肾小管上皮细胞转分化与IgA肾病预后的相关性分析

目的 检测IgA肾病中肾小管上皮细胞转分化及小管间质纤维化程度,并探讨其与IgA肾病预后的相关性。 方法 选取74例IgA肾病患者的肾穿活检组织,分为3组：轻度系膜增生组（27例）、局灶增生组（28例）和增生硬化组（19例）。检测患者的血压、血清肌酐及24 h尿蛋白定量。采用免疫组化及Masson方法观察肾小管间质内α-SMA、Vimentin、TGF-β和胶原纤维的表达。 结果 IgA肾病患者的血压、血清肌酐及24 h尿蛋白定量随病理分级增加逐渐升高,增生硬化组患者的各项临床指标均显著高于轻度增生组和局灶增生组（P＜0.01),局灶增生组24 h尿蛋白定量与轻度增生组间差异有显著性（P＜0.01); IgA肾病小管间质α-SMA、Vimentin及TGF-β表达及表示纤维化程度的胶原纤维表达随分级增加逐渐增高,各组间有差异（P＜0.05或 P＜0.01)。IgA肾病组织中α-SMA、Vimentin、胶原纤维与临床指标血清肌酐、24 h尿蛋白定量中度相关（P＜0.05）, Vimentin与α-SMA、胶原纤维的表达均呈高度相关（P＜0.01)。　结论 IgA肾病中肾小管上皮细胞转分化程度与小管间质纤维化及肾功能异常具有相关性,肾小管上皮细胞转分化可能是肾脏预后不良的关键因素之一,ɑ-SMA和Vimentin的表达可能作为评估临床IgA肾病预后指标之一。     

肾小管上皮细胞转分化在肾间质纤维化中的研究进展

肾小管一间质纤维化(renal interstitial filbrosis,RIF)是各种慢性肾脏病发展到终末期的共同病理改变.其特征为细胞外基质(extracellur msrtrix,ECM)在肾间质积聚及肾间质成纤维细胞增生.已证实肾小管下皮细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)为RIF发生的重要机制,并成为当前研究的热点,现就EMT在肾间质纤维化形成中的作用机制研究进展作一综述.     

AP-1活化在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨转录活化蛋白-1（activator protein-1,AP-1）在高糖诱导的肾小管上皮细胞表型转化中的作用。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（human kidney proximal tubular epithelial cell,HK2）分为正常对照组、高糖组、AP-1阻断组。光镜、透射电镜观察细胞形态的改变,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和细胞角蛋白（cytokeratin,CK）的表达,用凝胶电泳迁移率改变分析法（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测HK2细胞AP-1的改变,RT—PCR法检测CKmRNA的表达,Westernblot检测α-SMA蛋白的表达。结果高糖作用48h后,HK2细胞由椭圆形贴壁生长变为长梭形,胞体拉长,透射电镜下,细胞表面微绒毛明显减少,胞质内粗面内质网丰富,而AP-1阻断组较高糖组明显减轻;EMSA结果分析表明,在高糖刺激下,AP-1结合活力较正常对照组增加79．22％（P〈0．05）,而AP-1阻断剂可明显抑制AP—1的活化,较高糖组降低51．19％（P〈0．05）;免疫细胞化学和RT—PCR检测显示,高糖组和AP-1阻断组CKmR—NA和蛋白水平明显降低（P〈0．05）,而AP—1阻断组显著高于高糖组（P〈0．05）;免疫细胞化学和Westernblot检测显示,高糖组和AP-1阻断组α—SMA蛋白表达明显高于正常组（P〈0．05）,而AP-1阻断组显著低于高糖组（P〈0．05）。结论高糖能够导致肾小管上皮细胞AP-1活化,诱导其表型转化。     

