蛋白激酶C对晚期运动预处理心肌保护效应中缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)与大鼠心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)在晚期运动预处理(LEP)心肌保护效应中的关系及相互影响。方法:48只SD大鼠分为对照组(C组)、力竭运动组(EE组)、晚期运动预处理组(LEP组)、白屈菜赤碱+晚期运动预处理组(CHE+LEP组)、晚期运动预处理+力竭运动组(LEP+EE组)和白屈菜赤碱+晚期运动预处理+力竭运动组(CHE+LEP+EE组),每组8只。在进行LEP或/和PKC特异性抑制剂CHE干预后运动至力竭,观察、检测心肌Cx43 m RNA和蛋白的分布情况及表达变化。结果:⑴各组Cx43 m RNA原位杂交信号未见明显差异,实时荧光定量PCR结果亦无显著差异。⑵CHE+LEP组Cx43免疫阳性表达较LEP组减弱,CHE+LEP+EE组Cx43免疫阳性表达较LEP+EE组减弱;CHE+LEP组Cx43蛋白表达较LEP组显著降低,CHE+LEP+EE组Cx43蛋白表达较LEP+EE组显著降低。结论:在晚期运动预处理心肌保护效应信号转导通路中,PKC是心肌Cx43的上游中介物质。     

心肌缝隙连接蛋白43在运动预处理不同保护时相表达变化的比较研究

目的:比较大鼠心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)mRNA和蛋白在运动预处理(EP)早、晚期保护时相的表达变化。方法:SD大鼠32只随分为对照组(C组)、力竭运动组(EE组)、早期运动预处理+力竭运动组(EEP+EE组)和晚期运动预处理+力竭运动组(LEP+EE组)。在建立EP和EE动物模型基础上,用原位杂交和实时荧光定量PCR方法观察和检测心肌Cx43 mRNA表达,用免疫组织化学和Western免疫印迹方法观察和检测心肌Cx43蛋白表达。结果:与EE组相比,EEP+EE和LEP+EE组心肌Cx43 mRNA和蛋白水平显著升高。与EEP+EE组相比,LEP+EE组心肌Cx43原位杂交信号没有显著变化,Cx43 mRNA表达也没有显著性差异。与EEP+EE组相比,LEP+EE组心肌Cx43免疫阳性反应无明显变化,Cx43蛋白表达也没有显著性差异。结论:运动预处理早、晚期保护时相分别促进了心肌Cx43 mRNA和蛋白的表达,但在这两个保护时相之间,Cx43 mRNA和蛋白的表达没有明显差异,表明心肌Cx43在介导运动预处理早、晚期心肌保护效应中的表达变化规律和运动预处理早、晚期保护时相的变化具有同步性。     

仿生电刺激在离体心肌诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化中的作用

目的 探讨仿生电刺激在离体心肌微环境下诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化中的作用.方法 采用改良方法分离培养大鼠MSCs及心肌细胞,并将两者按固定比例共同培养(称为MSCs/心肌细胞共培养体系),按是否给予仿生电刺激分为非电刺激组和电刺激组,刺激组每日给予频率0.5Hz、脉宽5ms、电压10V(电流强度20μA)的仿生电刺激2h,非电刺激组常规培养.每组又以实验干预培养时间(3、5、7d)分为3个亚组.分别于实验的第3、5、7天观察各组细胞生长情况,细胞免疫荧光方法检测各组MSCs细胞cTnT的表达情况,以及各组的cTnT阳性细胞率.结果 MSCs与心肌细胞共培养之后,电刺激组细胞较非电刺激组生长更为良好,且心肌波动频率高.实验第5天非电刺激组MsCs细胞尚无cTnT表达,而电刺激组有少数MSCs细胞出现cTnT表达.实验第7天非电刺激组和电刺激组MSCs均有cTnT表达,电刺激组MSCs细胞cTnT的阳性细胞率(20.98%±5.55%)明显高于非电刺激组(13.20%±3.98%.P<0.05).结论 仿生电刺激可促进离体心肌微环境诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化,使其更早出现心肌样细胞改变,并提高分化效率.     

