益气活血方药抑制大鼠HSC体外增殖作用的实验研究

目的　研究益气活血方药抑制大鼠肝星状细胞 (HSC)体外增殖的作用机理和有效部位群。方法　用脂多糖 (lipopolysccharide ,LPS)刺激体外培养的HSC增殖 ,同时加入不同时相的含药血清Scl、Sc2或正常鼠血清 (Sn)或该方药不同提取物 ,分别培养 2 4、4 8、72h ,MTT法测定细胞增殖率 ,流式细胞仪测定HSC凋亡率。结果　在培养各时相Sc1和Sc2对LPS刺激的HSC增殖都有明显的抑制作用 (P <0 0 5或P <0 0 1)。流式细胞仪测定HSC凋亡的结果显示Sc2明显促进了HSC的凋亡 (P <0 0 1)。该方药不同提取物以不同的模式抑制体外培养的大鼠HSC增殖。结论　益气活血方药含药血清具有抑制体外培养大鼠HSC增殖作用 ,并促进其凋亡 ;益气活血方药有不同的有效部位群 ,并以不同的模式发挥作用     

红花注射液对肝星状细胞 HSC-T6 增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的 研究红花注射液对肝星状细胞 (hepatic steuate cell,HSC) HSC-T6 增殖、凋亡及凋亡相关基因 bcl-2 及 bax mRNA 表达的影响。方法 体外培养 HSC 株,用不同质量浓度的红花注射液处理 HSC-T6,采用 MTT 法检测细胞增殖;采用 5、10、20 mg/mL 红花注射液干预细胞 24 h,流式细胞仪检测细胞周期;倒置显微镜下观察细胞凋亡形态学改变;并用琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA Ladder 凋亡梯度;Annexin V-FITC/PI 双染色流式细胞仪分析凋亡率;Real time-RT PCR检测凋亡相关基因 bcl-2、bax mRNA 的表达水平。结果 红花注射液对 HSC 增殖有明显的抑制作用,且作用呈剂量和时间依赖性;红花注射液 (10、20 mg/mL) 作用 24 h 流式细胞术测出 G0/G1 期细胞所占比例增多,与对照组比较差异显著 ( P ＜0.05、0.01);药物干预后细胞表现不同程度的凋亡,琼脂糖电泳可见 DNA 出现断裂、PI/Annexin V 双染流式细胞仪分析对照组凋亡率为 (0.73±0.33)%,红花注射液在 5、10、20 mg/mL 凋亡率分别为 (2.04±0.58)%、(9.46±1.29)%、(16.55±1.27)%,差异显著 ( P ＜0.01);Real time-RT-PCR 结果显示红花下调抗凋亡基因 bcl-2 的 mRNA 表达,同时上调 HSC-T6 的促凋亡基因 bax 的 mRNA 表达。结论 红花注射液能抑制 HSC 增殖及增殖周期,促进活化的 HSC 凋亡,其机制可能是调控 bcl-2/bax mRNA 的表达。     

丹参酮ⅡA对人肝癌BEL-7402细胞生长的影响及其机制

目的研究丹参酮ⅡA对体外培养的人肝癌细胞系BEL-7402细胞生长的影响及其作用机制。方法0~10 μg/ml丹参酮ⅡA作用人肝癌BEL-7402细胞72 h后,用倒置相差显微镜观察丹参酮ⅡA对BEL-7402细胞的生长抑制作用;荧光显微镜、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术检测不同浓度丹参酮作用后细胞凋亡率的变化。结果肝癌细胞经丹参酮ⅡA作用后,细胞生长明显受到抑制;荧光显微镜、透射电镜观察发现细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡及凋亡小体形成等凋亡特征性形态改变;琼脂糖凝胶电泳观察到DNA“梯状带”;流式细胞仪定量分析示浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、和10.0 μg/ml的丹参酮ⅡA处理肝癌细胞72 h后,细胞凋亡率分别为(20.78±2.17)%、(24.64±2.07)%、(31.47±3.86)%、(43.65±4.04)% 和(52.36±3.75)%,与对照组[(2.37±0.29)%]比较,均有显著性差异。结论丹参酮ⅡA能抑制体外培养的人肝癌细胞系BEL-7402细胞的生长,其机制可能为诱导细胞凋亡。     

