喘平方对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β1及TNF-α的影响

目的: 探讨喘平方防治支气管哮喘的作用机制。 方法: 取白化豚鼠60只,随机分为正常组、模型组、麻黄组(0.20 g·kg^-1)、洋金花组(0.07 g·kg^-1)、喘平方组(0.32 g·kg^-1)、地塞米松组(7.5×10^-4 mg·kg^-1),通过对豚鼠ip卵蛋白致敏并雾化吸入激发,建立实验性哮喘豚鼠模型;治疗组自注射第14天起每天ig给药1次,连续7 d,正常组及模型组给予生理盐水。观察豚鼠的一般情况,豚鼠肺泡灌洗液中免疫球蛋白E(IgE),转化生长因子β₁(TGF-β₁),肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化,肺组织病理情况。 结果: 各组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α分别为:正常组IgE(68.25±5.92) mg·L^-1,TGF-β₁(78.72±10.92)ng·L^-1,TNF-α(388.02±55.61) ng·L^-1;模型组IgE(137.28±14.38) mg·L^-1,TGF-β₁(172.39±14.04)ng·L^-1,TNF-α(752.76±51.25)ng·L^-1;喘平方组IgE(76.35±6.22) mg·L^-1,TGF-β₁(115.76±9.17)ng·L^-1,TNF-α(569.32±39.7) ng·L^-1;哮喘组及喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均高于正常组(P<0.05);喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均低于哮喘组(P<0.05)。 结论: 喘平方能够通过下调豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量,可降低气道高反应性、减轻气道炎症症状、控制或延缓气道纤维化进程。     

依折麦布及其R-对映体的超临界流体色谱手性拆分方法研究

 目的 建立胆固醇抑制吸收剂依折麦布及其R-对映体的超临界流体色谱手性拆分方法。方法 采用Chiralcel OD 色谱柱(4.6 mm×250 mm, 10 μm);以超临界二氧化碳-含0.1% 三氟乙酸-0.1% 三乙胺的甲醇(90∶10)为流动相,背压为15 MPa,进样量为5 μL,柱温为35 ℃,流速为3.0 mL·min^-1,于235 nm波长处分离依折麦布及其对映体。结果 依折麦布与R-对映体在15 min内依次出峰,分离度为1.6;两者分别在0.010～0.100 mg·mL^-1内线性关系良好,相关系数均为0.999 9(n=7)。依折麦布及其R-对映体的定量限分别为34、32 ng (S/N≥10),检测限分别为10、9 ng(S/N≥3)。原料中R-对映体的平均加样回收率为98.4%(n=9)。结论 超临界流体色谱作为一种绿色环保的色谱方法,分离效率高,重现性好,可有效用于依折麦布原料及制剂中R-对映体的测定及质量控制。     

白茅内生菌Chaetomium globosum的化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对白茅内生菌Chaetomium globosum固体发酵产物的化学成分进行分离纯化,获得9个化合物。利用高分辨质谱、核磁共振谱及文献比对的方法,将上述化合物分别鉴定为chaetoglobosin F(1),chaetoglobosin F_ex(2),chaetoglobosin E(3),cytoglobosin A(4),penochalasin C(5),isochaetoglobosin D(6),N-benzoylphenylalaninyl-N-benzoylphenylalaninate(7),尿嘧啶(8),5-甲基尿嘧啶(9),其中化合物 7 为首次从毛壳菌中分离得到。采用MTT法测定化合物的体外细胞毒活性,结果显示,化合物 1,3,4,5 对人宫颈癌细胞株HeLa具有明显的抑制活性,IC₅₀分别为99.43,23.77,97.92,86.25 μmol·L^-1,而阳性对照药顺铂的IC₅₀为24.33 μmol·L^-1。     

