肝细胞癌组织中血管内皮生长因子-C的表达

目的:探讨肝细胞癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)- C的表达。方法:应用免疫组织化学方法检测 43例肝细胞癌及癌旁组织,24例正常肝组织中VEGF -C的表达。结果:肝癌、癌旁和正常肝组织中VEGF -C阳性表 达率分别为72.1%(31/43)、23.3%(10/43)和12.5%(3/24),肝癌组织与癌旁组织VEGF -C表达率差异有统计学 意义(χ2=5.82,P<0.05)。癌组织中VEGF -C的表达与门静脉癌栓、肝门淋巴结转移和复发有关(P<0.05)。结 论:VEGF -C与肝细胞癌侵袭转移相关。     

miR-30c减轻肝细胞肝癌的侵袭与转移

目的:观察miR-30c/snail在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达并探讨其在肝癌侵袭中的作用?方法:定量PCR检测肝癌及肝癌细胞系中miR-30c/snail的mRNA表达水平,通过免疫组织化学和Western blot分别检测肝癌及肝癌细胞系中snail的蛋白表达水平,并在肝癌细胞株中转染miR-30c模拟物或抑制物,分析其对肝癌细胞侵袭的作用?结果:与无脉管转移组相比,miR-30c在有脉管转移组的HCC组织中表达明显下调,同时在高转移肝癌细胞株MHCC-97H中也有相似的结果?转染miR-30c模拟物可减少snail的表达,并减少MHCC-97H细胞的侵袭性,然而,转染miR-30c抑制剂则增加snail的蛋白水平,增加HepG2细胞的侵袭力?结论:上调miR-30c的表达通过直接抑制snail,可减弱HCC的侵袭性?一种新的针对miR-30c的治疗策略可能有利于伴侵袭转移的HCC患者?     

黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响

目的探讨黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响及其机制.方法应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞,不同浓度黄芩甙处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其侵袭力、粘附力,细胞迁移实验测定细胞运动能力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞MMP2、TIMP2、integrin β1、E-cd表达的改变.结果黄芩甙能明显抑制肝癌细胞侵袭力、粘附力及运动能力(P＜0.05),随浓度提高作用增强.形态学观察发现,黄芩甙处理组细胞形态较圆,伪足数目较少.黄芩甙处理组MMP2阳性表达细胞减少,TIMP2阳性表达细胞增多,MMP2/TIMP2比值下降;integrin β1表达增加,E-cd的表达则减低(P＜0.05).结论黄芩甙能抑制肝癌BEL-7402细胞侵袭与转移,其机制可能与直接抑制细胞迁移运动,抑制细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2表达,促进TIMP2表达及抑制粘附分子E-cd的表达,促进integrin β1表达有关.     

组织因子和基质金属蛋白酶-2在肝细胞癌侵袭转移中作用

目的：研究肝细胞肝癌组织中的组织因子（TF）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达,对肝癌侵袭转移的作用及两者之间的关系。方法：用免疫组织化学EnVisionTM法检测肝癌56例及其癌旁肝组织标本中TF和MMP-2的表达。结果：（1）肝癌组织中TF及MMP-2的阳性表达均明显高于癌旁组织（P〈0.05）;（2）癌静脉浸润、肝内外转移、无或包膜不完整组织中TF和MMP-2的表达显著高于相应对照组（P〈0.05）;（3）肝癌中TF表达和MMP-2表达呈正相关。结论：HCC中TF及MMP-2表达明显增高,且与癌侵袭转移有关。     

Expression of Vascular Endothelial Growth Factor in Hepatocellular Carcinoma and Its Relationship to Tumor Growth and Metastasis

Vascularendothelialgrowthfactor(VEGF)isanewlydiscoveredgrowthfactorwhichmayinducetumorangiogenesisll].Inthepresentstudy,immunohistochemistryandNorthernblotwereusedtoinvestigatetheVEGFexpressioninhepatocellularcarcilloma(HCC)withtheattempttounderstanditsrelationshiptothemetastasls.IMATERIALSANDMETHODS1.1TissueSamplesThespecimensinvestigatedwereobtainedfromZII)atientswithHCCoperatedattheaffiliatedhospitalsofouruniversity.Nineofthepatientsshowedclinicallymetastasiswithportalveintu…     

