食管癌术前辅助化疗诱导癌细胞凋亡和相关基因表达的临床研究

目的研究食管癌术前辅助化疗中癌细胞凋亡和相关基因p21、p53、Bcl-2表达的关系。方法50例术前采用顺铂和氟尿嘧啶小剂量联合化疗的食管癌手术切除标本(术前化疗组)与50例食管癌手术切除标本(单纯手术组)经免疫组化方法检测p21、p53、Bcl-2的表达水平及细胞凋亡的情况。结果单纯手术组中p21、p53和Bcl-2的阳性表达率分别为54%(27/50)、68%(34/50)和56%(28/50),癌细胞凋亡指数(AI)为(1.992±1238)%;术前化疗组中p21、p53及Bcl-2的阳性表达率分别为52%(26/50)、50%(25/50)和52%(26/50),AI为(3112±1551)%。p21阳性表达时凋亡指数高于其阴性表达,p53阳性表达时凋亡指数低于其阴性表达。结论术前化疗能明显诱导食管癌细胞凋亡,p21和p53的阳性表达与癌细胞凋亡有密切关系,检测p21和p53的表达水平可以协助判断食管癌的分化程度及预后。化疗后Bcl-2随着病理分级的上升,阳性表达率明显提高,提示低分化肿瘤可能对化疗药物有耐受的倾向。     

垂体腺瘤的细胞凋亡及其相关基因产物的研究

目的 :研究人类垂体腺瘤中的细胞凋亡及其相关基因p5 3、Bcl 2、Bax产物。　方法 :采用TUNEL法检测14例患者垂体腺瘤的细胞凋亡 ,同时应用免疫组化技术检测 17例垂体腺瘤的细胞增殖相关抗原 (PCNA)和凋亡相关基因p5 3、Bcl 2、Bax表达的蛋白产物。　结果 :14例垂体腺瘤中 12例检测到凋亡细胞 (85 .71% ) ,其凋亡细胞比例仅占 0 .1%～ 8.0 % ,与肿瘤体积呈负相关 ,与腺瘤细胞增殖活性关系不密切。凋亡相关基因中Bax阳性率高 (92 .31% ) ,表达强 ,p5 3有 2例阳性 ,Bcl 2仅 1例弱阳性。腺瘤细胞Bax表达和细胞增殖活性呈正相关。结论 :人类垂体腺瘤中存在细胞凋亡。垂体腺瘤中Bax高表达 ,Bcl 2 /Bax比值 <1.0 ,这一细胞内的微环境有利于细胞凋亡的发生。人垂体腺瘤细胞Bax表达和细胞增殖活性呈正相关。垂体腺瘤的凋亡活性和其他临床特征(如增殖活性、侵袭性等 )无明显相关性。     

癌细胞凋亡和相关基因在食管癌组织中表达的临床意义

目的:探索食管癌组织中癌细胞凋亡和相关基因P21、P53、Bcl-2表达的关系。方法:采用免疫组化法检测40例食管癌手术切除标本中P21、P53、Bcl-2表达及细胞凋亡的变化。结果:40例食管癌组织中p21、P53、Bcl-2的阳性表达率分别为52．5％(21／40)、80％(32／40)和60％(24／40),癌细胞凋亡指数(AI)为(2．035±1．302)％,P21阳性表达时凋亡指数高于其阴性表达,P53阳性表达时凋亡指数低于其阴性表达。结论:P21和P53的阳性表达与癌细胞凋亡有密切关系,检测P21和P53的表达水平可以协助判断食管癌的分化程度及预后。     

