A值分别为0.65±0.17、1.45±0.48和1.82±0.63,F=23.752,P<0.001;在72 h A值分别为0.73±0.21、1.58±0.63和1.99±0.27,F=35.563,P<0.001.细胞划痕试验显示,24 h后实验组组迁移率为(7.7±0.91)%,阴性对照组和正常对照组迁移率分别为(13.4±1.52)%和(12.1±1.32)%,F=49.36,P<0.001,48 h后实验组迁移率为(12.4±1.29)%,阴性对照组及正常对照组迁移率分别为(32.9±1.71)%和(31.8±1.59)%,F=504.50,P<0.001.流式细胞仪检测细胞凋亡结果提示,实验组与阴性对照组及正常对照组相比明显使细胞阻滞在G0/G1期,促进其凋亡,FG0/G1期=425.102,FS期=135.063,均P<0.001.结论 成功构建了能够高表达OTUD7B的慢病毒载体,明显抑制了MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移,并促进了其凋亡.     

FasL基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞药物敏感性的上调效应

目的:探讨FasL基因转染对肿瘤细胞化疗敏感性的调节效应,方法:LjpofectAMINE介导建立FasL基因修饰的乳腺癌细胞系MCF-7(?)FL,MTT法检测化疗药物对转染细胞的杀伤效应,半定量RT-PCR分析化疗药物作用前后转染细胞Fas mRNA表达水平变化,结果:经C418筛选,RT-PCR和免疫组化鉴定,建立FasL稳定表达MCF-7/FL,ADM在0.625～2.5μg′ml之间.MTX在3～6μg′ml.CDDP在1.25～10μg ml间对MCF-7FL的杀伤效应均明显高于MCF-7和转染空载体的MCF-7Vt而F(ab’)_2-APO-LMcAb可部分抑制这—增强效应,半定量RT-PCR显示上述化疗药物作用后MCF-7/FL Fas mRN水平表达显著增强,结论:外源FasL基因导入可上调肿瘤细胞对多种化疗药物的敏感性,其机制可能与化疗药物上调Fas表达从而增强瘤细胞FasL-Fas凋亡通路效应有关     

ERβ1对乳腺癌MCF-7细胞Efp基因表达的抑制作用

目的 了解雌激素受体β1（ERβ1）对雌激素敏感性指状蛋白（Efp）基因的调节作用,为进一步探讨ERβ对Efp基因的调控机制奠定基础.方法 应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞中,再用Western blot检测转染细胞中Efp蛋白表达的变化.MTT比色试验观察ERβ1真核表达质粒转染后MCF-7细胞增殖活性的变化.结果 外源性ERβ1真核表达质粒组MCF-7细胞较未转染组MCF-7细胞Efp蛋白表达明显减弱.ERβ1基因转染后的MCF-7细胞的增殖活性降低.结论 ERβ1基因的表达可以抑制人乳腺癌MCF-7细胞中Efp基因的表达,并抑制MCF-7细胞的增殖能力,可能在乳腺肿瘤发生、发展机制中具有重要的作用.     

miR-129-5p通过HMGB1 调控乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇的敏感性

目的：探讨miR-129-5p 通过调控高迁移率族蛋白B1 基因（high mobility group box 1,HMGB1）影响乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇（paclitaxel,PTX）的敏感性。方法：采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics、HMGB1 小干扰RNA（si-HMGB1）分别转染入MCF-7 细胞,用PTX刺激培养细胞后,用实时荧光定量PCR检测转染后MCF-7 细胞miR-129-5p 和HMGB1 mRNA的表达,Western blotting 检测转染后MCF-7 细胞HMGB1 蛋白的表达,CCK-8 增殖实验检测转染后PTX对MCF-7 细胞增殖的影响,流式细胞术检测转染后对PTX诱导MCF-7 细胞凋亡的影响。结果：转染miR-129-5p mimics 后,MCF-7 细胞中miR-129-5p 的表达水平明显高于阴性对照组细胞（P<0.01）;过表达miR-129-5p 后可明显增强PTX抑制MCF-7 细胞的增殖和诱导细胞凋亡的能力（均P<0.05）,并显著抑制HMGB1 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。转染si-HMGB1 后,显著降低MCF-7 细胞HMGB1 mRNA 和蛋白的表达（均P<0.05）;干扰HMGB1 表达进一步促进PTX抑制MCF-7 细胞的增殖并诱导细胞凋亡（均P<0.05）。结论：miR-129-5p 通过下调HMGB1 的表达增强乳腺癌MCF-7 细胞对PTX的敏感性。     

