用间接免疫荧光法检测大鼠的抗泰泽氏菌抗体

用大鼠来源的泰泽氏菌芽孢RJ株经口服感染3周龄Wistar系大鼠,获得该菌抗原和抗血清,建立了检测泰泽氏病的免疫荧光法,并证实该法具有特异性。用该法检测不同饲养环境中的大鼠,结果:饲养在隔离器内的SPF级大鼠的抗体阳性率为0(0/28),饲养在开放系统内的普通级大鼠的抗体阳性率为40.9％(36/88),而饲养在同一开放系统内的普通级小鼠的阳性率仅为3％。这种差异是否反映了不同种类动物来源的菌株具有不同的抗原性,尚待进一步研究。     

间接免疫荧光法检验抗ds-DNA抗体方法

ＡＮＡ泛指抗各种核成分抗体 ,无器官和种属特异性 ,血清滴度≥ 1∶80可作为诊断ＳＬＥ标准之一。而ＡＮＡ中的抗ｄｓ-ＤＮＡ抗体具有特征性 ,是诊断ＳＬＥ、监测其活动和判断预后的重要指标。本文报告我室的检测方法如下。1　实验材料① 0 .0 1ｍｏｌ/ＬｐＨ 7.2～ 7.4磷酸盐缓冲液 (ＰＢＳ) ;②0 .1ｍｏｌ/Ｌ磷酸盐缓冲甘油 ;③小白鼠 (昆明种ＫＭ ) ;④ 0 .1Ｎ盐酸 ;⑤ＧＡＨ -ＩｇＧ -ＦＩＴＣ应用液用ＰＢＳ 1∶5 0 0稀释 ;⑥荧光显微镜。2　抗原片制备①取小白鼠直接断颈放血杀死 ,取出肝脏 ,去胆囊。用ＰＢＳ冲去肝表面的血等杂物 ,…     

间接免疫荧光法检测抗核抗体的临床应用

抗核抗体(ANA)是自身免疫病检测的主要项目之一,主要存在于IgG中。临床上用免疫光法检测抗核抗体报道很多,文献提示它是一个很敏感的试验,尤其是系统性红斑狼疮(SLE)阳性率最高。为了观察该方法在热带地区一海南岛的敏感性及临床应用价值,现报道97例阳性患者的临床疾     

抗核抗体间接免疫荧光法检测试剂的比对分析

目的 通过AESKU试剂和欧蒙试剂对164例抗核抗体核型结果的比对分析,评价AESKU试剂间接免疫荧光法抗核抗体检测试剂的性能.方法 从2015年1~12月广东省中医院门诊及住院患者中选取164例样本,分为AID患者组(n=115)和健康对照组(n=49),同时采用AESKU试剂与欧蒙试剂对抗核抗体核型进行双盲、平行检测,不一致结果采用第三方试剂复核.计算两种试剂的阳性符合率、阴性符合率、总符合率、Kappa系数,并进行Kappa一致性检验和配对χ2检验.结果 AESKU试剂与欧蒙试剂的总体阳性符合率为94.78%,阴性符合率为93.88%,总符合率为94.51%;Kappa=0.871,P<0.05,两种试剂的检测结果高度一致,差异无统计学意义(P>0.05).结论 AESKU试剂与欧蒙试剂具有等效性和很高的符合率,操作简便快速、结果清晰易读,适合临床广泛应用.     

4种自身抗体对间接免疫荧光法检测抗中性粒细胞胞质抗体的影响

目的:观察抗核抗体、抗线粒体抗体、抗高尔基体抗体和抗核糖体P蛋白抗体对间接免疫荧光(IIF)法检测抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)结果的影响. 方法:用IIF法检测4种自身抗体阳性血清可能出现的ANCA荧光图谱;用ELISA法确认上述4种血清的靶抗原. 结果:用乙醇固定的中性粒细胞检测ANCA受自身抗体的影响较大,甲醛固定的中性粒细胞受到的影响较小,同时应用猴肝切片可将这4种自身抗体与ANCA区别. 结论:联合应用猴肝切片与乙醇和甲醛固定的中性粒细胞抗原片,有助于准确判断ANCA结果.     

