CYTOLOGICAL CHARACTERISTICS OF MAIN CELLULAR ELEMENTS IN BFNIGN AND MALIGNANT GIANT CELL TUMOR OF BONE

Cytological characterist;cs of three main cellular elements iii benign and malignant giant cell tumor of bone were investigated by cytochemistry, tissue ccilture. electron microscopy and microspectropho. toinetry. The macrophage (MO), as identified by EA rosette assay, and the multinucleated giant celf (MGC) had similar enzyme activities, which differed from those of the non rosette-forming cell (NRFC). MO and MGC of malignant giant cell tumor of bone (MCCT) did not proliferate in vitro while ;ts NRFC could maintain seri81 growtfi with concomi tant formation of some multinuclear cells which are clifferent from MCC in the light and eleccron of atypical MCCs were certain aspects. Under both microscope a small number found in MGCT. The;r nii clei varied in size and shape. The NRFC in MGCT showed more prominent ritypical ultrastructural features. Part of the NRFCs had aneuploid DNA content above 4C (-4C), which is generally consi dered as the evidence of rnalignancy. Some nuclei i" the MGCs of MGCT contained }40 DNA con tent, but not those in MGCs of benign giant cell tumor of bone. Usually, no aneupaoidy was detected in MO of all the samples with the exception of one MGCT sample. in which l O% M¢ contains :4C DNA content. Iri the in virro labelling, :II-TdR labelled NRFC were in varying percentage, but labelled MO and MGC were infrequently found. The circumstan tial evidences suggest a close relationship exists be. tween M¢ and MGC: but NRFC presents neoplastic featurea. The atypical giant cells in MGCT might be of tumor origin.     

CONTRAST STUDY ON MULTINUCLEATED GIANT C,FLLS IN GIANT CELL TUMORS OF BONE AND OTHER MULTINUCLEATED CELLS

By means of tissue culture, electron microscopy, cytochemistry, indirect immunofluorescence and immunohistochemistry, the multinucleated giant cells(MGCs) in 12 giant cell tumors of bone (GCT) were studied in contrast with osteoclasts (OCs), foreign body giant cells (FGCs) and inflammatory giant cells (IGCs). The findings in the majority of MGCs were identical with those in OCs, suggesting that they most probably derived from the same precursor. Continuous in vitro culture revealed two kinds of MGCs, which were designated preliminarily as short-lived MGCs and long-lived MGCs for their difference in morphology and in several biological features, which suggests two kinds of MGCs exist in GCT. We conclude that the short-lived conform to the typical MGCs known generally to the pathologists, while the long-lived are deemed to be closely related to the neoplastic elements of the tumor.     

应用单抗GCF-5观察骨巨细胞瘤细胞成分

采用免疫细胞化学和免疫电镜方法,以我室制备的抗骨巨细胞瘤(GCT)肿瘤细胞的单克隆抗体GCF-5,对41例GCT及其它肿瘤细胞进行观察,结果表明:41例中的35例GCT标本与GCF-5结合呈阳性反应;除1例骨肉瘤细胞系(OS-732)细胞为阳性反应外,其它骨肿瘤均为阴性反应。经免疫金染色后电镜下,在阳性细胞表面可见金颗粒,证明GCF-5抗体是抗细胞表面抗原的单克隆抗体,GCF-5与GCT中部分基质细胞(STC)结合,除与一些双核细胞和核数少的多核巨细胞(MGC)结合外,与绝大多数的MGC不发生反应,但能与GCT体外培养、多次传代后的MGC发生反应。均支持本作者以前的观点,即GCT中的MGC与STC各自包含两种截然不同的细胞成分:肿瘤细胞和与肿瘤免疫有关的细胞,仅肿瘤细胞成分能在体外培养中生长、增殖。     

Effect of cytokines on in vitro bone resorption by cells isolated from giant cell tumor of bone

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅｓｏｎｉｎｖｉｔｒｏｂｏｎｅｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎｂｙｃｅｌｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｇｉａｎｔｃｅｌｔｕｍｏｒｏｆｂｏｎｅ．ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｓｔｒｏｍ...     

uPA-uPAR系统对骨巨细胞瘤细胞p44(MAPK)信号转导的影响

目的研究uPA／uPAR系统对骨巨细胞瘤细胞MAPK信号转导的影响。方法分离并培养骨巨细胞瘤细胞，用免疫组化检测骨巨细胞瘤组织中uPAR的表达水平，用免疫共沉淀方法检测外源激活或阻断uPA—uPAR对骨巨细胞瘤细胞信号转导通路的p44（MAPK）蛋白磷酸化水平的影响。结果仅有单核基质细胞可以在体外培养中长期生存；在骨巨细胞瘤组织中uPAR主要表达在部分单核基质细胞和一些多核巨细胞的胞膜上；将uPA—ATF加入培养的骨巨细胞瘤细胞后，细胞信号通路上的p44蛋白磷酸化水平明显增高。用uPAR抗体处理后，细胞p44蛋白磷酸化水平明显降低。说明uPA—ATF具有细胞信号转导活性，该活性受uPAR拮抗剂的影响。结论本实验检测到uPA—uPAR系统是通过p44（MAPK）信号转导通路转导信息，从而调节骨巨细胞瘤细胞增殖、分化及其他生物学行为。     