5-氮杂胞苷诱导间充质干细胞分化为成肌细胞的实验研究

目的：探讨5－氮杂胞苷（5－Aza）诱导间充质干细胞（MSCs)分化为成肌细胞的相关机制。方法：分离纯化4－6周龄Balb/C小鼠骨髓MSCs，以不同浓度5－Aza作用，用四唑盐（MTT）法测定细胞生长活力；逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）鉴定肌形成调节因子5（Myf5)，成肌素（myogenin)表达，免疫组织化学染色鉴定结蛋白（desmin)，肌凝蛋白（myosin)表达；观察细胞形态变化。结果：1，3umol/L5－Aza对细胞增殖无明显影响，20umol/L 5-Aza对细胞有毒性作用，影响其增殖，10umol/L 5-Aza对细胞增殖无明显影响。20umol/L 5-Aza对细胞有毒性作用，影响其增殖，10umol/L5-Aza诱导后6h,MSCs表达Myf5,9h达最高；5umol/L 5-Aza诱导后9h，MSCs表达Myf5,12h达高峰。10umol/L 5-Aza诱导后24h，MSCs表达myogenin,48h达最高；5umol/L5-Aza诱导后6d，MSCs表达myogenin,且为高峰。10umol/L 5-Aza诱导后7d，部分细胞表达desmin;14d部分细胞表达myosin.10umol/L 5-Aza诱导后9d，部分细胞体明显增粗，14－16d后可见有肌管样细胞,出现。结论：5－Aza诱导MSCs向成肌细胞定向分化，可能是因其产生的去甲基化作用使MSCs中处于转录失活阶段的肌分化调控基因Myf5等得以表达，从而调控MSCs向肌细胞系定向分化并逐步表达myogenin，最后分化为肌管样细胞的过程。     

法舒地尔对人骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化的影响

 目的探讨HA-1077(fasudil,法舒地尔)对人骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为表皮细胞的影响.方法采用直接贴壁法培养并扩增人胚胎股骨骨髓干细胞,免疫细胞化学及流式细胞仪进行表面标志的检测.设对照组、诱导组、HA-1077诱导组1、HA-1077诱导组2,采用免疫细胞化学及流式细胞仪对各组细胞角质蛋白表达变化进行检测,观察其对MSCs分化为表皮细胞的影响.结果采用直接贴壁法可以获得大量高纯度的人骨髓MSCs,分组培养后第2天开始出现少量细胞角质蛋白阳性表达细胞,随着时间延长,阳性率逐渐提高.7天后流式细胞仪显示单纯诱导组及HA-1077诱导组CK5/8、CK10/13、CK19阳性率均远高于诱导组(P＜0.01).结论HA-1077可能通过抑制Rho-ROCK途径的激活从而促进MSCs体外培养中角蛋白表达的显著提升,Rho-ROCK途径可能在促进MSCs分化为表皮细胞过程中起着重要调控作用.     

心肌肌钙蛋白Ⅰ对心肌损伤的诊断价值

目的　探讨心肌肌钙蛋白Ⅰ (cTnI)对心肌损伤的诊断和鉴别诊断价值。方法　对 1 5例确诊急性心肌梗死 (AMI)和 1 5例诊断明确的单纯肌酸磷酸激酶 (CK)增高无心肌损伤患者同一份血样分别行cTnI和CK、肌酸磷酸激酶同功酶(CK MB)测定。结果　cTnI在AMI组阳性率为 1 0 0 % ,对照组阳性为 0 ,两组差异非常显著 (P <0 .0 0 1 )。CK MB在AMI阳性率为 93 3 % ,对照组阳性率为 80 % ,两组相比无显著差异。结论　cTnI对心肌损伤具有很重要的诊断价值。     

肢体挤压伤早期心脏损伤的实验研究

目的观察挤压伤大鼠早期心脏损伤后心钠素(ANP)、内皮素-1(ET-1)的改变并阐明其与挤压伤早期心脏损伤的关系.方法制作挤压伤大鼠动物模型,32只大鼠随机分为对照组、挤压伤后6,12,24 h组,每组8只.采用标准Ⅱ导联观察心电图变化,全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、K+、Ca2+、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶心肌同功酶(CK-MB)浓度变化,放射免疫法检测心脏ANP、ET-1含量,化学发光法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度.结果挤压伤后心电图ST段由(0.003 8±0.007 5)mV抬高至(0.112 2±0.034 2)mV;伤后6 h,心脏ANP、ET-1含量分别由(5 112.34±4 167.65)pg/g和 (510.58±251.80)pg/g下降至(1 935.12±614.89)pg/g和(342.12±136.48)pg/g,血清CK、CK-MB、cTnI则显著升高,并持续至伤后24 h.结论肢体挤压伤早期有心肌细胞的损伤,ANP、ET-1可能对心肌细胞损伤起重要作用.     

