聚丙烯酰胺凝胶电泳应用于珠蛋白肽链的分析

聚丙烯酰胺凝胶电泳具有分辨力高、灵敏等特点,广泛应用于各种生物大分子的分析,成为强有力的实验手段。血红蛋白的珠蛋白肽链分析一般有:1.羧甲基纤维素柱层析法,2.以巯基乙醇—尿素为解离剂和以对氯汞苯甲酸为解离剂的电泳分析法。但有的操作繁杂。费时,有的分辨力低,不能分离HbF的~Gγ和~Aγ链。Rovera等结合巯基乙醇—尿素解离和含Triton X-100的酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳,除可分析α链和β链外,~Gγ链和~Aγ链也可分开。Alter等利用此法进行了~Gγ和~Aγ比率的测定和肽链合成的研究,并应用于产前诊断β地中海贫血和α地中海贫血纯合子,有快速、简便、取样量比层析法少几百倍等优点。我们基本上采用Alter法,略加变动,在鉴别β~+和β°地中海贫血方面结果明确,可以纠     

测定新生儿脐血β与γ珠蛋白肽链比值筛查新生儿β地中海贫血的探讨

测定新生儿脐血β与γ珠蛋白肽链比值筛查新生儿β地中海贫血的探讨梁昌达（江西省儿童医院血液科南昌３３０００６）鉴于国内外尚未报道新生儿β地中海贫血（β地贫）的筛查方法。本文探讨测定新生儿脐血β与γ珠蛋白肽链比值（β／γ比值）的方法来筛查新生儿β地贫。１...     

血红蛋白G Coushatta一例报告

本文报道在普查中发现的一例已遗传三代的异常血红蛋白患者,无任何临床表现。该血红蛋白在碱性电泳中位于HbS的位置:在酸性电泳中速度较HbA为慢;肽链解离、电泳和层析解离均示β链异常;指纹图示βT_pⅢ肽斑消失,而在βT_pV肽斑左下方出现一个新肽斑。经氨基酸自动H     

广西京族中血红蛋白E复合β—地中海贫血一例报告

HbE 是发现较早的一种异常 Hb,梁氏等1980年第一次经化学结构分析确证为HbE,以前根据 Hb 电泳速度或部分作了肽链解离电泳,均未作化学结构分析。本文用高压电泳(指纹图谱)和肽段氨基酸组成分析和抗碱 Hb 测定确证为 HbE 复合地中海贫血双重杂合子,此为我国少数民族中第一例。临床资料先证者,陈××,男,12岁,京族,广西防城各族自治县人。皮肤、结膜略苍白,     

成都地区发现的异常血红蛋白

1978～81年,作者对成都地区的机关干部和中小学生6479人进行了血红蛋白病的普查,发现了几种异常血红蛋白(Hb)并进行了化学结构分析,现报道如下. 方法先取末梢血,用简快Hb电泳法(1)筛选,有异常Hb区带者进行体检和家族调查,并取静脉血作血红蛋白测定和红细胞形态观察,Hb的醋酸纤维素薄膜和淀粉胶电泳,HbA_2和异常Hb定量,抗硷Hb测定,不稳定性试验(异丙醇试验、热变性试验、变性珠蛋白小体检查),Hb溶解度测定及异常Hb肽链分析(8M尿素解离和醋纤膜肽链电泳法):然后作异常Hb的化学结构分析,即先将Hb溶液制成珠蛋白干粉,经CM—22纤维素柱     

球蛋白链解离分析法观测近交系小鼠遗传特征

目前广用于近交系小鼠遗传质量监测的生化标记基因法,实际上是一种蛋白质或酶类的电泳分析法,是以蛋白质的带电性和颗粒大小为根据来分析推测基因变化的方法。这种方法对于带相同质量电荷的变异蛋白通常很难区分,不仅不够精确,甚至可能得到与实际相反的结论。要获得精确可靠的结果,常常需要进行结构分析。为适应生物医学对实验动物质量的需求,本文报告一种用以观测近交系小鼠遗传特征的简单、快速的珠蛋白解链分析法(下简称“解链分析法”)它是一种以脲解链,以巯基乙醇维持链的解离状态的血红蛋白珠蛋白醋酸纤维素薄膜电泳分离方法。在相同电泳条件下,不同珠蛋白链都各具特征性迁移率,从而可对品系遗传特征,做粗视结构的比较观察。依肽链电泳,可将在电泳谱上相似的各种血红蛋白区别     

HbQ Thailand家系及其一级结构分析

本文报道在浙江杭州地区发现的异常血红蛋白病一个家系。用醋酸纤维薄膜电泳从先证者血液中分离出一种向阳极泳动的慢速异常区带,经肽链解离电泳显示为α链变异。通过异常肽链的CM-52纤维素柱层析分离、胰蛋白酶酶解、指纹图谱分析及氨基酸固相顺序测定,证实为HbQ Thailand[α74(EF3)ASP→His]。     

~(60)Coγ射线对人外周血淋巴细胞电泳的影响

本文探讨~(60)CO_γ射线(0.5-8.0Gy)对人外周血淋巴细胞电泳的影响.结果表明:淋巴细胞电泳迁移率下降与~(60)CO_γ射线的剂量呈线性负相关,其直线回归方程为 Y=1.014-0.00035X在此剂量范围内淋巴细胞电泳迁移率的下降是可逆的.     

