miR-424在人骨髓间充质干细胞分化过程中的表达

目的 筛选可作为人骨髓间充质干细胞(MSCs)分子标记物的microRNA(miRNA).方法 以从骨髓中分离培养的MSCs及其诱导分化的成骨细胞和软骨细胞为实验对象,利用基因芯片检测miRNA的表达情况,由芯片显著性分析(SAM)得到MSCs较其诱导分化细胞高表达的miRNA,再由实时定量PCR进行验证.结果 成功分离培养出MSCs,并分别诱导其分化为成骨细胞和软骨细胞;MSCs及由其诱导分化的成骨细胞和软骨细胞经miRNA芯片检测及SAM分析得到8个MSCs较由其诱导分化的成骨细胞高表达miRNA(has-miR-424、has-miR-34a、has-miR-593、has-miR-10a、has-miR-148a、has-miR-602、mmu-miR-709、mmu-miR-665),3个MSCs较由其诱导分化的软骨细胞高表达miRNA(has-miR-424、PREDICTED_MIR189、mmu-miR-665).其中MSCs较成骨细胞和软骨细胞均高表达的人源性miRNA为has-miR-424,差异倍数分别为6.6倍和4.4倍;在原样本中对进行实时定量PCR的验证,结果提示与诱导分化的成骨细胞相比,MSCs中的has-miR-424表达升高约3.6倍,而与诱导分化的软骨细胞相比,MSCs中的has-miR-424表达升高约3.1倍,结果与芯片结果相符合.结论 MSCs较其诱导分化细胞高表达的miRNA有望成为人骨髓间充质干细胞的一种特异性的分子标记物,这些miRNA对MSCs自我更新和未分化状态起着重要的维持作用.     

不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞体外增殖及凋亡的影响

目的观察地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响。方法利用1.073g/mLPercoll分离液以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,进行体外培养。成骨诱导组细胞用地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠处理,分别进行ALP染色和矿化结节染色。实验组细胞分别以10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/L和10^-6mol/L地塞米松加以干预,MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞仪定量分析hMSCs的凋亡率。结果成骨诱导组细胞ALP染色和矿化结节染色均为阳性,对照组为阴性;低浓度（10^-9mol/L）地塞米松对细胞的体外增殖无明显影响（P〉0.05）,10^-8mol/L及以上浓度地塞米松可明显抑制细胞的增殖（P〈0.01）;hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高（P〈0.01）。结论地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠可促使hMSCs成骨分化,10^-8mol/L及以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖,地塞米松能促进体外培养的人骨髓间充质干细胞凋亡。     

hBMP7基因转染对兔骨髓间充质干细胞增殖及胶原合成的影响

使用含hBMP7基因的重组逆转录病毒液感染兔骨髓间充质干细胞（BMSc）,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,^3H脯氨酸掺故法检测I型胶原合成和表达情况。结果显示,经hBMP7基因转染的BMSc与空载体转染及未转染的BMSc在细胞增殖、细胞周期表现方面无显著性差异,经转染的BMSc合成胶原显著高于空载体转染和未转染者。提示采用逆转录病毒介导转染BMSc后能促进细胞的胶原合成,对BMSc增殖和细胞周期无显著影响,有利于进一步 应用于构建组织工程化骨组织。     

骨髓间充质干细胞对大鼠肺组织胶原的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对博来霉素(BLM)引起的肺损伤大鼠肺组织胶原的影响,初步探讨其作用机制。方法:将SD大鼠MSCs异体注入受体大鼠体内,2周后观察肺组织病理学变化,同时检测肺组织羟脯氨酸含量及转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板源性生长因子-A、B(PDGF-A,B)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA的变化。结果:MSCs的植入可使增生的大鼠肺泡间隔、基质胶原及Ⅰ、Ⅲ型胶原明显降低,使升高的肺组织羟脯氨酸及TGFβ1、PDGF-A,B、及IGF-ⅠmRNA的表达显著降低。结论:MSCs可减少肺损伤大鼠肺组织中的胶原含量,此作用与MSCs降低了多种促纤维化细胞因子的表达有关。     

