家蝇幼虫抗菌蛋白诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的探讨

目的 观察家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导，探讨其抗肿瘤作用机制。方法 流式细胞仪测定家蝇幼虫抗菌蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响；HE染色法观察细胞凋亡形态，并测定细胞凋亡指数（AI）。结果 在0．10％组A375的G／M期升高，S期降低。0．50％组G0／G1期、G2／M期和AI／PI（增殖指数）显著增加，S期及PI明显减少。2．50％组S期、PI、AI／PI及细胞凋亡率（Ap）显著增高，G0／G1期大大减少。12．50％组G2／M期、PI、AI／PI及Ap显著增高，G0／G1期和S期明显下降。结论 家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞有明显的抑杀作用；家蝇幼虫抗菌物质可能系通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而抑制黑色素瘤A375细胞生长。     

蜈蚣提取液体外抗肝癌Bel-7404细胞作用机制的研究

目的研究蜈蚣提取液（ECP）对肝癌Bel-7404细胞株的作用机制。方法采用不同浓度ECP作用于体外培养的肝癌细胞Bel-7404，流式细胞仪检测治疗组与对照组的细胞周期及其凋亡率；免疫组化法检测两组细胞内凋亡相关基因X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）及Bax的表达情况。结果ECP在不同浓度下，Bel-7404细胞内G0／G1期所占的比例、细胞增殖指数（PI）和细胞凋亡率是不同的，且差异有统计学意义（P〈0．05）。在相同浓度组下，24h的细胞凋亡率明显低于48h的，差异有统计学意义（P〈0．01）；随ECP浓度加大，XIAP在Bel-7404细胞中表达逐步减少，Bax表达逐步增多。结论ECP作用Bel-7404细胞的G1／G0期，抑制其增殖。通过上调Bax和抑制XIAP的表达，诱导并促进肝癌细胞凋亡，其作用呈剂量和时间依赖效应。     

1，25-二羟基维生素D3对K562细胞周期及凋亡的影响

目的观察1，25-二羟基维生素D3[1，25（OH）2D3]对白血病细胞株K562细胞周期及细胞凋亡的作用。方法Western印迹检测维生素D受体（VDR）在K562细胞的表达；四噻唑蓝法（MTT）、AO／EB、流式细胞仪分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期。结果（1）K562细胞核阳性表达VDR；（2）0-10^-6mol／L浓度的1，25（OH）2D3呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖，10^-8mol／L 1，25（OH）2D3明显抑制K562细胞增殖，促进凋亡，细胞周期阻滞主要发生在G2期或M早期，凋亡率从4．1％（对照组）增至26．5％（P〈0．01）。结论1，25（OH）2D3可明显抑制K562细胞增殖，促进细胞凋亡。     

缺氧对肝癌细胞HepG2中HIF-1α和HK11表达的影响

目的探讨缺氧对肿瘤细胞周期调控的机制及乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）、己糖激酶Ⅱ（HKⅡ）表达的影响。方法人肝癌细胞HepG2分成3组：缺氧12h组、缺氧24h组及对照组。缺氧组分别在缺氧条件下（37℃，5％CO2、2．0％O2饱和度）培养12h和24h，对照组置于正常氧浓度条件下（37℃。5％CO2、21．0％O2饱和度）培养24h。流式细胞仪检测细胞周期分布，免疫组织化学S2P法检测HIF-1α表达，荧光定量PCR法检测HKⅡ mRNA表达量。结果缺氧情况下细胞周期分析处于G0／G1期细胞百分比明显增多，处于G2／M期的细胞减少，并且可见到较明显的凋亡峰的形成，缺氧12h组、缺氧24h组的CO／G1期比例显著高于对照组（p〈0．05）；HIF-1α和HKⅡ在两组缺氧组与对照组比较，其表迭量明显增加（p〈0．05），缺氧24h组与缺氧12h组比较有显著性差异（p〈0．05）。结论HIF-1α可刺激人肝癌细胞HKⅡ表达的增加，细胞阻滞在Go／G1期，以HIF-1α为药物靶点可望成为治疗肝癌基因治疗的新途径。     

甲基硒酸对乳腺癌细胞体外凋亡和细胞周期的影响

目的:观察甲基硒酸(MSA)对乳腺癌细胞系MCF-7凋亡和细胞周期的影响。方法:以不同浓度的MSA作用乳腺癌细胞系MCF-7,在不同时间内,观察不同浓度MSA对乳腺癌细胞凋亡率和细胞周期的影响。流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果:①MSA可诱导乳腺癌细胞体外凋亡,随着药物浓度及作用时间的增加,乳腺癌细胞凋亡率逐渐增加。②MSA可改变乳腺癌的细胞周期,将乳腺癌细胞周期阻断在G1期,并且减少S期细胞的比例。结论:MSA可诱导乳腺癌细胞体外凋亡、调控乳腺癌细胞周期。MSA有望成为预防和治疗乳腺癌的一种新方法。     

