小鼠胚胎成纤维细胞条件培养液的蛋白质组学初步分析

目的：运用双向电泳、质谱技术对小鼠胚胎成纤维细胞饲养层条件培养液进行蛋白质组学分析,寻找其中可能具有抑制分化作用的蛋白因子。方法：用60Co γ-射线照射昆明白小鼠胚胎成纤维细胞,制成饲养层,置于ITS（胰岛素-转铁蛋白-硒钠盐）培养液中培养24h,收集条件培养液。用冷冻干燥、凝胶过滤层析、冷丙酮沉淀的方法从条件培养液中提取蛋白质样品,经双向电泳和银染得到双向电泳图谱,用Image master elite 2.0软件进行图像分析。取蛋白点进行酶解,再用CapLC-ESI-Q-TOF质谱进行分析,使用Mascot软件在NCBInr数据库中进行搜索。结果：双向电泳得到（221±67）个蛋白点的银染图谱,初步分析鉴定13个蛋白点。结论：昆明白小鼠胚胎成纤维细胞条件培养液中含有β-半乳糖苷结合蛋白、半胱氨酸富集的酸性分泌蛋白（SPARC）等成分。     

应用人黄素化颗粒细胞条件培养液行人类胚胎体外培养

目的 研究卵泡壁颗粒细胞条件培养液在人类胚胎体外发育中的作用。方法 将卵泡液中回收的卵泡壁颗粒细胞,分别置于添加0．1％聚乙烯醇(PVA)和添加10％胎牛血清(FCS)的TCM-199培养系统中进行体外培养。结果 在无蛋白培养系统中,颗粒细胞能够缓慢生长,第三～五天达到生长高峰,群体倍增时间发生在培养的第二～三天,培养第一～五天可分泌雌二醇到培养液中(3．22～4．65pmol／ml)。在有蛋白培养系统中,颗粒细胞生长速度明显高于无蛋白的培养系统。使用颗粒细胞条件培养液,获得的囊胚在囊胚腔的大小和细胞数量上,均优于商品化囊胚培养液。结论颗粒细胞条件培养液有利于人类4-细胞以后胚胎的发育。     

经直肠和经会阴前列腺穿刺对前列腺癌诊断价值的比较

目的：比较超声引导下经直肠前列腺系统穿刺（transrectal prostate systematic biopsy,TR-SB）和磁共振-超声引导下经会阴前列腺融合靶向穿刺（transperineal prostate targeted biopsy,TP-TB）对前列腺癌（prostate cancer,PCa）检出率的差异,探讨两者的诊断价值。方法：回顾性地分析重庆医科大学附属第一医院2020年12月至2022年5月的行经直肠和经会阴前列腺穿刺活检术的患者共310例,按穿刺方式将患者分为TR-SB组和TS-TB组,比较2种穿刺方式对前列腺癌、临床有意义的前列腺癌（clinically significant prostate cancer,CSPCa）检出率和并发症的差异。结果：在总前列腺特异性抗体（total prostate specific antigen,tPSA）4～50 ng/mL的患者中,TR-SB和TP-TB2种穿刺方式对PCa和CSPCa的检出率差异无统计学意义（P>0.05）。当tPSA水平处于4～<10 ng/mL或10～<20 ng/m...     

条件培养基对神经干细胞增殖与分化作用的影响

目的：观察大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）条件培养基对体外培养神经干细胞（NSCs）增殖与分化作用的影响。方法用 BMSCs 条件培养基分别在增殖与分化条件下培养 NSCs,观察 NSCs 形态变化。用 MTT 法及 NSCs 球数目和直径的统计分析了解 NSCs 增殖情况,同时行免疫荧光及 Western blot 法鉴定其分化情况。结果原代培养获得大量未分化且悬浮生长的 NSCs 球,并能分化为神经元细胞、星形胶质细胞及少突胶质细胞。BMSCs 条件培养基组能够促进 NSCs 球的吸附贴壁,但与对照组相比光密度（OD）值差异无统计学意义,NSCs 球数目和直径差异亦无统计学意义。另外,BMSCs 条件培养基组少突胶质细胞特异性蛋白MBP 表达量高于对照组（P <0.05）,星形胶质细胞特异性蛋白 GFAP 表达量低于对照组（P <0.05）,而神经元特异性蛋白 MAP-2表达量未见明显异常。结论大鼠 BMSCs 条件培养基促进 NSCs 向少突胶质细胞方向分化,但不抑制其增殖作用。     

