PCR法检测尿毒症病人血清HCV—RNA结果分析

应用ＰＣＲ技术检测尿毒症病人血清ＨＣＶ—ＲＮＡ１６５例，结果显示：ＥＩＡ检测病人血清抗ＨＣＶ阳性率为６３．０％；抗ＨＣＶ阳性病人ＨＣＶ—ＲＮＡＰＣＲ检出阳性率为６５．３％；抗ＨＣＶ阴性病人检出率为９．８％；ＰＣＲ总阳性检出率为７５．１％。提示：ＣＲＦ病人抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ检出率与输血呈正相关。ＣＲＦ病人接受透析与输血次数愈多，感染ＨＣＶ的机会就愈大。在血清中单独出现抗ＨＣＶ或同时检出抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ者，表明与早期输血感染ＨＣＶ者已产生抗ＨＣＶ，ＨＣＶ—ＲＮＡ阳性与近期输血再次感染者关系极为密切。用ＰＣＲ法直接检测病毒毒粒要早于ＥＩＡ检出抗ＨＣＶ的阳性结果，有利于早期诊断。     

丙型肝炎病毒5’非编码区PCR产物单链构象多态性分析及序列测定

目的：研究慢性肝炎病人血清、肝细胞肝癌组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇非编码区变异情况．方法：收集１０例慢性肝炎病人及４例肝细胞肝癌病人血清和肝细胞肝癌组织，检测抗ＨＣＶ抗体阳性，进行ＨＣＶ５＇非编码区ＲＮＡ的逆转录ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ产物进行单链构象多态性分析，并对部分病例序列进行测定．结果：６例慢性肝炎病人血清及３例肝细胞肝癌组织中检测到ＨＣＶＲＮＡ，单链构象多态性分析显示各例条带之间无明显差异，对１例肝细胞肝癌组织中ＨＣＶ５＇非编码区ｃＤＮＡＰＣＲ产物的序列测定表明它与ＨＣＶ－１的同源性为９７．３％，与ＨＣＶ－ＢＫ的同源性为９７．７％．结论：我们的结果提示在西安地区ＨＣＶ５＇非编码区几乎是一样的，并进一步证实不同地区ＨＣＶ５＇非编码区的高度保守性．     

不同肝炎病毒感染模式对慢性肝炎病情的影响研究

目的：探讨慢性肝炎病人中ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ和ＨＧＶ四型肝炎病毒的感染和重叠感染和慢性肝炎的病情及预后的影响。方法：选择慢性肝炎病人１３６例，应用ＰＣＲ方法检测ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ、ＨＤＵＶＲＮＡ和ＨＧＶＲＮＡ，用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ和ＨＧＶ其他血清学标志物。结果：上述四型肝炎病毒的感染模式为：：ＨＢＶ、ＨＢＶ＋ＨＣＶ、ＨＢＶ＋ＨＤＶ、ＨＢＶ＋ＨＧＶ、ＨＣＶ和ＨＢＶ＋ＨＣ     

血清HCV RNA与抗—HCV关系研究

目的 研究血清ＨＣＶ ＲＮＡ与抗－ＨＣＶ之间的关系。方法 对５０例抗－ＨＣＶ阳性的丙型肝炎病人，用酶标仪测血清抗－ＨＣＶ ＯＤ值，同时用逆转录－套式－聚合酶链反应检测血清ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 ５０例抗－ＨＣＶ阳性丙型肝炎（ＨＣ）患者中３０例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性，即６０％的ＨＣ病人存在病毒血症；在不同的抗－ＨＣＶ ＯＤ值范围内ＨＣＶ ＲＮ检出率不等，ＨＣＶ ＲＮＡ检出率随抗－ＨＣＶ ＯＤ值增高而增加（     

烧伤病人输血后丙肝发生情况报告

采用酶联免疫反应（ＥＬＩＳＡ）及聚合酶反应（ＰＣＲ）方法，对２０例烧伤病人血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）及丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ进行了检测。结果：入院时，输血组及非输血组抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ检测均为阴性。一个月后。输血组１０例病人中发现抗－ＨＣＶ阳性５例、ＨＣＶＲＮＡ阳性４例；而非输血组抗－ＨＣＶ及ＨＣＶＲＮＡ检测均为阴性。说明输血是烧伤病人感染ＨＣＶ的重要途径。本还对烧伤病人输血     

肝硬化,肝癌患者乙型及丙型肝炎病毒的检测

对４１例肝硬化病人，４０例肝癌病人及４１例非肝炎、非肝硬化及非肝癌病人（对照组）因清乙肝５项（ＨＢｓＡｇ，抗ＨＢｓ、抗ＨＢｃ、ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｅ）、血清抗ＨＣＶ及血清ＨＣＶＲＮＡ检测。结果：肝硬化组、肝癌组和对照组乙肝５项检出率分别为：９２．７％９５．０％６ ３１．７％；抗ＨＣＶ检出率分别为３１．７％１２．５、和９．７％；ＨＣＶＲＮＡ检 分别为：３６．６％、２７．５％和１４．６％。通过比较分析认     

