续断苷对人成骨细胞增殖和分化作用研究

目的:观察续断苷对体外培养人成骨细胞的增殖和分化的影响。方法:取人髂骨松质骨分离培养成骨细胞,传代后用含续断苷的培养液培养,用MTT方测定成骨细胞的增殖,并测定碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果:浓度为1,10,100μg/ml的续断苷培养液促进成骨细胞的增殖;浓度为10,100μg/ml的续断苷培养液促进成骨细胞碱性磷酸酶分泌。结论:续断苷在一定浓度范围内促进人成骨细胞的分化与增殖。     

素尔松对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 研究中成药素尔松对大鼠成骨细胞增殖分化的影响.方法 应用不同浓度素尔松处理大鼠成骨细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,并计数绘制生长曲线;免疫组织化学染色碱性磷酸酶活性变化;茜素红S染色观察成骨细胞钙化灶的形成和变化:透射电镜观察细胞内部结构的变化.结果 镜下观察成骨细胞数量与对照组相比,随素尔松浓度加大而增多,碱性磷酸酶表达增强,钙化灶增多.电镜下观察细胞器未见明显变化.结论 素尔松能促进成骨细胞的增殖、分化;增强成骨细胞的合成代谢,促进成骨活动增加,钙盐的分泌增加.     

雌激素与流体剪切力对成骨细胞增殖和功能的间接影响

目的 :了解雌激素与流体剪切力对体外培养的成骨细胞增殖和功能的间接影响 .方法 :进行新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞原代培养 .选择恒定的雌激素浓度及合适的振荡频率分四种组合方式施加于成骨细胞 ,2 4h后用其培养液培养静止状态下的成骨细胞 ,观察不同时间段细胞增殖和碱性磷酸酶活性的变化 .结果 :经雌激素和机械力影响的条件培养液作用 12h后 ,可促进细胞增殖 (P <0 .0 1) ,该效果持续至 2 4h ,在 2 4h至 72h两因素表现为协同作用 (P <0 .0 1) ;对ALP的活性的影响在 12h之前两因素表现为拮抗作用及抑制作用 (P <0 .0 1) .2 4h后 ,机械力可促进ALP活性升高 ,并持续至 72h .结论 :雌激素和流体剪切力及两者复合作用均可通过旁分泌方式影响细胞的增殖和功能     

大黄酸-雌酮对骺板TGF-β1及其受体TβRⅡ蛋白表达的影响

目的考察新型雌激素衍生物——大黄酸-雌酮对小鼠长骨转化生长因子-β1（TGF-β1）及其受体TβRⅡ蛋白表达的影响,初步探讨该化合物对骨的作用机制。方法取16d胚胎小鼠前肢尺骨在BGJb培养基中培养48h,培养基中分别含有1&#215;10^-6mol／L大黄酸-雌酮、雌酚酮、大黄酸及雌酚酮＋大黄酸混合物。采用免疫组织化学方法测定长骨骺板静止区、增殖区和肥大区TGF—β1和TβRⅡ基因表达产物。结果与空白对照组相比,雌酚酮组、大黄酸-雌酮和雌酚酮＋大黄酸混合组骺板各区TGF-β1和TβRⅡ蛋白水平明显上调。大黄酸组仅肥大区TβRⅡ上调,其他各区TGF—β1和TβRⅡ蛋白水平均无明显改变。与雌酚酮组相比,大黄酸-雌酮组静止区和增殖区TGF—β1和TβRⅡ的表达均增强。结论培养基中加入大黄酸-雌酮可上调长骨TGF—β1及其受体的表达,并可能与其促进体外培养胚胎小鼠长骨生长有关。     

麦胚提取物对大鼠成骨细胞增殖分化和矿化的影响

目的　探讨麦胚提取物对骨质疏松症的防治作用。方法　体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,然后用噻唑蓝 (MTT)法测定麦胚提取物对体外培养成骨细胞的增殖作用 ,氨基安替比林测酚法测成骨细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,茜素红染色方法 (ARS)研究对成骨细胞矿化的影响。结果　 0 10 g·L-1的麦胚提取物可以促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖和分化作用 ,0 5 0g·L-1促使成骨细胞矿化结节的形成。结论　麦胚提取物可以提高成骨细胞的增殖和分化 ,并有促进矿化的功能     

