非小细胞肺癌患者外周血调节性T细胞和辅助性T细胞17的平衡表达特征

目的 通过检测辅助性T(Th)细胞17、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)相关细胞因子及特异性转录因子维A酸相关孤核受体(RORγt)和叉头转录因子3(forkhead box P3,FoxP3) mRNA的表达变化,探讨非小细胞肺癌患者外周血Treg和Th17的平衡表达特征.方法 57例非小细胞肺癌患者作为研究对象,25名健康人作为对照.通过荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞(PBMC)中RORγt和FoxP3 mRNA的表达.应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测患者外周血转化生长因子β(transforming gowth factor-β,TGF-β)和Th17相关细胞因子白介素17 A(IL-17A)、IL-6的表达.结果 Ⅳ期非小细胞肺癌患者PBMC的RORγt mRNA水平[(11.30±4.07)×10-4]高于健康组[(7.50±2.75)×10-4]及Ⅰ～Ⅲ期非小细胞肺癌患者[(5.18±2.10)×10-4](q值分别为7.53、6.82,P值均＜0.01).Ⅳ期患者血浆TGF-β水平[(69.52±10.04) pg/ml]明显高于I～Ⅲ期非小细胞肺癌患者[(42.24±16.64)pg/ml]和健康对照组[(24.51±10.96)pg/ml](q值分别为3.91、3.87,P值均＜0.05).血浆IL-6、IL-17A各组间差异无统计学意义[非小细胞肺癌Ⅳ期组、Ⅰ～Ⅲ期组、健康对照组血浆IL-17A含量分别为(25.20±4.58)pg/ml、(18.58±5.92)pg/ml、(18.93±5.24)pg/ml];[非小细胞肺癌Ⅳ期组、Ⅰ～Ⅲ期组、健康对照组血浆IL-6含量(pg/ml)分别为(39.53±11.30) pg/ml]、(42.41±12.38)pg/ml、(38.15±12.09)pg/ml(血浆IL-17A组间两两比较q值分别为1.21、1.09、1.12;血浆IL-6组间两两比较q值分别为1.19、1.76、1.06,P值均＞0.05).结论 晚期非小细胞肺癌中RORγt mRNA表达增强、外周血TGF-β表达增高,Th17以及Treg细胞可能同时参与了非小细胞肺癌的肿瘤远处转移过程,从而影响肿瘤进程.     

Th17细胞和调节性T细胞在系统性红斑狼疮患者中的研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血Th17细胞、调节性T细胞及联系两者的细胞因子白细胞介素(IL)-6的变化及其与病情活动的相关性,探讨Th17细胞、调节性T细胞在SLE发病机制中的作用.方法 收集103例SLE患者及28名健康者,SLE活动性的判断采用SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分方法,其中非活动组(SLEDAI≤9分)患者37例,活动组(SLEDAI＞9分)患者66例.用四色分选流式细胞仪检测外周血Th17细胞、调节性T细胞百分数,用流式细胞仪微球捕获芯片技术(CBA)检测血清IL-6浓度,并分析其与病情活动的相关性.统计学处理采用t检验、秩和检验和Spearman相关分析.结果 ①SLE患者组Th17细胞[(1.2±1.1)%]、IL-6[(35±92)pg/ml]显著高于健康对照组[(0.6±0.4)%、(6±3)pg/ml],而调节性T细胞[(1.6±1.2)%]显著低于健康对照组[(2.6±1.8)%].②SLE活动组Th17细胞[(1.6±1.7)%]显著高于SLE非活动组[(1.0±0.7)%]与健康对照组(P均＜0.05),SLE活动组调节性T细胞[(1.5±1.3)%]显著低于SLE非活动组[(2.1±2.0)%]与健康对照组(P均＜0.05),SLE活动组Th17/调节性T细胞(0.68±0.34)显著高于SLE非活动组(0.24±0.20)与健康对照组(0.13±0.09,P均＜0.05),SLE活动组IL-6[(41±22) pg/ml]显著高于SLE非活动组[(32±28) pg/ml]与健康对照组(P均＜0.05);SLE非活动组与健康对照组之间Th17细胞、调节性T细胞、Th17/调节性T细胞、IL-6差异均无统计学意义(P＞0.05).③Th17细胞百分数与SLEDAI呈正相关,调节性T细胞百分数与SLEDAI呈负相关,Th17/调节性T细胞与SLEDAI呈正相关,IL-6浓度与SLEDAI评分之间呈正相关,Th17细胞与调节性T细胞呈负相关.结论 SLE患者外周血Th17细胞、调节性T细胞及IL-6浓度较健康对照组显著增高,并与疾病活动性密切相关,说明Th17细胞、调节性T细胞可能在SLE的发生、发展中起重要作用.