抗精子抗体的间接免疫荧光测定

本文探索了间接免疫荧光技术检测抗精子抗体的有关问题。输精管结扎术后抗精子抗体的测定,应选择附睾精子作抗原,其最适保存条件是将精子悬液置于-20℃,或用乙醇固定后保存于4℃冰箱中,乙醇固定不仅可增强精子抗原性的显示,而且对其抗原性具有保护作用。本方法所用的附睾精子抗原不须进行其他处理;用精子抗原免疫异种动物,抗精子抗体产生早,效价高,而免疫同种动物则抗原性极弱;抗精子抗体的特异性免疫荧光类型以顶体特异性荧光染色为主,根据不同稀释倍数的待测血清所显示的荧光强度,可判断血清抗精子抗体的效价。     

间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的临床意义分析

目的探讨间接免疫荧光法（IIF）筛查抗核抗体与特异性自身抗体检测的临床意义和应用。方法收集389例疑似自身免疫病（AID）患者血清,分别采用IIF、免疫斑点法（IDT）和免疫印迹法（IBT）进行检测分析。结果IIF检测阳性率为89．5％,IBT阳性率为85．1％,两者阳性符合率为81．7％。检测结果显示,IBT的灵敏度为91．4％（318／348）,特异度为68．3％（28／41）,误诊率为31．7％（13／41）,漏诊率为8．6％（30／348）。IDT和IBT检测5项的阳性率分别为69．7％和71．5％。结论IIF检测可用于初筛,其滴度的变化可提示疗效;IDT检测五项特异性自身抗体,快捷经济;IBT检测13项特异性自身抗体,可有效减少漏诊。三种方法联合检测可减少误差。     

间接免疫荧光法及蛋白质印迹法对肺癌患者体内自身抗体的分析

目的：了解肺癌患者血清自身抗体阳性率、细胞内定位及荧光图形特点,探索自身抗体作为肿瘤樗物的可能性。方法：应用间接免疫荧光法（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｓｅｅｎｅｅ,ＩＩＦ）检测７７份肺癌以及１４０份不同年龄段正常人血清中自身抗体。提取人喉癌上皮细胞（Ｈｅｐ－２）蛋白抗原,采用蛋白质印迹法对８１份肺癌患者及５２份正常人血清进行分析。结果：肺癌组和对照组的自身抗体阳性率有显著差别,两     

采用间接免疫荧光法监测流行性出血热疫苗接种3年后的人群抗体水平

目的：研究接种疫苗３年后人群抗体水平及间接免疫荧光抗体检测方法在流行性出血热免疫抗体检测中的应用。方法：采用间接免疫荧光法测定特异性ＩｇＧ抗体,并对２６６例血清样本进行分析。结果：全程接种与未加得抗体阳性率分别为７０．６３％,５９．７９％,并拍摄到抗原抗体免疫荧光结合物。结论：全程接种疫苗３年后人群抗体保持较高水平,加强接种后免疫效果更佳。     

酶免疫法和间接免疫荧光法检测抗精子抗体方法的比较

血清抗精子抗体（AsAb）阳性已被列为人类免疫性不育的确定指标之一。在原因不明的不孕症妇女中，约有30％在血清中检测到AsAb-20。目前检测AsAb方法较多，国内多数实验室采用酶联免疫吸附试验（ELISA），部分实验室采用间接免疫荧光法（ⅡF）。为了解不同方法检测AsAb的可比性及符合率，探讨影响AsAb检测准确性的因素。我们用上述两种方法检测94例不孕症患者血清，并将结果进行了比较。     

间接免疫荧光法(IFL)测抗伤寒、副伤寒沙门菌IgM抗体

目的 从敏感性、特异性、早期和快速检测的角度探讨新的伤寒和副伤寒的实验诊断方法，以提高伤寒及副伤寒的实验室诊断水平。方法 用间接免疫荧光法和肥达试验检测85例经血培养确诊的伤寒或副伤寒患者、20例献血员及65例非伤寒副伤寒发热病人血清伤寒及副伤寒IgM抗体，对检测结果进行统计学分析和处理。结果 IFL检测85例伤寒或副伤寒患者血清IgM抗体，79例阳性，阳性率92.9%，病程6d以内，阳性率为90%；肥达试验检测同样病例，47例阳性，阳性率55.3%，病程6d以内阳性率46.7%，两种方法的检测结果具有显著性差异（P〈0.01）。对献血员和其他发热病人检测，两种方法的阳性率均在2%以下，二者没有差异。结论 检测抗伤寒和副伤寒沙门菌IgM抗体，免疫荧光法比肥达试验的灵敏度更高，免疫荧光法比肥达试验更具早期和快速检出的特点。     