长穗桑中的α-葡萄糖苷酶抑制剂成分研究

 目的 研究长穗桑中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化学成分。方法 采用各种离子交换树脂对长穗桑水提取物进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱分析手段鉴定化合物结构。结果 从长穗桑水提取物中分离到11个化合物,其中7个多羟基生物碱类化合物,2个酰胺类化合物,1个氨基酸以及甜菜碱。分别鉴定为1-deoxynojirimycin (1),fagomine (2),3-epi-fagomine (3),1,4-dideoxy-1,4-imino-D-arabinitol (4),2-O-α-D-galactopyranosyl-1-deoxynojirimycin (5),4-O-β-D-glucopyranosyl-fagomine (6),1,4-dideoxy-1,4-imino-(2-O-β-D-glucopyranosyl)-D-arabinitol (7),(2S)-citrullinamide (8),grateloupinamide (9),天冬氨酸(10),甜菜碱(11)。化合物1~10分别进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选。结论 化合物1~11均为首次从该植物中分离得到。4个多羟基生物碱(1,5~7)以及1个酰胺类化合物(9)有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其中化合物1的IC₅₀为0.07 μmol·L^-1;化合物5的IC₅₀为0.39 μmol·L^-1,与阳性对照阿卡波糖(acarbose,IC₅₀=0.52 μmol·L^-1)相当;化合物6,7,9的IC₅₀值在1~5 μmol·L^-1。     

高效液相色谱法测定人绒毛滋养细胞上清培养液中的 <> L - 色氨酸

 目的 建立一种检测人绒毛滋养细胞上清培养液中 <> L - 色氨酸 (<>L-tryptophan , <> L -Trp) 的高效液相色谱 - 紫外检测法。 方法 采用的色谱柱为 Eclipse XDB-C₁₈ 柱 (4.6 mm×150 mm , 5 μm) ,流动相为 0.05 mmol·L^-1 磷酸二氢钾溶液 - 甲醇（ 92 ∶ 8 ）,流速为 1.3 mL·min^-1 。紫外检测波长为 225 nm 。滋养细胞上清培养液标本经 5.0%( 体积分数 ) 高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液过滤后直接进样分析测定。 结果 <> L -Trp 保留时间为 7.5 min ,线性范围为 1.0~100.0 μmol·L^-1 ,最低检出浓度为 0.5 μmol·L^-1 ,回收率为 95.9%~102.0% 。日内、日间测定的相对标准偏差均小于 3% 。加入 1- 甲基色氨酸 (1-methyl tryptophan , 1-MT) 的上清培养液中 <> L -Trp 的浓度高于未加 1-MT 的上清培养液。 结论 该方法简便、快速、稳定、可行,不同条件下 <> L -Trp 的浓度变化可间接证实人绒毛滋养细胞自身存在其他类似吲哚胺 2 , 3- 二氧化酶（ indoleamine 2 , 3-dioxygenase , IDO ）的方式调节 T 淋巴细胞免疫功能。     

三七皂苷R1对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的: 探讨三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护机制. 方法: MTT法检测细胞存活率;PI/Annexin V双染流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中Bax,Bcl-2的表达;ELISA法检测caspase-3,caspase-8及caspase-9的酶活性. 结果: 6.25,12.5,25,50,100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁对Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡均有一定保护作用,并呈剂量依赖关系;PI/Annexin V双染流式细胞术检测结果表明Aβ_1-42可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可显著降低细胞凋亡率.Western blot结果显示,6.25~100 nmol·L^-1的三七皂苷R₁可下调Bax表达,上调Bcl-2表达;ELISA分析显示不同剂量的三七皂苷R₁可抑制Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞caspase-3和caspase-9的激活,但对caspase-8的激活没有影响. 结论: 三七皂苷R₁通过抑制线粒体相关的凋亡通路激活,减少Aβ_1-42诱导的SH-SY5Y细胞凋亡.     

α-葡萄糖苷酶抑制活性跟踪分离芙蓉菊中的活性成分

目的：研究芙蓉菊全草中具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的化学成分。方法：采用体外α-葡萄糖苷酶抑制活性跟踪方法和各种柱色谱技术进行化学成分的分离和纯化;应用各种谱学方法鉴定化合物的结构;对单体化合物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性试验,确定活性成分。结果：芙蓉菊70%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部分和水溶性部分对α-葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用,从两部分分离鉴定了5,7-二羟基-3′,4′,5′-三甲氧基黄酮 (1)、东莨菪素(2)、艾菊素、粗毛豚草素(3)、5,5′,7-三羟基-3′,4′-二甲氧基黄酮(4)、柯伊利素(5)、万寿菊黄素-3,6,7-三甲基醚(6)、石杉黄素(7)、东莨菪苷(8)和槲皮万寿菊素-3,6-二甲醚(9)。其中,化合物2,3,5,6,7,9对α-葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用,IC₅₀(μmol·L^-1)值分别为(34.36±2.06),(146.28±12.44),(246.26±8.73),(74.06±3.83),(42.19±5.25),(136.20±25.73),强于同条件下的阳性对照药阿卡波糖(IC₅₀=489.25±38.55 μmol·L^-1)。化合物1,4,8和艾菊素的IC₅₀值皆大于1 000 μmol·L^-1。结论：化合物5和9为首次从该属植物中分离得到;化合物2,3,5,6,7,9对α-葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用,其抑制作用类型属于竞争性抑制作用,它们可能是芙蓉菊防治糖尿病的物质基础。     