骨髓间充质干细胞研究进展

骨髓间充质干细胞是干细胞领域的研究热点之一。虽然近几年来有关间充质干细胞的研究已取得了很大进展,但仍有很多问题有待进一步解决。本文主要对间充质干细胞的生物学特性、以及免疫耐受性、分化和促修复、间充质干细胞的标记等问题进行综述。     

骨髓间充质干细胞对大鼠急性放射性肝损伤修复的研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠急性放射性肝损伤的修复作用。方法 雌性SD大鼠12只,肝右叶接受单次6MVX射线20Gy照射,建立急性放射性肝损伤模型;随机分成2组,干预组注射雄性大鼠BMSCs悬液,对照组注射等量生理盐水。4周后观察大鼠肝组织的病理形态学改变,采用原位杂交技术检测肝脏中性别决定基因Y(SRY)及免疫组织化学技术检测ɑ-平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)的阳性表达。结果 两组大鼠肝右叶组织中均可见汇管区炎性反应及肝实质细胞的损伤,但干预组的损伤程度比对照组轻。干预组大鼠肝右叶中检测到的SRY阳性细胞多于肝左叶(t=3.77,P＜0.05),ɑ-SMA的阳性表达率低于对照组(t=2.25,P＜0.05)。结论 单次20Gy照射可以造成大鼠肝右叶急性放射性损伤;SRY阳性细胞可以被征募到大鼠的放射性肝损伤部位,在一定程度上可能减轻放射性肝纤维化的发生。     

骨髓间充质干细胞的生物学特性

从人骨髓中分离人间充质干细胞（ＭＳＣｓ）,台盼蓝拒染法测定细胞增殖状态,ＭＴＴ实验检测不同细胞因子对细胞增殖的影响。应用流式细胞学技术测定细胞周期及细胞表面抗原特征并观察细胞组织化学特点。结果：ＭＳＣｃ具有独特的表征,即ＣＤ２９,ＣＤ４４,ＣＤ１６６阳性,ＣＤ３４,ＣＤ４５,ＨＬＡ－ＤＲ和荆豆素阴性。细胞化学结果显示,几乎所有细胞酸性萘酚醋酸酯酶（ＡＮＡＥ）及糖原（ＰＡＳ反应）阳性,酸性磷酸酶（Ａ     

骨髓间充质干细胞治疗脑梗死的研究进展

目前,溶栓和神经保护治疗的进展将脑梗死的治疗推进到一个新时代。但是大部分患者在治疗后仍遗留有瘫痪、失语等严重残疾。近年来应用间充质干细胞（MSC）治疗脑梗死越来越被人们所关注。本文就间充质干细胞在治疗脑梗死方面的研究现状作如下综述。     

骨髓间充质干细胞对大鼠皮肤损伤促愈作用的研究

目的：研究骨髓间充质干细胞（MSCs)对大鼠皮肤损伤所发挥的促愈作用。从而为临床皮肤损伤修复提供新的种子细胞来源。方法：体外培养扩增雄性Wistar大鼠的骨髓MSCs，选择雌性Wistar大鼠30只制作皮肤损伤模型，并随机分为MSCs-胶原膜组（接种细胞胶原膜组，A组），单纯胶原膜组（B组）和自然愈合组（对照组，C组），每组10只。采用创面大体观察、组织学检查和透射电镜等方法观察创面愈合情况，并结合原位杂交方法判定创面愈合过程中是否存在植入细胞。结果：伤后7，14d,3组中任何两组之间创口收缩率比较，差异均有非常显著性意义（P＜0．01），其顺序为A组＞B组＞C组；组织学检查显示，A组肉芽组织含量明显多于B、C组；电镜检查显示，A组受损皮肤接近正常；原位杂交结果表明，移植后7，21，27d,A组均可检测到雌性Wistar大鼠受损皮肤真皮层有雄性大鼠sry基因的表达。结论：MSCs可对皮肤损伤发挥明显的促愈作用。     