p38丝裂素活化蛋白激酶信号转录对IL-1β诱导肾小管细胞转分化的影响

目的　探讨 p38MAPK信号转导途径对IL 1β诱导肾小管上皮细胞转分化的影响及其导致的功能改变。方法　以培养的人近端肾小管上皮细胞 (HK 2 )为研究对象 ,给予IL 1β(10ng/ml)刺激 2 4h ,在阻断实验中加入SB2 0 35 80阻断 p38通路。采用蛋白印记杂交法检测 p38MAPK的磷酸化程度 ;细胞表型特征检测包括细胞形态变化、标志蛋白 (角蛋白、α SMA)的表达及分布、细胞增殖、黏附和移行能力。结果　 (1)IL 1β刺激 6～ 4 8h可使α SMA表达上调 ,刺激 2 4h可使角蛋白表达减弱、α SMA分布紊乱 ,但细胞形态变化不明显 ;(2 )IL 1β在 5min时可使p38激活达高峰 ,较基础水平升高 2～ 3倍 (P <0 0 5 ) ;至 12 0min时 p38则呈持续激活状态 ;(3)p38阻断剂 (SB2 0 35 80 )对HK 2细胞α SMA的基础表达有抑制作用 ,抑制率 37 13% (P <0 0 1) ;同时可明显抑制IL 1β刺激的α SMA表达 ,抑制率 4 7 0 7% (P <0 0 0 1) ;(4)IL 1β及 p38阻断剂并不影响HK 2细胞之间的黏附能力 ,但IL 1β可使细胞的移行能力增强 (P <0 0 1) ,而 p38阻断剂可明显抑制其移行能力。IL 1β并不影响HK 2细胞增殖。结论　IL 1β可以激活肾小管上皮细胞p38/MAPK ,并可使其发生表型转化 ,这一作用部分通过 p38信号通路所介导。     

肾小管上皮细胞转分化在糖尿病肾病发生中的作用

糖尿病肾病(DN)是糖尿病的主要微血管并发症,是终末期肾病(ESRD)的最常见病因,也是一类以进行性肾脏纤维化为特征的疾病.     

蛋白酪氨酸激酶活性在人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨蛋白酪氨酸激酶(PTKs)活性在人肾小管上皮细胞 (HKC)转分化中的作用.方法将传代的HKC细胞分为:(1)无血清对照组(C);(2)酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)组(A);(3)genistein组(G),加入80ng/ml重组人aFGF条件下,分别加入不同浓度的genistein;培养72h.应用免疫组化检测HKC细胞表达α-SMA(α-smoothmuscleactin,α-SMA)的变化;对转分化过程中PTKs的活性用流式细胞仪加以分析.结果 aFGF(A)组加入80ng/ml aFGF后a-平滑肌动蛋白(a-SMA)表达增强,细胞a-SMA阳性率(60.60±2.70)%较对照组(C)(3.35±1.45)%有非常显著性差异(P<0.01).当G4,5组介入genistein浓度48、96μg/ml时,细胞α-SMA阳性率为(3.90±2.09)%,(3.98±1.75)%,较aFGF组(A)明显降低(P<0.01).PTKs的活性随加入aFGF的浓度增加而增高,当aFGF的浓度为20、40、80ng/ml时,分别比对照组(C)PTKs的活性增加16%、17%、24.6%,当介入genistein剂量为6、12、24、48μg/ml时,分别比aFGF组(A)PTKs的活性下降45.6%、53.5%、66%、81.9%,干预因素作用下HKC细胞PTKs活性与genistein剂量呈负相关(r=-0.987,P<0.05).结论 HKC转分化的机制可能与PTKs活性失控有关,genistein在防治肾间质纤维化中具有很好的应用前途.     