20(<>R)- 人参皂苷 Rg3 对 LPS 诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

  摘要：目的 观察 20(<>R)- 人参皂苷 Rg₃ 对人脐静脉内皮细胞（ HUVEC ）损伤的保护作用及其机制探讨。 方法 用脂多糖（ LPS ）诱导 HUVEC 损伤,采用 MTT 法观察 20(<>R)- 人参皂苷 Rg₃ 对 HUVEC 活性的影响; Fura-2/AM 荧光探针负载细胞,用双波长荧光分光光度法测定 HUVEC 细胞内游离钙离子浓度;用 ELISA 法测定培养的细胞上清液中组织型纤溶酶原激活物（ t-PA ）、纤溶酶原激活物抑制剂 -1 （ PAI-1 ）含量的变化。 结果 300 mg·L^-1 的 LPS 刺激内皮细胞 48 h 后,可明显降低 HUVEC 的吸光度,细胞内钙离子浓度升高, PAI-1 含量明显升高, t-PA 含量明显降低;各浓度的 20(<>R)- 人参皂苷 Rg₃ 可升高 LPS 引起的 HUVEC 的吸光度降低,并呈浓度依赖性地显著降低 HUVEC 内游离钙浓度的升高; 20(<>R)- 人参皂苷 Rg₃ 明显抑制 LPS 诱导的 PAI-1 分泌增多,对 t-PA 水平无明显影响。 结论 20(<>R)- 人参皂苷 Rg₃ 对 LPS 诱导的 HUVEC 损伤具有保护作用,其机制可能与降低细胞内钙离子浓度、抑制 PAI-1 产生、调节 t-PA /PAI-1 平衡密切相关。     

高效液相色谱法测定L-肌肽原料药的含量及其有关物质

 目的建立HPLC测定L-肌肽原料药的含量并进行有关物质检查。方法采用Kromasil NH₂色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为乙腈-40mmol·L^-1磷酸氢二钾溶液(44∶56,磷酸调pH6.3),流速1.0mL·min^-1,检测波长为210nm,柱温35℃。结果L-肌肽在9.93～99.3mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为100.5%(RSD=1.0%),检测限为1ng(S/N=3)。L-肌肽与有关物质分离良好。结论该方法操作简便、重复性好、专属性强,可用作L-肌肽原料药的含量测定和有关物质检查。     

HPLC测定盐酸头孢吡肟的含量和有关物质

 目的建立盐酸头孢吡肟有关物质及含量的分析方法。方法使用C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),检测波长为257nm。测定有关物质时,为线性梯度洗脱,流动相A为0.005mol·L^-1磷酸二氢铵-乙腈(93:7),流动相B为0.005mol·L^-1磷酸二氢铵-乙腈(70:30);测定含量时,为等度洗脱,流动相为0.005mol·L^-1磷酸二氢铵-乙腈(93:7)。结果盐酸头孢吡肟与其中间体、降解产物及E异构体分离良好。结论方法简便、专属,可用于盐酸头孢吡肟含量及有关物质的测定。     

RP-HPLC同时测定华山参滴丸中3种有效成分的含量

 目的 建立反相高效液相色谱法同时测定华山参滴丸中3种有效成分的含量。方法 采用Phenomenex Luna C₁₈ 色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm,流动相为20 mmol·L-1醋酸铵水溶液-甲醇（70∶30,流速为1.0 mL·min-1,检测波长215 nm,进样量20 μL。结果 硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱和消旋山莨菪碱的线性范围分别为1.444~28.88 μg（r=0.999 9,0.891~17.82 μg（r=0.999 9,2.196~43.92 μg（r=0.999 9;平均回收率（n=6分别为101.82%（RSD =2.89%、100.17%（RSD=2.49%、98.68%（RSD=2.33%。结论 所建立的RP-HPLC方法简便、准确、快速、重复性好,可用于华山参滴丸中硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱和消旋山莨菪碱3个有效成分的含量测定。     