逆转录病毒介导shRNA抑制Mig-7基因对人肝癌细胞血管生成拟态及体外侵袭转移的抑制作用

目的探讨逆转录病毒介导的短发夹RNA（shRNA）干扰迁移诱导基因7（Mig-7）对肝细胞癌（HCC）细胞血管生成拟态 （VM）形成及体外侵袭转移能力的影响。方法设计2条Mig-7 mRNA寡核苷酸序列（Mig-7 shRNA-1,Mig-7 shRNA-2）和1条 作为负对照的无关序列（Mig-7 shRNA-N）。构建Mig-7shRNA 逆转录病毒表达载体质粒,并将要接受转染的人肝癌细胞 MHCC-97H分为6组：转染Mig-7 shRNA-1组;转染Mig-7 shRNA-2组;转染Mig-7 shRNA-N组;转染空载质粒组（Vector）;重 组人血管内皮抑素（ES,商品名：恩度）组;MHCC-97H细胞对照组（Control）。半定量PCR、Western blot检测其对Mig-7表达的 影响;三维细胞培养观察其对VM形成的影响;细胞间粘附实验、Transwell侵袭实验及迁移实验观察其对细胞粘附、侵袭及迁移 能力的影响。结果转染后,Mig-7 shRNA-1组与Mig-7 shRNA-2组中Mig-7 mRNA与蛋白的表达、MHCC-97H细胞形成VM 能力、细胞侵袭、迁移能力明显减低（P<0.05）,细胞间粘附能力明显增加（P<0.05）;Mig-7 shRNA-N 组、Vector 组、ES 组中 MHCC-97H细胞Mig-7的表达、VM形成、细胞间粘附、迁移、侵袭能力较MHCC-97H细胞组均无明显变化。结论逆转录病毒 介导的shRNA能够有效下调Mig-7的表达并明显抑制HCC细胞VM形成能力及侵袭转移能力,增加细胞间的粘附作用;ES对 HCC细胞的Mig-7表达、VM形成、侵袭转移及粘附能力无明显影响。     

KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响

目的探讨KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响,从而推测KAI1基因影响MHCC97-H肝癌细胞侵袭转移的机制.方法采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正、反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘附力.结果在纤维连接蛋白(fibronectin,FN)裱衬表面,利用微管吸吮系统测得的各组肝癌细胞的粘附力分别为MHCC97-H-S组(678.4±101.8),MHCC97-H-AS组(1 083.6±113.8),MHCC97-H-pCI组(853.0±105.4)及MHCC97-H亲本细胞组(834.6±130.5)(单位为10-10N,细胞数为25).与MHCC97-H亲本细胞组比较,MHCC97-H-S组细胞对FN的粘附力显著下降(P＜0.01),MHCC97-H-AS组细胞对FN的粘附力显著增加(P＜0.01),而MHCC97-H-pCI组细胞对FN的粘附力无明显变化(P＞0.05).结论KAI1基因可能降低肝癌细胞对细胞外基质FN的粘附力,从而抑制转移的初始步骤,进而抑制MHCC97-H肝癌细胞的侵袭和转移.     

JWA抑制人肝癌细胞的黏附和迁移侵袭潜能

探讨JWA蛋白在人肝癌细胞黏附和迁移侵袭过程中的作用?方法:应用小干扰RNA下调低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L中JWA蛋白表达水平,MTT法检测MHCC97L增殖;应用细胞小室检测MHCC97L在JWA不同蛋白水平时的迁移及侵袭潜能变化;黏附试验检测MHCC97L细胞黏附能力变化?结果:研究发现人肝癌细胞株MHCC97L中的JWA表达水平下降后,肝癌细胞迁移及侵袭能力明显增强,细胞对细胞外基质纤维连接蛋白的黏附力增加?结论:RNA干扰JWA引起肝癌细胞的JWA蛋白表达水平下降,导致肝癌细胞的黏附?迁移及侵袭能力增强,结果提示JWA可能抑制人肝癌细胞侵袭和转移?     

Cripto-1在肝癌中的表达及与侵袭转移的关系

目的：检测 Cripto-1蛋白在不同转移潜能的人肝癌细胞株、肝癌及相应癌旁组织中的表达水平,探讨 Cripto-1蛋白的表达与肝癌侵袭转移能力之间的关系。方法采用Western blot 方法检测不同转移潜能的人肝癌细胞株、肝癌及相应癌旁组织中 Cripto-1的蛋白表达水平;采用免疫组织化学染色方法检测肝癌组织中 Cripto-1蛋白的表达并探讨与临床病理参数之间的关系。结果与癌旁肝组织相比,肝癌组织中 Cripto-1的蛋白表达水平明显升高。Cripto-1蛋白在肝癌细胞株中的表达水平与细胞株的侵袭潜能呈正比。与正常肝组织（0％）比较,Cripto-1在肝癌组织（64．6％）中高表达,且与肿瘤分化程度、血管侵犯和转移状态有相关性（P ＜0．05）。结论 Cripto-1蛋白在肝癌中高表达,并且其表达量与肝癌的侵袭转移能力密切相关。     