Abstract：

Objective To study the changes of Th17 cell, regulatory T cell (Treg) and interleukin (IL)-6 in the peripheral blood of patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and their relationship with disease activity. Methods Percentage of Th17 and Treg in the peripheral blood of 103 patients with SLE and 28 healthy volunteers were detected by flow cytometry. The concentration of IL-6 in SLE patients and healthy volunteers was detected by cytometric bead array (CBA). The disease activity of SLE was measured by SLEDAI. SLE patients were divided into two groups: stable SLE (SLEDAI≤ 9, n=37) and active SLE (SLEDAI＞9, n= 66). The change of Th17, Treg, IL -6 and their relationship with disease activity were analyzed. Nonparamentric tests, t -test and spearman correlation were used for statistical analysis. Results The percentage of Th17 cells and the concentration of IL-6 in the peripheral blood in patients with SLE was higher than that in normal controls [respectively for (1.2±1.1)%, (35±92) pg/ml and (0.6±0.4)%, (6±3) pg/ml, P＜0.05]. However, the percentage of Treg in patients with SLE was lower than that in normal controls [respectively for (1.6±1.2)%,(2.6±1.8)%, P＜0.05]. The percentage of Th17, Th17/Treg IL-6 level in active SLE patients was higher than those in inactive SLE and those in normal controls (P＜0.05). However, the percentage of Treg in active SLE was lower than that in stable SLE patients and that in normal controls (P＜ 0.05). The percentage of Th17, Th17/Treg and concentration of IL-6 was positively correlated to disease activity(P＜0.05). But the percentage of Treg had negative correlation with the percentage of Th17 and disease activity (P＜0.05). Conclusion Th17, Treg and serum IL-6 in SLE patients are abnormal and they maybe contribute to the pathogenesis of SLE.     

抗病毒治疗对慢性丙型肝炎患者Treg/Th17细胞比例变化的影响

目的 了解抗病毒治疗对慢性丙型肝炎患者调节性T细胞(Treg) /Th17细胞比例变化的影响.方法 32例慢性丙型肝炎患者进行聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗,20例健康人作为对照.在抗病毒治疗前和随访24周时,采用流式细胞仪检测患者外周血Treg和Th17细胞频率,ELISA法检测患者IL-17的水平,观察Treg/Th17细胞比例变化与患者获得持续性病毒学应答(SVR)的关系.统计学处理采用t检验.结果 抗病毒治疗前患者外周血中Th 17、Treg细胞频率和Treg/Th17比例明显高于对照组[(4.58±0.86)％与(2.48±0.60)％,t=2.399,P＜0.05;(8.58±2.20)％与(4.70±1.30)％,t=7.990,P＜0.01;(1.82±0.40)与(1.60±0.35),t=2.088,P＜0.05].抗病毒治疗后Th 17、Treg细胞频率和Treg/Th17比例分别为(5.35±0.79)％、(6.46±1.29)％、(1.25±0.21).获得SVR患者Th17细胞频率为(6.27±1.15)％,明显高于未获得SVR的(4.05±0.82)％(t=10.103,P＜0.01).获得SVR患者Treg细胞频率和Treg/Th17比例为(4.90±1.39)％、(0.80±0.15),明显低于未获得SVR的(7.42±1.95)％、(1.83±0.42)(t=5.718,8.752,P＜0.01).获得SVR患者IL-17水平为(143.5±31.2)pg/mL,明显高于未获得SVR患者组的(121.4±30.1 )pg/mL(t=2.028,P＜0.05).结论 慢性丙型肝炎患者Treg/Th 17细胞比例高于对照组,抗病毒治疗后Treg/Th17细胞比例下降,获得SVR患者下降更为明显.     

Th17细胞在慢性乙型肝炎及其重症化中的变化

目的 探讨Th17细胞在慢性乙型肝炎(CHB)及其重症化中的变化.方法 收集CHB患者32例(CHB组)、HBV相关慢加急性肝功能衰竭(ACLF)患者44例(ACLF组)及健康对照者20名(健康对照组).应用流式细胞术检测外周血Th17细胞频率,实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞( PBMC)中IL-17 mRNA表达,免疫组织化学检测肝组织内IL-17+细胞表达,ELISA检测血清IL-17水平,并动态观察不同预后ACLF患者血清IL-17水平变化趋势.正态分布数据采用方差分析,非正态数据采用Kruskal-Wallis H检验或U检验.结果 CHB、ACLF和健康对照组外周血PBMC中Th17细胞频率分别为(1.47±0.60)％、(3.20±1.08)％和(0.86±0.43)％;IL-17mRNA分别为4.32±1.77、18.32±8.21和1.00;肝组织内IL-17+细胞分别为(10.6±4.8)、(21.1±6.6)和(0.5±0.2)/高倍视野;血清IL-17分别为(15.88±6.51)、(35.03±11.54)和(10.04±4.06)ng/L(均P＜0.05).中晚期ACLF患者外周血Th17细胞频率和血清IL-17水平均高于早期ACLF患者(均P＜o.01).ACLF患者外周血Th17细胞频率与国际标准化比值(r=0.44.P＜0.01)和终末期肝病模型评分(r=0.44,P＜0.01)均呈正相关,丽CHB患者外周血Th17细胞频率与ALT水平呈正相关(r=0.51,P＜0.01).另外,ACLF存活患者血清IL-17基线水平低于死亡患者,且经内科治疗后逐渐下降,而死亡患者逐渐升高.结论 Th17细胞与其分泌的细胞因子IL-17可能促进了CHB肝脏损伤及其HBV相关ACLF的发生和发展,并且其水平越高可能预示患者短期预后越差.     