Prostate specific membrane antigen knockdown impairs the tumorigenicity of LNCaP prostate cancer cells by inhibiting the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt signaling pathway

Background Prostate specific membrane antigen （PSMA） can facilitate the growth,migration,and invasion of the LNCaP prostate cancer cell lines,but the underlying molecular mechanisms have not yet been clearly defined.Here,we investigated whether PSMA serves as a novel regulator of the phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/Akt signaling by employing PSMA knockdown model and PI3K pharmacological inhibitor （LY294002） in LNCaP prostate cancer cells.Methods PSMA knockdown had been stably established by transfecting with lentivirus-mediated siRNA in our previous study.Then,LNCaP cells were divided into interference,non-interference,and blank groups.We first testified the efficacy of PSMA knockdown in our LNCaP cell line.Then,we compared the expression of PSMA and total/activated Akt by Westem blotting in the above three groups with or without LY294002 treatment.Furthermore,immunocytochemistry was performed to confirm the changes of activated Akt （p-Akt,Ser473） in groups.Besides,cell proliferation,migration,and cell cycle were measured by CCK-8 assay,Transwell analysis,and Flow cytometry respectively.Results After PSMA knockdown,the level of p-Akt （Ser473） but not of total-Akt （Akt1/2） was significantly decreased when compared with the non-interference and blank groups.However,LY294002 administration significantly reduced the expression of p-Akt （Ser473） in all the three groups.The results of immunocytochemistry further confirmed that PSMA knockdown or LY294002 treatment was associated with p-Akt （Ser473） down-regulation.Decrease of cell proliferation,migration,and survival were also observed upon PSMA knockdown and LY294002 treatment.Conclusions Taken together,our results reveal that PI3K/Akt signaling pathway inhibition may serve as a novel molecular mechanism in LNCaP prostate cancer cells of PSMA knockdown and suggest that Akt （Ser473） may play a critical role as a downstream signaling target effector of PSMA in this cellular model.     

Lycopene can reduce prostate-specific antigen velocity in a phase II clinical study in Chinese population

Background Epidemiological studies have shown that lycopene has anti-prostate cancer effect.In vitro tests also confirmed that it can promote apoptosis of prostate cancer cells.We investigated the effect of whole-tomato supplement lycopene on the prostate-specific antigen velocity in selected prostate cancer patients.Methods Twenty selected prostate cancer patients were given whole-tomato supplement lycopene 10 mg per day for about 6 months.Blood samples of patients were collected weekly to measure serum prostate-specific antigen （PSA） values.PSA velocity slope,which reflects the change of PSA,and the degree of change were also calculated.By comparing the values of average PSA velocity slope （rise or fall of PSA） before and after the administration of lycopene,the effect of lycopene can be evaluated.Blood chemistry analysis was regular followed as safety control.Results Three patients in the research group withdrew within 3 weeks because of inability to conform.The rest 17 patients continued for an average period of 6 months.Two patients withdrew because of cancer progression （PSA rise） who later received active treatment.The average fall in PSA was equivalent to 2.56% over （i.e.an average slope/d of -0.000 28） the first 3 months.In the last 3 months,average fall in PSA was equivalent to 31.58% （i.e.an average slope/d of-0.003 51）.The Wilcoxon rank-sum test showed a statistically significant decrease of PSA velocity slope overall （P=0.000 9）.Analysis of the PSA doubling time （pre-vs.post-treatment） showed a median increase over 3 months but this was not statistically significant （P=0.21）.No toxic side effect was observed during the whole process.The results indicate that the average PSA change is ＂decline＂ in patients,and the degree of the decline is accelerated.Conclusion Administration of lycopene was able to reduce PSA velocity in this study group.     