重组人生长激素联合5-氟尿嘧啶对表达或不表达生长激素受体人肝癌细胞的体外干预

目的研究重组人生长激素（rhGH）在体外对表达或不表达生长激素受体（GHR）的人肝癌细胞系的影响。方法采用免疫组织化学方法检测人肝癌细胞系的GHR表达。每种肿瘤细胞系分4组进行处理：未处理组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）处理组、rhGH处理组及5-Fu＋rhGH联合处理组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞术分析不同浓度rhGH及其与5-Fu合用对人肝癌细胞系的生长抑制、凋亡、细胞周期及增殖指数（PJ）等的影响。结果Bel-7402细胞表达GHR；与未处理组相比，各浓度rhGH组的生长率、G2／M期比例和PI显著升高，细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）；与5-Fu处理组相比，各浓度rhGH＋5-Fu组的G2／M期比例和PI显著升高，抑制率和细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）。SMMC7721不表达GHR；不同浓度rhGH对该细胞系的分裂增殖无明显影响（P均〉0．05）；rhGH＋5-Fu联合处理组与5-Fu处理组问的细胞抑制率、凋亡率及Pl差异也无显著性（P均〉0．05）。结论rhGH在体外能促进GHR^＋的肝癌细胞增殖，减弱5-Fu对GHR^＋细胞的抗癌作用，但对GHR^-的肝癌细胞无明显影响，也不能明显干扰5-Fu对GHR^-细胞的抗癌功能。     

高温联合化疗药对人乳腺癌细胞杀伤作用研究

目的:探讨高温联合化疗药物诱导人乳腺癌细胞株(MDA-MB-435S)凋亡和细胞周期各时相变化的分子机理。方法:应用43℃水浴箱高温诱导MDA-MB-435S细胞株,并联合使用5-Fu进行细胞杀伤,通过MTT比色法和流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期各时相的变化。结果;高温组、高温联合5-Fu组细胞凋亡率及细胞周期时相变化与对照组差异显著(P<0.01)。结论:高温联合5-Fu可提高乳腺癌细胞凋亡率、可抑制乳腺细胞周期G1期向S期的进程,S期细胞减少、G2M期细胞相对增高。     

顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其对细胞周期影响的研究

目的:观察顺铂对人宫颈癌Hela细胞凋亡及细胞周期的影响,以揭示顺铂治疗宫颈癌的机理。方法:运用体外细胞培养技术,以不同浓度的顺铂作用于培养的人Hela细胞72 h,用流式细胞仪分析其凋亡率及细胞周期。结果:顺铂能以浓度依赖的方式诱导Hela细胞凋亡,并呈现出G0/G1期阻滞作用。结论:顺铂能诱导Hela细胞凋亡并改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期,这可能是顺铂抗宫颈癌作用的重要机制之一。     

母鼠高氟摄入对仔鼠颅骨成骨细胞的影响

目的观察高氟摄入对大鼠所生仔鼠颅骨及成骨细胞超微结构变化,探讨氟中毒与成骨细胞细胞周期和细胞凋亡的关系。方法常规饮食条件下,给雌鼠自由饮用含氟化钠0、50、100、150mgL蒸馏水2个月,随后与正常雄鼠交配,取仔鼠颅盖骨及成骨细胞做光镜和电镜检查;应用流式细胞术检测仔鼠成骨细胞凋亡的百分率和细胞周期。结果氟中毒仔鼠颅骨骨基质增生,胶原纤维堆积,排列紊乱,甚至断裂。成骨细胞异常增生。粗面内质网扩张,部分线粒体嵴断裂或消失,核出现凋亡特征。饮水中氟化钠浓度为150mgL,对成骨细胞OB的细胞周期和细胞凋亡均有影响,使S期细胞数增多,G2M期细胞减少;凋亡细胞百分率明显增多。结论过多的氟化物可以通过胎盘屏障直接作用于仔鼠颅骨成骨细胞,引起成骨细胞结构、细胞周期的改变,并可致细胞凋亡。     

甲基丙烯酸环氧丙酯对人支气管上皮细胞周期及凋亡影响的研究

目的探讨甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)对人支气管上皮细胞周期及凋亡的影响。方法人支气管上皮细胞(16HBE)经1~16μg/ml剂量的GMA染毒不同次数后,应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡率的改变,同时测定细胞分裂指数(MI)。结果经1次染毒处理后,随着染毒剂量的增加,G0/G1期细胞显著减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞显著增加,凋亡细胞数增多,细胞分裂指数下降;随着染毒次数的增加,各剂量组细胞周期均明显阻滞于G0/G1期,但高剂量组细胞仍表现出S期和G2/M期增多现象;经3次染毒后,高剂量组细胞出现凋亡率下降、分裂指数升高现象。结论经GMA染毒处理后,16HBE细胞周期由G0/G1期向S期和G2/M期移动而呈现增殖性改变。     