Th17细胞和自然杀伤性T细胞在胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血中的变化

目的 研究胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血辅助性T(Th) 17淋巴细胞和自然杀伤性T(NKT)细胞数量和功能的变化.方法 筛选52例慢性丙型肝炎患者(其中合并胰岛素抵抗26例),采用流式细胞仪检测患者外周血Th 17和NKT细胞频率,细胞内染色技术检测细胞内白细胞介素4(IL-4)和IFN-γ染色阳性的NKT细胞的比例,ELISA法检测患者白细胞介素17(IL-17)的水平.数据行t检验.结果 胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血Th17细胞频率、IL-17水平和细胞内IFN-γ阳性的NKT细胞的比例明显高于慢性丙型肝炎患者[分别为(6.60±1.70)％与(4.52±1.05) ％,t=5.205,P＜0.01; (180.0±35.6)与(82.0±17.0)pg/mL,t=12.674,P＜0.01;(39.5±9.1)％与(32.0±6.5)％,t=3.420,P＜0.01];而NKT细胞频率明显降低[(0.42±0.09)％与(0.62±0.14)％,t=9.325,P＜0.01].胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)≥4患者组Th17细胞频率、IL-17水平和细胞内IFN-γ阳性的NKT细胞比例明显高于HOMA-IR＜4患者[分别为(7.35±1.80)％与(5.82土1.47)％,t=3.292,P＜0.01;(243.3±61.2)与(144.7±37.5)pg/mL,t=6.938,P＜0.01;(44.3±10.2)％与(34.7±7.5)％,t=3.866,P＜0.01];NKT细胞频率明显下降[(0.33±0.08)％与(0.52±0.12)％,t=6.718,P＜0.01].结论 随着胰岛素抵抗程度加重,慢性丙型肝炎患者外周血Th-17细胞频率升高,分泌IL-17增加;NKT细胞频率减少,分泌IFN-γ增加,导致炎症反应向Th1漂移.     

Th17活化与乙型肝炎病毒相关性肝病

目的 探讨不同类型乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝病患者外周血中Th17表达以及与HBV相关性肝病的关系.方法 流式细胞仪检测93例HBV相关性肝病患者(包括慢性肝炎21例,肝硬化21例,肝功能衰竭23例,原发性肝癌28例)和15例健康对照组外周血Th17分泌的特征性细胞因子IL-17A;分析IL-17A在不同类型HBV相关性肝病的变化及其与ALT、AST、Tbil、Alb、PT、HBsAg、HBcAg、HBV DNA等指标的相关性;分析IL-17A对患者预后的预测价值.应用SPSS 19.0、MedCalc统计软件进行统计学分析.结果 肝癌患者血清IL-17A[(4.4±1.6)pg/mL]高于慢性肝炎[(3.1±1.1) pg/mL]、肝硬化[(2.5±0.6) pg/mL]、肝功能衰竭[(3.7±0.5) pg/mL]及健康对照组[(2.5±0.5)pg/mL](P＜0.05);肝功能衰竭高于肝硬化和健康对照组(P=0.000);轻、中、重度慢性肝炎患者血清IL-17A差异无统计学意义[分别为(3.0±1.2) pg/mL、(2.9±1.0) pg/mL、(3.5±1.5)pg/mL)](P＞0.05).失代偿期肝硬化[(4.5±1.1) pg/mL]高于代偿期肝硬化[(2.3±0.5)pg/mL] (P=0.000);原发性肝癌伴有远处转移者[(5.1±1.7)pg/mL]高于无转移者[(3.6±0.6) pg/mL](P=0.003);死亡患者血清IL-17A[(3.8±0.5) pg/mL]高于病情好转患者[(3.4±1.4)pg/mL](P=0.036).IL-17A对死亡预测的c-statistic值为0.726;IL-17A与AST、Tbil呈正相关(rs=0.349、0.266,P=0.001、0.009);与ALT、PT之间无明显相关性(rs=0.174、0.127,P=0.094、0.266),与Alb也无相关性(r=- 0.005,P=0.959);与HBsAg呈负相关(rs=-0.582,P=0.000),与HBeAg呈正相关(rs=0.715,P =0.000);而与HBV DNA无明显相关性(rs=0.059,P=0.662).结论 IL-17A在肝功能衰竭、失代偿期肝硬化、肝癌患者中明显升高,与相关反映炎症程度的指标及HBsAg、HBeAg有相关性,Th17可作为反映HBV相关性肝病肝脏炎症损伤程度的指标之一,可以预测患者的顶后.     