LRG1基因在肝细胞癌中的表达情况研究

目的：研究富亮氨酸重复1（leucine-rich-alpha-2-glycoprotein 1,LRG1）在人肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）中的表达情况,探讨其与 HCC 的相关性。方法：选取6个肝癌细胞系及30对连续的新鲜冰冻HCC 组织及其相应的癌旁非瘤肝组织标本,采取 qRT-PCR 检测 LRG1mRNA 的表达;Western blot 检测 LRG1的蛋白表达。结果：肝癌细胞系中 LRG1的 mRNA、蛋白的表达水平明显高于正常肝细胞系 LO2,LRG1的表达量与肝癌细胞系的侵袭转移能力正相关,新鲜冰冻组织中 LRG1的 mRNA、蛋白的表达水平明显高于相应的癌旁非瘤肝组织。结论：LRG1的高表达与 HCC 的恶性程度密切相关,对其研究可用于研发新的靶向药物。     

肾母细胞瘤过表达基因促进肝癌细胞的侵袭与转移

目的:探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV CCN3)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用?方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中的CCN3的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中CCN3的mRNA表达水平,Western blot检测肝癌及癌旁组织中CCN3蛋白的表达量;通过肝癌细胞过表达CCN3分析CCN3蛋白对肝癌细胞转移的作用;运用Transwell侵袭实验和划痕迁移实验研究CCN3过表达对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响?结果:50对样本中有39对CCN3的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,Western blot提示肝癌组织中CCN3蛋白表达量高于癌旁组织?体外肝癌细胞的功能试验中,过表达CCN3能促进MHCC-97H?SMMC-7721细胞的侵袭与转移?结论:CCN3在肝癌组织中高表达,过表达CCN3能促进肝癌的侵袭与转移,CCN3发挥作用机制的研究能为肝细胞肝癌的治疗提供新的思路?     

Inhibition of connective tissue growth factor overexpression decreases growth of hepatocellular carcinoma cells in vitro and in vivo

Background  We have previously found that connective tissue growth factor (CTGF) is highly expressed in a rat model of liver cancer. Here, we examined expression of CTGF in human hepatocellular carcinoma (HCC) cells and its effect on cell growth.

Methods  Real-time PCR was used to observe expression of CTGF in human HCC cell lines HepG2, SMMC-7721, MHCC-97H and LO2. siRNA for the CTGF gene was designed, synthesized and cloned into a Plk0.1-GFP-SP6 vector to construct a lentivirus-mediated shRNA/CTGF. CTGF mRNA and protein expression in HepG2 cells treated by CTGF-specific shRNA was evaluated by real-time PCR and Western blotting. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay was utilized to evaluate the growth effect, and a colony formation assay was used for observing clonogenic growth. In vivo, tumor cell proliferation was evaluated in a nude mouse model of xenotransplantation. Statistical significance was determined by t test for comparison between two groups, or analysis of variance (ANOVA) for multiple groups.

Results  Immunohistochemical staining of CTGF was seen in 35 of 40 HCC samples (87.5%). CTGF was overexpressed 5-fold in 20 HCC tissues, compared with surrounding non-tumor liver tissue. CTGF mRNA level was 5–8-fold higher in HepG2, SMMC-7721 and MHCC-97H than in LO2 cells. This indicated that the inhibition rate of cell growth was 43% after knockdown of CTGF expression (P <0.05). Soft agar colony formation assay showed that siRNA mediated knockdown of CTGF inhibited colony formation in soft agar of HepG2 cells (P <0.05). The volume of tumors from CTGF-shRNA-expressing cells only accounted for 35% of the tumors from the scrambled control-infected HepG2 cells (P <0.05).

Conclusions  CTGF was overexpressed in human HCC cells and downregulation of CTGF inhibited HCC growth in vitro and in vivo. Knockdown of CTGF may be a potential therapeutic strategy for treatment of HCC.