慢性胃炎脾胃虚实证候胃粘膜细胞凋亡及相关蛋白的研究

为探讨脾胃虚实证候与胃粘膜细胞凋亡的相关性，采用辨证分型，以胃粘膜细胞凋亡指数（AI）、凋亡基因相关蛋白p53、Bcl-2、Fas等为指标进行研究，结果：①脾胃虚证和实证均表现为胃粘膜Al增加（P〈0．05），虚证组高于实证组（P〈0．05）；②脾胃虚证组和实证组p53、Bcl-2表达高于对照组（P〈0．01～0．05）；③脾胃实证组Fas表达高于对照组（P〈0．05）。说明慢性胃炎从正常到实证到虚证的发展过程中，细胞凋亡逐步增多；p53、Bcl-2、Fas的表达参与细胞凋亡的调控，与证候形成的复杂性有关。     

脑挫伤早期细胞凋亡相关基因表达的实验性研究

目的 探讨脑挫伤早期细胞凋亡相关基因：Bcl-2、Fas/Fas—L的表达变化规律及神经细胞凋亡的调控机制。方法 用光镜观察脑挫伤后脑组织的形态学变化，同时应用免疫组织化学SABC法结合图像分析检测脑挫伤早期不同时程Bcl-2、Fas/Fas—L的表达变化规律。结果 伤后8h在脑挫伤周围可见典型的凋亡神经细胞；伤后30min损伤灶周围神经细胞出现Bcl-2、Fas/Fas—L阳性表达，以后呈逐渐上升趋势且表达范围亦逐渐扩大，其中Bcl-2蛋白表达在伤后4h达高峰，随后呈下降的趋势，至伤后10—12h其表达程度与伤后1h相比无明显差异。结论 神经细胞凋亡参与脑挫伤后病理形态学改变，神经细胞凋亡的形成可能与促凋亡调控基因和抑凋亡调控基因的表达不平衡有关。     

子宫内膜癌中细胞凋亡和p53基因的表达

目的 探讨细胞凋亡在子宫内膜癌发生发展中的作用，细胞凋亡与抑癌基因p53表达产物的关系，以及p53蛋白表达与预后相关性。方法 应用免疫组织化学方法和TUNEL技术，对子宫内膜腺癌癌变过程中各种病变组织中p53蛋白和细胞凋亡进行测定。结果 正常增生期子宫内膜有偶发凋亡，早期子宫内膜癌和晚期子宫内膜癌的细胞凋亡率分别为1．82％和3．86%。p53蛋白在正常增生期子宫内膜、早期子宫内膜癌和晚期子宫内膜癌的表达率分别为8．31％、38．9％和57．1％。p53蛋白阴性组细胞凋亡率明显高于r63蛋白阳性组。结论 细胞凋亡参与子宫内膜癌的发生发展，子宫内膜癌细胞凋亡受p53基因调控，p53蛋白可能成为评判预后的指标。     

p21在大肠肿瘤细胞凋亡中的作用

目的 探讨细胞内基本p21水平和被应急反应诱导的p21,在大肠肿瘤细胞DLD1对化学治疗、放射治疗和基因治疗所诱发的细胞凋亡中的作用和机制。方法 建立受IPTG控制表达p21大肠肿瘤细胞系DLD1－p21,用阿霉素、X射线和暂时性转染p53基因的方法处理表达和不表达p21的两种DLD1细胞,观察其细胞形态、DNA片段化和测定细胞的生存率;并用放射性同位素标记进入S期细胞来显示细胞周期和凋亡间的关系。结果 （1）p21不仅能以p53依赖性方式产生,而且还能以p53非依赖性方式产生。（2）细胞内基本的p21在抗细胞凋亡中发挥着主要作用,而相反,应急产生的p21几乎不在抗细胞凋亡中发挥作用。凋亡细胞数分别为9％对55％、12％对65％和7％对59％。结论 在抗细胞凋亡作用中,基本的p21比应急产生的p21起着更为重要作用。     