高表达PTEN抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化

目的 研究PTEN高表达对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化的抑制及其信号传导机制.方法 脂质体介导含人全长PTEN基因或空载体转染人肾小管上皮细胞(HKC细胞)48 h,倒置荧光显微镜检测PTEN转染组及空载体转染组绿色荧光蛋白表达;Western blot检测正常组、PTEN转染组、空载体转染组中PTEN蛋白表达;RT-PCR检测3组中PTEN mRNA表达.然后将实验分为正常组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激)、PTEN+TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激)、空载体+TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),Western blot检测各组细胞E-cad-herin、α-SMA、Akt、p-Akt表达水平.结果 FTEN基因及空载体转染HKC细胞48 h后可见明显绿色荧光蛋白表达;PTEN转染组PTEN蛋白及PTEN mRNA表达较正常组及空载体转染组细胞均显著上升(均P<0.05).在正常组、TGF-β1刺激组、PTEN+TGF-β1组、空载体+TGF-β1组中,TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组较正常组E-cadherin表达明显下降(均P<0.05),而a-SMA及p-Akt表达显著上升(均P<0.05);PTEN+TGF-β1组较TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组a-SMA及p-Akt表达明显下降(均P<0.05).而E-cadherin表达上升(均P<0.05);各组细胞Akt表达水平差异不明显(P>0.05).结论 PTEN通过阻止PI3K/Akt通路活化而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化.     

缺血性急性肾衰肾小管上皮细胞微丝的改变及其机制

目的 了解缺血时肾小管上皮细胞（TEC）微丝的改变,并探讨此改变的机制。方法 用双肾蒂钳夹法建立缺血性急性肾衰模型,采用电镜组化法观察缺血5、15和45min时TEC微丝肌动蛋白的改变,并用高效液想象以谱法测试细胞内三磷酸腺苷（ATP）水平。结果 缺血5min即有细胞微丝肌动蛋白的损害。微绒毛融合、断裂、随着缺血时间的延长,微丝损伤加重,极性丧失,由细胞尖端分布变为胞浆内弥漫分布,微绒毛消失,与此同时细胞内ATP水平也迅速降低,微丝紊乱程度与ATP的下降呈一致。结论 肾TEC微丝结构和极性的改变可能与细胞内ATP水平相关。     

IgA肾病中磷酸化c-Jun氨基末端激酶与肾小管上皮细胞转分化关系的研究

目的检测IgA肾病（IgAN）患者肾小管间质中转化生长因子β1（TGF-β1）、磷酸化c—Jun氨基末端激酶（p-JNK）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,探讨c—Jun氨基末端激酶（JNK）在体内对肾小管上皮细胞转分化的调控作用。方法参考IgAN病理类型HASS分级标准,把39例IgAN患者的肾活检标本,分为轻度增生组（HaasⅠ、Ⅱ型）、局灶增生组（HaasⅢ型）和增生硬化组（HaasⅣ、Ⅴ型）。据Katafuchi半定量积分标准评估肾小管间质损伤指数,用免疫组织化学技术检测TGF-β、p-JNK、d—SMA在肾小管间质的表达。结果IgAN各病变组肾小管间质损伤指数和TGFβ1、p-JNK、α-SMA表达均增高,且p-JNK与TGF-β1、α-SMA表达和肾小管间质损伤指数正相关。结论在I酗N患者肾组织中,JNK可能是调控TGF-β1介导的肾小管上皮细胞转分化的关键细胞内信号。     

脂氧素A4拮抗CTGF所致的人肾小管上皮细胞转分化

目的:探讨脂氧素A4(LXA4)对结缔组织生长因子(CTGF)诱导的肾小管上皮细胞HK2转分化的影响.方法:在体外培养的人肾小管上皮细胞(HK2细胞)中,加入CTGF和LXA4刺激48 h后,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,应用RT-PCR、Western blot方法测定上皮细胞E钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA与蛋白的表达.结果:CTGF刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形,下调E钙黏蛋白mRNA与蛋白表达,上调α-SMA的mRNA与蛋白表达.LXAc能够抑制CTGF所致的上述变化,E钙黏蛋白mRNA与蛋白的相对表达值分别为0.270±0.082和0.827±0.177,分别高于CTGF刺激组的0.067±0.015(P<0.05)和0.257±0.221(P<0.05);α-SMA的mRNA与蛋白表达的相对表达值分别为0.070±0.046和0.023±0.023,分别低于CTGF刺激组的0.653±0.256(P<0.05)和0.167±0.050(P<0.05).结论:外源性CTGF能导致HK2细胞转分化为肌成纤维细胞.LXA4可抑制CTGF对HK2细胞的转分化,这为治疗肾间质纤维化提供了一条新途径.     