重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(rhIGF-Ⅰ)对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响

目的观察胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶(ALP)的合成和钙化结节形成的影响.方法不同浓度IGF-Ⅰ分别刺激培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力;采用对硝基酚磷酸盐法测定细胞裂解液中ALP活性;Von Kossa染色测定钙化结节数目.结果一定浓度IGF-Ⅰ能明显增加大鼠成骨细胞数量(P＜0.05),在0.1～100.0 ng/ml这种作用与IGF-Ⅰ的浓度呈正相关;经IGF-Ⅰ刺激,大鼠成骨细胞ALP合成明显高于对照组(P＜0.05);经IGF-Ⅰ刺激,大鼠成骨细胞钙化结节数目明显高于对照组(P＜0.001).结论IGF-Ⅰ能增加体外培养的大鼠成骨细胞数量,促进成骨细胞ALP合成和钙化,提示IGF-Ⅰ可能直接促进骨形成.     

成骨生长肽羧基端片段及其衍生物G38I对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的探讨成骨生长肽(OGP)羧基端片段[OGP(10~14)]及其衍生物G38I对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法大鼠颅盖骨成骨细胞体外培养至第3代,分别加入10-15~10-7mol/L的OGP(10~14)或G38I,48h后行细胞计数,并用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖情况。细胞分为实验组[OGP(10~14)组和G38I组]及对照组,实验组给予10-11mol/L的药物干预48h。电镜观察细胞超微结构的变化,测定培养上清液碱性磷酸酶(ALP)含量,用免疫组织化学方法比较细胞中Ⅰ型胶原蛋白含量的变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞中核结合因子a1(Cbfa1)和Ⅰ型胶原mRNA表达水平的变化。结果在较低浓度时,随药物浓度升高,OGP(10~14)和G38I促进细胞数增加、提高细胞活性的作用增强,10-11mol/L药物作用时成骨细胞数分别为37×104/ml和30×104/ml,进一步升高药物浓度反而抑制细胞增殖。电镜下实验组细胞粗面内质网发达,胞质中有大量分泌囊泡。对照组细胞囊泡中可见钙盐结晶。OGP(10~14)组和G38I组与对照组比较,细胞培养上清液ALP含量高(4·47U/g、3·82U/g vs2·21U/g),细胞中Ⅰ型胶原蛋白含量多,Cbfa1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平较高,差异均具有统计学意义(P<0·01,P<0·05)。结论OGP(10~14)及其衍生物G38I具有与OGP全长肽相同的促进成骨细胞增殖、提高细胞活性的作用,OGP(10~14)和G38I可上调成骨细胞Cbfa1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平,增加细胞中Ⅰ型胶原的合成,促进细胞分化和成骨作用。     

雌马酚对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

【目的】研究雌马酚对体外原代培养的成骨细胞增殖和分化作用的影响,以探讨其预防骨质疏松症的作用机制。【方法】用含20%胎牛血清的α-MEM培养新生Wistar大鼠颅骨分离培养的成骨细胞,同时分别给予10-8mol/L-10-6mol/L的雌马酚、雌二醇或二者分别联合雌激素受体拮抗剂ICI182780,MTT法检测细胞增殖能力,对硝基酚磷酸盐法测定成骨细胞碱性磷酸酶活性。【结果】雌马酚与雌二醇均能显著增加体外培养大鼠成骨细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性,且雌激素受体拮抗剂可显著抑制雌马酚和雌二醇的上述效应。【结论】雌马酚可明显促进体外培养大鼠的成骨细胞增殖,并促进前成骨细胞向成骨细胞的分化,推测该促效应可能是通过ER途径来介导的。     