HPLC测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量

 目的 建立高效液相色谱法测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏3种化学药物的含量。方法 采用色谱柱Thermo electron corporation hypersil gold C₁₈（4.6 mm×150 mm,5 μm）,以乙腈-0.5%磷酸（用三乙胺调至pH 2.1）（6︰94）为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长264/249 nm。结果 对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏线性范围分别为0.324 5～1.135 7 μg（r=0.999 9）,0.192 3～0.673 1 μg（r=0.999 9）,0.175 4～0.614 0 μg（r=0.999 8）;平均回收率（n=9）分别为99.42%（RSD=0.76%)、98.58%（RSD=1.89%）,98.58%（RSD=1.30%）。结论 该方法准确、灵敏、重复性好,可同时测定感冒灵颗粒中3种化学药物的含量。     

藏药材印度獐牙菜质量标准研究

 目的 建立印度獐牙菜药材的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和芒果苷成分;以高效液相色谱法测定该3种成分的含量。色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇-水（0.1%冰醋酸）线性梯度洗脱,甲醇体积分数从22%经18 min至32% 并保持5 min,流速为1.0 mL·min-1,柱温为25 ℃,检测波长为243 nm。结果 印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和芒果苷的薄层色谱鉴别特征明显,专属性强;药材中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和芒果苷的含量测定线性范围分别为0.06~2.00 μg(r=0.999 7),0.09~2.90 μg(r=0.999 7)和0.05~1.65 μg(r=0.999 8),平均回收率（n=9）分别为103.76 % (RSD=1.34 %),99.43 % (RSD=1.60%)和96.22% (RSD=1.30%)。结论 所建立的印度獐牙菜定性定量测定方法简单准确,能够为印度獐牙菜药材的质量控制提供有效数据。     

四物汤中四种成分的含量测定研究

目的建立四物汤中没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药苷、阿魏酸的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为ZorbaxSB-Aq;流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(梯度洗脱);没食子酸、芍药苷的检测波长为230nm,5-羟甲基糠醛的检测波长为280nm,阿魏酸的检测波长为316nm;流速为1mL·min-1;柱温为40℃。结果没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药苷、阿魏酸的线性范围分别为0.0247～0.4944μg(r=0.9992)、0.01996～0.7984μg(r=0.9999)、0.1181～2.362μg(r=0.9997)、0.1262～0.5048μg(r=0.9996),加样回收率分别为100.22%(RSD=2.06%)、99.83%(RSD=2.70%)、101.37%(RSD=1.59%)、99.89%(RSD=2.29%)。结论四物汤中没食子酸与芍药苷来自白芍,5-羟甲基糠醛来自熟地黄与川芎,阿魏酸来自当归与川芎,为四物汤物质基础的研究提供了一定的参考。     

HPLC-ELSD法同时测定鲜地黄中3种低聚糖的含量

 目的 建立同时测定中药鲜地黄中主要的3种低聚糖的HPLC - ELSD含量测定方法。方法 采用HPLC - ELSD对鲜地黄中主要的低聚糖进行研究,采用Waters XBridgeTM Amide 3.5 μm（4.6 mm×150 mm）色谱柱为固定相,乙腈-水-70∶30为流动相,流速为0.5 mL·min-1,柱温：25 ℃。ELSD检测器：漂移管温度40 ℃,雾化气体2.07 L·min-1,喷雾模式：冷却。结果 该方法下,鲜地黄中3种低聚糖分离效果良好,具有良好的线性范围,分别为0.184~9.2 μg （r=0.999 8）,0.458~11.45 μg （r=0.999 7）和0.924~11.55 μg （r=0.999 2）,平均加样回收率为96.94% （RSD,1.87%）,98.87% （RSD,1.98%） 和101.02% （RSD,3.23%）。结论 该方法稳定、可靠、精密度高、重复性好,为有效控制鲜地黄药材的内在质量提供科学依据。     

