RNA干扰技术抑制类风湿关节炎成纤维细胞COX-2合成

目的 体外合成针对人环氧化酶-2（hCOX-2）的小分子干扰RNA（siRNA）,并转染人人滑膜成纤维细胞,通过比较不同siRNA抑制COX-2 mRNA表达、COX-2蛋白合成以及下游产物PGE2水平,旨在确定特异性阻断人滑膜成纤维细胞COX-2的siRNA.方法 分离、培养和传代人类风湿关节炎（类风关）滑膜成纤维细胞.设计合成4条针对hCOX-2 mRNA siRNA（1#-4#siRNA）,1条随机序列siRNA.设立1#-4#siRNA和随机序列siRNA组（NC）及未转染对照组（CTL组）.应用Lipofect AMINE 2000将上述siRNA分别转染人滑膜成纤维细胞,4 h后各培养孔加入终浓度为100 nmol/L的佛波酯.转染36 h、48 h后,各组提取蛋白质和总RNA,应用RT-PCR检测hCOX-2 mRNA表达水平,通过Western Blot检测hCOX-2蛋白表达水平.采用ELISA方法检测各组上清液PGE2的水平.结果 转染36 h,PCR结果显示,CTL、NC、1#siRNA、2#RNA、3#RNA、4#siRNA、阳性对照HeLa细胞组hCOX-2 mRNA电泳条带密度值分别为1、0.72、0.3、0.25、0.4、0.04、2.1.Western Blot结果提示上述各组hCOX-2蛋白密度值分别为1、1.04、0.52、0.39、0.9、0和2.48.转染48 h后,各组hCOX-2蛋白条带密度值分别为0.05、0.52、0.51、0.9和0.15.转染24 h、48 h和72 h后,4#siRNA组培养上清液PGE2的水平较其他各组低.结论 4#siRNA能有效抑制人滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达和COX-2蛋白的合成,且上清液中PGE2水平最低,证实4#siRNA能特异性阻断COX-2在滑膜成纤维细胞表达.     

紫草素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的观察紫草素对人滑膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响,探讨紫草素可能的免疫抗炎作用机制。方法分离并培养人膝关节滑膜成纤维细胞,各加入IL-1β、TNF-α15 ng/mL,体外模拟人类风湿关节炎滑膜细胞。以塞来昔布作阳性对照,进行紫草素(浓度为5～80μg/L)干预,分别作用24、48、72 h后终止培养。用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达情况。结果紫草素对滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA的表达,对浓度无明显依赖性(P=0.089),用药时间上有显著统计学意义(P<0.0001)。塞来昔布抑制滑膜成纤维细胞COX-2mRNA水平的表达亦无明显浓度依赖性(P=0.051),而与用药时间显著相关(P<0.0001)。紫草素对滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达的影响与塞来昔布相比,其抑制作用无明显差异。结论紫草素可通过抑制COX-2 mRNA基因表达,减少炎症性细胞因子的产生而发挥其对类风湿关节炎的免疫抗炎作用,为开发紫草素成为COX-2抑制剂提供一定的实验基础。     

白介素-18和前列腺素E2在骨性关节炎滑膜细胞中的表达及相互关系

目的 了解白细胞介素18(IL-18)和前列腺素E2(PGE2)在骨性关节炎(OA)患者滑膜细胞中表达及其相关性.方法 取材OA患者(n=30)关节滑膜组织,分别原代培养滑膜细胞,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测滑膜细胞培养上清液中IL-18和PGE2蛋白的表达水平.结果 ELISA检测OA患者细胞培养上清液中IL-18的含量为(51.559±27.614)pg/ml,PGE2的含量为(327.036±333.561)pg/ml,统计学分析表明,30例患者膝关节滑膜细胞上清液中IL-18和PGE2存在显著正相关关系(r=0.863,P<0.01).结论 在OA病变过程中,IL-18的增高可能引起PGE2含量的增高,两者相互作用,从而在OA的发病机制中发挥重要作用.     

A novel tumor-suppressor candidate gene-ndr2 is differentially expressed between osteoarthritis synovium cells and rheumatoid arthritis synoviuni fibroblasts

Objective: To test whether the novel tumor-suppressor candidate gene-ndr2 is also differentially expressed between osteoarthritis synovium cells (OASC) and rheumatoid arthritis synovium fibroblasts (RASF), and whether ndr2 can suppress the growth of RASF in vitro. Methods: Dot blotting, cell culture and gene transfection, cell cycle analysis techniques were applied to investigate the effect of ndr2 on the cell phenotype and cell cycles. Results: ndr2 is expressed in OASC but absent in RASF. Transient transfection of ndr2 into RASF can suppress the growth of RASF from phenotype observation. Cell cycle analysis showed that apoptotic peaks can be detected in RASF cells transfected with ndr2 gene. Conclusion: Novel tumor suppressor candidate ndr2 is not only differentially expressed between OASC and RASF but also can induce the apoptosis of RASF in vitro.     