PUMA基因转染乳腺癌MCF-7细胞增强表柔比星致凋亡敏感性的研究

  目的  探讨PUMA基因转染是否增强乳腺癌MCF-7细胞对表柔比星致凋亡的敏感性。   方法  应用脂质体介导重组真核表达载体PUMA-pCDNA3和空载体pCDNA3质粒瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞中, G418筛选阳性细胞。将系列浓度(0.01~100μmol/L)的表柔比星分别作用于MCF-7、MCF-7/PUMA和MCF-7/pCDNA3细胞72 h, MTT法测定各组细胞的存活率并计算IC50, FCM、TUNEL法检测细胞凋亡情况, Western blotting检测各组细胞PUMA蛋白表达的变化。   结果  MCF-7、MCF-7/PUMA和MCF-7/pCDNA3细胞的表柔比星IC50分别为(13±1.4)、(1.8±0.2)和(10.7±1.3)μmol/L, MCF-7/PUMA细胞对表柔比星作用的敏感性增加了7.2倍。表柔比星以剂量依赖方式诱导MCF-7细胞凋亡, 但对MCF-7/PUMA细胞所诱导的凋亡比MCF-7和MCF-7pCDNA3更明显。低浓度表柔比星(0.1μmol/L)轻微引起MCF-7/pCDNA3[(1.15±0.26)%]和MCF-7细胞凋亡[(0.9±0.24)%], 但能诱导MCF-7/PUMA细胞明显凋亡[(6.44±1.46)%]; 高浓度表柔比星(1μmol/L)诱导各组细胞凋亡, 但表柔比星MCF-7/PU MA细胞凋亡率[(35.47±9.36)%]明显高于MCF-7[(12.6±3.73)%]和MCF-7/pCDNA3细胞[(15.2±5.17)%], 差异均有统计学意义(P < 0.01);FCM和TUNEL方法检测显示相同的结果。PUMA蛋白在MCF-7/PUMA细胞中的表达明显高于MCF-7和MCF-7/pCD NA3细胞。   结论  PUMA基因稳定转染明显地增强了乳腺癌MCF-7细胞增强表柔比星致凋亡作用的敏感性。      

脐带血和乳腺癌患者外周血来源CIK细胞PD-1表达及对MCF-7细胞杀伤

目的：探讨脐带血和乳腺癌患者外周静脉血来源的CIK细胞程序性死亡分子-1（programmed cell death-1,PD-1）的表达及其对乳腺癌MCF-7细胞的杀伤作用。方法: 采集2015年6月至2015年12月在解放军第105医院住院的健康产妇脐带血和乳腺癌患者外周静脉血各5例,分离PBMC,体外培养、扩增CIK细胞。流式细胞术检测不同时间节点两种来源的CIK细胞PD-1表达情况,分别取培养第7、14、21、28天的CIK细胞与MCF-7细胞共培养,细胞计数（CCK-8）法测定CIK细胞对MCF-7细胞的杀伤率, 吖啶橙-溴化乙啶双染(AOEB)法观察共培养后CIK细胞凋亡变化,流式细胞术检测CIK细胞凋亡率。结果: 随着体外培养时间的延长,脐带血和乳腺癌患者静脉血来源的CIK细胞PD-1表达率均逐渐上升,第14天时脐带血组CIK细胞PD-1表达率低于乳腺癌组\[（38.42±4.76）% vs （50.54±3.50）%,P<0.05\],至第21天后两组PD-1表达率均升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。培养第7、14、21、28天两组CIK细胞对MCF-7细胞的杀伤率分别为(18.54±354）%和（21.74±427）%、（71.86±16.86）% 和（58.78±24.25）%、（44.32±26.87）%和（43.96±26.04）%、（43.24± 24.27）%和（40.28±23.69）%,以培养第14天的脐带血来源的CIK细胞的杀伤活性最强（P<0.05）。分析发现,两种来源的CIK细胞PD-1表达水平与CIK细胞的凋亡率呈正相关(r=0.971,r=0.900, 均P<0.01）,与杀伤率呈负相关（r=-0.865,r=-0885, 均P<0.01）。结论: 活化的CIK细胞表面高表达PD-1,脐带血较乳腺癌患者静脉血来源的CIK细胞表面PD-1水平低;培养第14天的CIK细胞凋亡率均较低,其杀伤能力更强。     