骨巨细胞瘤体外培养及其生物学特性的观察

１９８３～１９９２年作者通过组织培养，组化及免疫组化、电镜、细胞遗传学，动物接种等方法，对骨巨细胞瘤（ＧＣＴ）的生物学特性进行研究，认为ＧＣＴ的基质细胞有两种，即间叶性基质细胞及巨噬细胞性基质细胞，巨噬细胞性基质细胞可能为许多种不同的巨噬细胞混合体，这两种类型细胞在瘤组织内互相依赖存活。在体外培养见巨噬细胞性基质细胞逐渐减少而消亡，间叶性基质细胞则在没有巨噬细胞性基质细胞的情况下也容易老化及消亡，故目前尚未有本瘤的细胞株建立。多核巨细胞是一反应性及终末性细胞，可能由于基质细胞分泌目前尚末清楚的细胞因子，吸引血中破骨细胞前身的单核巨噬细胞到瘤组织内，并促进其分化成破骨细胞样多核巨细胞。     

骨巨细胞瘤的p16蛋白表达特点

目的 :探讨p16蛋白表达与骨巨细胞瘤发生的关系。方法 :采用免疫组织化学S P法检测 4 2例骨巨细胞瘤的p16蛋白表达。结果 :骨巨细胞瘤的p16蛋白表达缺失率为 6 6 .7% ,p16蛋白表达随骨巨细胞瘤恶性程度的上升而降低。骨巨细胞瘤的多核巨细胞有 3种染色状态。结论 :p16蛋白表达降低与骨巨细胞瘤的发生有关 ,骨巨细胞瘤的多核巨细胞可能存在不同种类。     

Apoptosis in giant cell tumors of bone

Although giant cell tumor of bone (GCT) is characterized by the extensive multinucleated giant cells among mononuclear stromal cells, proliferation of these cells and multinucleation are not without limit in certain cases. Few studies on oncogenesis of GCT have focused on the negative growth control, including growth arrest and apoptosis. The purpose of this study was to investigate the mechanism of cell death in multinucleated giant cells and stromal cells of GCT. In this study, we have demonstrated that GCT cells can undergo apoptosis. The cells in surgical specimen were positively stained in situ nick end labeling methods, and electron micrographs showed the morphological changes associated with apoptosis in some of stromal cells and multinucleated giant cells. A candidate responsible for this apoptosis was then examined using cultured GCT cells. We focused on Fas that is a major trigger of apoptosis. Cultured GCT cells expressed detectable amount of Fas on their surface. Although GCT cells did a little undergo apoptosis following treatment with anti-Fas alone, combination treatment with cyclohexamide led to an increase in apoptosis of the GCT cells. These data suggested that the sensitizing activity of cyclohexamide on anti-Fas mediated cytotoxicity could happen in vitro.     

冬凌草甲素在体外对DNA、RNA和蛋白质合成的影响

采用[~3H]TdR、[~3H]UR和[~3H]leucine在体外参入ECA细胞的液体闪烁计数术,探讨冬凌草甲素对DNA、RNA和蛋白质合成的影响。结果表明:冬凌草甲素对DNA、RNA和蛋白质的合成均有明显抑制作用,其抑制程度的大小呈剂量相关性。它对DNA、RNA合成的抑制发生较早,恢复较快,对蛋白质合成的抑制作用较强且持久。终止药物作用后,[~3H]TdR参入曲线表明,该药对DNA合成的抑制属干扰代谢型。     

人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404的建立和生物学特性

目的:研究骨巨细胞瘤细胞体外培养的生物学特性,并建立人骨巨细胞瘤细胞系. 方法: 采用原代组织块培养法培养骨巨细胞瘤手术标本,对存活细胞进行形态学观察、免疫组织化学染色、细胞周期检查、核型分析、裸鼠移植. 结果: 建立人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404,其形态学表现、免疫组织化学染色均符合骨巨细胞瘤纤维母细胞样基质细胞的特征. 经过近1 a的体外培养,现已传代100次,细胞倍增时间39.7 h,细胞周期测定G1期为67.5%,G2期为8.9%,S期为23.6%. 染色体具有三倍体核型. 裸鼠移植成瘤率100%,无支原体污染. 结论: 人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404可以用于对骨巨细胞瘤的研究.     