     

组织因子在结肠癌表达的临床意义

目的 探讨组织因子（Tissue factor，TF）在结肠癌表达的临床意义。方法 用RT—PCR和免疫组织化学方法分别检测TF在12例结肠癌旁组织、结肠癌组织中mRNA和蛋白抗原的表达。HPIAS图像分析各组标本相对密度，t检验各组相对密度差异。结果 TF mRNA在癌旁组织中低表达，在结肠癌组织中伴有淋巴结转移和肝转移者TF mRNA表达明显高于无转移者，P〈0．05。TF蛋白抗原在癌旁组织呈阴性和弱阳性。在伴有琳巴结和肝转移组阳性表达率为83．33%高于无转移组66．67％。有差别。但无统计学意义。TF表达与肿瘤的转移力高度相关。结论 TF是反映结肠癌进展和生物学特性的指标，是临床上判断预后指标之一。     

微血管侵犯与孤立性大肝癌病理特征及根治术后疗效的关系研究

目的探讨微血管侵犯（MVI）与孤立性大肝癌的病理特征及其与根治术后疗效的相关性。方法回顾性分析2011年1 月-2014 年12月在该院普外科住院治疗的159例孤立性大肝癌的病理资料,根据患者有无发生MVI 将其分为无MVI 组（n =97）和有MVI 组（ n=62）,分析两组患者的肿瘤大小、肿瘤分化、卫星结节与术后无进展期的关系。结果孤立性大肝癌根治术后的1、3 和5 年生存率分别为882％、56.7％和41.4％。单因素分析显示,年龄、性别、MVI、甲胎蛋白（AFP）、肿瘤分化程度、肿瘤直径和数量、卫星结节与孤立性大肝癌术后无进展期有关;多因素分析显示,AFP>400 ng/ml、MVI、卫星结节、肿瘤数量及肿瘤直径是孤立性大肝癌术后无进展期的危险因素。MVI 发生率为43.7％。其中无MVI 患者的中位无进展生存期为47 个月,1、3 和5 年无进展生存率分别为91.7％、67.5％和56.0％;有MVI 患者的中位无进展生存期为35 个月,1 和3 年无进展生存率分别为84.7％和45.8％。结论AFP>400 ng/ml、MVI、卫星结节、肿瘤数量及肿瘤直径是影响孤立性大肝癌根治术后无进展生存期的重要因素。     

基质金属蛋白酶含量及表达与肝细胞癌侵袭转移的关系

目的：探讨基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的血清含量及组织表达与原发性肝细胞癌侵袭转移的关系。方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）检测40例肝细胞癌患者及20例正常对照者血清中MMP-2和MMP-9的含量;应用免疫组织化学SP法,检测40例肝细胞癌、10例癌旁正常组织中MMP-2和MMP-9的表达及分布情况。结果：肝癌患者血清中MMP-2和MMP-9含量明显高于正常对照组（P<0.01）,淋巴结转移组患者血清MMP-2和MMP-9含量高于无淋巴结转移组（P<0.05),肝癌组织中MMP-2和MMP-9表达显著高于癌旁正常组织,随着肿瘤分级的增高MMP-2和MMP-9表达显著增强,且与病理组织学分级、淋巴结转移有关（P<0.05）。结论：MMPs血清含量及组织表达与肝细胞癌侵袭转移有关,可以作为判断肝细胞癌预后的客 观指标。     

Rho 激酶抑制剂法舒地尔作用BTBD7-ROCK2 信号通路抑制肝细胞癌侵袭运动

目的：观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)对人高侵袭潜能HCC细胞株3(human high metastatic liver cancer cells 3,HCCLM3)侵袭转移的影响,并且探讨其作用的机制。方法：应用100 μmol/L Fasudil作用于HCCLM3细胞,采 用肌动蛋白微丝荧光染色和侵袭小室实验观察HCCLM3细胞的运动侵袭能力。HCCLM3细胞经过处理后分为阴性对 照组、Fasudil作用组、BTBD7干扰组,通过Western印迹检测BTB/POZ结构域蛋白7(BR-C, ttk and bab/pox virus domain containing 7,BTBD7)、Ras同系物家族成员C(ras homolog family member C,RhoC)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated, coiled-coil containing protein kinase 2,ROCK2)、MMP2和MMP9蛋白表达水平,酶谱分析法检测MMP2和 MMP9活性水平。BTBD7干扰组作为阳性对照。结果：Fasudil处理后HCCLM3侵袭运动能力下降,BTBD7,RhoC, ROCK2蛋白表达下调,MMP2和MMP9活性降低,与阴性对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论：Fasudil具 有干预BTBD7-ROCK2信号通路、抑制HCC侵袭转移的重要作用。     

Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1促进肝癌细胞的转移

目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用?方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中ROCK1的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中ROCK1mRNA表达水平,免疫组织化学染色(IHC)法检测肝癌及癌旁组织中ROCK1蛋白的表达量,并通过在肝癌细胞株中过表达及干扰ROCK1分析ROCK1蛋白对肝癌细胞转移的作用?结果:60对样本中有42对ROCK1的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,免疫组织化学染色提示肝癌组织中ROCK1蛋白表达量高于癌旁组织?在体外肝癌细胞的功能实验中,过表达ROCK1能促进HepG2细胞的侵袭和转移,而干扰ROCK1的表达能减少SMMC-7721细胞的侵袭和转移?结论:ROCK1在肝癌组织中高表达,过表达ROCK1能促进肿瘤的侵袭及转移,ROCK1可能成为临床治疗中抑制肿瘤侵袭和转移的靶点?     