JNK信号通路在乙醛刺激的肝星状细胞凋亡中的作用

目的: 观察用特异性c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)特异性阻断剂SP600125阻断JNK信号传导通路对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)凋亡的影响.方法: 体外培养大鼠HSC株;用不同浓度的SP600125(20,60,100 μg/L)对乙醛(200 μmol/L)刺激的大鼠HSC进行处理,分别以DNA片段凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western Blotting法检测JNK激酶的活性变化.结果: 不同浓度的SP600125(终浓度为20,60,100 μg/L)对乙醛刺激的HSC内p-JNK的水平有明显下调作用,强度呈剂量依赖关系,同乙醛组相比有显著性差异[MVI: (35.6±0.9),(24.4±1.1),(3.4±0.2) vs (48.2±0.9),P<0.05];同时SP600125具有促进HSC凋亡的作用: 空白对照组及乙醛组中细胞凋亡率为[(2.0±0.2)%和(6.0±0.5)% ,两者有显著性差异(P<0.05)],经SP600125处理后细胞凋亡率上升[分别为(11.1±0.4)%,(26.9±0.9)%,(33.1±1.3)%,P<0.05],同乙醛组相比有显著性差异(P<0.05).结论: SP600125通过阻断JNK通路促进HSC凋亡,故JNK信号通路可能参与了HSC的凋亡.     

川芎嗪对肝星状细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究川芎嗪对大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及可能机制,为肝纤维化的治疗提供新的方法.方法 以血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞系HSC-T6,建立体外肝纤维化细胞模型,在此基础上,给予川芎嗪30μmol/L刺激HSC-T6,作用24 h后,Western blot法检测相关蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Hoechst 33258染色法观察各组HSC的凋亡形态.结果 Western blot法结果表明,与PDGF组比较,川芎嗪组ERS标志性蛋白GRP78表达增多,并且ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12表达增强,Bcl-2/Bax比例明显下调,p-ERK/ERK水平降低.流式细胞仪检测结果表明川芎嗪组较PDGF组HSC凋亡率增强,同时Hoechst 33258染色结果表明川芎嗪组HSC呈现典型的核固缩等凋亡形态变化.结论 川芎嗪可以诱导PDGF活化的HSC发生凋亡,其可能与ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12的表达上调、ERK1/2磷酸化水平降低,进而下调Bcl-2/Bax比例,发生相关凋亡.     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对人鼻咽癌(NPC)CNE-2细胞增殖及凋亡的影响.方法 不同浓度(0、10、20、40、60 μmol/L)姜黄素处理NPC细胞株CNE-2,利用噻唑蓝(MTT)实验检测CNE-2细胞增殖活性,利用流式细胞仪检测CNE-2细胞周期及凋亡率,利用Hoechest33258荧光染色法观察细胞凋亡情况.结果 姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且随姜黄素浓度增加,CNE-2细胞抑制率呈上升趋势(P＜0.05),姜黄素作用CNE-2细胞24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(23.54±0.36)、(18.31±0.42)、(8.56±0.37)μmol/L,即姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且呈现明显浓度、时间依赖性;流式细胞检测结果显示,0、10、20、40、60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞,凋亡率随着姜黄素浓度增加而上升;荧光染色结果可见,CNE-2细胞未给予姜黄素处理,细胞呈圆形或者椭圆形,细胞核大小均匀一致,染色质分布均匀的淡蓝色荧光;10 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24h后,细胞胞体缩小,细胞核染色质凝聚,呈颗粒状亮蓝色荧光;20 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞出现胞体缩小,细胞核浓缩、染色质不均匀,出现凋亡小体,甚至出现核碎裂;40和60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞凋亡小体数量增多,出现大量核碎裂.结论 姜黄素对NPC细胞株CNE-2细胞增殖具有明显抑制作用,且促进CNE-2细胞凋亡.     

β-淀粉样蛋白25-35片段诱导PC12细胞凋亡

目的　探讨 β -淀粉样蛋白 2 5 - 35片段 (Aβ2 5-3 5)对体外培养的PC12细胞的毒性作用机制。方法　用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)代谢率检测 ,光镜吖啶橙荧光染色术 ,透射电镜以及流式细胞仪技术研究Aβ2 5-3 5损伤PC12细胞的途径。结果　用Aβ2 5-3 5处理PC12细胞 2 4h ,Aβ2 5-3 5剂量依赖性地引起PC12细胞的MTT代谢率减少 ,荧光染色及电镜观察发现经Aβ2 5-3 5处理的PC12细胞表现出凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪检测发现 ,对照组 2 0 μmol/L及 5 0 μmol/L的Aβ2 5-3 5组PC12细胞的凋亡率分别为 0 .0 8%± 0 .0 1% ,14 .8%± 1.13% ,2 5 .9%± 2 .34%。结论　Aβ对PC12细胞的损伤主要通过细胞凋亡的途径     