遗传性胎儿血红蛋白持续存在兼β地中海贫血的血红蛋白研究

来院诊治的2位女青年系姐妹,自幼患中度贫血症。血红蛋白定量表明:抗碱血红蛋白及HbA_2明显升高,HbA显著降低,诊断为胎儿血红蛋白的持续存在兼β地中海贫血。该症在我国尚未见报道,特提出报告,引起讨论。为了确证患者的抗碱Hb系胎儿Hb(HbF),作了Hb杂交及解链电泳。对照结果,患者抗碱Hb电泳区带与脐带血HbF迁移位置相同;解链电泳比较:脐带血HbF解链后的α、γ链的迁移位置与抗碱Hb两条肽链的位置相同。杂交实验也显示同样的结果。从而进一步证明患者的抗碱血红蛋白与脐带血HbF的一致性。本文对Clegg等人所报道的HPFH兼β地中海贫血的研究作了初步的比较讨论,也对HPFH的研究概况,如结构分析、遗传学研究等方面作了探讨。     

北方汉族中发现一例标准型α地中海贫血

我们在1987年对包头钢铁公司职工医院新生儿脐带血做异常血红蛋白检查时,发现一例快泳异常血红蛋白,经理化性质测定和肽链解离实验证明,其为HbBart’s含量为9.1％,并据此及与其母的遗传关系,确定为标准型α地中海贫血。1 材料和方法血液学检查结果由包医附院检验科提供。溶血液制备用四氯化碳法。PH8.6TEB缓冲液醋纤膜电泳同参考文献。血红蛋血含量测定用分光光度法。酸性琼脂电泳同Vella法。HbH包涵体实验同参考文献。热不稳定实验同参考文献。异丙醇实验用Carrel法。肽链解离实验同参考文献。     

地中海贫血患者珠蛋白基因mRNA和肽链水平的检测及其相关性分析

目的 研究β地中海贫血（简称地贫）患者外周血中α,β,γ珠蛋白基因ｍＲＮＡ和肽链的相对含量,为进一步研究珠蛋白基因表达的调控提供基础。方法 应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ和血红蛋白电泳,以α珠蛋白基因ｍＲＮＡ和α珠蛋白连为内对照,检测了正常人和β地贫患者外周血中β和γ珠蛋白基因和肽链的相对含量。结果 β地贫患者外周血中β珠蛋白基因ｍＲＮＡ和β珠蛋白肽链都有不同程度的减少和γ珠蛋白基因产物代偿性增高,同时两     

尿γ—谷氨酰转肽酶及其同功酶在诊断肾脏疾病中的价值

γ—谷氨酰转肽酶(r—glutamyl tran-speptidase)是一种分子量约为20万以上的细胞分泌酶,此酶由细胞微粒体合成后位于具有高度分泌或吸收功能的细胞膜上,属糖蛋白,主要存在于肾、胰、肝等组织中,但以肾脏组织中含量最高;在肾脏主要分布在近曲肾小管上皮细胞刷状缘及部份享氏袢,不存在于肾小球和集合管。尿中γ—GT 来源于肾脏的近曲小管上皮细胞,正常有溶解型(分子量低,占总酶活性的2/3)及结合微粒体膜(分子量在20万以上,占总酶活性的1/3)两种同功酶。前者电泳移动快,位于电泳带β—γ带之间为γ—GT_4,后者位于原位称之γ—GT_5,血中γ—GT 来源于肾脏,其电泳可有两个区带:     

血红蛋白分析技术Ⅴ:肽链解离试验

血红蛋白分子在对汞苯甲酸(PMB)或对氯化汞苯甲酸(PCMB)的作用下,容易解离为肽链(亚单位),由此可以分离和鉴定血红蛋白的各种肽链,研究它的理化特性。这两种肽链解离作用原理相同,但操作方法各异,现已成为鉴定异常血红蛋白病和研究血红蛋白亚单位的重要方法。本文分别介绍经改进的这两种技术,并对操作要点进行讨论分析。     

血红蛋白肽链的层析解离法

临床上对原因不明的贫血或某些呈特殊症状的患者(例如原因不明的先天性青紫)有必要进行血红蛋白的分析,以明确诊断。鉴定血红蛋白是否异常,应先通过一系列的常规操作,其中包括异丙醇试验、在不同pH缓冲液内进行电泳、吸收光谱测定和其他特殊的试验项目等,检验其理化性质。一旦发现异常血红蛋白,则须进一步作肽链解离,以初步肯定异常的存在。本文报道应用羧甲基纤维素(简称CMC)层析法,解离正常的和异常的血红蛋白,并对所得的结果作一初步分析。     