类风湿关节炎和骨关节炎患者膝关节置换术后并发症的临床对照研究

目的 :对比骨性关节炎(osteoarthritis,OA)和类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者膝关节置换术后并发症发生情况.方法 :选取67例RA和78例OA患者,均行膝关节置换术治疗,观察并记录患者的术前,术后3d和5d的VAS评分、ROM评分,随访2年期间并发症发生情况,对比OA和RA患者膝关节置换术后并发症发生情况.结果 :与术前相比,RA组术后5d的VAS评分明显降低,OA组术后3d,5d的VAS明显降低,OA组术后3d,5d的VAS评分明显低于RA组.术前两组ROM评分无统计学差异,与术前相比,RA组术后3 d的ROM评分明显降低,OA组术后5d的ROM评分明显增加,OA组术后3d,5d的ROM评分明显高于RA组,随访2个年期间,RA组2年内翻修率和伤口并发症发生率均明显高于OA组,关节失稳,假体松动,下肢深静脉血栓发生率比较,无统计学差异.两组主要伤口并发症为伤口渗液,发生率相比无统计学差异.其他3种并发症发生率相比,也没有统计学差异.结论 :骨关节炎患者经人工膝关节置换术治疗后,并发症发生较少,膝关节活动较术前改善明显,疼痛度减轻.     

岗松中抗前列腺素E2受体4拮抗剂筛选及其体内抗类风湿性关节炎作用

筛选岗松中抗前列腺素E2受体4(EP4)的拮抗剂和探讨抗类风湿关节炎的作用.体外建立HEK293T-EP4细胞拮抗剂筛选模型,采用均相时间分辨荧光(HTRF)技术筛选岗松活性成分.SPF级别ICR小鼠,雄性,随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组、岗松提取物BF-2(100、50和25 mg/kg)组,体内建立胶原诱导型类...     

醋氯芬酸治疗类风湿性关节炎和骨关炎的临床观察

目的观察醋氯芬酸治疗类风湿性关节炎(RA)和骨关节炎(OA)的疗效和安全性.方法将126名患者随机分为治疗组64例,其中RA36例,OA28例,每天早晚各服醋氯芬酸0.1 g;对照组62例,其中RA35例,OA27例,每天早晚各服布洛芬缓释胶囊0.3 g.疗程均为4周.分别观察治疗前后临床指标和炎性实验的变化以及不良反应的发生.结果醋氯芬酸和布洛芬治疗RA 4周后,疼痛程度,压痛关节数,关节压痛指数,关节肿胀指数,握力,晨僵时间,血沉均显著改善,醋氯芬酸的总有效率为77.8%.两者治疗OA 4周后,膝关节活动痛、15 min行走时间、日常活动能力及患者综合评估均有显著改善,醋氯芬酸的总有效率为71.4%.醋氯芬酸对RA和OA的疗效与布洛芬相比无显著性差异.醋氯芬酸以胃肠道反应为主的不良反应发生率为14.3%,低于布洛芬(25.9%).结论从临床角度而言醋氯芬酸对RA和OA均为安全、有效的治疗药物.     

骨性关节炎与类风湿关节炎患者单侧膝关节置换术后围术期效果比较

目的 对比骨性关节炎（osteoarthritis,OA）与类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者单膝关节置换的围术期治疗效果。方法 2012年9月-2013年8月于本院骨科行单侧人工膝关节置换的骨性关节炎患者65例,类风湿关节炎患者43例,采用视觉模拟评分法（visual analogue scale,VAS）,关节活动度（range of motion,ROM）对两组患者进行术前、术后3 d、术后5 d评价,并比较两组患者住院时间、围术期并发症的差异。应用美国纽约特殊外科医院（Hospital for Special Surgery,HSS）膝关节评分对患者进行术前、术后1个月、3个月的功能评定。结果 术前两组各项评分差异无统计学意义（P〉0.05）,术后3 d、5 d OA组的ROM高于RA组（P〈0.05）,VAS评分低于RA组（P〈0.05）。RA组引流量、患肢膝上10 cm周径、住院时间、伤口并发症多于OA组（P〈0.05）。RA组术后1个月、术后3个月HSS评分低于OA组（P〈0.05）。结论 与骨性关节炎患者相比,类风湿关节炎患者人工膝关节置换术后围术期效果差。     