自体心包瓣“内皮化”的实验研究

目的 探讨有利于自体心包瓣内皮化的处理方法。方法 将体外培养小牛主动脉内皮细胞接种于不同方法处理的自体牛心包表面。采用＾３Ｈ－ＴｄＲ摄取量测定、扫描电镜及放射免疫法观察不同处理方法对接种后内皮细胞生长、前列环素（ＰＧＩ２）合成量和细胞内ｃＡＭＰ含量的影响。结果 三种不同浓度戊二醛短时间（１０ｍｉｎ）处理的心包表面内皮细胞均可生长,其中以体积分数为０．２％戊二种不同浓度戊二醛短时间（１０ｍｉｎ）处理     

骨巨细胞瘤p~（53）蛋白和PCNA的表达及其意义

目的探讨抑癌基因ｐ~（５３）蛋白和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）在骨巨细胞瘤（ＧＣＴ）中的表达特征及其临床病理意义。方法应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测３９例ＧＣＴ组织中ｐ~（５３）和ＰＣＮＡ的表达与定位分布。结果ｐ~（５３）和ＰＣＮＡ阳性反应主要定位于单核基质细胞核上，少数多核巨细胞呈阳性反应，多数多核巨细胞呈阴性反应。ｐ~（５３）在ＧＣＴⅢ级中阳性率为６０％，显著高于Ｉ，Ⅱ级（Ｐ＜０，０５）。ＰＣＮＡ的阳性分级和ｐ~（５３）表达两者间呈显著正相关（Ｐ＜０．０５）。结论ｐ~（５３）和ＰＣＮＡ的表达可作为评估ＧＣＴ增殖活性和恶性程度的指标。     

TNF-α对骨巨细胞瘤u-PA系统表达的调节及意义

目的探讨TNF-α对骨巨细胞瘤u-PA系统mRNA表达的调节及意义。方法骨巨细胞瘤原代培养及传代,加入外源性TNF-α,观察加入TNF-α前后细胞生长特性的变化,流式细胞分析仪检测细胞的增殖指数,RTPCR检测u-PA系统mRNA的表达。结果原代培养过程中可见到三种细胞:多核巨细胞(MGC)、巨噬细胞样单核细胞(MC)及纤维母细胞样单核细胞(FC),传代几次以后只有FC及MC;RT-PCR检测细胞中有u-PA、uPAR及PAI-1mRNA表达,加入TNF-α后mRNA的表达较加入前增高(P<0.05);流式细胞分析仪检测细胞的增殖指数(PI),加入TNF-α后PI值较加入前增高(P<0.05)。结论外源性TNF-α促进骨巨细胞瘤原代培养细胞u-PA系统mRNA的表达及细胞增殖。     

IGF-1及TNF-α对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用

目的：通过对大鼠成骨肉瘤ＵＭＲ１０６细胞增殖状态及细胞周期变化的观察，探讨胰岛素样生长因子 １（ＩＧＦ １）及肿瘤坏死因子 α（ＴＮＦ α）对该细胞增殖调节作用的机理。方法：将ＵＭＲ１０６细胞培养于含１０％小牛血清的ＭＥＭ培养基中。细胞长满后换无血清培养７２ｈ，然后分别用生理剂量的ＩＧＦ １和ＴＮＦ α刺激细胞１２ｈ，应用３Ｈ ＴｄＲ参入、磺基罗丹明染色法和流式细胞技术对细胞增殖状态及细胞周期进行定量测定。结果：ＩＧＦ １有明显促细胞ＤＮＡ合成作用，并使Ｓ期细胞所占比例明显增加；而ＴＮＦ α则具有相反的作用。定量测定细胞增殖也显示ＵＭＲ１０６受ＩＧＦ １的正性调节而受ＴＮＦ α的负性调节。结论：ＩＧＦ １和ＴＮＦ α对ＵＭＲ１０６细胞增殖的调节作用与该细胞ＤＮＡ复制水平调节有关。     

CREST 在骨巨细胞瘤中的表达及意义

目的：研究钙反应性反式激活因子（ CREST）在各级骨巨细胞瘤组织中的表达变化,探讨其与骨巨细胞瘤临床病理分级的关系。方法应用免疫组织化学技术检测60例骨巨细胞瘤标本中CREST的表达变化。结果 CREST定位于细胞核,表达于大多数骨巨细胞瘤的肿瘤细胞中。随着肿瘤组织临床病理分级增高, CREST表达率增高,CREST的表达在骨巨细胞瘤率Ⅰ级和骨巨细胞瘤Ⅲ级间的差别有统计学意义（ P＜0．05）,在骨巨细胞瘤其他各分级间差异无显著性（ P＞0．05）。结论 CREST的表达与临床病理分级存在一定相关性。     