生后大鼠下丘GABA_A受体β2和γ2亚单位的表达

目的研究大鼠发育期下丘GABAARβ2和γ2亚单位的表达规律。方法选用生后P1到P16天的正常大鼠,将下丘组织提取的GABAARβ2和γ2亚单位mRNA用RT-PCR半定量,原位杂交方法定位和定性。将引物与内参GAPDH一起进行PCR,产物的电泳结果在紫外分析系统下进行灰度分析比较。用非放射性寡核苷酸探针进行原位杂交。结果GABAARβ2和γ2亚单位在生后正常大鼠下丘内表达的总体趋势是非线性增加的,P7表达最低,P13为高峰,P16下降到与成年时的水平相当。差异有统计学意义(P<0.01)。下丘GABAARβ2和γ2亚单位的表达模式相似。结论GABAAR两种亚单位在生后大鼠下丘的表达是阶段性和波动性的。两种亚单位在下丘内同步表达。     

宁夏回族人民血红蛋白病和葡萄糖—6—磷酸脱氢酶缺乏症的调查研究

回族是我国少数民族中人口较多的民族,分布于我国各地,而以宁夏最为集中。为了弄清回族的血红蛋白病(Hb病)种类和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6PD)缺乏情况,我们选择了宁夏所有两个地区及两个市16个县市中的12个县市11个公社23所中小学7——19岁的回族青少年为对象。1、作耳垂血微量Hb醋酸纤维素薄膜电泳筛选,对发现有异常Hb区带或A_2增高者抽取静脉血作酸性电泳、淀粉胶电泳、Hb肽链解离试验等生化     

清蛋白与γ球蛋白在尿中的比值及其肾清除率测定的意义

尿蛋白电泳和血浆蛋白肾清除率的测定结果,对于肾脏疾病的诊断及预测激素等药物的疗效,均有一定的临床意义。本文采用蛋白质纸上电泳的方法,测定102例(265例次)成人慢性肾炎患者的尿清蛋白/γ球蛋白(下简称a/γ)比值与γ球蛋白清除率/清蛋白清除率(下简称Cγ/Ca)比值;分析了尿a/γ比值、Cγ/Ca比值和肾功能试验——内生肌酐清除率(C_(ογ)三者之间的关系。结果提示患者在肾功能受到损害时,尿a/γ比值明显降低,而Cγ/Ca比值明显增高。     

肝胆疾病中γ-谷氨酰转酞酶的检验分析

γ-谷氨酰转酞酶(γＧＴ),是氨基酸代谢过程中一个关键的酶,催化γ谷氨酰肽中的γ谷氨酰基向各种氨基酸、肽链的转移参与γ谷氨酰循环和谷胱甘肽的水解,在多数肝胆疾病中,γＧＴ均有不同程度的改变,尤其是在某些肝胆疾病的辅助诊断上有一定作用。因此,了解γＧＴ检验在肝胆疾病中作用,对某些疾病的辅助诊断有一定意义[1]。1　材料与方法11　试剂与仪器　γ谷氨酰转肽酶试剂盒:上海长征医学科学有限公司产品。可溶性底物法,底物为Ｌγ谷氨酰3羧基4硝基苯胺。日立737自动生化分析仪,日立公司出品。12　研究对象121　肝胆疾病　①急性肝炎:37例…     

脑出血患者血浆神经肽γ检测临床意义

目的　探讨脑出血时血浆神经肽γ(NPγ)的变化及其临床意义。方法　采用放射免疫分析法检测5 6例患者及 2 5例健康人血浆NPγ的含量。结果　脑出血患者血浆NPγ的含量升高 ,与对照组比较具有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;死亡者NPγ含量高于存活的患者 (P <0 .0 5 ) ;治疗后和恢复过程中患者血浆中NPγ逐渐下降至正常。结论　NPγ含量与脑出血的发病及病情变化密切相关 ,检测NPγ对脑出血的诊断、预防及指导治疗具有重要意义     

醋酸纤维素薄膜微量电泳在珠蛋白肽链分离中的应用

珠蛋白肽链解离试验是血红蛋白研究工作中的一项重要的分析技术。通常采用尿素巯基乙醇、对氯汞苯甲酸(PCMB)或对汞苯甲酸(PMB)解离珠蛋白肽链,前者用层离析法,后者用淀粉凝胶或琼脂凝胶电泳分离之。但以上方法比较繁琐、费时。近几年来,国外巳逐渐用醋酸纤维素膜,醋酸纤维素板代替之,效果较好。为适应大规模人群血红蛋白病普查的需要,我们采