龙葵提取物对荷lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞周期调控相关蛋白及凋亡的影响

[目的]观察龙葵氯仿及正丁醇提取物对荷lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞周期调控相关蛋白、细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达的影响。[方法]建立lewis肺癌模型,64只C57BL/6J小鼠随机分成模型组、环磷酰胺组、龙葵氯仿和正丁醇提取物高、中、低剂量组,给药15d后处死,剥离肿瘤组织,称重,计算肿瘤生长抑制率;TUNEL染色法检测细胞凋亡;免疫组织化学法检测PCNA、p53、p21和Bax、Bcl-2。[结果]龙葵氯仿及正丁醇提取物对荷瘤小鼠肿瘤增殖有一定抑制作用,其中氯仿提取物中剂量组和正丁醇提取物高剂量组的抑瘤率分别为38.93%和32.14%（P〈0.01或P〈0.05）。龙葵氯仿及正丁醇提取物可降低荷瘤小鼠肿瘤组织PCNA和P53阳性细胞表达率,分别为29.7%-58%和32%-56%,并提高P21阳性细胞表达率（20%-32%）（P〈0.01或P〈0.05）。荷瘤小鼠肿瘤组织细胞的凋亡率均不同程度升高（15%-38%）（P〈0.01或P〈0.05）。Bax阳性细胞表达率均有不同程度升高（11%-41%）,Bcl-2阳性细胞表达率则均有不同程度降低（23%-37%）（P〈0.01或P〈0.05）,并可不同程度上调荷瘤小鼠肿瘤组织Bax/Bcl-2的比值。[结论]龙葵正丁醇及氯仿提取物有一定抑制lewis肺癌的生长作用,其作用机制可能与对荷瘤小鼠肿瘤组织细胞周期调控相关蛋白（PCNA、p53、p21）表达的影响、上调肿瘤组织Bax蛋白的表达、下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax/Bcl-2的比值;促进肿瘤组织的细胞凋亡等相关。     

p53和Bcl-2在食管鳞癌组织中的表达及与放化疗疗效的关系

目的探讨p53、Bcl-2蛋白表达与食管鳞癌的发生发展及放化疗疗效的关系。方法用免疫组织化学法测定50例食管鳞癌患者放化疗前活检组织中p53与Bcl-2蛋白表达,观察指标表达阳性率以及与临床病理特征的关系及与放化疗疗效的相关性。结果p53、Bcl-2蛋白在食管鳞癌组织表达阳性率(42%和68%)与正常组织表达阳性率(12%和10%)之间差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白表达与食管鳞癌的分化程度相关(P<0.05),p53蛋白表达与淋巴结转移相关(P<0.05);p53蛋白阴性表达组放化疗疗效优于阳性表达组(P<0.05),Bcl-2蛋白表达与食管鳞癌的疗效无关(P>0.05)。结论p53、Bcl-2蛋白表达与食管鳞癌的发生发展有关,p53蛋白检测可作为食管鳞癌患者放化疗敏感性的判断指标。     

多药耐药相关蛋白基因表达与食管癌病理特征关系的临床研究

目的：探讨食管癌组织中多茏耐药相关蛋白基因（ＭＲＰ）表达与其病理特征的关系。方法：应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，对５１例食管癌、癌旁及３３枚淋巴结组织中ＭＲＰ基因的表达进行检测分析。结果：食管癌组织中ＭＲＰ阳性率（３５．３％）高于癌旁组织（３．９％）。ＭＲＰ表达阳性与肿瘤大小、病理类型及淋巴转移与否无明显关系。但ＴＮＭⅢ、Ⅳ期和肿瘤侵犯 深肌层以上的ＭＲＰ阳性率增高；低分化食管癌的     