致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞功能的影响

目的 研究致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞增殖、分化的作用。方法 经酶消化法从新生兔颅骨中分离成骨细胞,进行成骨细胞的碱性磷酸酶染色及成骨能力的检测。从经铬（Cr^6 ）致敏的新西兰兔外周血分离淋巴细胞并提取其培养上清液（LCM）,并分别观察在无LCM、加未经抗原（Ｃr^6 )刺激的LCM和加经Ｃr^6 刺激的LCM等3种情况下成骨细胞增殖、碱性磷酸酶和骨钙素分泌的情况。结果 从兔颅骨分离的细胞碱性磷酸酶染色阳性,在长期培养中能够形成钙化结节。致敏淋巴细胞培养介质抑制成骨细胞的增殖、促进碱性磷酸酶的分泌,抑制骨钙素的产生。经方差分析检验均具有明显的统计学差异。结论 致敏淋巴细胞能够抑制成骨细胞的功能,可导致骨形成障碍。     

依普拉芬对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖和分化的影响

目的 研究依普拉芬对体外培养的原代大鼠成骨细胞增殖和分化功能的影响.方法 体外分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,将不同浓度的依普拉芬加入培养液,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化结节.结果 与阴性对照组相比, 各浓度组的依普拉芬均可增加成骨细胞数量(P＜0.01),提高细胞的ALP活性和促进钙化结节形成(P＜0.01),其中10-8～10-5 mol/L作用更为显著.结论 依普拉芬具有促进体外培养成骨细胞增殖、分化的作用.     

大豆异黄酮对体外原代大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的 :研究大豆异黄酮对体外培养原代大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法 :采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞 ,培养液中加入不同浓度的大豆异黄酮 ,以17- β 雌二醇 (E2)作为阳性对照组 ,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶 (ALP)活性及骨钙素 (BGP)含量。结果 :与正常对照组相比 ,大豆异黄酮可增加成骨细胞数量(P<0.01) ,提高细胞的ALP活性和BGP含量(P<0.01)。除ALP外 ,这些作用均低于E2(P<0.01)。结论 :大豆异黄酮可促进体外培养成骨细胞的增殖、分化 ,其作用与雌激素相似 ,但低于雌激素     

蛇床子素对新生大鼠颅盖骨成骨细胞的作用

目的：研究蛇床子素（ｏｓｔｈｌｅ）在体外对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖及成骨作用的影响。方法：酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞;改良Ｇｏｍｏｒｉ钙钴法染色鉴定,＾３Ｈ－胸腺嘧啶和＾３Ｈ－脯氨酸掺入法分别测定细胞增殖和胶原合成;磷酸苯二钠法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性;并以抗骨质疏松症药物依普黄酮（ｉｐｒｉｆｌａｖｏｎｅ,ＩＰ）作为阳性对照药物。结果：蛇床子素对新生大鼠颅盖骨成骨细胞的增殖、ＡＬＰ的活性和胶原合成都有促进作用。其对成骨细胞的增殖作用比ＩＰ强,但对胶原合成的促进作用弱于ＩＰ。结论：蛇床子素通过增加成骨细胞数量、促进细胞胶原蛋白及ＡＬＰ的合成而促进成骨作用。     

唑来膦酸对成骨细胞增殖及IGF-1表达的影响

目的：观察唑来膦酸对体外大鼠成骨细胞增殖及IGF-1表达的影响,进而分析其对成骨质量的影响。方法：采用体外培养的大鼠颅盖骨成骨细胞,用不同浓度的唑来膦酸（10^-4～10^-9 mol/L）处理后,观察其对成骨细胞增殖率以及其分泌IGF-1的影响。结果：唑来膦酸在较高浓度时（≥10^-5 mol/L）明显抑制细胞增殖;唑来膦酸在≤10^-6 mol/L的浓度时并不影响IGF-1的分泌。结论：唑来膦酸在低浓度时不影响成骨质量,考虑到其在体的作用时间更久,所以使用低浓度的唑来膦酸治疗骨质疏松是更明智的选择。     