胡萝卜素降解物体外对小鼠H_(22)肝癌细胞的抑制作用

目的以胡萝卜素降解物为对象,探讨其在体外对小鼠H22肝癌细胞的抑制作用。方法采用MTT法测定肿瘤细胞增殖抑制作用、HE染色观察细胞形态结构、PI/Hoechst双染检测细胞凋亡、Annexin-V-FITC/PI定量分析细胞凋亡率和流式细胞术检测细胞周期变化。结果在200 g/ml质量浓度下培养48h后,可使65.47%的H22细胞凋亡;流式结果显示胡萝卜素降解物主要将H22细胞阻滞在G0/G1期。结论胡萝卜素降解物在体外对H22细胞有抑制作用。[营养学报,2013,35(2):162-166]     

雷帕霉素抑制人前列腺癌细胞PC-3生长及转移的实验研究

目的观察雷帕霉素（RPM）对人前列腺癌细胞PC-3生长、周期、凋亡及转移的影响,探讨RPM抑制前列腺癌细胞生长、转移的可能机制及临床应用前景。方法体外培养前列腺癌PC-3细胞,用不同浓度的RPM（10、25ng／m1）干预PC-3细胞。采用MTT法检测RPM对于PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测PC-3细胞周期及凋亡的变化;动物体内荷瘤实验检测对PC-3侵袭转移的影响。结果RPM能显著抑制PC-3细胞生长增殖,且呈时间和浓度依赖性,在25ng／36h时抑．ml36h制率达到（42．23±0．78）％,差异有统计学意义（P〈0．05）;流式细胞分析显示RPM能显著抑制细胞周期,使Go／G,期细胞增多（P〈0．05）,在25ng／ml、36h时Go／G1期细胞达到（92．17±0．69）％,并促进肿瘤细胞的早期凋亡（P〈0．05）,在25ng／ml、36h时凋亡率达到（28．75±1.31）％;动物体内荷瘤实验较对照组差别明显,对照组肿瘤重量与转移比率明显高于RPM组[（3．41±0．28）gVS（1．19±0．23）g,100％（7／7）vs 14．29％（1／7）,P〈0．05],肿瘤增长和转移被显著抑制。结论RPM明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长及迁移,以RPM为基础的前列腺癌治疗方案可能在临床中具有良好的应用前景。     

他莫昔芬诱导体内外雌激素受体阳性乳腺癌细胞凋亡的周期特异性研究

目的研究他莫昔芬(TAM)诱导不同生长状态下雌激素受体阳性(ER( ))乳腺癌细胞凋亡的周期特异性并比较其差异。方法体外培养的ER( )乳腺癌细胞株MCF-7细胞株和原代培养的。ER( )乳腺癌细胞用TAM作用后，在流式细胞仪(FCM)上用亚G1峰(sub—G1)法检测细胞凋亡率，用细胞周期特异性细胞凋亡检测法(API)检测细胞凋亡的周期特异性。结果TAM诱导不同生长状态的ER( )乳腺癌细胞凋亡均为G0／G1期发生的周期特异性细胞凋亡，但TAM在体外诱导的乳腺癌细胞凋亡率高于在体乳腺癌细胞。结论在ER( )乳腺癌细胞中TAM在G0／G1期特异性诱导细胞凋亡，但在不同的生长状态下，TAM诱导细胞凋亡的效率不同。     

米非司酮对子宫内膜癌细胞增殖抑制的研究

目的:探讨孕激素拮抗剂米非司酮对患者子宫内膜癌细胞凋亡、周期及孕激素受体(PR)亚型的影响。方法:患者在米非司酮治疗前及治疗后分别留取标本60例,用流式细胞仪检测组织细胞凋亡率和周期时相的变化,用实时定量PCR检测PR-A mRNA和PR-B mRNA的表达情况。结果:患者经过米非司酮治疗后,癌细胞凋亡率和G0/G1比率升高,S期比率下降,RR-B mRNA表达显著下降,PR-B与PR-A的比例明显降低。结论:米非司酮下调PR-B的表达,使癌细胞阻滞于G1期,促进癌细胞凋亡,抑制子宫内膜癌肿瘤细胞的生长。     