miR-620通过靶向ING4调控乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性

目的：探讨miR-620对乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性的影响及其机制。方法：收集2017年3月至2018年3月在海南省儋州市人民医院手术切除的21例乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本,以及乳腺癌细胞MCF-7、BCaP-37和乳腺上皮细胞HBL-100,采用qPCR法检测癌组织和细胞中miR-620和生长抑制因子4(ING4)mRNA的表达。利用脂质体转染技术,分别将miR-620抑制剂（anti-miR-620）和抑制剂阴性对照（anti-miR-NC）、anti-miR-620和ING4小干扰RNA(si-ING4)、anti-miR-620和小干扰RNA阴性对照序列（si-NC）转染至MCF-7细胞,经放射处理后（依次记为IR+anti-miR-620组、IR+anti-miR-NC组、IR+antimiR-620+si-ING4组、IR+anti-miR-620+si-NC组）,利用克隆形成实验、MTT法和FCM分别检测细胞放射敏感性、细胞增殖活力、细胞周期分布和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验和WB法验证miR-620和ING4的靶向关系。结果：与癌旁组织和HBL-100细胞比较,...     

HAP1对乳腺癌细胞MCF-7生物学特性影响的观察

目的:探讨亨廷顿相关蛋白1(HAP1)基因过表达对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖、体外迁移侵袭和细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:通过转染的方法将逆转录病毒pBabe-puro(嘌呤霉素)HAP1质粒和pBabe-puro质粒导入人乳腺癌细胞系MCF-7,用嘌呤霉素筛选稳定表达两质粒的细胞系,荧光定量PCR和蛋白质印迹法鉴定是否成功构建HAP1过表达细胞系;细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测细胞的生长增殖,Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移,流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果:成功构建稳定表达pBabe-HAP1的MCF-7-pBabe-puro-HAP1细胞模型.CCK-8检测72 h细胞增殖率,MCF-7-pBabe-puro-HAP1为(75.97±6.76)％,明显低于MCF-7-pBabe-puro细胞(93.98±6.63)％(P=0.03)及MCF-7细胞(100.00±0.oo)％,P=0.004;MCF-7-pBabe-puro-HAP1细胞克隆形成率为(22.67±1.26)％,明显低于MCF-7(35.00±0.50)％(P=0.000)和MCF-7-pBabe-puro细胞(33.83±0.76)％,P＝0.000;Transwell小室侵袭和迁移实验表明,MCF-7-pBabe-puro-HAP1组的侵袭(3.33±0.58,P=0.000)和迁移(50.00±3.61,P＜0.01)能力明显降低;流式细胞仪检测细胞凋亡,MCF-7-pBabe-puro-HAP1凋亡率为(8.03±0.15)％,高于MCF-7-pBabe-puro(3.13土0.25)％(P=0.000)和MCF-7细胞(3.33±0.35)％,P=0.000.结论:HAP1基因能够抑制肿瘤细胞增殖和迁移侵袭,并能诱导细胞凋亡,其可能作为一个抑癌基因在肿瘤发生发展中发挥重要作用.     