成骨生长肽10～14及其结构类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的探讨成骨生长肽10～14(G36G)及其结构类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖与分化功能的影响。方法采用无血清培养条件,G36G和G48A各9组:浓度依次为1×10~(-7)、1×10~(-8)、1×10~(-9)、1×10~(-10)、1×10~(-11)、1×10~(-12)、1×10~(-13)、1×10~(-14)和1×10~(-15)mol/L。甲状旁腺激素(PTH)组:培养结束前6 h培养液中的PTH浓度为1×10~(-8)mol/L。对照组:培养液中含1%牛血清白蛋白。分别观察不同浓度G36G及其类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,免疫组织化学法检测不同处理因素对成骨细胞胰岛素样生长因子(IGF)-1蛋白表达水平的变化。结果透射电子显微镜下,G36G、G48A和PTH组的成骨细胞形状丰满,核膜清晰,粗面内质网丰富,高尔基器发育良好,胞质内分泌颗粒增多,可见细胞核分裂相;对照组的成骨细胞胞体扁平,胞质内部分细胞器丧失,细胞核分裂相比例降低。G36G、G48A组分别在1×10~(-11)’、1×10~(-13)mol/L时促进成骨细胞增殖的效应最强。PTH组的ALP活性显著高于对照组(P<0.05)。G36G组在1×10~(-13)mol/L时促进ALP活性作用最强,显著高于对照组(P<0.01)。G48A组在1×10~(-15)mol/L时促进ALP活性作用最强,显著高于对照组(P<0.01)。4组间IGF-1蛋白表达水平的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论G36G及其类似物G48A在体外能够促进大鼠成骨细胞的增殖及分化。     

辛伐他汀对成骨细胞增殖和矿化功能影响的实验研究

目的：研究辛伐他汀对原代培养大鼠颅骨成骨细胞增殖和矿化功能的影响。方法:酶消化法分离培养大鼠颅骨成骨细胞,分别用空白培养基、不同浓度辛伐他汀及不同浓度的rhBMP-2作用24h后,MTT法测量药物对细胞增殖活性的影响,细胞接种到培养板连续培养7d,von Kossa染色观察成骨细胞矿化结节,采集图像并转换处理后计算矿化结节面积的百分比。结果:辛伐他汀对成骨细胞增殖活力的增加呈剂量依赖方式,而且可使成骨细胞矿化面积百分比显著增加,与rhBMP-2的作用相当。结论:辛伐他汀可促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞的增殖和矿化,从而发挥促进骨形成的作用。     

低频正弦交变磁场磁力线方向对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响

目的研究磁场强度1.8mT、频率50Hz,正弦交变磁场磁力线方向对体外培养大鼠成骨细胞(ratsosteoblasts,ROB)的影响。方法原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为3组,对照组、平行组和垂直组,平行组和垂直组分别暴露在磁场中,磁场强度1.8mT、频率50Hz、磁力线方向分别与培养皿平行和垂直,30min/次/d。倒置相差显微镜下观察细胞形态;MTT法测定细胞增殖;第3d、6d、9d、12d测定碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性和钙盐沉积量;第10d进行ALP组织化学染色,第12d进行茜素红钙化结节染色;在正弦交变磁场(sinusoidal electromagnetic fields,SEMFs)处理0h、24h、48h和96h后,Real-time RT-PCR检测ALP、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和Osterix(OSX)mRNA表达平行变化。结果成骨细胞于磁场暴露处理3～4d后呈漩涡样分布;与对照组相比,磁场组均抑制细胞增殖(P<0.01或P<0.05),其中与垂直组比较平行组显著抑制细胞增殖;与对照组比较,磁场组均促进细胞分化成熟,表现为提高细胞的ALP活性,促进钙盐沉积量,增加钙化结节数量,提高ALP、BMP-2和OSX mRNA表达水平,尤以平行组最为明显。结论 1.8mT、50Hz,磁力线方向与培养皿平行和垂直放置的正弦交变磁场均抑制体外培养成骨细胞的增殖,但能促进其分化成熟,此作用与磁力线方向有关,尤以平行组促分化效果最为明显。