爱迪诱导U251细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

目的　以人类成神经胶质瘤细胞系U2 5 1为实验对象 ,研究爱迪 (AD)诱导细胞凋亡的规律 ,并初步探讨了其内在的分子机制。方法　将爱迪分为 7 5mg/ml(A组 )、15mg/ml(B组 )、30mg/ml(C组 )、6 0mg/ml(D组 ) 4个浓度组 ,以顺铂 (DDP) 0 .4μg/ml为阳性对照组 (E组 ) ,另设一阴性对照组 (F组 ) ,观察光镜下细胞的形态变化 ,采用An nexinV PI双标记流式细胞仪凋亡检测法 ,观察爱迪诱导细胞凋亡的情况 ;采用ABC免疫组化法检查p5 3、Bcl 2和PCNA基因的表达。结果　爱迪对U2 5 1细胞具有诱导凋亡的作用 ,在 2 4h和 48h范围内 ,爱迪诱导U2 5 1细胞凋亡率与作用时间无明显关系 (P >0 .0 5 ) ,与药物浓度密切相关 (P <0 .0 1)。在爱迪浓度为 30mg/ml时 ,其凋亡率最大 ,2 4h和 48h分别为 2 0 87%和 2 0 0 9%。但爱迪浓度为 15mg/ml以上时 ,p5 3、Bcl 2、PCNA基因表达均与对照组有明显差异 ,在爱迪浓度为 30mg/ml时 ,p5 3表达高达 73 3 % ,Bcl 2降低为 2 0 9% ,随着药物浓度的增加 ,PCNA表达下降。结论　爱迪有诱导U2 5 1细胞凋亡的作用 ,其诱导凋亡依赖于p5 3基因 ,并伴有Bcl 2、PCNA基因的下调     

食管鳞癌患者癌及癌旁组织差异基因表达

目的:探讨食管鳞癌组织差异基因表达.方法:分别取3例无食管鳞癌家族史患者的癌及癌旁组织(I组)和6例有食管鳞癌家族史患者的癌及癌旁组织(Ⅱ组)等量混合,抽提RNA,将RNA逆转录合成相应cDNA,以Cy5和Cy3标记cDNA作为探针,在含有14 000点人类基因组芯片(BiostarH-140s)上进行杂交.用scan...     

人食管癌相关基因4在食管癌中的抑癌功能

目的 探讨人食管癌相关基因4(ECRG4)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的抑癌功能及其机制.方法 利用DNA重组技术,构建ECRG4真核表达质粒pcDNA3.1-ECRG4,在ESCC细胞系EC9706细胞中转染表达ECRG4蛋白,检测细胞生长状态、细胞黏附、迁移、侵袭能力和裸鼠成瘤能力的改变.Western印迹检测ECRG4表达诱导P53和P21蛋白表达的变化.结果 ECRG4基因转染组裸鼠成瘤的最后体积和重量分别为(264±43)mm3和(0.39±0.09)g,对照组裸鼠分别为(464±128)mm3和(0.76±0.13)g,差异均有统计学意义(均P＜0.05).ECRG4基因转染组肿瘤细胞与基质的黏附性、迁移和侵袭能力均低于对照组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05).ECRG4基因转染组P53和P21蛋白表达均高于对照组(100.00±3.87和35.71±2.36比16.6±1.92和1.09±0.11,均P＜0.05).结论 ECRG4是ESCC的候选抑癌基因,ECRG4可能通过参与P53通路调控P21蛋白表达来发挥其抑癌功能.     

人食管鳞状细胞癌基因表达变化的cDNA芯片研究

目的 利用TaKaRa人癌基因芯片研究食管鳞状细胞癌（ESCC）和相应正常组织差异表达基因．分析基因差异表达谱,以期找到更快捷、高通量的方法来筛选与原发性食管癌发生、发展以及与食管癌临床进展相关的分子标记物。方法 应用基因芯片技术及激光捕获微切割术、T7RNA聚合酶扩增技术,对15例ESCC癌组织和正常组织的mRNA进行检测,并用生物信息学对检测结果进行分析。结果 在886个目的基因中有110条（12．42％）至少2次出现差异表达．其中56条（6-32％）基因表达上调幅度〉2．0倍,54条（6．09％）基因表达下调幅度〈0．5。结论 高通量的基因芯片技术可筛选出大量ESCC相关基因,对这些相关基因功能的验证将有助于找到ESCC发生、发展的关键基因或通路。     