人视网膜色素上皮细胞条件培养液对视网膜干细胞生物学特性的影响

目的观察人胚视网膜色素上皮细胞条件培养液(HRPE-CM)对人胚视网膜干细胞(HRSCs)体外生物学特性的影响。方法利用HRPE-CM模拟体内环境,分为对照组、表皮生长因子(EGF) 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)组和HRPE-CM组。体外培养HRSCs,通过细胞计数方法比较不同环境条件对HRSCs体外生物学特性的影响,并进一步鉴定其神经干细胞特性。结果与对照组比较,HRPE-CM对HRSCs有明显的促增殖作用(P<0.01);与EGF bFGF组相比较,HRPE-CM的促增殖作用也更为强大(P<0.01)。在HRPE-CM中培养的原代和子代HRSCs均表达Nestin,具有自我更新能力和多向分化潜能。结论HRPE-CM对HRSCs的增殖能力具有明显的促进作用,并且能很好地维持其神经干细胞特性。     

内皮祖细胞条件培养基对间充质干细胞增殖和成骨分化的影响及其机制

目的:探讨小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)条件培养基(CM) 对同源间充质干细胞(MSCs)增殖和成骨分化功能的影响,并阐明其作用机制。方法:小鼠骨髓细胞经差速贴壁法结合专用培养基分别培养扩增MSCs和EPCs,采用流式细胞术(FCM)检测MSCs和EPCs表面标记物,以成骨、成脂和成软骨诱导分化对MSCs进行功能鉴定,以成血管对EPCs进行功能鉴定。将MSCs分为0% EPCs-CM组(对照组,采用LG-DMEM培养)、50% EPCs-CM组(采用50% EPCs-CM+50% LG-DMEM培养)和100% EPCs-CM 组(采用100% EPCs-CM培养)。采用MTT比色法检测各组MSCs的增殖活性;采用茜素红染色检测各组MSCs的成骨分化能力。结果:FCM法检测,第3代MSCs高表达Sca-1、CD29, 低表达CD45、CD11b;经诱导可向成骨、成软骨和成脂方向分化。第3代EPCs 高表达CD34、CD133和VEGFR2;在铺有基质胶的96孔培养板中可形成血管样结构。与对照组比较,50% EPCs-CM组和100% EPCs-CM组MSCs增殖活性明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。茜草色素红染色法检测,培养21 d后50%和100% EPCs-CM组MSCs的钙结节数量和钙盐沉积均高于对照组(P<0.05)。结论:利用差速贴壁法可同时分离MSCs和EPCs,EPCs-CM能促进MSCs 的增殖和成骨分化。     

PKD3上调前列腺癌细胞中PSA表达及机制

目的 研究蛋白激酶D3(PKD3)对前列腺癌细胞中前列腺特异性抗原(PSA)表达水平的影响及其机制,以期阐明PKD3在雄激素依赖的前列腺癌细胞增殖中的重要作用.方法 首先,在LNCaP细胞中过表达PKD3并以双氢睾酮刺激,而后采用荧光定量PCR扩增PSA的cDNA并使用2-△△α方法比较其相对表达量的变化;其次,在HEK293细胞中,共转染PKD3的野生型质粒(或无激酶活性的突变型质粒)、AR的表达质粒、AR转录活性的报告质粒pMMTV-luc及内参照报告质粒pRL-SV40,并以双氢睪酮刺激后,以Promega的双报告基凶分析试剂盒测定AR的转录活性.最后,利用共聚焦显微技术分析LNCaP细胞中内源性的PKD3和AR在有无双氢睾酮刺激时亚细胞定位的变化和可能的共定位.结果 在LNCaP细胞中,过表达PKD3可明显升高双氢睾酮刺激时PSA的mRNA表达水平(P<0.001).与之相符,在HEK293细胞中,过表达PKD3明显提高双氢睾酮刺激时AR的转录活性(P<0.001),而过表达无激酶活性的PKD3可部分降低AR的转录活性(P<0.01).此外,LNCaP细胞中内源性的PKD3和AR在双氢睾酮刺激时均向核内转位并共定位于核内.结论 PKD3增强双氢睾酮刺激的前列腺癌细胞中AR的转录活性及上调PSA的表达,提示PKD3可能参与雄激素依赖的前列腺细胞的生长和恶性增殖.     