Th17细胞与Treg细胞在HBV感染患者中的检测意义

目的了解HBV感染后肝细胞不同程度损伤的患者外周血中辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)的比例变化。方法选取乙型肝炎患者109例,其中无症状HBV携带者32例(ASC组)、慢性乙型肝炎47例(CHB组)、肝细胞癌伴活动性肝炎30例(HCC组)。另选健康体检者25名作为对照组。采用流式细胞术检测外周血Th17细胞和Treg细胞以及CD3+、CD3+CD4+T细胞含量,自动生化分析仪检测血清ALT、AST。结果与对照组Treg细胞比较,ASC组稍高,但差异无统计学意义(t=0.809,P0.05);CHB组、HCC组升高明显(t=2.988、7.569,P0.05),均高于ASC组(t=2.456、7.177,P0.05);HCC组患者外周血Treg细胞比例高于CHB组,差异有统计学意义(t=4.057,P0.05);外周血Treg细胞比例与血清ALT和AST水平呈正相关(r=0.546、0.587,P0.01)。与对照组Th17细胞比较,ASC组略有升高,但差异无统计学意义(t=1.459,P0.05);CHB组和HCC组均明显升高(t=3.910、6.725,P0.05),且HCC组高于CHB组(t=6.580,P0.01);外周血Th17细胞比例与血清ALT和AST水平呈正相关(r=0.546、0.617,P0.01)。在Th17/Treg比值上,外周血Th17细胞和Treg细胞在HBV感染者中呈正相关(r=0.487,P0.05),对照组Th17/Treg比值最低(0.15%±0.14%),CHB组、HCC组升高明显(t=2.015、5.056,P0.05),Th17升高更为明显。结论随着HBV感染患者病情的发展,外周血Th17/Treg细胞比例升高,Th17、Treg细胞构成免疫的平衡状态被破坏,机体受到Th17细胞介导的炎性反应,造成肝细胞损伤。     

HBV相关慢加急性肝衰竭患者Treg细胞、Th17细胞表达特点及其与HBV前C区/BCP区变异的相关性

目的探讨HBV相关慢加急性肝衰竭患者外周血调节性T淋巴细胞(Treg)、辅助性T淋巴细胞(Th)17细胞表达特点及其与HBV前C区/BCP区变异的相关性。方法选择HBV相关慢加急性肝衰竭和肝衰竭前期患者各41例,采用ELISA检测外周血IL-17、TGF-β1、IFN-γ、IL-1β及IL-21水平,流式细胞术检测Treg和Th17表达水平,直接测序法检测HBV前C区及BCP区基因,统计学处理用t检验。结果肝衰竭患者Treg、Th17、IL-17、TGF-β1、IFN-γ、IL-1β水平、HBV变异位点中A1762T/G1764A双突变、G1896A突变比例分别为(9.28±1.12)%、(0.23±0.05)%、(151.83±35.22)pg/mL、(153.24±34.15)pg/mL、(177.61±29.25)pg/mL、(77.46±13.15)pg/mL、22/19、23/18,均高于肝衰竭前期患者的(7.47±0.74)%、(0.19±0.03)%、(134.02±34.39)pg/mL、(130.76±35.13)pg/mL、(130.68±22.87)pg/mL、(60.12±15.67)pg/mL、13/28、12/29,差异均有统计学意义(t’值分别为8.594、4.609、2.316、2.939、8.094、5.429,χ~2值分别为4.038、6.032,均P0.05);而Treg/Th17比值、IL-21水平在两组中差异无统计学意义(t=0.902,P=0.370;t=0.294,P=0.769)。HBV BCP区A1762T/G1764A双突变和G1896A突变的患者Treg、Th17水平均高于野生型,差异有统计学意义(t=2.932,P=0.004;t=2.339,P=0.022;t=3.232,P=0.002;t’=2.990,P=0.004),而Treg/Th17比值在突变型和野生型中差异均无统计学意义(t=0.030,P=0.976;t’=0.272,P=0.787)。结论 Treg细胞及Th17细胞变化,HBV BCP区A1762T/G1764A双突变、G1896A突变可能与HBV相关慢加急性肝衰竭相关。     