5-氮胞苷不同时点对骨髓间质干细胞的诱导分化作用

 目的 对比研究5-氮胞苷(5-aza)在不同时点对大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)的诱导分化作用.方法 体外分离培养雌性Wistar大鼠MSCs,分为6组,每组n=12,每次诱导均加入10μmol/L 5-aza作用24h.分组及各组诱导开始时间点为:A组,原代培养第72 h;B组,传5代后72 h;C组,传10代后72h;D组,传15代后72 h;E组,原代培养第72小时诱导1次,传5代后72h再重复诱导1次,共诱导2次;F组,空白对照组.诱导后,观察细胞形态学变化,免疫细胞化学鉴定心肌特异性结构蛋白,统计分析比较各组阳性表达率.结果 MSCs经诱导后,表达肌球蛋白重链和心肌特异性肌钙蛋白-T.A、B、E组间阳性表达率无明显差异(P＞0.05),与C、D组比较阳性率较高(P＜0.05),C、D组间无差异.结论 MSCs在体外诱导后可表达心肌特异性结构蛋白,随着传代次数增加,定向分化能力明显降低.作为移植种子细胞,以3～5代MSCs较好.     

新生儿病理性黄疸心肌酶及肌钙蛋白I检测结果分析

目的探讨新生儿病理性黄疸时心肌酶及肌钙蛋白的变化。方法测定75例新生儿病理性黄疸患儿(观察组)及40例足月健康新生儿(对照组)血清胆红素和心肌酶及肌钙蛋白的变化。对61例观察组和40例对照组新生儿行心电图、心脏超声心动图检查,观察有无心肌受损表现。将新生儿病理性黄疸患儿分为磷酸肌酸治疗组和非治疗组,测定其急性期及恢复期心肌酶及肌钙蛋白的变化。结果 观察组血清总胆红素和心肌酶及肌钙蛋白均较对照组高(P<0.05或0.01)。观察组与对照组心电图结果均符合国内健康新生儿标准,未出现心肌受损的临床表现。观察组新生儿应用磷酸肌酸1 g/d治疗3~5 d后复查CK、CK-MB、cTnI均显著下降(P<0.01或0.05);而未应用磷酸肌酸而予常规蓝光照射治疗3 d后复查CK、CK-MB、cTnI值,治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论病理性黄疸对新生儿心肌具有一定损害,但并不严重;有条件时可进行营养心肌治疗,以帮助患儿心肌损害尽快恢复。     

热性惊厥患儿血清cTnI和CK-MB的改变及临床意义

目的 探讨热性惊厥(FC)患儿血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的改变及临床价值.方法 入院后24 h内检测98例热性惊厥(FC)患儿血清cTnI、CK-MB水平,同时选择48例有发热但无惊厥,并除外心肌炎、急性肌炎等疾病的患儿为对照组.结果 FC组血清cTnI和CK-MB水平明显高于对照组(P＜0.05).结论 FC患儿易合并心肌损害;血清cTnI、CK-MB的升高对早期发现心肌损害具有重要意义.     

新生大鼠肌源性干细胞跨胚层分化为胰岛素分泌细胞的研究

目的探讨新生大鼠肌源性干细胞(MDSCs)在体外跨胚层转分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)的可能性。方法提取新生大鼠MDSCs原代细胞,差速贴壁培养后行Desmin免疫细胞化学鉴定。然后将细胞分为3组:胰腺提取液诱导组、化学方法诱导组、空白对照组,分别诱导并同期观察细胞的生长形态,采用双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛素分泌细胞,RT-PCR方法检测诱导后细胞的基因表达情况。结果获得高纯度的MDSCs,且Desmin免疫细胞化学鉴定呈阳性。胰腺提取液诱导组诱导后4d,相差显微镜下可见细胞团结构,诱导后6d呈半贴壁状态,诱导后12d形成典型的胰岛样细胞团,较化学方法诱导组诱导时间缩短3d。RT-PCR检测显示:胰腺提取液诱导组诱导6d后可检测到胰岛前体细胞相关基因Ngn3、nestin、PDX-1的表达;诱导12d后可检测到胰岛素基因的表达,但未检测到Ngn3、nestin、PDX-1的表达。结论胰腺提取液可模仿胰岛细胞发育的微环境,并诱导大鼠MDSCs跨胚层分化为胰岛素分泌细胞。     

脂肪间充质干细胞分化为肾小管上皮细胞的实验研究

目的 探讨脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMCSs)是否能分化为肾小管上皮细胞,用于急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的治疗.方法 体外分离和培养ADMSCs,用一种携带有荧光素酶和红色荧光蛋白(fluc-mrfp)报告基因的慢病毒转染ADMSCs;构建SD大鼠缺血再灌注诱导的AKI模型,将病毒转染ADMSCs直接从肾实质注射移植2×106细胞量.使用生物发光成像仪(bioluminescence imaging,BLI)示踪移植后的ADMSCs在大鼠体内的分布;免疫荧光染色法检测ADMSCs在体内的分化.结果 ADMSCs高表达CD29、CD90,不表达CD31、CD45、CD34;慢病毒转染后的ADMSCs稳定表达fluc和mrfp报告基因.体内ADMSCs移植后,BLI可以检测到荧光信号一直持续到第14天;免疫荧光结果进一步证实移植的ADMSCs可能分化为肾小管上皮细胞.结论 ADMSCs在体内可以分化为肾小管上皮细胞,为进一步研究ADMSCs治疗AKI提供实验基础.     