嗅鞘细胞条件培养液对PC12细胞神经丝蛋白?突触蛋白?突触素蛋白表达的影响

目的:观察嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)条件培养液对PC12细胞神经丝蛋白(neurofilament protein,NF)、突触蛋白(synapsin)和突触素蛋白(synaptophysin)表达的影响,探讨嗅鞘细胞条件培养液促神经细胞分化生长的作用机制。方法:原代培养并纯化OECs,收集培养上清制备成嗅鞘细胞培养液(OEC culture medium,OECCM),与PC12细胞培养24、48、72h,观察细胞形态学变化;通过免疫荧光法检测PC12细胞NF的表达及分布;蛋白质印迹法检测NF、突触蛋白和突触素的相对含量。结果:OECCM培养的PC12细胞长有突起,并随着培养时间的延长,细胞形态酷似神经元;免疫荧光染色显示NF起初在核周分布,OECCM作用后NF的分布范围逐渐增加,其分布面积与β-tubulin分布面积的比值显著增高(P<0.05)。蛋白质印迹法显示OECCM组NF、突触蛋白(synapsin)和突触素蛋白(synaptophysin)的表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:嗅鞘细胞能分泌一些促PC12细胞分化的因子,这些因子能促进P...     

条件培养基局部移植对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的：观察骨髓间充质干细胞的条件培养基(BMSC-CM)局部移植对脊髓损伤修复的作用。方法采用改良的Allen 装置制作大鼠 T9脊髓损伤模型,随机分为对照组(脊髓损伤后局部微量注射生理盐水10μl)和实验组(脊髓损伤后局部注射 BMSC-CM 10μl),两组均采用 BBB 评分、斜板实验法观察大鼠运动功能恢复情况,苏木精-伊红(HE)染色观察脊髓损伤处血管生长及空洞体积的改变情况。结果实验组大鼠的 BBB 后肢功能评分、斜板倾斜角度优于对照组(P <0．05),脊髓损伤处空洞体积明显小于对照组,血管直径大于对照组。结论 BMSC-CM 能够减小脊髓损伤处的空洞体积和促进血管生长,从而促进脊髓损伤后神经功能的恢复。     

基于多参数建立前列腺癌列线图预测模型及验证的研究

目的 基于单中心数据探讨前列腺癌相关预测因素,建立并验证前列腺癌列线图预测模型.方法 回顾性收集2014年1月至2020年1月邯郸市中心医院行前列腺穿刺活检患者的临床资料,包括年龄(Age)、总PSA(tPSA)、游离PSA(fPSA)和前列腺体积(PV)等.资料完整者纳入研究,共697例,中位年龄71岁(40～95岁...     

游离前列腺特异性抗原联合癌胚抗原 对前列腺癌的早期诊断价值

目的 分析游离前列腺特异性抗原（fPSA）联合癌胚抗原（CEA）对前列腺癌的早期诊断价值。 方法 选取2017 年1 月—2019 年12 月在滁州市第一人民医院就诊的256 例疑似前列腺癌患者作为研究对象。 血清总前列腺特异抗原（tPSA）水平介于4.0 ～ 20.0μg/L,根据血清tPSA 水平分为tPSA 4.0 ～ 10.0μg/L 组180 例和tPSA 10.1 ～ 20.0μg/L 组76 例。比较两组前列腺癌与非前列腺癌患者血清fPSA、CEA、游离与 总前列腺特异性抗原比值（f/tPSA）、前列腺健康指数（PHI）。进行Pearson 相关性分析和线性回归性分析, 使用受试者工作特征曲线下面积（AUC）评价fPSA 联合CEA 对前列腺癌的诊断效能。结果 tPSA 4.0 ～ 10.0μg/L 组前列腺癌与非前列腺癌患者血清fPSA、CEA 水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）;而年龄、 血清tPSA 水平、f/t PSA 及PHI 比较,差异无统计学意义（P >0.05）。tPSA 10.1 ～ 20.0μg/L 组前列腺癌与 非前列腺癌患者血清fPSA、CEA 及PHI 比较,差异有统计学意义（P <0.05）;而年龄、血清tPSA 水平及 f/t PSA 比较,差异无统计学意义（P >0.05）。Pearson 相关性分析显示,前列腺癌患者血清fPSA、CEA 水平与 PHI 呈正相关（r =0.348 和0.392,P <0.05）。线性回归分析显示,血清fPSA、CEA 水平是PHI 水平的影响因 素（b =0.046 和0.449,P <0.05）。ROC 曲线结果显示,FPSA 联合CEA 诊断前列腺癌的AUC 为0.921,大于 fPSA 的0.672 和CEA 的0.703（P <0.05）。结论 fPSA 和CEA 是早期诊断前列腺癌的重要线索,两者联合诊 断血清tPSA 低水平升高前列腺癌的效能较好,可能成为更好的前列腺癌早期诊断的新途径。     