系统性红斑狼疮患者外周血白细胞介素-17与辅助T细胞17的检测及其意义

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血白细胞介素(IL)-17蛋白和mRNA水平、辅助T细胞(Th17)细胞表达比例,探讨其临床意义.方法 用酶联免疫吸附试验检测SLE患者及对照者血浆中IL-17的蛋白水平;采用实时荧光定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测2组外周血中IL-17 mRNA表达水平;运用流式细胞术检测SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Th17细胞比例,进一步分析IL-17/Th17细胞与SLE临床实验室指标的相关性.计量资料组间比较采用t检验,相关性分析采用Spearman秩和相关分析.结果 SLE组患者血浆IL-17含量明显高于健康对照组,SLE组患者外周血IL-17 mRNA表达水平[(28.3±11.7)×10-5]高于对照组[(9.8±2.2)×10-5](P均＜0.01).SLE患者PBMCs中Th17细胞比例(2.5±1.5)%及IL-17荧光强度(1937±1022)显著高于对照组[(1.5±0.7)%,(1245±413)],且SLE活动期患者Th17细胞百分比高于非活动组,SLE肾病组Th17细胞比例较无肾病组明显升高(P均＜0.05).SLE患者血浆IL-17水平、Th17细胞数与SLE疾病活动性指数(SLEDAI)呈正相关(r=0.681,P＜0.01;r=0.426,P=0.034).结论 SLE患者体内IL-17蛋白分泌及基因表达水平存在明显异常,外周血Th17细胞比例亦显著升高,且与疾病活动性有明显相关,提示IL-17/Th17细胞可能在SLE发病中起着重要作用.     

急性冠状动脉综合征患者外周血辅助性T细胞和调节性T细胞的检测意义

目的探讨外周血辅助性T细胞(Th17)和调节性T细胞(Treg)平衡在急性冠状动脉综合征(ACS)患者中的变化和意义。方法选择79例冠心病患者分为急性心肌梗死(AMI)组22例、不稳定性心绞痛(UAP)组19例、稳定性心绞痛(SAP)组18例及胸痛综合征(CPS)组20例,用流式细胞术检测外周血中Th17(其占CD3T淋巴细胞比例)及Treg(其占CD4T淋巴细胞比例)的表达,ELISA检测血清Th17及Treg的相关细胞因子白细胞介素(IL)-17和IL-10水平。结果与CPS组和SAP组比较,UAP组及AMI组Th17表达[(2.97±0.62)%和(3.58±1.02)%vs(0.59±0.27)%和(1.37±0.44)%]及血清中IL-17水平显著升高[(41.92±8.89)ng/L和(52.27±9.49)ng/L vs(10.32±2.05)ng/L和(14.73±4.74)ng/L,P0.01],Treg表达及血清中IL-10水平显著降低(P0.01)。SAP组Th17表达及IL-17水平也显著高于CPS组,Treg表达及IL-10水平显著低于CPS组(P0.05,P0.01)。与CPS组和SAP组比较,UAP组和AMI组Th17/Treg比值显著升高(P0.01),SAP组Th17/Treg比值显著高于CPS组(P0.01)。结论 ACS患者外周血中Th17/Treg失衡可能促进了冠状动脉粥样硬化斑块不稳定的进展并进一步诱导ACS的发病。     

Changes in circulating Foxp3+ regulatory T cells and interleukin-17-producing T helper cells during HBV-related acute-on-chronic liver failure

AIM: To longitudinally investigate cytokine gene expression and protein levels in Th17 and Treg cells, to observe T-cell phenotypes during hepatitis B virus (HBV)-related acute-on-chronic liver failure (ACHBLF) and to analyze changes in Th17 and Treg phenotypes during disease progression.METHODS: We measured the expression of seven Th17/Treg differentiation-related genes and serum concentrations of the corresponding cytokines in 18 ACHBLF, 18 chronic hepatitis B (CHB) disease controls and 10 healthy controls (HCs) by real-time quantitative PCR and enzyme linked immunosorbent assay. Peripheral Th17 and Treg cell frequencies were analyzed by flow cytometry.RESULTS: From the onset of ACHBLF, patients presented with a conductive Th17 differentiation cytokine environment accompanied by high Th17 frequency and high serum IL-17 levels, which were sustained throughout the disease course. The Treg-related cytokine IL-2 and Foxp3 were also up-regulated from disease onset, and Foxp3 gene expression showed a gradually increasing trend during ACHBLF. The circular phenotype of Treg and Th17 cells showed changes from the onset of ACHGLF. At disease onset, Th17 frequency increased significantly compared with both CHB and HCs, but Treg cell frequency decreased significantly compared with CHB. During the ACHBLF event, Th17 frequency remained higher compared with HCs, but decreased sharply from the peak point to the recovery point; Treg cell frequency increased gradually during the ACHBLF event. Treg and Th17 cell counts correlated with ACHBLF development; in all patients, serum IL-17 levels significantly correlated with patient serum ALT levels. In survivors, Th17 frequency at the onset point and the Treg to Th17 ratio at the peak point correlated with the patient’s model for end stage liver disease (MELD) plus sodium (MELD-Na) score. The Treg to Th17 ratio and the Th17 frequency at onset were significant predictors of patient survival. Low Treg/Th17 cell ratios at the onset predicted poor survival. Survivors exhibited an initial decrease in the circulating Treg/Th17 ratio from the onset to the peak time, and subsequently displayed a continuous increase.CONCLUSION: Treg and Th17 cells showed changes in genes, protein levels and T cell phenotypes during ACHBLF events. An increased Treg/Th17 ratio was associated with the survival of ACHBLF patients.     