应用PCR对维持性血液透析病人丙肝病毒感染状况的研究

应用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ法）对１４８例维持性血液透析病人进行了血清丙肝病毒（ＨＣＶ）感染标志物ＨＣｖＲＮＡ检测，同时应用ＥＬＩＳＡ法检测了血清抗ＨＣＶ，结果显示：１４８例血透病人共检出ＨＣＶＲＮＡ２１例，阳性率１４．２％，抗ＨＣＶ１５例，阳性率１０．１％。并对年龄、性别和透析时间各不相同的血透病人所检测出的丙肝病毒标志物ＨＣＶＲＮＡ阳性结果进行分析，结果发现丙肝病毒感染的发生率与血透病人的性别、年龄无关，与血透时间密切相关，提示透析时间越长感染丙肝病毒危险性越大。     

丙型肝炎病毒感染者血清ALT,抗—HCV及HCV—RNA关系的分析

对８９例丙型肝炎病毒感染者血清ＡＬＴ、抗－ＨＣＶ及ＨＣＶ－ＲＮＡ进行检测分析，结果表明：抗－ＨＣＶ与ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性检测的符合率为４８．３１％，抗－ＨＣＶ与ＨＣＶ－ＲＮＡ虽然有较好的相关性，但二者无平行关系，说明义气风发－ＨＣＶ仅在某些情况下能反映ＨＣＶ的复制状态，但不能代替ＨＣＶ－ＲＮＡ的检测，２份ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性血清抗－ＨＣＶ阴性，说明ＨＣＶ－ＲＮＡ的检测早期诊断意义较抗－ＨＣＶ更大。ＡＬ     

43份血清标本抗－HCV检测分析

为了解本地区ＨＣＶ的感染情况，我们对４３份住院和门诊病人血清标本作了抗－ＨＣＶ检测，并着重观察肝硬化、肝癌和ＡｌＴ长期升高者的ＨＣＶ感染。结果为：４３例病人标本，抗－ＨＣＶ阳性１５例（３４．９％），阳性例数分别是：肝硬化病人为３／１０，肝癌病人为４／８，ＡＬＴ长期升高者为７／９，慢性肾炎病人为１／１，胃肠道疾病１５例均为阴性。由此看出：本地区的ＨＣＶ感染在人群中是较广泛存在的，尤其是捐血员中，ＨＣＶ的感染率相当高。而且，ＨＣＶ感染的慢性化进程与ＨＣＣ的转化密切相关。因此，有必要引起医疗卫生部门对防止ＨＣＶ感染的高度重视。     

慢活肝合并HDV感染30例临床分析

对３０例慢性活动性乙型肝炎（ＣＡＨＢ）合并ＨＤＶ感染者，与不合并ＨＤＶ感染的ＣＡＨＢ３０例进行对照研究。发现前者ＡＬＴ、ＴＢｉ、ＨＡ明显增高，住院天数延长，发展成肝硬化腹水例数增多，说明ＨＤＶ感染是加重ＣＡＨＢ的促进因素。     

聚合酶链反应检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸的研究

本文报道了简便快速检测血清及肝脏中丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的聚合酶链反应(PCR)方法。检测单浆献血员61例,其中抗-HCV阳性30例,检出血清HCV RNA阳性者17例;抗-HCV阴性31例,检出血清HCV RNA阳性者9例。检测6例血清HCV RNA阴性、抗-HCV阳性丙型肝炎患者的肝穿标本,发现4例HCV RNA阳性。说明本文所建立的PCR方法是诊断HCV感染的特异性强、敏感度高的一种新方法。检测肝组织内的HCV RNA可提高HCV RNA的检出率。本文还对标本的处理及如何避免假阳性等问题进行了讨论。     

丙型肝炎病毒在供、受血者间传播的调查

采用市售第二代抗HCVELISA试剂对一组供、受血者血清抗HCV进行了抽查。结果表明，未经地方血站抗HCV筛选的献血员血清抗HCV阳性率为18．57％，经筛选后为1．03％～5．24％，正常人群为1．98％，同期受血者为7．59％，抗HCV阳性与阴性献血者HCVRNA检测阳性率分别为56．8％与20．0％。在9例接受抗HCV阳性血液的受血者中，1例患者受血前后抗HCV均为阳性，5例抗HCV及6例HCVRNA阳转，6例血清HCV感染标志阳转者中4例ALT明显较正常为高，其中3例因临床症状较重而再次住院治疗。研究还发现3例输血感染者所接受的血液中抗HCV呈低表达状态（采用ELISA检测，OD值0．22～0．39），并对此进行了讨论。     

126例丙型肝炎病者临床病毒血清学分析

分析126例丙型肝炎病者的临床资料,丙型肝炎病毒血清抗体(抗-HCV)滴度及丙型肝炎核酸(HCV-RNA)。发现有明确输血(浆)史者103例,该病史中发现输血后2个月内有肝损者87例占84.4％。抗-HCV检出率为91.3％,其中急性病者检出率82.6％,慢性者95.8％。抗-HCV强阳性者(OD>1.0),HCV-RNA的检出率48.1％,明显高过OD<1.0的低阳性者。抗-HCV阴性者中有18·18％(2/11)检出HCV-RNA。另外,HCV-RNA的检出与谷-丙转氨酶(ALT)水平有一定关系,有肝损者比ALT正常者HCV-RNA检出率明显高。提示HCV-RNA的检出与活动性肝病有关系。     