前列腺间质肿瘤的临床特点及早期诊断策略:病例报告及文献复习

目的探讨前列腺间质肿瘤的临床特点及诊断策略。方法收集2例前列腺间质肿瘤的病例并且回顾了相关评估此疾病临床特点及早期诊断策略的文献。1例是1位老年患者因排尿困难而至泌尿外科就诊,另1例老年患者是因排便困难而至普通外科就诊。2例患者的直肠指检结果表明前列腺的体积增大并有硬结,但是前列腺特异性抗原(PSA)却未明显升高。前列腺穿刺活检结果表明硬结中有大量的梭形细胞,免疫组化结果显示CD117(+),CD34(+),SMA(-),病理诊断为前列腺间质肿瘤。结果这2例报告说明前列腺间质肿瘤的临床特点主要是排尿困难,排便困难,经直肠前列腺超声检查发现前列腺体积增大并伴随着PSA的轻度升高或处于正常水平。前列腺穿刺活检在早期诊断前列腺间质肿瘤中发挥着极其重要的作用。结论对于前列腺有肿块并且PSA水平正常的患者,有必要进行进一步的检查。     

前列腺特异性抗原在前列腺癌诊治中的变化和意义

探讨前列腺特异性抗原（PSA）在前列腺癌诊治中的变化及意义。采用双抗体放射免疫分析法测定78例前列腺良、恶性病变患者血清PSA含量，观察31例前列腺癌患者内分泌治疗后PSA变化。结果：前列腺癌组与前列腺增生症组比较，血清PSA差异有极显著性意义（P＜0．01）。前列腺癌临床各期两两比较，血清PSA有极显著性差异（P＜0．01）或显著性差异（P＜0．05）。各组分化程度不同的前列腺癌相比较，血清PSA均无显著性差异（P＞0．05）。前列腺癌患者中核素骨扫描提示癌骨转移与未提示骨转移两组血清PSA比较有极显著性差异（P＜0．01）。血清PSA明显异常可以预测骨转移的概率．血清PSA的动态变化与临床病情演变基本一致。结论：采用双抗体放射免疫分析法进行血清PSA测定在前列腺癌诊治中是一个较敏感而有价值的指标。血清PSA检测与核素骨扫描联合应用对于前列腺癌的诊断以及了解疾病演进会有很大的帮助。     

Inhibitory Effect of Matrine on the Expression of PSA and AR in Prostate Cancer Cell line LNCaP

In order to investigate the inhibitory effect of matrine on the expression of prostate specific antigen （PSA） and androgen receptor （AR） in prostate cancer cell line LNCaP in vitro, LNCaP cells were treated with matrine at different concentrations （0.5, 1.0, 1.5, 2.0 g/L） for 12-36 h. The growth activities of cancer cells were determined by MTT colorimetric assay. The AR level was measured by Western blotting. The expression of PSA was detected by using AXSYM system-chemical luciferase methods. The results showed that matrine could effectively inhibit the growth of androgen-dependent prostate cancer cell line LNCaP in vitro in a time-and dose-dependent manner （P〈0.05）. It could obviously decrease the level of AR （P〈0.01） and inhibit the expression of PSA in a dose-dependent manner （P〈0.05） in LNCaP cells. It was concluded that matrine could significantly suppress the growth of LNCaP cells and inhibit the expression of PSA and AR of prostate cancer cells.     