右旋布洛芬片的Ⅱ期临床研究

目的评估右旋布洛芬片治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和骨关节炎(osteoarthritis,OA)的疗效及安全性。方法通过多中心及随机双盲对照试验,试验组给予右旋布洛芬0.4～0.6g/次,每日2次,对照组给予布洛芬0.4～0.6g/次,每日2次,疗程4周。结果右旋布洛芬组对RA和OA的总改善率,总有效率及关节疼痛,肿胀的改善率均高于布洛芬组,且2组不良反应发生率比较差异无显著性。结论右旋布洛芬治疗RA、OA疗效优于布洛芬,不良反应未增加,用药较为安全。     

甲氨蝶呤对类风湿关节炎滑膜细胞增生及细胞周期的影响

目的研究甲氨蝶呤(MTX)对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增生及细胞周期的影响,揭示MTX治疗RA的机制。方法应用MTS/PMS比色法和流式细胞术分别测定MTX处理和未处理RA患者滑膜细胞的细胞增生水平和细胞周期。结果加入不同浓度MTX(0.2~2.0 μmol/L),RA患者滑膜细胞接种后第4天起增生水平均显著低于未处理的RA患者滑膜细胞(P<0.05);细胞周期分析显示加入不同浓度MTX(0.2~2.0 μmol/L)后第5、8天,RA患者滑膜细胞停留在G1期的比例要比未处理的RA患者滑膜细胞明显增加(P< 0.05),而S、G2期的细胞比例比未处理的RA患者滑膜细胞则明显减少(P<0.05);MTX能以剂量依赖性明显抑制滑膜细胞的增生水平。结论MTX在治疗RA时,主要起到对RA患者滑膜细胞的增生及增生相关病理过程的抑制。     

RNA干扰对人环氧化酶-2合成以及对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的分析siRNA对前列腺素E2（PGE2）、白介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF—α）和血管内皮生长因子（VEGF）合成的影响。方法设计4条（1^#-4^#）环氧化酶-2（hCOX-2）mRNA的小分子干扰RNA（siRNA）,设立空白阴性（CTL）和1条随机序列（NC）对照。应用LipofectAMINE 2000将siRNA转染入滑膜成纤维细胞（RASF）,4h后,再加入100nmol/L的佛波酯。应用RT-PCR和Western印迹分别检测hCOX-2 mRNA和蛋白表达水平。采用ELISA法检测各组上清液中致炎因子水平。结果转染48h后,NC、1^#-4^#siRNA组与CTL组mRNA条带吸光度比值分别为0．72、0,3、0．25、0．4、0．04。转染36和48h后,各组与CTL组hCOX-2蛋白吸光度比值分别为1．04、0、52、0．39、0．9、0和1．05、0．52、0．51、0．9、0．15;4^# siRNA组上清液PGE2、IL-1β、TNF—α、IL-6和VEGF水平较其他各组为低,且与其他处理组相比死亡细胞率差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论4^#iRNA组能有效抑制COX-2mRNA和蛋白表达,其上清液中致炎因子水平最低,死亡细胞较苴他各组无明显增加．     

类风关1号对佐剂关节炎大鼠滑膜VEGF和COX-2表达的影响

[目的]探讨类风关1号对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜血管内皮细胞生长因子(VEGF)和环氧化酶2(COX-2)表达的影响。[方法]建立AA大鼠模型,并给予类风关1号灌胃4周,以免疫组化法检测滑膜组织中VEGF和COX-2的表达。[结果]灌胃4周后类风关1号组大鼠膝关节滑膜VEGF和COX-2表达水平明显降低,与AA模型组及雷公藤多苷组相比差异意义有显著性(P<0.01)。[结论]类风关1号可明显抑制滑膜组织中VEGF和COX-2的表达,减轻关节病理性血管增生。     