RP-HPLC同时测定蒙药查干-扫日老-4汤中槲皮素和甘草苷

目的建立蒙药查干-扫日老-4汤(甘草、北沙参、拳参、紫草茸)中槲皮素和甘草苷同时测定的反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。方法采用超声提取法制备供试品。分析色谱柱为symmetry Cl8(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(35∶65);检测波长273 nm;体积流量0.8 mL/min。结果槲皮素和甘草苷分别在0.56～5.6μg和0.50～5.0μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(相关系数分别为0.999 9和0.999 8)。平均加样回收率为97.64%和98.54%,RSD为1.02%和1.44%。结论该方法简便、准确、重复性良好,可作为蒙药查干-扫日老-4汤中槲皮素和甘草苷的同时测定方法。     

根痛平片快速质量控制方法研究

目的制订简便、快捷的根痛平片质量控制方法。方法用薄层色谱法在2块薄层板上鉴别葛根、续断、白芍药、甘草和乳香。用高效液相色谱(HPLC)法,以乙腈-0.1%磷酸溶液(11.5∶88.5)为流动相,检测波长为230 nm,同时测定根痛平片中葛根素与芍药苷含量。结果薄层色谱斑点清晰,易于识别,阴性无干扰。2种规格、7批样品根痛平片中芍药苷及葛根素含量分别为2.64～4.59、0.82～1.60 mg/片。对照品溶液与供试品溶液色谱峰保留时间一致,空白样品无干扰。葛根素进样量在0.01512～1.512μg,芍药苷进样量在0.0612～2.04μg,分别与峰面积呈良好的线性关系。葛根素平均回收率为99.91%,RSD=0.64%;芍药苷平均回收率为100.78%,RSD=0.90%。结论根痛平片快速质量控制方法简便、快捷、实用。     

高效液相色谱法测定甘草及其炮制品中5种活性成分的含量

 目的建立甘草及其3种炮制品中芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷和甘草酸的HPLC含量测定方法,并比较炮制前后5种主要活性成分含量的变化。方法采用依利特Hypersil ODS色谱柱,乙腈-3%乙酸梯度洗脱,流速为0.6mL·min^-1,检测波长为254nm,柱温为35℃,对甘草、炙甘草、蜜润甘草、清炒甘草中的5种活性成分进行含量测定。结果芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷和甘草酸分别在0.47～15.04μg(r=0.9996),0.13～4.16μg(r=0.9995),0.11～3.52μg(r=0.9999),0.13～4.16μg(r=0.9998),0.53～16.96μg(r=0.9990)内呈良好的线性关系;平均回收率分别为97.7%,100.8%,99.7%,100.5%和99.6%,RSD分别为0.4%,1.8%,1.5%,2.1%,1.9%。测定甘草及其3种炮制品中5种活性成分的结果表明,除甘草苷含量蜜炙甘草高于蜜润甘草外,5种成分在4种样品中的含量依次为清炒甘草>生甘草>蜜润甘草>蜜炙甘草。结论炮制对甘草5种主要活性成分的含量有明显影响;本方法简便,快捷,可用于甘草及其炮制品的质量控制。     

高效液相色谱法测定复方虎杖烧伤凝胶中没食子酸的含量

目的建立以高效液相色谱法测定复方虎杖烧伤凝胶中没食子酸的含量。方法色谱柱:RromsilC18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(15:85);检测波长:273nm;流速:1.0mL·min-1;柱温:25℃。结果没食子酸在进样量为0.119～0.792μg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为99.5%,RSD为1.93%(n=5)。结论该法灵敏度高、准确性高、重复性好,可作为复方虎杖烧伤凝胶的质量控制方法。     

安神健脑液质量标准研究

目的建立安神健脑液的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别麦冬、丹参、枸杞子和人参;采用高效液相色谱法测定五味子中五味子醇甲的含量,C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(55∶45),流速1.0mL/min,检测波长250nm。结果在薄层色谱中可检出丹参、枸杞子和人参的特征斑点;五味子醇甲在0.1218～1.218μg范围内线性关系良好,r=0.9999,精密度RSD=0.22%(n=6),重复性试验RSD=1.1%(n=6),平均加样回收率为97.34%(RSD=1.7%,n=6)。结论本方法简便、灵敏、专属性强、重复性好,可作为安神健脑液的质量控制方法。