海龙蛋白质提取物诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的机制

目的 研究海龙蛋白质提取物对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的诱导作用.方法 采用MTT法检测蛋白质提取物对细胞生长的抑制情况,采用Annexin WPI流式细胞分析法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、P53的表达.结果 不同浓度海龙蛋白质提取物对Hela细胞的增殖有抑制作用,具有时间和浓度依赖性.Annexin V/PI流式细胞分析显示,加药组早期凋亡率分别为29.18±0.65、39.32±0.78、51.21±1.13、61.56±1.09,与对照组（9.82±0.18）差异有统计学意义（P＜0.05）;晚期凋亡率加药组分别为3.20±0.03、7.48±0.06、11.11±0.07、14.60±0.03,与对照组（1.12±0.09）差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot检测发现随着蛋白质提取物浓度的升高,Bax、P53蛋白的表达逐渐升高,Bcl-2蛋白的表达逐渐降低.结论 海龙蛋白质提取物在一定浓度范围内可在体外抑制Hela细胞增殖并诱导其凋亡,且随蛋白质提取液浓度的升高,凋亡率显著增加,可能的机制是增强促凋亡蛋白Bax、P53的表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.     

培养人视网膜色素上皮细胞的免疫细胞化学特征

目的：观察体外培养人视网膜色素上皮细胞（ＲＰＥ）免疫组化特征．方法：取第１代、第３￣６代ＲＰＥ,以间接免疫荧光方法比较角蛋白、波形蛋白、肌动蛋白、ＶⅢ因子和ＧＦＡＰ,ＨＡＭ４５等６种蛋白表达的特征．结果：与对照组相比,传代培养的人ＲＰＥ角蛋白、波形蛋白表达呈阳性;随传代次数增多,角蛋白表达强度无明显变化,波形蛋白表达逐渐增强;肌动蛋白、ＶⅢ因子、神经纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）、ＨＭＢ４５呈阴性．结论     

皮内试验和间接荧光抗体试验诊断并殖吸虫病的初步研究

应用并殖吸虫成虫可溶性抗原对8例并殖吸虫病患者进行皮内试验,其中7例为阳性反应。应用并殖吸虫成虫冰冻切片间接荧光抗体试验(IFAT),对并殖吸虫病、其它寄生虫病及非流行区正常人血清进行检测井殖吸虫抗体,结果:8份该病患者血清IFAT均为阳性反应,囊虫病患者血清7份及脑脊液2份,蛔虫病、丝虫病、华枝睾吸虫病患者血清各2份,非流行区正常人血清16份,IFAT均为阴性反应;旋毛虫病患者血清15份中,14份IFAT呈阴性反应,另一份IFAT为弱阳性反应。     

116例类风湿性关节炎联合检测4种自身抗体的结果分析

目的　探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、抗RA54抗体、抗Sa抗体和类风湿因子(RF)联合检测对类风湿性关节炎(RA)的诊断意义。方法　用ELISA法检测抗 CCP抗体,免疫印迹法检测抗 RA54 抗体、抗 Sa 抗体,免疫比浊法检测 RF。结果　抗CCP、抗RA54、抗Sa抗体和 RF对RA诊断的特异性和敏感性分别是95.5%(63/66)和41.4%(55/116),90.9%(60/66)和30.2%(35/116),93.9%(62/66)和36.2%(42/116),80.3%(53/66)和 49.1%(57/116)。在 59例 RF阴性 RA患者中,16 例(27.1%)抗CCP抗体阳性,14例(23.7%)抗RA54抗体阳性,19例(32.2%)抗Sa抗体阳性。4种抗体中任何两种抗体同时阳性的诊断特异性和敏感性分别是98.5%(65/66)和46.6%(54/116)。而当3种或 3种以上抗体阳性时,特异性可达 100%(66/66)。结论　4 种抗体联合检测可显著提高对RA的诊断特异性,有助于早期RA的诊断和治疗。     