REGgamma基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛋白酶体激活因子REGgamma(REGγ)基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的作用.方法:构建真核表达重组体PcDNA3.1-REGγ,通过脂质体转染将REGγ基因导入MCF-7,以G418(800mg/L)连续筛选获得稳定高表达REGγ基因的细胞株,以转染空载体和未转染细胞作为对照.分别利用MTT法及免疫细胞化学方法检测各组细胞PCNA的表达分析REGγ基因对细胞增殖的影响;以Caspase-3分光光度法及AnnexinV-FITC的流式细胞仪(FCM)来检测细胞凋亡的变化;以透射电镜(TEM)观察细胞超微结构的改变.结果:获得稳定转染且高表达REGγ的细胞株.经Western Blot检测转染REGγ基因的细胞(实验组),其REGγ蛋白表达明显高于对照组细胞(P＜0.05);未转染组、空载体组和实验组细胞的倍增时间分别为34.6、35.1、26.7h.提示实验组细胞倍增时间缩短;MTT法绘制生长曲线提示实验组细胞生长明显加速;免疫细胞化学检测PCNA结果显示,未转染组、空载体组和实验组细胞的染色灰度值分别为89.61±14.32、87.95±16.38、133.47±8.14,表明实验组细胞PCNA表达明显增强(P＜0.01);Caspase-3分光光度法检测显示,实验组细胞的OD值普遍低于对照组(P＜0.05);Annexin V-FITC的FCM检测显示,实验组细胞的凋亡率明显低于对照组(P＜0.01);TEM观察实验组细胞表现为核仁肥大,线粒体、高尔基体丰富或扩张,未见凋亡小体形成.结论:REGγ基因具有促进乳腺癌MCF-7细胞增殖并抑制其凋亡的作用.     

GSDME通过调控细胞焦亡影响乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的敏感性

[摘要] 目的：探讨GSDME是否通过调控细胞焦亡影响乳腺癌MCF-7 细胞对化疗药物紫杉醇（paclitaxel,PTX）的敏感性。方法：利用RNA干扰技术敲降GSDME在MCF-7 细胞中的表达,采用CCK-8 法、流式细胞术、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放实验及Wb技术分别检测GSDME低表达前后,PTX对细胞增殖、焦亡、LDH释放、GSDME-N端蛋白及cleaved-caspase-3 蛋白表达水平的变化情况。结果：与对照组比较,PTX处理组细胞的焦亡率、LDH释放量、GSDME-N端蛋白及cleaved-caspase-3 蛋白的表达水平均显著升高（均P<0.01）;与si-NC组比较,敲低GSDME可使si-GSDME组细胞对PTX的敏感性降低,其细胞焦亡率、LDH释放量及GSDME-N端蛋白表达水平均显著下降（均P<0.01）。结论：敲减MCF-7 细胞中GSDME的表达量可显著抑制细胞焦亡并降低细胞对PTX的敏感性。     

沉默HuR的表达增加人乳腺癌耐药MCF-7/Adr细胞对多柔比星的敏感性

目的：研究RNA干扰人抗原R（human antigen R,HuR）基因的表达对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr对多柔比星（doxorubicin）敏感性的影响。 方法： 构建靶向 HuR基因 的shRNA表达质粒（pGenesil-siHuR）,稳定转染至MCF-7/Adr细胞,real-time PCR检测细胞中 MDR1 mRNA的表达,Western blotting检测MCF-7/Adr细胞中由 MDR1 基因编码的P糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的表达,MTT法检测pGenesil-siHuR 转染后MCF-7/Adr细胞在多柔比星作用后的存活率和IC50,流式细胞术检测MCF-7/Adr细胞的凋亡率。 结果： 与未转染的MCF-7/Adr细胞比较,pGenesil-siHuR质粒转染MCF-7/Adr细胞中 MDR1 mRNA的表达水平明显减低\[（0184±0.029） vs （1.203±0.026）,P<0.01\],P-gp表达水平明显降低。pGenesil-siHuR质粒转染MCF-7/Adr细胞后,MCF-7/Adr细胞对多柔比星的IC50从未转染的(148.2±2.3）nmol/L降至(42.9±0.4）nmol/L;经多柔比星处理后,pGenesil-siHuR质粒转染组MCF-7/Adr细胞的凋亡率明显上升\[（34.6±1.1）% vs （1.1±0.2）%,P<001\]。 结论： RNA干扰HuR的表达能抑制 MDR1基因 的表达,增加耐药乳腺癌MCF-7/Adr细胞对多柔比星的敏感性。     