丙型肝炎分子生物学、血清学诊断方法的研究和临床应用

Using techniques of molecular biology and serology, we research on the establishment of HCV diagnotic quality control standard, HCV diagnostic materials, anti-HCV EIA diagnostic method, detection of serum HCV RNA,detection of HCV RNA in liver tissue by in situ PCR, and the establishment of monoclonal hybridoma cell line of HCV C33c and NS5a. Successfully prepared diagnostic kits have applied in screening of blood donor, clinical diagnosis,observation of treatment effect and research on pathogenesis of hepatitis C. After the use of these reagents, the transmission rate of HCV through blood product has been dramatically reduced.     

输血后丙型肝炎感染及影响因素的研究

采用回顾性定群研究方法，对济南市１１９例输血后丙型肝炎感染情况进行了调查。结果表明，１１９例受血者中，抗－ＨＣＶ阳性３１例，阳性率为２６．１％，其中１４例为临床丙型肝炎患者，罹患率为１１．７％。输入经筛检血液的受血者中，ＨＣＶ感染率和丙肝罹患率分别为１４．６％和４．２％，输入未经筛检血液者分别为３３．８％和１６．９％，差异有显著性（Ｐ＜０．０５，ＲＲ＝２．３０ＲＲ＝４．０２）。对输血量，输血次数及住院天数双向筛选法多元线性逐步回归分析表明，输血量是影响受血者感染ＨＣＶ的主要因素。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关，而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

PCR检测丙型肝炎病毒感染各高危人群

用ＰＣＲ方法克隆了中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者的５’端非编码区（５’－ｎｏｎｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎ，５’－ＮＣＲ）序列，并根据此序列合成引物检测我国ＨＣＶ各高危感染人群的病毒复制情况，结果显示ＨＣＶＲＮＡ在慢性丙型肝炎患者的血清标中的阳性率为８１．８％（９／１１），在ＨＣＶ抗体阳性的血液透析患者血清标本中的阳性率为６３．６％（７／１１），在ＨＣＶ抗体阳性的献血员血清标中的阳性率为２０％（４／     

检测HCA-RNA的RT-PCR技术改进与应用

以台湾株丙型肝炎病毒的非结构区基因序列(HCV-T_3)设计内外五条呈巢式排列的引物,结合AGPC核酸一步抽提法,寡聚核苷酸探针5′末端标记法和Southern电泳转移杂交法,建立简捷特异检测HCV-RNA的逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)技术。应用这一技术对121例非甲非乙型肝炎患者和45例抗HCV阳性的慢性乙型肝炎患者进行了血浆HCV-RNA检测,结果阳性率分别为66.1％(80/121)和66.7％(30/45)。本文对这一技术的方法学、HCV-RNA与抗HCV的关系、血液暴露史对HCV感染的意义以及HBV与HCV的重叠感染进行了讨论。     

116例血清中HCV RNA定量检测与抗-HCV结果对比分析

目的探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)和HCVRNA定量检测阳性结果对丙型肝炎诊断治疗的临床意义。方法采用第三代ELISA夹心法检测抗-HCV，荧光定量PCR法检测HCVRNA检测116例血清抗-HCV或HCVRNA阳性标本。结果在116例标本中，抗-HCV( )／HCVRNA( )双阳性者83例，抗-HCV( )／HCVRNA(-)者12例，抗-HCV(-)／HCVRNA( )者21例)。两者阳性符合率为71．6％(83／116)。在HCVRNA定量阳性结果中，则有104例为HCV感染，其中抗-HCV的阳性检出率为80．0％(83／104)。随着血清HCVRNA滴度的增高，抗-HCV的阳性率也增加，两者变化趋势一致。结论抗-HCV检测，HCVRNA荧光定量PCR法检测均有一定的局限性，同时应用抗-HCV和HCVRNA检测对临床上完善HCV诊断、评价抗病毒疗效更为准确。     

慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染

研究45例慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染。病例均为后发抗HCV阳性的慢性HBsAg携带者,无先抗HCV阳性而后HBsAg阳性的个案,这可能反映HBV和HCV两种病毒感染的先后次序、不同传播方式及HBV对HCV易感性的增进作用。用RT-PCR检出30/45例血浆HCV RNA阳性,不仅确证HCV重叠感染诊断,还证实HCV复制及传染性。23/30例HCVRNA阳性者有输血史,提示输血是其获得HCV重叠感染的主要途迳。用PCR检出25/45例血清HBV DNA阳性,其中抗HBe阳性者的HBV DNA检出率为42.9％(12/18),明显低于(P<0.001)我们前文报道,提示重叠HCV感染对HBV复制有抑制作用。此外有9例抗HBe阳性者,其HBV DNA阴性但HCV RNA阳性,反映HCV可能已取代HBV成为致肝损害的主要病因。