骨髓间充质干细胞的应用研究进展

间充质干细胞 (ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌ,ＭＳＣ)是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞 ,主要存在于全身结缔组织和器官间质中 ,以骨髓组织中含量最为丰富 ,胎儿脐血中亦可分离得到[1 ] 。在一定诱导条件下具有向成骨细胞、成软骨细胞、成肌细胞、肌腱细胞、脂肪细胞以及基质细胞等中胚层细胞分化的能力 ;同时 ,ＭＳＣ还可以向外胚层的神经元细胞和内胚层的肝卵圆性细胞分化[2 5] 。这似乎突破了ＭＳＣ仅为中胚层干细胞的概念 ,展示了ＭＳＣ具有更为重要的理论研究意义和更为广阔的应用前景。笔者就近年来骨髓间充质干细…     

高原红细胞增多症患者骨髓间充质干细胞的培养

目的：对高原红细胞增多症（HAPC）患者骨髓间充质干细胞（MSCs）进行分离培养,为进一步探讨其生物学特性奠定基础。方法：采用密度梯度离心和贴壁筛选法对10例HAPC和10例正常人骨髓MSCs进行分离培养,倒置显微镜下观察MSCs形态,流式细胞仪行细胞表面抗原检测,检测MSCs生长情况,判断其增殖能力。结果：骨髓密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞（BMMNC）后培养,骨髓MSC均分离培养成功,贴壁细胞呈梭形;两组骨髓MSCs均表达CD29、CD105和CD13,不表达CD45、CD4、CD8、CD14、CD3、CD34和HLA-DR（P〉0.05）。HAPC骨髓MSCs增殖能力高于正常骨髓（P〈0.01）。结论：HAPC患者骨髓MSCs体外可有效分离培养,所培养的细胞成分单一,可供进一步实验应用。     

High-Dose 111In Induces G1 Cell Cycle Arrest and Cell Death in Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

Purpose

This study was performed to evaluate the effect of ¹¹¹In-labeling on the cell growth, cycle and viability of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs).

Methods

Rat BMSCs were labeled with various doses of ¹¹¹In (0.4–11.1 Bq/cell). The growth curve of ¹¹¹In-BMSCs was obtained up to 14th day of labeling. The cell cycle was evaluated by 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) labeling or propidium iodide (PI) staining. Senescent cells were counted under a light microscope after staining with 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside. Flow cytometry was performed to measure apoptotic and necrotic fractions after staining with annexin V-FITC and PI.

Results

The growth of BMSCs labeled with higher doses of ¹¹¹In (4.4 or 11.1 Bq/cell) was significantly inhibited from the 3rd day of labeling. Flow cytometry revealed less BrdU-positive BMSCs at 11.1 Bq ¹¹¹In/cell during all measurement days and G1 arrest at 4.4 and 11.1 Bq ¹¹¹In/cell. Significant increases in apoptosis and necrosis were also observed at 4.4 (3.04%/1.35%) and 11.1 Bq ¹¹¹In/cell (9.07%/3.18%) on the 14th day (control = 1.60%/0.39%). However, no cellular senescence was visualized up to the 14th day.

Conclusion

A high dose of ¹¹¹In-labeling induced cell cycle arrest and death in BMSCs; therefore, it should be used with a careful dosimetry in case of applying it to humans.     