miR-1297 通过下调TET3 促进乳腺癌MCF-7 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨miR-1297 对乳腺癌细胞恶性生物学行为的调控作用及其潜在机制。方法：选用2016 年5 月至2018 年5月乐山市人民医院甲乳外科手术切除的20 例乳腺癌组织和癌旁组织标本以及乳腺癌细胞系MCF-7、SW626、HCC1937 和人乳腺上皮细胞MCF-10A,用qPCR检测乳腺癌组织和细胞系中miR-1297 的表达水平。实验分为对照组、miR-1297 inhibitor 组、TET甲基胞嘧啶双加氧酶3（TET3）过表达组及同时过表达TET3 和miR-1297 组,用CCK-8、Transwell 实验检测MCF-7 细胞的增殖、迁移和侵袭能力,用WB检测MCF-7 细胞中TET3 和EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin 和vimentin）的表达水平。用双荧光素酶报告基因验证miR-1297 与TET3 的靶向关系。结果：miR-1297 在乳腺癌组织和细胞系中均高表达（P<0.01 或P<0.05）。敲降miR-1297 后,MCF-7 细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT均明显受到抑制（P<0.05 或P<0.01）。转染pcDNA3.1-TET3 后,MCF-7 细胞TET3的表达水平显著上调（P<0.05）;同时过表达TET3 和miR-1297 能够逆转MCF-7 细胞中TET3 的表达水平及TET3 对MCF-7 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用。双荧光素酶报告基因结果显示,miR-1297 靶向结合TET3 的3'' UTR,miR-1297 靶向下调TET3 从而促进MCF-7 细胞的恶性生物学行为。结论：miR-1297 在乳腺癌组织和细胞中高表达,其通过靶向下调TET3 的表达水平促进MCF-7 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT等恶性生物学行为。     

靶向VEGF的不对称siRNA抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的:探讨靶向血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的siRNA对乳腺癌MCF-7细胞的抑制效果。方法:设计靶向VEGF的4种小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),包括对称siRNA(siRNA21/21,siRNA23/23)与不对称siRNA(asymmetric siRNA,aiRNA;aiRNA21/23,aiRNA19/21)。siRNA转染入MCF-7细胞后,MTT及流式细胞术检测MCF-7细胞增殖及凋亡情况,RT-PCR、ELISA法检测MCF-7细胞中VEGF基因和蛋白的表达。结果:与对照组相比,aiRNA21/23、siRNA23/23、aiRNA19/21、siRNA21/21这4种siRNA都能有效抑制VEGF mRNA的表达[(71.4±5.01)%、(40.0±3.11)%、(37.2±2.79)%、(11.1±0.99)%vs(2.4±0.11)%,P<0.01],且抑制MCF-7细胞的增殖[(44.7±5.38)%、(38.5±5.67)%、(33.6±2.18)%、(33.1±3.18)%vs(2.2±0.28)%,P<0.01],其中以不对称aiRNA21/23的抑制效果最明显。与对照组比较,aiRNA21/23显著促进MCF-7细胞的凋亡[(49.9±4.02)%vs(4.7±0.91)%,P<0.01]。结论:靶向VEGF基因的siRNA可抑制MCF-7细胞的增殖、促进细胞凋亡,尤以不对称siRNA的效果最明显。     

重组质粒BFP—cyclin D1的构建及表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移能力的影响