Inhibition of connective tissue growth factor overexpression decreases growth of hepatocellular carcinoma cells in vitro and in vivo

Background We have previously found that connective tissue growth factor (CTGF) is highly expressed in a rat model of liver cancer. Here, we examined expression of CTGF in human hepatocellular carcinoma (HCC) cells and its effect on cell growth. Methods Real-time PCR was used to observe expression of CTGF in human HCC cell lines HepG2, SMMC-7721, MHCC-97H and LO2. siRNA for the CTGF gene was designed, synthesized and cloned into a Plk0.1-GFP-SP6 vector to construct a lentivirus-mediated shRNA/CTGF. CTGF mRNA and protein expression in HepG2 cells treated by CTGF-specific shRNA was evaluated by real-time PCR and western blotting. MTT assay was utilized to evaluate the growth effect, and a colony formation assay was used for observing clonogenic growth. In vivo, tumor cell proliferation was evaluated in a nude mouse model of xenotransplantation. Statistical significance was determined by t test for comparison between two groups, or ANOVA for multiple groups. Results Immunohistochemical staining of CTGF was seen in 35 of 40(87.5%) HCC samples. CTGF was overexpressed 5-fold in 20 HCC tissues, compared with surrounding non-tumor liver tissue. CTGF mRNA level was 8–10-fold higher in HepG2, SMMC-7721 and MHCC-97H than in LO2 cells. This indicated that the inhibition rate of cell growth was 43% after knockdown of CTGF expression （P < 0.05）. Soft agar colony formation assay showed that the colony forming ability of HepG2 cells decreased by ~77% （P < 0.05）. The volume of tumors from CTGF-shRNA-expressing cells only accounted for 35% of the tumors from the scrambled control-infected HepG2 cells （P < 0.05）. Conclusion CTGF was overexpressed in human HCC cells and downregulation of CTGF inhibited HCC growth in vitro and in vivo. Knockdown of CTGF may be a potential therapeutic strategy for treatment of HCC.     

miR-497抑制肝癌细胞的侵袭与转移

目的:检测miR-497/IGF-1R在肝癌中的表达并探讨其在肝癌侵袭与转移中的作用?方法:定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中miR-497的表达,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中miR-497/IGF-1R mRNA的表达水平,免疫组织化学及Western blot检测肝癌与肝癌细胞系中IGF-1R蛋白表达,通过过表达或干扰肝癌细胞系中miR-497的表达,分析其对肝癌细胞侵袭与转移的作用?结果:肝癌组织中miR-497表达水平低于癌旁组织?与无脉管转移组相比,有脉管转移组降低更为明显?同时在肝癌细胞系也有相似的结果,高侵袭性肝癌细胞系MHCC-97H中降低最为明显?IGF-1R在肝癌组织及肝癌细胞系中表达增加?过表达miR-497能降低MHCC-97H中IGF-1R的表达,抑制其侵袭和转移;干扰miR-497表达能增加IGF-1R表达,促进SMMC-7721细胞的侵袭和转移?结论:miR-497在肝癌组织中表达降低,过表达miR-497能下调IGF-1R,抑制肝癌的侵袭与转移,miR-497可能为治疗肝细胞肝癌提供新的靶点?     

Periostin与上皮源性恶性肿瘤侵袭转移的关系

Periostin是近年发现的一个新的间质特异基因,位于染色体13q13.3,编码由835个氨基酸组成、分子量约90 000的黏附分子,可促进成骨细胞的增殖、分化和骨膜成骨前体细胞的聚集、黏附及间质平滑肌细胞的迁移,在多种人类正常组织中都有表达。肿瘤的侵袭转移是一个复杂的、多基因参与的过程,而间质特异基因在对肿瘤侵袭转移的调控中起着重要的作用。Periostin在肺癌、结肠癌、肝癌、食管癌、乳腺癌、卵巢癌等恶性肿瘤中过表达,可促进肿瘤的存活和血管生成,并可作为肿瘤细胞发生上皮间质转化的标志,其在肿瘤侵袭转移的作用也日益受到关注并取得了一些研究进展。periostin有望成为恶性肿瘤生物治疗的新靶点。