BMSC对内毒素诱导的肺泡上皮细胞氧化应激的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞（(bone marrow stromal cell,BMSCs）对内毒素（lipopolysaccharide, LPS）诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞（alveolar epithelial cellⅡ,AECⅡ）氧化应激的影响。方法 选用A549细胞代替AECⅡ,将实验分为A549组、A549+LPS组、A549-BMSC+LPS组及A549-BMSC+PBS组,即单独培养A549细胞或将BMSC与A549细胞共培养于Transwell体系,培养过夜后予LPS或等体积的PBS刺激。收集各组A549细胞样本,通过流式细胞仪检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）的表达水平,并利用化学检测试剂盒,通过分光光度计检测脂过氧化物（lipid peroxides,LPO）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH）表达水平。结果 A549细胞在LPS的干预下,细胞内ROS表达水平（658.40±27.89）及其代谢产物LPO（1.46±0.15）、MDA（36.85±2.75）的水平明显升高（P<0.001）,抗氧化因子SOD（13.44±3.32）、GSH（346.56±44.33）的活性明显降低（P<0.001）;与A549+LPS组比较,A549-BMSC+LPS组ROS（544.61±41.30）、LPO（1.05±0.09）、MDA（10.63±0.95）的水平明显降低（P=0.001、P=0.006、P<0.001）,SOD（33.41±3.59）、GSH（447.18±45.56）的活性明显升高（P=0.001、P=0.028）;而与A549组比较,A549-BMSC+PBS组ROS（108.97±17.49）、LPO（0.12±0.03）、MDA（1.23±0.36）的表达水平呈下降趋势（P=0.033、P=0.004、P=0.012）,SOD（68.33±8.01）、GSH（793.89±62.33）的活性进一步升高（P=0.001、P=0.002）。结论 BMSC能显著减轻LPS诱导的AECⅡ细胞的ROS生成,同时能正向调节其抗氧化的能力,可以一定程度上抑制LPS诱导的AECⅡ细胞的氧化应激反应。抑制肺泡上皮细胞氧化应激状态下ROS的产生、增强肺泡上皮细胞抗氧化的能力,或许可以成为治疗急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的新策略之一。     

In Vivo MR Imaging of Magnetically Labeled Mesenchymal Stem Cells in a Rat Model of Renal Ischemia

Objective

This study was designed to evaluate in vivo MR imaging for the depiction of intraarterially injected superparamagnetic iron oxide (SPIO)-labeled mesenchymal stem cells (MSCs) in an experimental rat model of renal ischemia.

Materials and Methods

Left renal ischemia was induced in 12 male Sprague-Dawley rats by use of the catheter lodging method. In vivo MR signal intensity variations depicted on T2*-weighted sequences were evaluated in both the left and right kidneys prior to injection (n = 2), two hours (n = 4), 15 hours (n = 2), 30 hours (n = 2) and 72 hours (n = 2) after injection of SPIO-labeled MSCs in both kidneys. Signal intensity variations were correlated with the number of Prussian blue stain-positive cells as visualized in histological specimens.

Results

In an in vivo study, it was determined that there was a significant difference in signal intensity variation for both the left and right cortex (40.8 ± 4.12 and 26.4 ± 7.92, respectively) and for both the left and right medulla (23.2 ± 3.32 and 15.2 ± 3.31, respectively) until two hours after injection (p < 0.05). In addition, signal intensity variation in the left renal cortex was well correlated with the number of Prussian blue stain-positive cells per high power field (r = 0.98, p < 0.05).

Conclusion

Intraarterial injected SPIO-labeled MSCs in an experimental rat model of renal ischemia can be detected with the use of in vivo MR imaging immediately after injection.     

不同浓度菲立磁对大鼠间充质干细胞标记效率和细胞活力的影响

目的探讨不同浓度菲立磁标记大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的磁标记效率及对细胞生长活力的影响,寻找最佳标记浓度。材料与方法菲立磁与多聚左旋赖氨酸（PLL）混合制备菲立磁-PLL复合物。将不同浓度的菲立磁-PLL复合物与培养基混合（铁的终浓度分别为150μg／ml、100μg／ml、50μg／ml、25μg／ml、10μg／ml和5μg／ml）,加入MSCs孵育过夜。分别于标记后1天、1周、2周、3周、4周行铁染色、铁含量测定及细胞活力检测。结果菲立磁-PLL标记组细胞铁含量显著高于单纯菲立磁标记组（P＜0．05）,25μg／ml浓度组细胞铁含量显著高于10μg／ml及其以下浓度组（P＜0．05）,但与50μg／ml及其以上浓度组差异无统计学意义（P＞0．05）。台盼蓝排除试验显示,100μg／ml及其以下浓度组细胞活力与对照组之间差异无统计学意义（P＞0．05）。结论以25μg/ml铁浓度标记干细胞不仅标记效率高,而且对细胞活力无明显影响．为菲立磁标记MSCs的最佳浓度。     