目的构建含人cyclinD1基因全长编码区的蓝色真核荧光表达载体BFP—cyclinD1,并观察cvclinD1的表达对MCF-7增殖和迁移能力的影响。方法以人乳腺癌MCF-7细胞总RNA为模板,经PCR扩增和酶切后与pEBFP-N1质粒连接,得到重组质粒BFP-cyclinD1。转染到人乳腺癌MCF-7细胞后分为3组：实验组转染BFP—cyclinD1,阴性对照组转染pEBFP—N1;空白对照组为MCF-7,以荧光定量PCR检测基因表达;MTT实验检测细胞生长速度;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果成功构建了BFP-cyclinD1,并在人乳腺癌MCF-7细胞中呈高表达,荧光定量PCR检测示实验组cyclinD1在转染后12h开始增高,48h达到高峰并持续高表达,与激光共聚焦显微镜观察实验组蓝色荧光表达量的趋势一致;MTT实验证实实验组细胞增殖速度（48、72、96h）显著高于对照组（P〈0．01）;细胞迁移实验表明实验组细胞迁移能力显著高于对照组细胞（P〈0．01）。结论cyclinD1的高表达促进了人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移,这可能与其缩短细胞周期、促进DNA合成和复制功能有关。     

梓醇通过FOXO3-FOXM1轴调控乳腺癌MCF-7细胞的增殖与凋亡

目的：探讨中药地黄提取物梓醇（Cat）对乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡,以及裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法：以不同质量浓度（0、5、25、50、100、200 μg/mL）Cat 处理人乳腺癌MCF-7细胞,用MTT法筛选Cat 给药浓度。将MCF-7细胞分为空白对照组、Cat 低剂量组、Cat 中剂量组、Cat 高剂量组、Cat+sh-NC 组和Cat+sh-FOXO3组,采用Edu 细胞增殖实验、平板克隆实验、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖与克隆形成能力、凋亡率和细胞周期,WB法检测各组细胞中FOXO3、FOXM1、caspase-3和caspase-8 蛋白表达。构建乳腺癌MCF-7 细胞裸鼠移植瘤模型,观察Cat 对移植瘤生长的影响,WB 法检测移植瘤组织中FOXO3和FOXM1蛋白表达。结果：Cat 低（50 μg/mL）、中（100 μg/mL）、高（200 μg/mL）剂量处理的MCF-7细胞的增殖能力均显著下降（均P<0.05）。与空白对照组比较,Cat 低、中、高剂量组Edu阳性细胞率、克隆形成数、S期与G2/M期细胞比例及FOXO3蛋白表达均显著降低（均P<0.05）,细胞凋亡率、G0/G1 期细胞比例及FOXM1、caspase-3 、caspase-8 蛋白表达均显著升高（均P<0.05）;与Cat+sh-NC 组比较,Cat+sh-FOXO3组Edu 阳性细胞率、克隆形成数、S期与G2/M期细胞比例及FOXO3蛋白表达均显著升高（均P<0.05）,细胞凋亡率、G0/G1 期细胞比例及FOXM1、caspase-3 和caspase-8 蛋白表达均显著下降（均P<0.05）。Cat 组MCF-7细胞裸鼠移植瘤体积、质量和FOXO3蛋白表达均显著降低（均P<0.05）,FOXM1的蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论：Cat 抑制乳腺癌MCF-7 细胞增殖并促进凋亡,在体内抑制裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与上调FOXO3、下调FOXM1 的表达有关。     