肾小管上皮细胞转分化在高脂血症大鼠肾损害中的作用

目的 探讨肾小管上皮细胞转分化在脂质肾损害发病中的可能作用。方法 用含4%胆固醇和1％胆酸钠的高脂饲料饲喂大鼠建立高脂模型，观察大鼠血脂、尿蛋白、血肌酐和肾间质病理改变，并用免疫组化技术检测肾小管上皮细胞a-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白、角蛋白的表达。结果 高脂大鼠血脂、尿蛋白和血肌酐升高，肾间质出现明显病理改变，免疫组化显示肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白表达增高，角蛋白表达下调。结论 肾小管上皮细胞转分化在促进脂质肾损害发生发展的过程中起重要作用。     

pax2基因在肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 探讨pax2基因在大鼠慢性肾小管间质纤维化过程中的表达及其对肾小管上皮细胞转分化的可能作用.方法 大鼠5/6肾切除造模,分别于术后2、4、6、8、10、12周取左肾皮质,采用逆转录(RT)-PCR及免疫组织化学的方法检测模型组和正常对照组的pax2和α-SMA的表达.结果 病变组织见系膜细胞和基质增生,间质炎症细胞浸润,基底膜变厚.5/6肾切除模型组大鼠在术后第2周出现pax2 mRNA的强表达,第4周达高峰,与正常对照组比较P＜0.05,此后下降至痕量表达;α-SMA mRNA也在术后第2周表达逐渐增强,第8周达高峰,与正常对照组比较P＜0.05,此后逐渐下降.免疫组织化学染色显示,5/6肾切除模型组pax2蛋白的表达、肾小管上皮细胞中α-SMA的表达与pax2 mRNA、α-SMA mRNA的表达趋势相同.结论 在大鼠慢性肾间质纤维化的过程中,受损的肾小管上皮细胞可向肌成纤维细胞转分化,肾小管发育胚胎基因pax2在此过程中的一过性表达可能起到重要的作用.     

The Effect of Connective Tissue Growth Factor on Human Renal Tubular Epithelial Cell Transdifferentiation

Summary To investigate the role of connective tissue growth factor (CTGF) in transdifferentiation of human renal tubular epithelial cell (HKC),in vitro cultured HKC cells were divided into 3 groups: negtive control, low dose CTGF-treated group (rh CTGF, 2.5 ng/ml) and high dose CTGF-treated (rhCTGF, 5. 0 ng/ml). Then the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) were assessed by indirect immuno-fluorescence, and the percentage of α-SMA positive cells were assessed by flow cytometry. RT-PCR were also performed to examine the mRNA level of α-SMA. Upon the stimulation of different concentrations of rhCTGF, the expression of α-SMA were markedly stronger than that in negative controls. The percentages of α-SMA positive cells were significantly higher in the stimulated groups than that of negative controls (38.9%, 65.5% vs 2.4%,P<0.01). α-SMA mRNA levels were also up-regulated by the stimulation of rhCTGF (P<0.01). These results suggest that CTGF can promote the transdifferentiation of human renal tubular epithelial cells towards myofibroblast (Myo-F). ZHANG Chun, male, born in 1977, M. D., Ph. D. This work was supported by a grant from the Science & Technology Foundation of Hubei Province (No. 2003AA301C14).     