Tamoxifen诱导MA782细胞凋亡与P21/CIP1、PCNA的关系

目的　探讨三苯氧胺 (TamoxifenTAM )诱导ER(- )小鼠乳腺癌细胞MA782细胞凋亡及其分子作用机制。方法　TAM体外作用于MA782细胞 ,用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布 ,透射电镜观察细胞凋亡超微结构改变 ,免疫组化检测MA782细胞p2 1/CIP1、PCNA蛋白表达 ,并用病理图像分析软件进行半定量分析。 结果　 6 μmol/L、10 μmol/LTAM在体外能明显抑制MA782细胞生长 ,诱导细胞凋亡 ,作用 2 4小时细胞凋亡率分别为 7.0 4 %、19.0 4 % ,10 μmol/LTAM作用 4 8小时后细胞凋亡率从 19.0 4 %上升到 5 1.2 7% ,与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 1)。 2 μmol/LTAM作用不同时间后 ,细胞上述蛋白无明显变化 ,而 6 μmol/L、10 μmol/LTAM作用不同时间后 ,PCNA蛋白表达有不同程度的下降 ,p2 1/CIP1蛋白表达有不同程度的上升与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论　TAM诱导MA782细胞凋亡其分子作用机制可能与下调细胞PCNA蛋白表达及上调 p2 1/CIP1蛋白表达有关。     

姜黄素诱导卵巢癌细胞株A2780细胞周期阻滞和凋亡

目的 探讨姜黄素对卵巢癌细胞株A2780的生长抑制作用及其机制。方法 10一50μmol/L姜黄素作用6—24h后，MTT比色法检测细胞生长活性，流式细胞仪测定细胞周期时相变化，末端TdT酶标记技术和DNA Ladder检测细胞凋亡；透射电镜观察细胞超微结构变化。结果 姜黄素能显著抑制卵巢癌细胞株A2780的体外生长，呈时间与剂量依赖性；细胞周期阻滞于G0／Gl期；部分细胞出现凋亡形态学改变，凝胶电泳可见“梯形”条带，凋亡率为6．41％一28．48％(P＜o．01)。结论 姜黄素通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制，能显著地抑制卵巢癌细胞的体外生长。     

姜黄素和环氧合酶-2抑制剂NS-398对肝星状细胞时效的双向调节体外实验研究

[目的]观察抗氧化剂姜黄素(Cur)与选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398两种药物同时联用或分时联用对大鼠肝星状细胞(HSC)生长的影响。[方法]体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,接种96孔板,分为5组。Ⅰ:单独姜黄素系列浓度组(0、20、30、40μmol/L);单独NS-398系列浓度组(0,20,40,80μmol/L);Ⅱ:单独NS-398系列浓度组(ABSI)和NS- 398系列浓度组 姜黄素20μmol/L(ABS2)对大鼠HSC增殖的影响,Ⅲ:两种药物同时加药组;Ⅳ:两种药物先后6 h加药组:先加姜黄素20μmol/L作用HSC6h后加NS-398系列浓度组(0、20、40、80μmol/L);先加NS-398系列浓度(0、20、40、80μmol/L)作用HSC6h后加姜黄素20μmol/L组,Ⅴ:析因分析组。各组设不加药物的细胞对照组,与HSC共同培养,以MTT法检测姜黄素、NS-398单用或同时、分时联用对HSC生长的影响。LDH法检测各组对HSC的细胞毒性作用。[结果]单独NS-398系列浓度组和单独姜黄素系列浓度组有抑制HSC的作用,但姜黄素的作用比NS-398强:同时加两药组比分时加药组有明显不同,先加NS-398作用HSC6h组比先加姜黄素作用HSC6h组的抑制率明显降低。[结论]时间因素导致两药联用是双向调节,同时加药或先加姜黄素作用HSC6h组后加NS-398时呈正调节作用,抑制率升高,而先加NS-398作用HSC6h后加姜黄素呈负调节作用,抑制率降低。NS-398对HSC作用一定时间后有抑制姜黄素对HSC起生物效应的作用。