前列腺癌穿刺活组织检查阳性率影响因素的分析及前列腺癌预测模型的建立

目的：建立前列腺癌logistic回归预测模型,为决策前列腺穿刺提供更充分的指征。方法：回顾性分析117 例行前列腺穿刺活组织检查术的病例资料,按照病例收集的时间先后顺序分为两组,前2/3(78例)分入建模组,后 1/3(39例)分入验证组,建立logistic回归预测模型,并通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下 面积来评估该模型的预测价值。结果：直肠指诊(digital rectal examination ,DRE)、经直肠超声(transrectal ultrasound, TRUS)、MRI、前列腺特异性抗原密度(prostate-specifi c antigen density,PSAD)以及前列腺特异性抗原游离比值(free PSA/ total PSA,fPSA/tPSA)是前列腺穿刺的影响因素(P<0.01)。根据各影响因素的回归系数值,建立前列腺癌logistic回归预 测模型：logit P=−2.362+2.561×DRE+1.747×TRUS+2.901×MRI+1.126×PSAD−2.569×fPSA/tPSA。ROC曲线下面积为0.907, 当P的临界值取值0.12时,其敏感度、特异度分别为81.80%,89.30%。结论：利用logistic回归分析建立预测模型可以为 前列腺穿刺提供更充分的指征。当该模型预测概率P>0.12时建议行前列腺穿刺活组织检查。     

嗅鞘细胞上清液对抗过氧化氢诱导的星形胶质细胞损伤的线粒体机制

目的： 研究嗅鞘细胞上清液（olfactory ensheathing cell conditioned medium, OECCM）对星形胶质细胞的保护作用及其线粒体机制。方法： 先用500 μmol/L H₂O₂ 损伤星形胶质细胞20 min;再以50%的OECCM继续培养细胞24 h。MTT法检测星形胶质细胞的活性,Hoechst 33342 染色法和蛋白质印迹法检测细胞凋亡及凋亡相关蛋白caspase-3的表达;用JC-1染色法检测线粒体的膜电位。结果： OECCM能减少H₂O₂诱导的细胞凋亡,减少caspase-3的表达,并且使线粒体膜电位增高。结论： OECCM可以对抗500 μmol/L H₂O₂诱导的星形胶质细胞凋亡,其机制可能与稳定线粒体膜电位有关。     

前列腺增生症手术前后前列腺特异抗原的差异与移行带体积的相关回归分析

目的:探讨血清前列腺特异抗原(PSA)和前列腺移行带的关系。方法:对60例经病理证实为良性前列腺增生症(BPH)的患者进行手术前和术后1周的PSA水平测定,患者术前均行经直肠超声测量前列腺移行带体积,采用单因素相关回归方法分析患者手术前后PSA的差异与移行带的关系。结果:术后58例患者PSA水平下降,平均下降3.733μg/L,2例术后PSA水平升高,平均升高为7.11μg/L。手术前后PSA值具有明显的差异性(P<0.05);手术前后PSA的差值和前列腺移行带体积具有直线回归关系(b=0.011),移行带每减少1cm3,PSA就下降0.011μg/L;手术前后PSA的差值与移行带存在明显的直线相关关系(r=0.311)。结论:BPH患者血清PSA主要受前列腺体积的影响,而移行带的体积对PSA的影响比较大。     

Propachlor 对前列腺癌细胞 PC3及 LNCaP 的作用及其可能机制

目的：探讨化合物 Propachlor 对前列腺癌的作用及可能的分子机制。方法用梯度浓度的化合物 Propachlor处理前列腺癌 PC3及 LNCaP 细胞株;使用 CellTiter 方法检测肿瘤细胞的存活率,Western blot 法检测细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ的转变情况,荧光显微镜检测细胞中诱导 LC3质粒标记绿色荧光蛋白(GFP-LC3)的表达情况。结果 Propachlor可以抑制前列腺癌 PC3及 LNCaP 细胞的存活率,同时剂量越大肿瘤细胞存活率抑制越明显;Propachlor 可以诱导 PC3及 LNCaP 肿瘤细胞自噬蛋白 LC3-Ⅱ及自噬小体 GFP-LC3的表达,诱导自噬效应同 Propachlor 的剂量正相关。结论化合物 Propachlor 具有抗前列腺癌的生物学效应,同时该抗肿瘤效应是通过激活细胞内自噬效应产生的。