Cell death pathways in directly irradiated cells and cells exposed to medium from irradiated cells

Abstract

Purpose: The aim of this study was to compare levels of apoptosis, necrosis, mitotic cell death and senescence after treatment with both direct radiation and irradiated cell conditioned medium.

Materials and methods: Human keratinocytes (HaCaT cell line) were irradiated (0.005, 0.05 and 0.5 Gy) using a cobalt 60 teletherapy unit. For bystander experiments, the medium was harvested from donor HaCaT cells 1 hour after irradiation and transferred to recipient HaCaT cells. Clonogenic assay, apoptosis, necrosis, mitotic cell death, senescence and cell cycle analysis were measured in both directly irradiated cells and bystander cells

Results: A reduction in cell survival was observed for both directly irradiated cells and irradiated cell conditioned medium (ICCM)-treated cells. Early apoptosis and necrosis was observed predominantly after direct irradiation. An increase in the number of cells in G2/M phase was observed at 6 and 12 h which led to mitotic cell death after 72 h following direct irradiation and ICCM treatment. No senescence was observed in the HaCaT cell line following either direct irradiation or treatment with ICCM.

Conclusion: This study has shown that directly irradiated cells undergo apoptosis, necrosis and mitotic cell death whereas ICCM-treated cells predominantly undergo mitotic cell death.     

嗅鞘细胞对脊髓源性神经干细胞分化的影响

目的 探讨嗅鞘细胞对脊髓源性神经干细胞分化的作用。方法 应用Millicell插入式细胞培养皿，大鼠脊髓源性神经干细胞与嗅鞘细胞在无血清培养液中共培养，通过免疫化学染色方法，检测脊髓源性神经干细胞分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的比例。结果 共培养7d后，脊髓源性神经干细胞分化为神经元的比例高达43．5％，明显高于对照组的21．4％。结论 嗅鞘细胞提供的微环境可促进脊髓源性神经干细胞分化为神经元。     

Mononuclear cells in subcutaneous haemorrhage with special consideration of myeloid percursor cells

Various hematogenous markers were used to differentiate and quantify the types of mononuclear cells present in subcutaneous haemorrhages. Fifty samples of subcutaneous bleeding with a survival time of a few minutes to more than 48 hours were studied. The various cell types were detected using the following stains: Naphthol AS-D chloracetate esterase for myeloid cells, including mast cells; (alpha1-antichymotrypsin for monocytes/macrophages; UCHL1 for T-lymphocytes; and L26 for B lymphocytes. The percentage of monocytes/macrophages was found to increase in dependence on survival time, whereas T-lymphocytes declined. Within minutes of injury neutrophilic granulocytes had emigrated into the surrounding tissue and mast cell degranulation had occurred within the haemorrhagic zone. Esterase-positive mononuclear cells, namely metamyelocytes, were detected within minutes after injury and were still present after survival times exceeding 48 hours; however, no dependence on survival time or cause of death was found. Although the increasing number of monocytes/ macrophages and T-lymphocytes was expected, the sometimes high percentage of myeloid precursor cells within the wound were surprising. Possible explanations for this phenomenon are discussed.     

硒促进小鼠胚胎干细胞分化为胰岛细胞的实验研究

目的：探讨硒在体外诱导小鼠胚胎干细胞向胰岛细胞分化中的促进作用。方法：将ES-D3小鼠胚胎干细胞悬浮培养7d形成拟胚体，然后进行贴壁培养，加入分化培养液1诱导6d，然后用分化培养液2诱导6d。最后用含不同浓度的亚硒酸钠的培养基诱导20d。对诱导后获得的胰岛素产生细胞团(IPCC)细胞进行双硫腙染色，对染色结果进行体视学分析。进行胰岛素刺激释放试验，用ELISA法测定胰岛素释放量。RT-PCR法检测胰腺细胞相关基因的表达。结果：亚硒酸钠浓度在0．03～810μmol／L之间时，经过系列诱导后获得的IPCC其DTZ阳性率随着亚硒酸钠浓度的提高而显著升高。当亚硒酸钠浓度为270μmol/L时DTZ阳性率上升至最高点，随后开始缓慢下降；胰岛素分泌释放试验也证实270μmol/L亚硒酸钠诱导的细胞释放的胰岛素最多。RT-PCR结果进一步表明诱导获得的IPCC具有类胰岛组织的功能。结论：硒对胚胎干细胞向胰岛细胞分化具有促进作用。