肝癌细胞前列腺素E2受体表达和分布的研究

目的：基于肝癌细胞（肝细胞癌细胞和胆管上皮癌细胞）对PGE2的不同反应性，研究Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1肝癌细胞株前列腺素E2受体的表达类型和分布定位。方法：体外培养肝细胞癌细胞株（Hep3B，HuH7）和胆管上皮癌细胞株（SG231，HuCCT1）。分别给予不同浓度的外源性PGE2处理，以WST-1细胞增殖实验检测肿瘤细胞增殖率：以RT-PCR实验检测上述细胞4种PGE2受体（EP1、EP2、EP3和EP4）的mRNA表达情况；采用上述肝癌细胞的细胞涂片或细胞爬片进行荧光免疫细胞化学实验．于荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察上述4种EP受体蛋白的表达和定位分布。结果：WST-1细胞增殖实验结果显示PGE1可以促进Hep3B和HuH7细胞的生长，但对胆管上皮癌细胞（SG231、HuCCT1细胞）则表现为生长抑制作用；RT-PCR和荧光免疫细胞化学实验结果表明Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1细胞株均有4种EP受体的表达；激光共聚焦结果显示4种EP受体不仅有胞浆，胞膜定位。而且部分在胞核也有表达。其中EP4受体的表达主要定位于细胞核。结论：Hep3B、HuH7、SG231和HuCCT1，4种肝癌细胞株均可以表达EP1、EP2、EP3和EP4受体。且受体的细胞内定位不同。肝癌细胞对前列腺素E2的反应性可能与EP受体的定位以及不同的细胞内信号转导通路激活有关。     

骨关节炎、类风湿关节炎的关节滑液和血清中基质金属蛋白酶-1、2、3和9的含量及意义

目的探讨骨关节炎(OA)和类风湿关节炎(RA)的关节滑液和血清中基质金属蛋白酶(MMPs)含量的变化。方法采集17例非OA、RA患者(对照组)、33例OA患者(OA组)和10例RA患者(RA组)血清及关节滑液标本,采用酶联免疫吸附试验检测标本中MMP-1、2、3及9的含量。结果OA、RA组血清中MMP-2、3及9的含量分别为(17．1±6．9)、(3．6±0．2)、(2．7±0．4)ng／mL和(91．2±23．9)、(7．3±0．5)、(2．7±0．5) ng／mL,均显著高于对照组[(2．1±0．3)、(1．4±0．4)和(0．5±0．3)ng／mL,P值均<0．01];而MMP-1的含量分别为(20．7±7．8)和(19．0±2．8)ng／mL,与对照组[(18．7±5．2)ng／mL]的差异无统计学意义(P值均> 0．05)。OA、RA组关节滑液中MMP-1、2、3和9的含量分别为(557．4±41．5)、(1 246．0±42,0)、(384．3±44．6)、(15．2±1．4)ng／mL和(644．4±27．3)、(2 470．0±209．0)、(429．1±34．6)、(20．9±1．0)ng／mL,均显著高于对照组[(106．2±32．9)、(112．7±18．6)、(33．0±8．7)和(0．6±0．3)ng／mL,P值均<0．01]。RA组血清中MMP-2、3的含量均显著高于OA组(P值均<0．01),而两组血清中MMP-1、9含量的差异均无统计学意义(P值均>0．05);RA组关节滑液中MMP-1、2、3和9的含量均显著高于0A组(P值均<0．01)。结论OA、RA患者的关节滑液及血清中部分MMPs含量升高,且RA患者的MMPs含量高于OA患者。     

类风湿关节炎患者血清及滑液中DNase I活性检测及与炎症的相关性

目的探讨脱氧核糖核酸酶Ⅰ（DNase Ⅰ）在类风湿关节炎中潜在的致病作用。方法辐射状酶扩散法测定83例类风湿关 节炎（RA）患者和60名健康对照者血清DNaseⅠ活性以及27例RA患者和38例其他炎症性关节炎患者滑液（SF）DNaseⅠ活性, PicoGreen试剂盒测定游离DNA（cfDNA）水平,并分析两者与RA患者临床指标的相关性。结果RA组血清DNaseⅠ活性显著 低于健康对照组［（0.3065±0.1436）U/mL vs（0.4289±0.1976）U/mL, P<0.001］;血清DNaseⅠ活性与ESR（r=-0.2862, P= 0.0122）、CRP（r=-0.2790, P=0.0184）和中性粒细胞计数（r=-0.287, P=0.011）呈负相关。SF DNaseⅠ活性在RA、强直性脊柱炎组 和痛风性关节炎组中几乎都是阴性的。RA组患者SF cfDNA 水平明显高于骨性关节炎组患者［（100.81±142.98）μg/mL vs （18.98±31.40）μg/mL, P=0.002］;与强直性脊柱炎组（45.85±47.67 μg/mL, P=0.428）和痛风性关节炎组（162.95±97.49 μg/mL, P=0.132）无显著性差异;炎症性关节炎患者SF cfDNA水平与ESR（r=0.4106, P=0.0116）和CRP（r=0.5747, P=0.0002）呈显著正 相关。结论DNase I活性受损可能是中性粒细胞胞外网状陷阱形成增强的原因并在RA发病机制中起作用。     