人骨巨细胞瘤细胞DNA含量的研究

将体外培养的人骨巨细胞瘤第四代和第五代瘤细胞,进行~3H—TdR放射自显影术和Feulgen反应,先计算出银粒标记细胞(S,G_2)的增殖比率,再用显微分光光度法测定未被标记的细胞(G_0和G_1期)的DNA含量。结果,第四代单核瘤细胞DNA含量为亚四倍体值((?)=87.36,DI=1.83),第五代单核瘤细胞DNA含量为超四倍体值((?)=118.13,DI=2.47).两代瘤细胞DNA含量经统计学处理,有显著差异(P<0.01),证实了骨巨细胞瘤细胞长期传代培养可以恶化。     

Ge—132对荷瘤小鼠NK细胞活性及红细胞免疫功能的影响

为了探讨Ｇｅ－１３２抗癌作用机制，本文进行了Ｇｅ－１３２对荷瘤小鼠脾脏ＮＫ细胞活性和红细胞免疫粘附功能影响的体内实验研究。实验采用Ｃ５７ＢＬ／６荷瘤小鼠，腹腔注射Ｇｅ－１３２（剂量分别为１００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ），每日１次，连续１４天后，取小鼠脾细胞和血液进行ＮＫ细胞活性及红细胞免疫粘附功能测定，并摘除瘤块称重，计算抑瘤率。结果表明，Ｇｅ－１３２对小鼠抑植瘤（Ｓ１８０）的生长具有显著的抑制效应，抑瘤率达５５％；荷瘤小鼠脾细胞ＮＫ活性明显低于正常对照组，Ｇｅ－１３２能使其得以恢复；荷瘤小鼠ＲＢＣ－Ｃ３ｂ受体花环率和肿瘤ＲＢＣ花环率明显低于正常对照组（Ｐ＜００１），ＲＢＣ－ＩＣ花环率则高于正常对照组（Ｐ＜００１），注射Ｇｅ－１３２可显著提高ＲＢＣ－Ｃ３ｂ受体花环率和肿瘤ＲＢＣ花环率，降低ＲＢＣ－ＩＣ花环率。表明Ｇｅ－１３２能增强荷瘤小鼠ＮＫ细胞杀伤活性和红细胞免疫粘附功能。     

骨巨细胞瘤体外原代培养及特性

目的观察骨巨细胞瘤体外培养细胞的形态生长特性及DNA倍体含量。方法取手术切取的骨巨细胞瘤新鲜标本8例,以组织培养法进行原代培养,观察细胞形态、生长曲线,FCM分析其倍体含量。结果骨巨细胞瘤原代培养种可见3种细胞;多核巨细胞可以长期培养。FCM分析显示:5例复发及2例原发病例是二倍体或亚二倍体,1例原发病例是非整倍体。结论单核梭形细胞是骨巨细胞瘤的主要肿瘤性成分;FCM无助于骨巨细胞瘤的预后判断。     

长骨骨巨细胞瘤相关复发因素分析

目的：分析长骨骨巨细胞瘤相关复发因素,为其治疗及降低复发率提供参考依据。方法：分析２１例长骨复发性骨巨细胞瘤一般资料、影像学检查资料、首次手术方式、肿瘤所在部位、病理骨折与否、Ｊａｆｆｅ‘ｓ病理分级、Ｃａｍｐａｎｉｃｃｉ’ｓ放射线分级等,总结相关的复发因素。结果：Ｓ一组４１例肿瘤中复发者２１例,２１例中Ｊａｆｆｅ‘ｓ病理诊断与首次比较,１７例无变化,;按Ｃａｍｐａｎｉｃｃｉ’ｓ放射诊断标准,首次１     

血管内皮生长因子与骨巨细胞瘤预后的关系

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)及微血管密度(MVD)对估计人骨巨细胞瘤预后的价值。方法:通过对69例骨巨细胞瘤患者的随访,将他们分为无复发和无转移组及复发或转移组。采用免疫组织化学SABC法检测骨巨细胞瘤中VEGF、CD34的表达,用MVD值衡量CD34的表达。结果:无复发组42例的中位阳性细胞率为28%,复发转移组27例的中位阳性细胞率为48%,两组间差别有极显著性意义(P<0.001)。无复发组MVD值为33.55±10.82,复发转移组MVD值为56.78±16.17,两组间MVD值的差别有极显著性意义(P<0.001)。VEGF阳性细胞率与MVD值的关系经Spearman等级相关检验,两者呈显著正相关(r=0.845,P<0.01)。结论:VEGF和MVD是估计骨巨细胞瘤预后的新指标,VEGF是重要的促血管生成因子。