双歧杆菌WPG对肝癌H22细胞的抑制作用研究

目的研究双歧杆菌完整肽聚糖（WPG）对小鼠肝癌细胞株H22的影响。方法采用MTT法检测双歧杆菌WPG对肝癌细胞株H22、人肝脏上皮细胞株的杀伤作用;观察WPG对荷瘤小鼠生存期的影响、抑瘤率及淋巴细胞转化率;对WPG作用后的肝癌细胞株H22进行形态学观察。结果双歧杆菌WPG在体外对肝癌细胞株H22具有显著的选择性杀伤作用;小鼠体内注射WPG明显抑制小鼠肝癌H22细胞的生长,提高淋巴细胞转化率;WPG作用后的H22细胞在透射电镜下凋亡现象明显。结论双歧杆菌的WPG对肝癌细胞株H22具有抑制作用。     

大豆甙元对小鼠肝癌H22瘤细胞生长抑制作用

目的探讨大豆甙元(daidzein)诱导H22肿瘤细胞凋亡的作用及机制。方法用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测不同剂量大豆甙元(0.1～150.0μmol/L)对H22细胞增殖的影响;昆明雄性小鼠60只,随机分为6组,每组10只,腹腔注射给药,分别为模型组、对照组(不含血清的RPMI 1640培养液),低、中、高剂量大豆甙元组(大豆甙元分别为501、00、200 mg/kg),阳性对照组(环磷酰胺30 mg/kg);给药14 d后比较各组小鼠体重、脾脏指数、胸腺指数及瘤重;采用western blot检测bax、bcl-2的蛋白表达。结果 MTT检测结果显示大豆甙元对H22细胞有抑制作用,150μmol/L大豆甙元作用72 h,抑制率达30.3%,与低剂量组比较有明显抑制作用(P<0.05);大豆甙元能使Bax表达上调,Bcl-2表达下调,与对照组比较,10.0μmol/L大豆甙元组bax表达灰度值增加50.05%,凋亡抑制基因bcl-2表达减少52.62%;中、高剂量大豆甙元组小鼠胸腺指数和脾脏指数均明显升高(P<0.01),与模型组比较,大豆甙元各组瘤重指数下降明显(P<0.01)。结论大豆甙元对小鼠肝癌H22细胞的生长具有明显抑制作用,可诱导H22细胞凋亡,并在一定程度上抑制小鼠移植性肿瘤的生长,增强宿主免疫功能。     

FTY720对人乳腺癌MCF-7细胞、喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的:探讨FTY720抑制人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖作用。方法:将人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞用不同浓度FTY720作用48 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡率的影响。结果:MTT结果显示,FTY720对乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖均有抑制作用,而且对喉癌Hep-2细胞抑制作用的浓度依赖性高于对乳腺癌细胞的作用;流式细胞术检测结果显示,FTY720可将乳腺癌MCF-7细胞阻滞于G1期,将喉癌Hep-2细胞阻滞于G2/M期,并明显促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论:一定浓度的FTY720能明显抑制体外培养的乳腺癌和喉癌细胞增殖,调节其细胞周期,诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

人参皂苷Rh2联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2联合顺铂对于人卵巢癌细胞株SKOV-3的影响。方法:采用MTT比色法检测人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3细胞株增殖的影响,利用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况,并计算细胞平均凋亡率,利用Western-blot技术观察SKOV-3细胞内HER-2蛋白的表达。结果:①Rh2与DDP联合应用分别作用于SKOV-3卵巢癌细胞株,单独应用DDP 350μmol/L和600μmol/L IC50降为DDP 250μmol/L和300μmol/L。②流式细胞术检测显示,DDP+Rh2组凋亡率在SKOV-3细胞系中为32.2%,SKOV-3细胞被阻止于G1期,在SKOV-3 DDP细胞中为12.5%,均显著高于仅应用DDP组细胞(P<0.05),SKOV-3 DDP细胞亦被阻止于G1期。③Western blotting结果显示,SKOV-3细胞中DDP+Rh2组HER-2蛋白表达较对照组、DDP组、Rh2组显著降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3卵巢癌细胞株有促凋亡作用,并改善卵巢癌细胞株SKOV-3 DDP对DDP的敏感性。     

人生长激素对结肠癌细胞株细胞周期动力学的影响

目的：了解人生长激素（ｈＧＨ）对于结肠癌细胞有无促增殖和分化作用。方法：取对数生长期的人结肠癌细胞株ＬＯＶＯ,以顺铂和（或）不同浓度的ｈＧＨ体外培养,２４ｈ后以流式细胞增殖周期及细胞凋亡等指标。结果：同时加顺铂和ｈＧＨ培养细胞,癌细胞群在Ｇ２－Ｍ期发生阻滞,细胞凋亡率增加,Ｓ期细胞数率非常显著地降低;加ｈＧＨ１００ｎｇ／ｍｌ组Ｇ０－Ｇ１期九率降低,Ｓ期百分率增高。结论：ＬＯＶＯ细胞表面可能有ｈＧＨ