白血病患者造血干细胞移植前后的骨髓MRI研究

目的:研究白血病患者造血干细胞移植前后不同阶段的MRI表现,并探讨最佳显示部位及MR检查序列。方法:31例中对照组14例,病例组17例(观察时间内未复发14例,复发3例)。均应用T1WI、STIR、DWI和常规增强相结合的方法,行骨盆、股骨干和腰椎MRI骨髓成像。结果:①未复发组:14例均有腰椎和髂骨T1WI信号增高,11例STIR及DWI示原病变区信号减低,3例信号无明显变化;各组骨髓ADC值较移植前变化不明显;②复发组:T1WI上见点片状低信号灶,STIR示在相应部位可见高信号灶,DWI示病灶处信号稍高,ADC灰度图能更清楚地显示复发病灶。各组骨髓ADC值较同期未复发者明显增高。结论:MRI是监测白血病造血干细胞移植后植活和复发的有效影像学监测方法。部位以髂骨最为敏感,DWI显示病灶最佳。     

自体外周血干细胞移植联合自体骨髓移植治疗恶性血液病61例临床分析

目的　总结分析自体外周血干细胞移植 (APBSCT)联合自体骨髓移植 (ABMT)治疗恶性血液病的经验。方法　APBSCT联合ABMT治疗恶性血液病患者 6 1例 ,其中急性髓系白血病 (AML) 2 0例 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 2 4例 ,非霍奇金淋巴瘤 (NHL) 17例。结果　AML ,ALL ,NHL组的 3年及 5年无病生存率分别为 (6 3.2± 10 .6 ) % ,(5 4.6±10 .3) % ;(32 .8± 12 .5 ) % ,(15 .4± 12 .4) % ;(75 .4± 11.3) % ,(73.2± 11.5 ) %。移植后造血重建时间 ,WBC恢复至 >0 .5× 10 9/L时中位天数 +12 .0d ,WBC >1.5× 10 9/L时中位天数 +14.0d。PLT最低降至 <30× 10 9/L者当恢复 >30× 10 9/L时的中位天数 +17.5d。全部患者移植相关死亡率为零。 6 1例中至今死亡 14例 ,皆死于复发 ,主要为ALL患者。移植相关并发症以发热、肝功能受损最常见。结论　APBSCT联合ABMT治疗恶性血液病的疗效优于常规化疗。     

右归丸对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期和凋亡的影响

目的观察右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓细胞周期和凋亡的影响,探讨其可能造血调控作用机制。方法用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法和流式细胞术（FCM）分别检测右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数以及骨髓细胞周期和调亡的影响。结果右归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、骨髓有核细胞（BMC）数,右归丸高剂量对血小板（PLT）和白细胞（WBC）有明显升高作用。右归丸低、高剂量组均能促进骨髓GO／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化,从而导致G2／M期细胞比例明显升高,增殖指数（PI）也明显升高。中、低剂量组右归丸的骨髓细胞凋亡比例显著下降。结论右归丸可能通过促进骨髓细胞修复受损的DNA,加速通过GI／S和S期监测点,进行增殖和分化;抑制造血细胞的凋亡;调节造血细胞增殖与凋亡之间的平衡等机制,从而促进损伤骨髓造血功能恢复。     

高原低氧条件下大鼠骨髓细胞凋亡及沙利度胺干预效应研究

目的：观察高原低氧条件下大鼠骨髓细胞凋亡情况,并应用沙利度胺进行干预研究,探讨细胞凋亡在慢性高原病发生发展中的作用。方法：TUNEL方法检测高原低氧条件下及其在沙利度胺干预后的大鼠骨髓细胞凋亡指数,与对照组进行比较分析。结果：高原低氧条件下1天时大鼠骨髓细胞凋亡指数减低,低氧1天组为（1.34±0.65）%,对照组为（2.73±0.51）%（P〈0.01）;与低氧21天组比较,沙利度胺干预后细胞凋亡增加,低氧21天组为（2.65±0.98）%,干预组为（4.02±2.13）%（P〈0.05）。结论：高原低氧条件下大鼠骨髓细胞凋亡减少,细胞凋亡可能是慢性高原病的重要发病机制之一。抗血管新生药物沙利度胺有促进高原低氧大鼠骨髓细胞凋亡的作用,可能成为慢性高原病治疗的新手段。