木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制

目的 研究木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制。方法 Eca109细胞经不同浓度木犀草苷处理后,MTT法检测Eca109细胞增殖;倒置显微镜观察Eca109细胞形态的变化;流式细胞术检测Eca109细胞周期变化及细胞凋亡情况;RT-PCR检测Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达。结果 MTT实验表明,木犀草苷80、120、160、200、240 μmol/L对Eca109细胞均有抑制作用,且与浓度相关。木犀草苷可引起Eca109细胞形态改变、体积缩小,并与周围细胞脱离,浓度为240 μmol/L时使细胞呈出芽状,有的细胞伸出多个伪足样突起;浓度为160、240 μmol/L时,可将细胞阻滞于G₂/M期,诱导细胞凋亡;浓度为240 μmol/L并处理Eca109细胞48 h后,使Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达低于对照组（P＜0.05）。结论 木犀草苷对食管鳞状癌Eca109细胞的生长有显著抑制作用,其通过改变细胞周期、诱导细胞凋亡及抑制相关基因的表达发挥抗肿瘤作用。     

子宫内膜癌中细胞凋亡和p53基因的表达

目的 探讨细胞凋亡在子宫内膜癌发生发展中的作用。细胞凋亡与抑癌基因p53表达产物的关系。以及p53蛋白表达与预后相关性。方法 应用免疫组织化学方法和TUNEL技术，对子宫内膜腺癌癌变过程中各种病变组织中p53蛋白和细胞凋亡进行测定。结果 正常增生期子宫内膜有偶发凋亡，早期子宫内膜癌和晚期子宫内膜癌的细胞凋亡率分别为1.82%和3.86%，p53蛋白在正常增生期子宫内膜，早期子宫内膜癌和晚期子宫内膜癌的表达率分别为8.31%,38.9%和57.1%。p53蛋白阴性组细胞凋亡率明显高于p53蛋白阳性组。结论 细胞凋亡参与子宫内膜癌的发生发展，子宫内膜癌细胞凋亡受p53基因调控，p53蛋白可能成为评判预后的指标。     

电化学疗法与恶性淋巴瘤细胞凋亡与相关基因表达

目的：探讨电化学疗法（ECT）与肿瘤细胞凋亡的关系。方法：采用Tunel法和免疫组化S－P法,分别检测肿瘤未治疗对照组和ECT组B细胞淋巴瘤组织的细胞凋亡率和p53,bcl-2基因的表达。结果：ECT组肿瘤细胞凋亡率（5．18）显著高于对照组（1．05）,p53,bcl-2在ECT组表达分别为80％,25％,在对照组表达分别为15％,90％,ECT组中p53表达与癌细胞凋亡率呈正相关,而bcl-2则与癌细胞凋亡率呈负相关。结论：ECT可诱导癌细胞凋亡,其发生可能与p53和bcl-2基因调控有关。     

Livin基因表达与食管鳞癌化疗药物敏感性的相关性研究

目的研究原代培养食管癌细胞对化疗药物的敏感性,并进一步探讨其敏感性与食管癌组织中Livin基因表达的关系,为食管癌的临床化疗提供个体化用药的实验资料和依据。方法：取手术切除的新鲜食管癌组织标本,用MTT法检测经化疗药物作用后肿瘤细胞活力及代谢活性的变化;同时取相同食管癌组织制成石蜡切片,用免疫组化检测Livin蛋白的表达。结果：1.Livin阳性表达与5-FU及ADM耐药有关（P〈0.05）;2.TAX、MMC及5-FU与ADM及DDP之间敏感性差异具有统计学意义（P〈0.05）,前者明显高于后者;ADM敏感性明显高于DDP,组间差异具有统计学意义（P〈0.01）;结论：食管癌组织中Livin阳性表达者与5-FU及ADM耐药有关,提示Livin可作为食管癌原发性耐药标志之一。