新型LL-37 杂合肽对乳腺癌MCF-7 细胞的抗肿瘤活性的研究

目的：探究新型LL-37 杂合肽对乳腺癌MCF-7 细胞的抗肿瘤活性及其作用机制。方法:利用抗菌肽数据库（http://aps.unmc.edu/AP/main.php）筛选出人源的抗肿瘤抗菌肽，即LL-37 和中性粒细胞防御素-1（human neutrophil peptide 1，HNP-1），经生物信息学软件分析提取有效肽片段，改造整合成新型LL-37 杂合肽；采用CCK-8 法检测0~70 μmol/L 的新型LL-37 杂合肽对MCF-7 细胞和人正常乳腺细胞MCF10A增殖的影响，激光扫描共聚焦显微镜观察分析新型LL-37 杂合肽与肿瘤细胞的亲和能力，流式细胞仪检测新型LL-37 杂合肽和caspase 抑制剂对MCF-7 细胞凋亡和周期的影响。结果:经软件分析得出新型LL-37 杂合肽为水脂两亲性的阳离子多肽，可靶向性地抑制乳腺癌MCF-7 细胞的增殖（P<0.05），其IC50值为58.34 μmol/L，而对正常乳腺MCF10A细胞无明显抑制作用；新型LL-37 杂合肽与MCF-7 细胞具有较高的亲和力，可引起细胞周期阻滞于S期及显著增加细胞早期凋亡率（P<0.01）；但在加入caspase 抑制剂后，细胞周期阻滞及凋亡情况明显缓解（P<0.01）。结论:新型LL-37 杂合肽对乳腺癌MCF-7 细胞具有抗肿瘤活性，可能通过caspase依赖的信号通路阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

Galectin-3 在人乳腺癌组织中的表达及对MCF-7 细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨半乳凝集素-3（galectin-3）蛋白在人乳腺癌组织中的表达规律及沉默galectin-3 基因后对乳腺癌MCF-7 细胞迁移、侵袭和凋亡的影响。方法：收集2014 年2 月至2018 年2 月邢台市人民医院手术切除的15 例乳腺癌患者癌组织及其癌旁组织,另外采集该医院和河北医科大学附属第四医院组织石蜡切片100 份,利用Western blotting 检测15 例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织中galectin-3 蛋白相对表达水平,用免疫组织化学法检测galectin-3 蛋白在100 例乳腺癌石蜡标本切片中的表达水平,并分析其表达与患者临床病理特征的关系。将galectin-3 siRNA 转染至MCF-7 细胞中,用qPCR 法和Western blotting 分别检测galectin-3 mRNA和蛋白的表达水平;用Transwell 小室法和流式细胞术分别检测galectin-3 基因沉默后对MCF-7 细胞迁移、侵袭和凋亡的影响。结果：在乳腺癌组织中galectin-3 蛋白表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）;乳腺癌组织中galectin-3 蛋白阳性表达率为67.00%,其表达水平在淋巴结转移、激素受体（ER、PR）阴性组中显著升高（均P<0.05）,且随TNM分期和组织学分级的升高而升高（均P<0.05）。转染galectin-3 siRNA 后,能显著降低MCF-7 细胞galectin-3 mRNA和蛋白的表达水平、迁移和侵袭能力（均P<0.05）,提高细胞的凋亡率（P<0.05）。结论：Galectin-3 在乳腺癌组织中高表达,沉默galectin-3 表达后抑制MCF-7 细胞的迁移和侵袭、诱导细胞凋亡,可作为乳腺癌生物治疗的一个新靶点。     

RhG-CSF对乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的影响

目的：探讨人重组粒细胞集落刺激因子（RhG-CSF）对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖作用的影响。方法：体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7,将含不同浓度RhG-CSF的培养液与MCF-7细胞共同培养不同时间,采用MTT比色法计算细胞生长增殖率;Anexxin V/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率。实验结果用SPSS.v16.0软件分析。结果：不同浓度RhG-CSF处理细胞后,可以显著促进MCF-7细胞株的增殖（P〈0.01）,且当浓度为10μg/L时增殖作用最强。同时各浓度的RhG-CSF亦可抑制MCF-7细胞凋亡（P〈0.01）。结论：RhG-CSF可以显著促进人乳腺癌细胞株MCF-7增殖。当浓度小于10μg/L时,增殖呈浓度依赖性。大于10μg/L时,增殖能力反而逐渐下降。同时RhG-CSF亦可抑制MCF-7细胞凋亡。