辅助性T淋巴细胞1、2、17在慢性乙型肝炎病毒感染状态中的变化

目的 了解慢性HBV感染中辅助性T淋巴细胞(Th)1、Th2、Thl7产生的主要细胞因子的表达,以反映这3种细胞的功能状态.方法 ELISA测定34例慢性乙型肝炎、31例肝硬化、26例原发性肝癌、22例慢性重型乙型肝炎患者及15例健康对照者m清中的1FN-γ、IL-4和IL-17水平,对数据进行t检验和Pearson相关分析.结果 IFN-γ/IL-4在慢性乙型肝炎患者(1.08±0.66)比健康对照者(2.60±0.60)降低(P＜0.01),在慢性重型乙型肝炎患者(4.81±0.87)比健康对照者升高(P＜0.01);IFN-γ/IL-17在慢性乙型肝炎(1.13±0.85,P＜0.01)、肝硬化(1.69±0.92,P=0.010)、肝癌(1.76±0.84,P=0.011)患者比健康对照者(2.66±0.70)降低,在慢性重型乙型肝炎患者(3.68±0.42)比健康对照者升高(P=0.004);IL-4/IL-17在肝硬化(0.72±0.38,P=0.026)、肝癌(0.63±0.19,P＜0.01)患者比健康对照者(1.04±0.23)降低.结论 慢性乙型肝炎患者IL-4的表达占优势;肝硬化、肝癌患者IL-17的表达占优势;慢性重型乙型肝炎患者IFN-γ的表达占优势.     

Th17淋巴细胞对甲型H1N1流行性感冒病毒清除作用的探讨

目的 探讨甲型H1N1流行性感冒(流感)患者Th17淋巴细胞表型、比例及其与病毒清除之间的关系.方法 将甲型H1N1流感患者70例、季节性流感患者30例、健康对照者68例分别纳入3组.通过细胞内染色,流式细胞技术测定3组人群外周血Th1、Th2、Th17、调节性T细胞(Treg)淋巴细胞比例;ELISA法测定血浆及外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中的IFN-γ、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-6水平;RT-PCR检测鼻咽拭子甲型H1N1流感病毒载量.统计学方法采用单因素方差分析和线性相关分析.结果 甲型H1N1流感患者Th17淋巴细胞比例为(2.740±0.210)%,较健康对照者的(3.443±0.154)%及季节性流感患者的(3.443±0.277)%显著下降(F=4.242,P＜0.05),而3组间Th1、Th2、Treg淋巴细胞比例无明显差异;甲型H1N1流感患者血浆TGF-β水平为(10±8)ng/mL,较健康者的(43±32)ng/mL及季节性流感患者的(18±10)ng/mL显著下降(F=17.72,P＜0.01);甲型H1N1流感患者PBMC中TGF-β水平为(782±736)pg/mL,较健康者的(1462±315)pg/mL及季节性流感患者的(1481±348)pg/mL显著下降(F=5.730,P＜0.01);Th17淋巴细胞比例与病毒清除时间呈负相关(r=-0.38,P=0.02).结论 甲型H1N1流感患者Th17淋巴细胞比例显著降低,且与TGF-β水平密切相关,其降低可能导致机体延长排毒时间.     