类风湿性关节炎患者血清免疫球蛋白和自身抗体水平的检测与分析

目的测定类风湿性关节炎(RA)患者血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和自身抗体(ANA、抗ds-DNA、抗ENA)水平,并探讨两者与RA及两者之间的关系。方法应用速率散射比浊法、间接免疫荧光法和免疫印迹法等对40例初诊RA患者和30例正常人血清IgG、IgM、IgA和类风湿因子(RF)及自身抗体水平进行检测。用t检验和字2检验分析这些自身抗体与Ig水平的关系。结果RA患者血清IgA、IgG、IgM水平升高,与正常人相比存在显著性差异(P<0.05)。40例患者中有26例检出1种或多种自身抗体或RF,其中以RF检出率最高,为8例。患者中自身抗体或RF阳性组IgA水平高于阴性组(P<0.01);IgA水平高于正常参考范围上限组自身抗体阳性率(83.3%,15/18)高于IgA水平在正常参考范围以内组(50%,11/22;P<0.05)。结论RA患者血清免疫球蛋白升高与自身抗体阳性关系密切,血清IgA水平升高者自身抗体阳性率明显高于IgA水平在参考范围以内者。     

IBP促进人涎腺腺样囊性癌细胞对紫杉醇耐药

目的探讨IBP对SACC细胞抗紫杉醇凋亡能力的影响及其机制。方法将ACC2转染IBP组和空白对照组各自根据不同紫杉醇浓度分成5组,紫杉醇作用72 h后,MTT法检测在紫杉醇作用下IBP对SACC细胞增殖的影响;通过微管蛋白Tubulin免疫荧光染色,观察紫杉醇作用前后ACC2细胞微管的变化及IBP与微管的关系。结果 IBP使ACC2细胞对紫杉醇产生一定程度的耐药,在5μg/ml的紫杉醇浓度下最为明显;紫杉醇开始作用后,ACC2-C1细胞的微管点状聚集成团,而ACC2-C1/IBP细胞的微管则出现明显的紊乱、断裂,IBP能促进微管的解聚;IBP所发的绿色荧光与微管的红色荧光糅合在一起呈黄色,IBP与微管存在一定程度的共定位。结论 IBP促进SACC细胞对紫杉醇耐药。     

高尔基体蛋白73单克隆抗体的制备和鉴定

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)鼠源单克隆抗体的制备方法并进行鉴定。方法用GP73重组抗原蛋白免疫5只小鼠获得血清抗体,免疫小鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过筛选后选择GP73抗体阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养,通过腹水制备获得高特异性和高效价的GP73单克隆抗体(单抗)。结果成功筛选出11株能稳定分泌特异性GP73单抗的杂交瘤细胞株,经多次复苏传代仍能稳定分泌特异性强、效价高的抗体。11株单抗均能结合天然状态下的GP73蛋白,与无关蛋白均无交叉反应,提示有较强的特异性。应用筛选出的配对GP73单抗可检测出浓度为1ng/ml的GP73基因工程表达抗原。结论制备的GP73杂交瘤细胞株分泌的抗体对GP73蛋白具有特异亲和性,并且有较高效价,为GP73蛋白诊断试剂的研制提供了关键技术基础。     

间接免疫荧光法和原位杂交法检测急性白血病中Bcl-2和Bcl-2/Bax表达的对比研究

目的:比较两种不同方法检测急性白血病(AL)患者Bcl-2和Bcl-2/Bax表达情况。方法:采用链亲和索-胶体金原位杂交法(ISH-SAG)和间接免疫荧光法对57例AL患者的Bcl-2和Bcl-2/Bax进行检测。结果:(1)ISH-SAG法中,完全缓解(CR)组Bcl-2细胞表达率高于间接免疫荧光法,且差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Bel-2及Bcl-2/Bax检测均显示ISH-SAG法的特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比优于间接免疫荧光法;Bcl-2/Bax检测也显示ISH-SAG法较间接免疫荧光法高。(3)ISH-SAG法中Bcl-2细胞表达率和积分值的阳性检出率无差别。结论:(1)ISH-SAG法测定Bcl-2及Bel-2/Bax优于间接免疫荧光法。(2)ISH-SAG法中Bcl-2积分值临床应用价值不大。