奈帕芬胺对角膜组织中前列腺素E2的作用研究

目的通过复制兔眼前节缺血（ASI）模型,检测模型角膜中前列腺素E2（PGE2）的表达,探讨奈帕芬胺在角膜组织中对PGE2 的抑制作用。方法将54 只已排除眼疾的健康雄性纯种大耳白兔随机分成对照组（18 只兔,36 只眼）和手术组（36 只兔,72 只眼）。手术组36 只兔的左眼（36 只眼）为缺血组,右眼（36 只眼）为治疗组。不同时间在裂隙灯显微镜下观察各组角膜的变化,然后取角膜做病理学检查和免疫组织化学检查,观察各时间PGE2 在角膜中的表达。结果缺血组各时间点PGE2 表达增高（p <0.05）,治疗组PGE2 表达较缺血组下降（p <0.05）。结论在ASI 的发病过程中,PGE2 发挥重要作用,奈帕芬胺在角膜组织中可有效抑制PGE2。     

双手类风湿性关节炎早显X线征象探讨

文献上对早期类风湿性关节炎 X 线诊断认识并不一致。本文根据双手骨关节 X 线改变及软组织 X 线改变两组征象研究了44例早期类风湿性关节炎,并与同一时期作 X 线检查的系统性红斑狼疮22例、慢性肾衰40例、痛风8例及骨关节病18例作了比较。我们归纳的早期 X 线征象为:关节旁骨质疏松;软组织肿胀;关节边缘侵蚀及关节间隙狭窄。     

Follicular fluid levels of prostaglandin E2 and the effect of prostaglandin E2 on steroidogenesis in granulosa-lutein cells in women with moderate and severe endometriosis undergoing in vitro fertilization and embryo transfer

Background  The mechanisms of endometriosis with infertility have not been fully studied. The present study aimed to assess the follicular fluid (FF) levels of prostaglandin E2 (PGE2), which plays a critical role within the ovary, and to investigate the effect of PGE2 on steroidogenesis in granulosa-lutein cells (GLCs) from women with and without endometriosis.

Methods  Thirty-three women with laparoscopically documented endometriosis and 40 controls undergoing in vitro fertilization (IVF) were studied. We assayed the concentrations of PGE2 in FF, the production of E2 and progesterone in FF and in culture medium, and the expression of steroidogenic acute regulatory protein (StAR) and CYP19A1 in GLCs with the intervention of PGE2.

Results  PGE2 and progesterone concentrations were increased and displayed positive correlation in endometriotic FF. PGE2 induced the expression of StAR and the production of progesterone in GLCs from women with endometriosis, and the expression of StAR and the production of progesterone were increased in GLCs from women with endometriosis. However, there were no significant effects of PGE2 on promoting the production of E2 or the expression of CYP19A1 in GLCs. Moreover, the production of E2 and the expression of CYP19A1 in GLCs from women with endometriosis were significantly decreased compared to the controls.

Conclusions  PGE2 concentrations are increased in endometriotic FF, along with concomitant increases in progesterone and StAR. In contrast, the E2 and CYP19A1 are decreased in GLCs, which may delay the development of the follicles and cause an imbalance in the follicular steroid hormone levels. These changes may have close relationship with endometriosis-associated infertility.

     

类风湿关节炎患者外周血和关节滑液中TNF-a水平分析及意义

目的:通过测定类风湿关节炎(RA)患者的外周血和关节滑液中TNF-a浓度变化,探讨其在RA发病过程,尤其是在关节滑膜组织炎症病变时的免疫病理作用。方法:于2004年8月～2006年12月间,收集了RA患者50例和36例健康人的外周血清和膝关节滑液标本,采用双抗体夹心酶免疫吸附法(ELISA)分析TNF-a浓度。对28例RA患者进行有效治疗后,再进行测定TNF-a浓度,观察其变化。结果:RA患者外周血中TNF-a水平比健康者明显升高(P<0.001),且膝关节滑液中TNF-a水平比外周血中的明显提高(P<0.001)。经过统计学分折发现TNF-a水平与外周血WBC,ESR和C反应蛋白之间无相关性。经过有效治疗后,RA患者外周血中TNF-a水平比治疗前显著下降(P<0.001)。结论:RA患者外周血和关节滑液中TNF-a水平明显升高,TNF-a可能直接参与了关节滑膜组织的炎症病变反应。