从Th1/Th2、Treg/Th17之间的平衡研究轻、中度慢性乙型肝炎患者CD4~+T淋巴细胞的免疫失衡状态

目的从Th17及其相关细胞因子与Th1、Th2、Treg的相互关系,探讨轻、中度CHB患者CD4~+T淋巴细胞的整体免疫失衡状态。方法选择轻、中度CHB患者,与健康志愿者进行比较,观察其外周血各免疫细胞(Th17、Th1、Th2、Treg、Th1/Th2、Treg/Th17)、相关细胞因子(IL-17、IL-6、TGF-β、IFN-γ、IL-4)、主要效应分子(穿孔素、颗粒酶B)和核转录因子(孤独核受体RORγt、Foxp3等)的变化及其相互关系。结果与健康志愿者相比,CHB患者CD8~+T淋巴细胞比例更高,CD4~+/CD8~+比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th1细胞比例更高,Th1/Th2显著升高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th17细胞比例更高,Treg/Th17比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者穿孔素和颗粒酶B的表达更高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者FOXP3、IL17mRNA和RORγt的表达差异无统计学意义(P0.05);与健康志愿者相比,CHB患者TGF-B1、IL-6、IL-17显著增高,差异有统计学意义(P0.01);IFN-γ和IL-4的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论轻、中度CHB患者在免疫细胞及其相关细胞因子、效应分子等各环节,尤其是Treg/Th17比例,均处于严重的免疫失衡状态。     

Th17/Treg细胞因子在乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者中的表达及意义

目的探讨乙型肝炎慢加急性肝衰竭患者(HBV-ACLF)血清中Th17/Treg细胞因子(IL-17/IL-35)的表达及其临床意义。方法收集兰州市第二人民医院2010年12月至2013年12月收治的HBV-ACLF患者共33例(HBVACLF组),选取同期住院的慢性乙型肝炎(CHB)患者42例(CHB组)和20例健康体检者(健康对照组)。采用ELISA法检测3组病例血清中IL-17与IL-35水平,同时检测各项肝功能指标。结果 HBV-ACLF组与CHB组患者IL-17、IL-35水平分别为(137.47±60.81)、(242.39±81.80)、(121.63±57.25)、(212.05±123.98)pg/mL,均高于健康对照组(16.37±8.47)、(33.6±24.63)pg/mL,(t=6.496、6.136、5.857、5.441,P0.01);HBV-ACLF组与CHB组IL-17、IL-35水平差异无统计学意义(t=0.987、1.034,P0.05)。结论 IL-17、IL-35的高水平表达可能与乙型肝炎慢加急性肝功能衰竭的发生有关。     

慢性乙型肝炎患者外周血Treg/Th17比值平衡及其对替比夫定治疗效果的影响

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血调节性T淋巴细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)平衡及其对替比夫定治疗应答的预测能力。方法 2019年2月～2020年3月我院诊治的123例CHB患者和112例乙型肝炎病毒携带者,另选同期健康人95例,给予CHB患者替比夫定治疗48 w,使用流式细胞仪检测外周血Treg细胞和Th17细胞百分比,计算Treg/Th17比值。采用Logistic多因素回归模型分析影响替比夫定治疗应答的因素,应用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)分析Treg/Th17比值预测替比夫定治疗应答的价值。结果 CHB患者外周血Treg细胞和Th17细胞百分比及Treg/Th17比值分别为(4.8±1.1)%、(6.1±1.7)%和(0.8±0.1),显著高于HBV携带者[分别为(1.1±0.3)%、(2.5±0.8)%和(0.4±0.0),P＜0.05]或健康人[分别为(0.9±0.2)%、(2.1±0.6)%和(0.4±0.0),P＜0.05);在治疗12 w、24 w和48 w, CHB患者血清ALT复常率分别为65.9%、77.2%和93.5%,HBV DNA阴转率分别为61.8%、72.4%和82.9%;在治疗48 w末,21例(17.1%)CHB患者不应答;不应答组复治、服药依从性差、血清ALT水平低、基线HBV DNA载量高、Treg细胞百分比高和Treg/Th17比值高的比率显著高于应答组(P均<0.05);Logistic回归分析显示,复治、基线HBV DNA载量、ALT水平和Treg/Th17比值均为影响替比夫定治疗不应答的独立预测因素(OR=3.695、OR=3.232、OR=3.866、OR=4.039,P均<0.05);ROC分析显示,Treg/Th17比值预测替比夫定治疗不应答的最佳截断点为0.83,AUC为0.923(95%CI:0.860～0.963),其灵敏度为81.0%,特异度为87.3%,准确度为91.1%。结论 CHB患者外周血Treg细胞百分比和Treg/Th17细胞比值异常升高,可能影响替比夫定抗病毒治疗效果,其机制值得进一步研究。     

CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞对肝星状细胞增殖及功能的影响

目的 了解CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞在体外对肝星状细胞(HSC)增殖以及功能的影响,初步探讨调节性T淋巴细胞促肝纤维化的机制。方法传代培养HSC LX-2,将免疫磁珠细胞分选(MASC)法分离所得慢性乙型肝炎患者调节性T淋巴细胞与HSC LX-2按不同方式共培养5d,以单独培养的HSC作为对照,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测共培养HSC增殖情况,ELISA法检测上清液中转化生长因子(TGF)β1含量,放射免疫法检测HSC分泌HA、PCⅢ水平。统计学处理采用LSD-t检验。结果 5例调节性T淋巴细胞与HSC比例为1.5∶1时HSC增殖最为明显,10例直接接触共培养与使用Transwell系统共培养调节性T淋巴细胞与HSC吸光度值分别为(0.713±0.032)、(0.735±0.028) cpm,均较对照组的（0.677±0.029）cpm增殖明显(t=5.4003,8.7878;均P＜0.01)。10例直接接触共培养与Transwell组细胞上清液中TGFβ1浓度分别为(781.59±76.45)、（813.53±60.62）pg/mL,显著高于对照组的(722.51±59.66) pg/mL（t=4.0014,6.1653;均P＜0.01）;HA浓度分别为（433.57±27.90）、（445.40±23.73）ng/mL,显著高于对照组的（415.83±19.44）ng/mL（t=3.3124,5.5231;均P＜0.01）;PCⅢ浓度分别为(21.93±1.71)、(23.12±1.87) ng/mL,显著高于对照组的（20.10±1.49）ng/mL(f=4.8082,7.9436;均P＜0.01)。且Transwell组各项结果均显著高于直接接触组(t=3.3875,2.1639,2.2107,3.1354;均P＜0.05)。结论CD4+ CD25+ CD127dim调节性T淋巴细胞可促进共培养的HSC增殖及其HA、PCⅢ的分泌。体外实验证明,CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞具有促进肝纤维化的重要作用。     

HBV特异性抗原对HBV携带者T淋巴细胞免疫功能的影响

目的 通过分析不同类型HBV携带者外周血单个核细胞(PBMCs)的细胞免疫功能,分析HBV抗原对其的影响,探索HBV慢性感染的机制并寻求可能的免疫治疗方法.方法 用不同的抗原和(或)细胞因子刺激培养的无症状HBV携带者PBMCs,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中不同细胞因子的水平;流式细胞术检测PBMCs的细胞表型.对数据进行t检验分析和相关性分析.结果 HBsAg刺激无症状HBV携带者PBMCs后产生的干扰素(IFN)γ为(48.3±19.8)Pg/ml,较健康对照人群低[(196.2±104.3)Pg/ml(t=3.023,P＜0.05)].HBsAg和HBcAg刺激HBeAg阳性患者PBMCs分泌的IFN y水平分别为(50.4±51.6)Pg/ml和(63.2±36.9)pg/ml,明显低于HBeAg阴性组[(86.2±42.3)Pg/ml和(101.4±32.5)pg/ml],t值分别为2.468和3.184,P值均＜0.05;HBeAg阳性患者组分泌白细胞介素(IL)-12 P70明显低于HBeAg阴性组(P＜0.05);补偿外源性IL-12可明显促进HBV携带者PBMCs分泌IFN γ(P＜0.01),IL-12协同HBV抗原可激活CD8+CD45RA+CCR7及CD8+CD45RA CD62L+细胞.结论 HBeAg阳性患者PBMCs分泌IL-12减少,这可能是HBV携带者持续感染的重要原因;外源性IL-12可促进HBV携带者PBMCs中的中枢记忆性T淋巴细胞的免疫功能.

Abstract：

Objective To investigate the effect of HBV antigens and pathological mechanism of chronic HBV infection by analyzing the cellular immune function of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from HBsAg carriers. Methods PBMCs were prepared from individuals with chronic asymptomatic HBV infection and cultured in the presence of different antigens and/or cytokines. The levels of cytokines in culture supernatants were detected by ELISA method. The phenotype of the cells was detected by FACS.Results The levels of IFN γ secreted by PBMCs from HBsAg carriers were (48.3 ± 19.8) pg/ml, significantly lower than that from healthy controls (t = 3.023, P ＜ 0.05＝; The IFN γ produced by PBMCs from HBeAg positive patients due to HBsAg and HBcAg stimulation were (50.4±51.6) pg/ml and (63.2 ± 36.9)pg/ml, significantly lower than that of HBeAg negative patients (t = 2.468 and 3.184, P ＜ 0.05, respectively＝.The IL-12p70 secreted by PBMCs from HBeAg positive patients was also significantly lower than that of HBeAg negative patients (P ＜ 0.05＝; Exogenous IL-12 promoted significantly PBMCs to secrete IFN γ (P ＜0.01＝ and IL-12 combined with HBV antigens activated CD8+CD45RA+CCR7+ and CD8+CD45RA-CD62L+cells. Conclusion IL-12 secreted by PBMCs decreased in HBeAg positive patients, which may be the crucial reason of viral persistence in chronic HBV carriers. Exogenous IL-12 combined with specific HBV antigen could promote the central memory CD8+ T cells to produce IFN γ.