创伤性急性肾衰时肾脏分离肾小管上皮细胞DNA损伤的意义

目的探讨肾小管上皮细胞DNA损伤在急性肾功能衰竭（acute renal failure,ARF）中的意义。方法Wistar大鼠108只,等分为大、小剂量及对照组,分别于后肢肌肉注射10、5ml／kg50％甘油及10ml／kg生理盐水。于1、3、6、12、24、48h测定血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、肌酐（creatinine,Cr）,取肾脏分离肾小管上皮细胞,单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis,SCGE）技术测定DNA损伤。结果两实验组BUN、Cr分别于12、6h起较对照组显著升高（P＜0．05,P＜0．01）,两实验组间BUN和Cr分别在12h和24h起出现显著差异（P＜0．05,P＜0．01）,表明肾功能受损程度不同。肾脏分离肾小管上皮细胞DNA损伤对甘油注射呈现剂量和时间依赖性,其变化趋势与尿脱落细胞DNA损伤相似,但损伤程度较轻。结论DNA损伤、细胞脱落及凋亡等变化参与了肾小管上皮细胞的损伤,是ARF病理生理变化过程“多米诺骨牌”中的重要环节,在预防或及时阻断其发生在ARF的救治中有重要意义。     

Differential activation of mitogen-activated protein kinases by γ-irradi-ation in IEC-6 cells: Role of intracellular Ca~(2 )

Objective: To explore the effects of γ-irradiation on mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and role of intracellular calcium in this event in intestinal epithelial cell line 6 (IEC-6 cells). Methods: After cultured rat IIEC-6 cells with or without the pretreatment of intracellular Ca2 chelator were exposed to Y-ir-radiation of 6 Gy, the total and phosphorylated MAPKs in the cells were determined with Western blotting and apoptosis was examined with flow cytometry. Activities of Extracellular signal-regulated protein kinase (ERK) and p38 MAPK were determined by using immuoprecipitation followed by Western blotting. Results: In response to γ-irradiation, phosphorylation of ERK was not significantly observed, while the levels of phosphorylated c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) and p38 MAPK were increased in 30 min and reached the peak 2 h after exposure to 6 Gy γ-irradiation, though the cell viability was significantly lowered 12 h. On the other hand, no obvious changes were seen in the total protei     

骨关节炎家兔关节软骨中丝裂原活化蛋白激酶信号通路蛋白表达以及活化状况

 目的 观察骨关节炎家兔关节软骨组织中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号通路蛋白表达以及活化的时相变化,明确上述蛋白在骨关节炎(osteoarthritis,OA)发展中的作用。方法 用30只家兔制作OA模型,分别于术后4、8、12周各处死10只,另选10只行假手术作为对照组。取关节软骨,实时定量 RT PCR测定MAPKs mRNA表达; Western blot法测定MAPKs总蛋白以及磷酸化状态蛋白的表达。结果 造模术后几个时间点MAPKs(包括ERK1/2、P38 MAPK、JNK)的基因表达与蛋白表达均无明显变化;与正常对照相比,磷酸化ERK1/2在术后4、8、12周均有高水平表达,磷酸化P38 MAPK术后4周高水平表达,磷酸化JNK术后4、8周高水平表达,其他时间点差异无统计学意义。结论 关节炎软骨组织中MAPKs信号通路的活化主要依赖于信号通路蛋白的磷酸化,而非总蛋白表达的上调;信号通路蛋白的活化存在时相差异。     

IGF-Ⅰ对人肾小管上皮细胞转分化相关基因表达的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在人肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK2)分为对照组和IGF-Ⅰ组:培养液中加入IGF-Ⅰ,终浓度分别为25、50、100、200ng/ml。倒置显微镜观察细胞形态变化。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定HK2细胞E-钙黏蛋白、角蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白和纤连蛋白(FN)mRNA水平的变化。结果:IGF-Ⅰ刺激使HK2细胞形态由椭圆变为梭形。不同浓度的IGF-Ⅰ作用于HK2细胞48h后E-钙黏蛋白和角蛋白mRNA的表达显著下降(P<0.05),α-SMA、波形蛋白和FNmRNA水平显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:IGF-Ⅰ在体外能刺激人肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞(MyoF)转分化,并促进其合成细胞外基质(ECM)。